Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Immünyetmezligi Farelerde Orofaringeal kandidiyazis ve Th17 İltihabı Modeli

9.2K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/52538

⸱

18 Şubat 2015

 ,  , 
1Department of Biological Sciences, School of Dental Medicine, Case Western Reserve University

Bu makalede

Özet

Candida enfeksiyon modelleri, konak immün direncini incelemek için mevcut olsa da, Candida enfeksiyonu bağlamında T hücresi aracılı immünopatolojiyi incelemek için bir model yoktur. Burada, immün yetmezliği olan farelerde oral Candida enfeksiyonu ile ilişkili Th17 immünopatolojisini oluşturmak için bir yöntem tarif ediyoruz.

Özet

Orofaringeal Kandidiyazis (OPC) hastalığı sadece konak immün direncinin olmamasından değil, aynı zamanda enfeksiyonun neden olduğu immünopatolojinin uygun regülasyonunun olmamasından da kaynaklanır. Th17 hücreleri antifungal savunmada rol oynamasına rağmen, immünopatolojideki rolleri belirsizdir. Bu çalışma, immün yetmezliği olan farelerde oral kandidal enfeksiyon ile ilişkili oral Th17 immünopatolojisinin kurulması için bir yöntem sunmaktadır. Yöntem, lenfopenik farelerin in vitro kültürlenmiş Th17 hücreleri ile sulandırılmasına ve ardından Candida albicans (C. albicans) ile oral enfeksiyona dayanmaktadır. Sonuçlar, dizginlenmemiş Th17 hücrelerinin inflamasyon ve patolojiye yol açtığını ve kilo kaybı, proinflamatuar sitokin üretimi, dil histopatolojisi ve mortalite dahil olmak üzere çeşitli ölçülebilir okumalarla ilişkili olduğunu göstermektedir ve bu modelin OPC immünopatolojisinin incelenmesinde değerli olabileceğini göstermektedir. Düzenleyici hücrelerin (Tregs) evlat edinici transferi, inflamatuar yanıtı kontrol eder ve azaltır, bu da bu modelin oral inflamasyona karşı koymak için yeni stratejileri test etmek için kullanılabileceğini göstermektedir. Bu model, diğer ağız hastalıkları bağlamında genel olarak oral Th17 immünopatolojisinin incelenmesinde de uygulanabilir.

Giriş

Ağız içi enfeksiyonlar ve iltihaplanma, kanser ve kardiyovasküler hastalıklarla ilişkilidir ve genel insan sağlığı üzerinde dramatik bir etkiye sahiptir2,3. C. albicans'ın neden olduğu fırsatçı enfeksiyonlar ve iltihaplanma, primer immün yetmezlikler (PID)4,5, periodontitis 6,7, Sjögren sendromu ve tükürük bezi hastalığı8,9 gibi inflamatuar bozuklukların yanı sıra oral skuamöz hücreli karsinom 10-12 ile ilişkilidir. C. albicans, sağlıklı insanların %60'ının ağzını asemptomatik olarak kolonize eden dimorfik kommensal bir mantar olmasına rağmen, konak savunması zayıfladığında enfeksiyonlara neden olan en yaygın mantar patojenidir13-15. AIDS ve PID'li hastalarda ve ayrıca diğer bağışıklığı baskılanmış bireylerde tekrarlayan ve kronik enfeksiyonlara ve iltihaplanmaya neden olur. Bir kommensal olarak, kolonizasyon yükü, genel oral mikrobiyomun çeşitliliğindeki değişiklikle ilişkilidir16. Bir patojen olarak akut psödomembranöz, akut atrofik, kronik atrofik, kronik hipertrofik / hiperplastik ve açısal keilit gibi çeşitli orofaringeal kandidiyazis formlarına neden olur.

C. albicans'a karşı koruma, sadece konak immün direnci ile değil, aynı zamanda Candida'nın neden olduğu immünopatolojiyi uygun şekilde kontrol etme yeteneği ile de belirlenir. Her ne kadar C. albicans gibi kommensaller diğer oral enflamatuar durumların modülasyonuna ve alevlenmesine katkıda bulunsa da, fırsatçı enfeksiyonlar sırasında disbiyozun ortaya çıktığı mekanizmalar belirsizdir. Adaptif Th17 hücrelerinin C. albicans17'ye karşı hafıza yanıtında bilinen rolünün yanı sıra, kronik enfeksiyonlar sırasında inflamasyon patolojisinin başlatılması ve sürdürülmesindeki rolleri belirsizliğini korumaktadır. Ayrıca, Sjögren sendromu ve periodontitis gibi oral inflamatuar hastalıklar Th17 aracılı patoloji ile ilişkilidir. İlginç bir şekilde, bu hastalıklar aynı zamanda sık OPC ile de güçlü bir şekilde ilişkilidir. Bununla birlikte, Th17 hücreleri, OPC'nin oral immünopatolojisi ve diğer oral inflamatuar hastalıklar arasındaki etkileşimler araştırılmamıştır.

Oral kandidiyazisin primer ve sekonder enfeksiyonunun fare modelleri mevcut olmasına rağmen, özellikle immün yetmezlik bağlamında Candida enfeksiyonu ile ilişkili Th17 inflamasyonunu incelemek için bir fare modeli mevcut değildir. Bu çalışma, farelerde oral Candida enfeksiyonu ile ilişkili oral Th17 inflamasyonunu oluşturmak için bir yöntem sunmaktadır. Farelerde kandida enfeksiyonu, mantar lezyonları, dilde iltihaplanma, gıda alımında azalma, kilo kaybı ve sonunda can çekişen bir durum ile karakterizedir. Oral patoloji, kronik kandidal enfeksiyon lezyonlarına ve ayrıca fare ağız kanseri modellerinde epitelyal displaziye benzer12,18.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

NOT: fareler kullanarak deneyler kurumsal hayvan refahı komitesi (IACUC) yönergeleri uygun olarak yapıldı.

(Enfeksiyon Üç gün önce) I n Vitro kültürlü Th17 hücreleri ile Fare - / - 1. Rag-1 yeniden kurgulamak

  1. Çözünür mevcudiyetinde tek başına U dipli, 96 gözlü levhalar, ya da 3 x 104 CD4 + CD25 + Foxp3 + Tregs ile birlikte ko-kültür bunları Th17 hücreleri, kültür, CD4 + CD44low CD62Lhigh CD25 naiv T hücreleri (x 104 3) oluşturulması için α-CD3 (1 ug / ml), α-CD28 (2 ug / ml), Th17 koşulları altında antikorlar ve antijen sunan hücreler (IL-6 (25 ng / ml), TGF-β kullanılarak polarize (2 ng / ml) , α-IFN-γ (2 ug / ml) ve α -IL-4 (2 ug / ml)) 3-4 gün karıştırılmıştır.
    Not: Saf hücreleri ve T STüz THP kullanılarak dizildi (FACS) birManyetik hücre izolasyon prosedürleri, d ve kültüre daha önce 19-22 açıklandığı gibi.
  2. 4. günde, pipet kullanarak Th17 hücrelerin tekrar asılı tutulmasından sonra, kültürler bunları toplamak ve steril koşullar altında santrifüj.
    1. Bunların canlılığı ve fenotipleme incelemek için, bu hücrelerin küçük bir kısım al. Propidyum iyodür (200 ng / ml) ekleyin ve akış sitometrisi ile hemen uygulanabilirliğini değerlendirmek, RPMI ortamında 500 ul bunları yeniden süspanse edin. Yeniden uyarıldıktan sonra IL-17A üretiminin değerlendirilmesi flow sitometri ile fenotiplendirilmesini gerçekleştirin (bakınız bölüm 6.3).
  3. Aksi belirtilmediği sürece, santrifüj ve tüm adımlar 4 ° C'de 6 dakika boyunca 480 xg'de steril PBS içerisinde hücrelerin büyük bir kısmını yıkayın.
  4. 6-8 haftalık CD45.2 Rag1 içine evlatlık transferi için bu hücreleri kullanın - / - immünyetmezligi fareler.
    1. Soğuk steril PBS kullanılarak 1 x 10 7 hücre / ml hücre yoğunluğunda tekrar süspansiyon hücreleri.
    2. Intrap hücrelere 100 ul enjekteeritoneal enjeksiyon, bir fare 1 x 10 6 hücre aldığı şekilde, 1 ml tüberkülin şırınga 25 G iğne kullanarak. Bazı fareler sadece PBS veya Th17 hücreleri alır ve diğer fareler, regülatör T hücreleri ile birlikte kültürlendiğinde, Th17 hücreleri alır.
      NOT: aseptik tüm adımları uygulayın.

2. C Büyüyen enfeksiyon için albicans (bir gün Enfeksiyon önce)

  1. Aşılamadan önce, CAF2-1 C'de beş koloni dağıtmak albicans laboratuvar steril PBS süspansiyon 100 ul zorlanma, ve steril suyu için süspansiyon ekleyin.
  2. C. 5 koloni inoküle maya azot baz, 50 ml albicans (amino asit içermeyen YNB) / Pepton / dekstroz et suyu, orta ve 130 rpm'de 15-18 saat süre ile 30 ° C'de çalkalamalı bir inkübatör içinde inkübe edilir.
  3. Bu mantar büyümesi için bir gösterge olarak, bulutluluk için suyu izleyin.

3. CandidaHasat ve (Enfeksiyon gününde) Sayım İşlemi

  1. 15 ml tüpler Candida suyu 10 ml toplayın. Daha büyük miktarlar için, 50 ml tüpler içinde Candida toplamak.
  2. Aksi belirtilmediği sürece, tüm adımlarda oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 1900 x g'de blastosporlar santrifüjleyin. Üstte kalan sıvı kısmın çıkarılması ve ardından santrifüjle blastosporlar, pelet.
  3. Birden fazla tüp olması durumunda, topaklar, steril PBS ilave, çok sayıda boruların Candida blastosporlar havuz ve sayım için, 10 ml PBS içinde tekrar süspansiyon haline bunları.
  4. 1.5 ml mikrosantrifüj tüplerine blastosporlar 20 ul al 2X paraformaldehit 20 ul ve 15-20 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe edilir. Mikroskop altında hemasitometre kullanarak sabit blastosporlar sayın.
    NOT: Paraformaldehyde kanserojen. Sadece davlumbaz sulandırılmamış çözüm açın.
  5. Bu arada, t santrifüjle, en az iki kez blastosporlar yıkama tekrarPBS hem, ve blastosporlar peletleme. Enfeksiyonu için hazır ABSL1 başlığı içinde, oda sıcaklığında 15 ml tüpler peletlerin tutun.
  6. Enfeksiyon için blastosporlar resuspending RT'de bazı steril PBS bırakın.
  7. Sayımının ardından, maya hücre / ml'lik 2 x10 8 maya blastospor hücre sayısını ayarlamak için blastospor pelet steril PBS ilave edin. Bu fareleri enfekte etmek için kullanılacak blastospor süspansiyonudur.
    NOT: aseptik tüm adımları uygulayın.

4. Fare Enfeksiyon (Hücre Transferi sonrası 3-5 gün)

NOT: Daha önce açıklandığı gibi 19,23-25 ​​temel enfeksiyon prosedürü yapılır.

  1. / - - PBS veya üç gün önce hücreleri alınan fareler Rag-1 tartılır.
  2. Kendi vücut ağırlığını kullanarak anestezik ajanların dozu hesaplayın. Intr göre, 1 mi tüberkülin şırınga 25 G iğne kullanılarak, ketamin / ksilazin karışımı (16.1 mg / ml ve 1.6 mg / ml) uygulanması ile fareler anesteziaperitoneal enjeksiyonu.
    1. Vücut ağırlığının her 10 gramı başına 50 ul uygulayın. (Örneğin, ketamin, 0.8 mg ve vücut ağırlığının ksilazin 10 g / 0.08 mg ya da ketamin 80 mg ve vücut ağırlığındaki her bir kg başına ksilazin 8 mg) mevcuttur. Ayak tutam yanıt anestezi sonrası her 15 dakika gözlemleyin.
      NOT: Bu dozaj enfeksiyon prosedürü için yeterli anestezi 60-90 dakika, neden olacaktır.
    2. Kurumasını önlemek için kornealar farelerin gözünde oftalmik yağ merhemi sürün. Göz yağlayıcı kurumasına gibi, oftalmik yağlama her 45 dakikada bir tekrarlayın.
  3. Anestezi sırasında farelerin rehidrasyon yardımcı, ön ayakları ile deri altından geri bitişik tuzlu su (% 0.9 NaCl) ile 1 ml enjekte edilir.
  4. Yeni, temiz bir kafes edinin. Bir kez enfekte yeni kafesin içine fare her yerleştirerek, bir defada enfeksiyon prosedürü bir fare izleyin. İlk PBS / sahte enfeksiyonu gerçekleştirin ve sonra Candida enfeksiyonu Gro devamgüç kaynağı.
  5. Anestezi fare Pick up ve dil tabanı ortaya çıkarmak için geniş ağzını açın.
    1. Dil altından, 90 dakika için ağız boşluğu içinde, PBS veya blastospor süspansiyonu, 50 ul ile doyurulmuş 3 mm çapında pamuk yerleştirin. Pamuk topları hareket etmiyor sağlanması, akciğer tıkanıklığı önlemek için geri farelere her 15 dk ön çevirin ve.
  6. Ağız boşluğu Sham veya Candida aşılamadan 90 dakika sağlamak için her fare için bir zamanlayıcı ayarlayın.
  7. Isı lambası (4 metre uzaklıkta) altında bir kafes ve ısı jel yastıkları her fare tutun.
  8. Dil dil laserasyon yaralanmasıdır diş önlemek için, diş içinde ve uzak çekilir emin olun.
  9. 90 dakika sonunda, fare ağızdan pamuk çıkarın. 75 dakikadan daha kısa sürede anestezi kurtarmak herhangi fare izleyin. Böyle bir durumda, sadece, ketamin (40 mg / kg) ile yeniden anestetize.

5. Mesaj prosedüründee (90 dk Anestezi sırasında) İzleme

  1. 90 dakika anestezi sırasında ısı jel pedleri kullanın.
    1. Vücut ısısını korumak için ve boğulma önlemek için, fareler normal mısır koçanı fare yatak üzerinde kurtarmak için izin vermez.
  2. Anesteziden çıktıktan sonra, arka iki konumda steril% 0.9 NaCl, deri altından ilave 1 ml yönetmek.
  3. Beş PBS (plasebo) kafes başına aşılanmış farelerde kadar tutun. Kafes başına Evi sadece 1-2 enfekte fareler.
  4. Alışkanlıkları ve genel sağlık bakım, vücut ağırlığı değişiklikleri not etmek işlem sonrası her gün baş harfleri ile prosedür kartını doldurun.

6. Enflamasyon değerlendirilmesi

6.1) Kilo kaybı

  1. Enfeksiyon prosedür öncesi gün ile başlayarak, enfeksiyon sırasında, her gün fareler tartılır.
    Not: Genellikle, Th17 hücreleri olmadan ve T gruplar gruplar enjekte bağışıklık yetersizliği olan farelere 20 yenikNedeniyle -30% kilo kaybı mantar yükünü 19 artmış ve inflamasyon şiddetlenir.

Dil 6.2) Histoloji puanlama

  1. Servikal dislokasyon CO2 asfiksiyasyonu ile fareler kurban.
  2. Çeneleri açın ve makas ve forseps ile dilini incelemek. Dilini tutmayı künt forseps kullanın ve makas ağız arkasına ulaşmak kullanarak dilin arka uç kesilirken.
  3. Imüno hematoksilin ve eosin dil dokuların (H & E) boyama için, buz gibi soğuk PBS ile dil dokuları yıkayın. 15 ml'lik tüplerde / N 2-3 dil için% 10 formalin 5 ml ekleyin ve O bunları düzeltmek.
    1. Sonraki gün, formalin çıkarın ve hiper tespit önlemek için% 70 etanol içinde 5 ml doku bırakın. Kesit ve parafin kesitlerin boyanması, parafin gömme devam etmek ticari hizmet için bunları gönderin.
      NOT: Ticari histoloji hizmeti adımları gerçekleştirmek için kullanılır.
  4. Slaytlar geri ticari histoloji hizmetinden kez, sınıf bir ışık mikroskobu altında doku bölümleri gözlemleyerek iltihabı.
    1. 0 hiçbir iltihap olan, ve 5 en şiddetli inflamasyon olmak, 0-5 puan. Tablo 1 kullanılarak iltihabı Puan.

Th17 hücreleri tarafından 6.3) sitokin üretimi

Not: Aşırı TNF-α üretimindeki azalma, aşırı immunopatolojilerinde için okumalar biridir. Farenin adoptif Th17 hücreleri ile transfer edildiğinde, sadece, bunun Th17 hücrelerinde aşırı TNF-α üretimi ile ilişkilidir Immunopathology neden olur.

  1. Daha önce açıklanan yöntemleri kullanarak 19.26 dalak, servikal lenf nodları, aksiller lymphnodes ve dil tek bir hücre süspansiyonu, toplayın.
  2. Brefeldin A (10 ug / mi) ile 4 saat için forbol miristat asetat (PMA) (50 ng / ml) ve iyonomisin (500 ng / ml) ile hücrelerin yeniden uyarmak l eklendiast 2 saat. PBS ile hücreleri yıkayın ve üreticinin talimatlarına göre ticari Tespit / permeabilizasyon kiti kullanılarak onları düzeltmek.
  3. Daha önce tarif edildiği gibi 19 florokrom konjuge anti-TNF-α, anti-IL-17A ve ROR-γt antikorları kullanılarak hücre içi sitokin boyama yapın.
  4. / Ml nihai konsantrasyon 3 ug - Kısaca anlatmak gerekirse anti-TNF-α, anti-IL-17A ve ROR-γt antikorlar, 2 de her bir antikorun bir kokteyli ile 1X permeabilizasyon tampon maddesi içinde tekrar süspansiyon hücreleri.
  5. Oda sıcaklığında 1 saat süre ile inkübe hücreleri.
  6. İnkübasyondan sonra, 1X permeabilizasyon tampon maddesi ile hücreleri yıkayın.
  7. Akışkan sitometri analizi için% 0.5 sığır serum albümini ile PBS içinde 500 ul hücre pelletini.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bu modelde, Rag-1 de, Candida ile enfekte olan fareler ve enfekte edilmemiş fareler, her iki - / - bağışıklık yetersizliği olan arka plan adoptif enfeksiyona 3-5 gün önce, Th17 hücreleri ile transfer edilmiştir. 10-12 farelerin toplam 2, her bir Sahte enfekte edilmiş gruptaki farelerin ve Candida enfekte gruplarının her biri 4-5 ile, deneyler için kullanılmıştır. Enjekte Th17 hücreleri, sırasıyla (Şekil 1A) Thy1.1 veya CD45.1 boyaması kullanılarak in vivo olarak tak...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu model, oral C uyarıcı dayanmaktadır albicans enfeksiyonu bağımlı Th17 iltihabı. Çünkü T regs yokluğu, Th17 hücre kaynaklı inflamasyon sınırsız ve zayıf çözülmesi İmmünopatolojiye yol açar. In vitro Th17 hücreleri evlatlık transferi için kullanılan olarak polarize naif CD4 hücreleri elde edilen. 40 - kültürlenmiş CD4 + hücrelerinin% 50 3. günde yaklaşık keşfedilebilir IL-17A ifade (Th17 hücreleri) gösterir ve bu nedenle, fareler enjeksiyon için kullanıldı. modelin önemli bir avant...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

Dr. Helene Bernstein'a akış sitometresine erişim sağladığı için teşekkür ederiz. Akış sitometrisi hizmetleri için CFAR akış sitometrisi tesisine de teşekkür ederiz. Bu proje kısmen CTSC çekirdek kullanım fonu ve STERIS şirketi/Üniversite Hastaneleri-Bulaşıcı Hastalıklar Bölümü'nün PP'ye verdiği hibe ile desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
CAF-2Pittsburgh Üniversitesi (Sarah Gaffen)-Candida kültürü
U-dip 96 kuyulu plakalar Fisher055588Hücre kültürü için kullanılır
a-CD3 eBiosciences16-0031-85Hücrelerin Th17 koşullarına polarizasyonu
a-CD28 eBiosciences16-0281-85Hücrelerin Th17 koşullarına polarizasyonu
m-IL-6Bio BasicRC232Hücrelerin Th17 koşullarına polarizasyonu
h-TGF-b Ar-Ge D240-BHücrelerin Th17 koşullarına göre polarizasyonu
a-IFN-g eBiosciences16-7311-85Hücrelerin Th17 koşullarına polarizasyonu
a-IL-4 eBiosciences16-7041-85Hücrelerin Th17 koşullarına polarizasyonu
alfa;-IL17A ef660eBiosciences50-7177-82Hücre kültürü için kullanılır - 1:50
α-TNFa-PE-Cy7eBiosciences25-7423-41Hücre kültürü için kullanılır - 1:100
α-RORgt; PE eBiosciences12-6981-82Hücre kültürü için kullanılır - 1:50
YNB amino asitler olmadan) / Pepton / Dekstroz suyu ortamı Biyo TemelS507. BOYUT:Kandida büyümesi için Mediium
Shaker kuluçka makinesi New Brunswick ScientificInnova 4300Candida
15 ml tüplerBio BasicBT888-SYHücre kültürü ve kandida büyümesi için kullanılır
50 ml tüplerBio BasicCT 788-YSHücre kültürü ve kandida büyümesi için kullanılır
Masa üstü SantrifüjVWR International LLC82017-654Candida -900 g
Allegra Santrifüjpeletleme içinBeckman Coulter392302Hücre kültürü - 480 g
1.5 ml eppendorf tüpleriBio BasicBT620-NSKandida 2x
paraformaldehitElektron Mikroskobu Bilimlerinin15710Sayım için kandida sabitleme
HemositometreVWR International LLC15170-172Hücre sayma
PBS - Fosfat Tamponlu SalinBio BasicPD8117Tamponların hazırlanması
Ketamin / ksilazin ve nbsp;Case Western Reserve Üniversitesi - Hayvan KaynakMerkezi-Anesteziiçin ARC onaylı protokolden elde edildi
Oftalmik kayganlaştırıcı merhem Kuruluğu önlemek için hayvanlar içinalergan-Göz
Tuzlu (% 0.9 NaCl)G Biosciences786-561Dehidrasyonu önlemek için hayvanlara uygulanır
3 mm çapında pamuk yünü top VWR International LLCBP7603kandida enfeksiyonu için 3 mm toplar
Isı jeli pedleriCase Western Reserve University - Hayvan Kaynak Merkezi-vücut sıcaklığını korumak ve hızlı iyileşme için
Hematoksilen ve Eozin boyamaHistoserv - MD-Dokuhistolojisi
% 10 formalin Elektron Mikroskobu BilimleriJC1111 / MCDoku histolojisi
% 70 etanol ve nbsp;VWR International LLC97064-490Sterilizasyon amaçlı
PMA - Phorbol 12-miristat 13-asetatSigma-AldrichP1585-1MGHücrelerin yeniden uyarılması
İyonomisinYaşam Teknolojileri124222 1mgHücrelerin yeniden uyarılması
Fiksasyon geçirgenlik kitieBiosciencesE16913-106Akış sitometrisi için sabitleme hücreleri
Tüberkülin şırıngalarıBD Biosciences309659Fare enjeksiyonu
25 G x 3/8 iğneBD Biosciences309626Fare enjeksiyonu
Rag1 -/- farelerJackson laboratuvarlarıStok no: 002216Alıcı fareler
CD45.1 konjenik farelerJackson laboratuvarlarıStok no:002014 Donör Th17 hücreleri
CB17-SCID farelerJackson laboratuvarlarıStok no: 001303Alıcı fareler
Balb/c farelerJackson laboratuvarlarıStok no: 000651Donör Th17 hücreleri
& için inkübasyon büyümesi nihai konsantrasyonunun hazırlanması merhemi

Kaynaklar

  1. Allam, J. P., et al. IL-23-producing CD68(+) macrophage-like cells predominate within an IL-17-polarized infiltrate in chronic periodontitis lesions. Journal of Clinical Periodontology. 38 (10), 879-886 (2011).
  2. Loesche, W. J. Periodontal disease: link to cardiovascular disease. Compendium Of Continuing Education In Dentistry. 21 (6), 463-466 (2000).
  3. Sfyroeras, G. S., Roussas, N., Saleptsis, V. G., Argyriou, C., Giannoukas, A. D. Association between periodontal disease and stroke. Journal Of Vascular Surgery. 55 (4), 1178-1184 (2012).
  4. Huppler, A. R., Bishu, S., Gaffen, S. L. Mucocutaneous candidiasis: the IL-17 pathway and implications for targeted immunotherapy. Arthritis Research & Therapy. 14 (4), 217(2012).
  5. Sitheeque, M. A., Samaranayake, L. P. Chronic hyperplastic candidosis/candidiasis (candidal leukoplakia). Critical Reviews In. Oral Biology And Medicine : An Official Publication Of The American Association Of Oral Biologists. 14 (4), 253-267 (2003).
  6. Canabarro, A., et al. Association of subgingival colonization of Candida albicans and other yeasts with severity of chronic periodontitis. Journal Of Periodontal Research. 48 (4), 428-432 (2013).
  7. Urzua, B., et al. Yeast diversity in the oral microbiota of subjects with periodontitis: Candida albicans and Candida dubliniensis colonize the periodontal pockets. Medical Mycology. 46 (8), 783-793 (2008).
  8. Ergun, S., et al. Oral status and Candida colonization in patients with Sjogren's Syndrome. Medicina Oral, Patologia Oral Y Cirugia Bucal. 15 (2), e310-e315 (2010).
  9. Hernandez, Y. L., Daniels, T. E. Oral candidiasis in Sjogren's syndrome: prevalence, clinical correlations, and treatment. Oral Surgery, Oral Medicine, And Oral Pathology. 68 (3), 324-329 (1989).
  10. Gall, F., et al. Candida spp. in oral cancer and oral precancerous lesions. The New Microbiologica. 36 (3), 283-288 (2013).
  11. Grady, J. F., Reade, P. C. Candida albicans as a promoter of oral mucosal neoplasia. Carcinogenesis. 13 (5), 783-786 (1992).
  12. Dwivedi, P. P., Mallya, S., Dongari-Bagtzoglou, A. A novel immunocompetent murine model for Candida albicans-promoted oral epithelial dysplasia. Medical Mycology. 47 (2), 157-167 (2009).
  13. Cheng, S. C., Joosten, L. A., Kullberg, B. J., Netea, M. G. Interplay between Candida albicans and the mammalian innate host defense. Infection and Immunity. 80 (4), 1304-1313 (2012).
  14. Marodi, L., Johnston, R. B. Invasive Candida species disease in infants and children: occurrence, risk factors, management, and innate host defense mechanisms. Current Opinion In Pediatrics. 19 (6), 693-697 (2007).
  15. Kumamoto, C. A. Inflammation and gastrointestinal Candida colonization. Current Opinion In. Microbiology. 14 (4), 386-391 (2011).
  16. Kraneveld, E. A., et al. The relation between oral Candida load and bacterial microbiome profiles in Dutch older adults. PloS One. 7 (8), e42770(2012).
  17. Hernandez-Santos, N., et al. Th17 cells confer long-term adaptive immunity to oral mucosal Candida albicans infections. Mucosal Immunology. 6 (5), 900-910 (2013).
  18. Hasina, R., et al. ABT-510 is an effective chemopreventive agent in the mouse 4-nitroquinoline 1-oxide model of oral carcinogenesis. Cancer Prevention Research. 2 (4), 385-393 (2009).
  19. Pandiyan, P., et al. CD4(+)CD25(+)Foxp3(+) regulatory T cells promote Th17 cells in vitro and enhance host resistance in mouse Candida albicans Th17 cell infection model. Immunity. 34 (3), 422-434 (2011).
  20. Pandiyan, P., et al. The role of IL-15 in activating STAT5 and fine-tuning IL-17A production in CD4 T lymphocytes. J Immunol. 189 (9), 4237-4246 (2012).
  21. Pandiyan, P., Lenardo, M. J. The control of CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cell survival. Biology Direct. 3 (6), (2008).
  22. Pandiyan, P., Zheng, L., Ishihara, S., Reed, J., Lenardo, M. J. CD4(+)CD25(+)Foxp3(+) regulatory T cells induce cytokine deprivation-mediated apoptosis of effector CD4(+) T cells. Nat Immunol. 8 (12), 1353-1362 (2007).
  23. Conti, H. R., Huppler, A. R., Whibley, N., Gaffen, S. L., et al. Animal models for candidiasis. Current Protocols In Immunology. Coligan, J. E., et al. 105, 11-19 (2014).
  24. Conti, H. R., et al. Th17 cells and IL-17 receptor signaling are essential for mucosal host defense against oral candidiasis. J Exp Med. 206 (2), 299-311 (2009).
  25. Kamai, Y., et al. New model of oropharyngeal candidiasis in mice. Antimicrobial Agents And Chemotherapy. 45 (11), 3195-3197 (2001).
  26. Pandiyan, P., Bhaskaran, N., Zhang, Y., Weinberg, A. Isolation of T cells from mouse oral tissues. Biological Procedures Online. 16 (1), 4(2014).
  27. Gladiator, A., Wangler, N., Trautwein-Weidner, K., LeibundGut-Landmann, S. Cutting edge: IL-17-secreting innate lymphoid cells are essential for host defense against fungal infection. J Immunol. 190 (2), 521-525 (2013).
  28. Leppkes, M., Roulis, M., Neurath, M. F., Kollias, G., Becker, C. Pleiotropic functions of TNF-alpha in the regulation of the intestinal epithelial response to inflammation. International Immunology. 26 (9), 509-515 (2014).
  29. Bishu, S., et al. The adaptor CARD9 is required for adaptive but not innate immunity to oral mucosal Candida albicans infections. Infection and Immunity. 82 (3), 1173-1180 (2014).
  30. Quintin, J., et al. Differential role of NK cells against Candida albicans infection in immunocompetent or immunocompromised mice. Eur J Immunol. 44 (8), 2405-2414 (2014).
  31. Ramirez-Garcia, A., et al. Candida albicans and cancer: Can this yeast induce cancer development or progression. Critical Reviews In Microbiology. , 1-13 (2014).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Adoptif T H cresi TransferiCandida Albicans EnfeksiyonuAk Sitometrisi Analizimm nohistokimya AnaliziTreg H cresi TransferiKilo Kayb l mDil Histopatolojisi
Immünyetmezligi Farelerde Orofaringeal kandidiyazis ve Th17 İltihabı Modeli
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.