restenoz fare femoral arter yaralanması tel modeli teknik olarak zordur. Bu protokolde başarıyla restenoz çalışmaları için tutarlı neointima ikna etmek tel yaralanması gerçekleştirmek için anahtar teknik detaylar önemlidir göstermektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Arter Restenozun bir fare modeli: Femur Tel Yaralanma Teknik Yönleri
Bu makalede
Özet
Özet
Ateroskleroz neden Kardiyovasküler hastalık gelişmiş dünyada önde gelen ölüm nedenidir. Nedeniyle aterosklerotik plak gelişimi veya kurulmuş plakların çatlaması, damar lümeninin daralması gibi miyokard enfarktüsü ve inme gibi çeşitli hastalıklar giden normal kan akışını keser. Anjiyoplasti gibi klinik endovasküler işlemlerde yaygın lümen yeniden açmak için yapılır. Bununla birlikte, bu tedaviler, kaçınılmaz olarak bir fazla iyileşme yanıtı ve damar restenozu (yeniden daralma) neden olan lümen içine uzanan bir neointimal plak gelişimini tetikleme, damar duvarı hem de vasküler endotel hasar. Restenoz ateroskleroz için endovasküler tedavi başarısızlığı önemli bir nedenidir. Böylece, restenoz preklinik hayvan modelleri öteleme vasküler müdahalelere yaklaşımları yanı sıra patofizyolojik mekanizmaları araştırmak için hayati önem taşımaktadır. Bir çok murin experime arasındayakından endotel ve damar duvarını hem yaralı anjiyoplasti işlemi benzer çünkü ntal modelleri, femoral arter tel yaralanması yaygın anjiyoplasti sonrası restenoz çalışmaları için en uygun olarak kabul edilir. Ancak, birçok araştırmacı nedeniyle teknik zorluk yüksek derecede bu modeli kullanan zorluk. Bu, bir metal tel belirgin neointima indüklemek için yeterli darbe üretmek için, yaklaşık olarak tel üç kat daha incedir femoral arter içine takılması gerekir öncelikle çünkü. Burada, biz etkili bu modelin önemli teknik zorlukların üstesinden gelmek için gerekli cerrahi ayrıntıları açıklar. , Sunulan prosedürleri takip gerçekleştirerek fare femoral arter tel yaralanması kolaylaşır. Aşina sonra, bütün işlem 20 dakika içinde tamamlanabilir.
Giriş
Çeşitli kardiyovasküler hastalıklar için endovasküler tedavilerin yaygın olarak uygulandığı çağda, anjiyoplasti sonrası restenoz, bu tür tedaviler gören hastalar için en önemli sorunlardan biridir. Anjiyoplasti sırasında vasküler endotel hasarı, aterosklerotik arka plan ile uyumlu olarak, medial tabakada aşırı düz kas hücresi proliferasyonuna neden olarak neointimal hiperplaziye neden olur. 1,2 Bu nedenle, anjiyoplasti sonrası neointimal hiperplaziyi özetleyen canlı bir hayvan modeli, sadece hastalık mekanizmalarının araştırılması için değil, aynı zamanda bu patolojiyi tedavi etmek için etkili terapötiklerin geliştirilmesi için de önemlidir.
Fareler, aşağıdaki nedenlerden dolayı neointimal hiperplaziyi özetlemek için mükemmel bir model hayvanı temsil eder: deney farelerinin genetik geçmişleri iyi bilinmektedir; çok çeşitli genetiği değiştirilmiş suşlar mevcuttur; 2 Aynı arka plana sahip littermatları elde etmek kolaydır; Ve hayvanların maliyeti nispeten düşüktür. Arteriyel ligasyon modeli ve tel yaralanması modeli, mekanik olarak indüklenen neointimal hiperplazinin en yaygın iki fare modelidir. Arteriyel ligasyon modelinin oluşturulması kolaydır, ancak fizyolojik olarak gerçek anjiyoplasti prosedüründen farklıdır. Tel yaralanması modeli, gerçek anjiyoplasti prosedürlerini yakından taklit eder, ancak fare arterlerinin küçük boyutu nedeniyle teknik olarak zordur. 2,3 Sata ve ark. ilk olarak, vaskülatürün anatomik yapısına ve uygun boyutta esnek tel kullanımına dayalı olarak fare femoral arterleri için bir tel yaralanma yöntemi tanımlamıştır. Bu tekniği kullanarak, çeşitli fare suşlarında neointimal hiperplaziyi tekrarlanabilir şekilde indüklemeyi başardılar. 4
Femoral tel yaralanması iyi bilinen bir model olmasına rağmen, tekniğin bazı teknik yönleri, ligasyon gibi diğer modellere kıyasla oldukça zordur. 5 Bu makalenin amacı, Sata'nın orijinal yönteminin değiştirilmiş bir versiyonu olan fare teli yaralanma modeli prosedürlerimizi ayrıntılı olarak açıklamaktır. İki ana değişiklik yaptık: 1) Sadece arterleri döngüye sokmak ve 2) Lidokain kullanımı yok.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
NOT: Etik Açıklama: Tüm işlemler Wisconsin Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanan Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanımı Kılavuzu (Ulusal Akademiler Press, 8. baskı, 2011), ve protokollere uygun. Tüm ameliyatlar (oran 2 ml / dak akış, teneffüs yoluyla) izofluran anestezi altında, ve tüm çabalar acı en aza indirmek için yapılmıştır. Hayvanlar kademeli CO2 ile doldurulmuş bir odacığm içine kurban edilmiştir.
Genel Anestezi ve Cilt Kesiden 1. İndüksiyon
- 23-28 g bir 12-16 haftalık yaş ve vücut ağırlığı, erkek C57BL / 6 fareleri kullanın. Kapalı-devre anestezi aparatı ile izofluran ile hayvan anestezisi. Onun ayak kısma doğru anesthetization onaylayın. Kuruluğunu önlemek için gözlerin bazı yapay gözyaşı merhemi sürün.
- Biraz kaçırılan sol arka bacak ve diz eklem sl ile yatar pozisyonda fare yerleştirinightly gerdi. Sol üst uyluk yöresinde saç tıraş ve klorheksidin ile cilt dezenfekte, steril pamuk uçlu aplikatörler kullanarak üç kez uygulandı. Ameliyat sırasında sterilize aletler tutmak için sıcak bir boncuk sterilizatör kullanın.
- Sol bacak üzerinde bir sterilize gazlı bez örtü yerleştirin. Kasık (Şekil 1A) diz ekleminin sol medial uyluk üzerinde 1.5 cm düz, uzunlamasına deri kesi yapmak.
Femoral Arter ve Şube 2. Pozlama
NOT: Şekil 1B üst uyluk brüt damar anatomisini gösterir. cilt kesi düzgün medial uyluk orta hat boyunca yapıldığında yüzeyel femoral arter (SFA) bir mikroskop aracılığıyla görülebilir.
- Ince cımbız ve daha sonra döngü 9-0 naylon sütür ile SFA ile SFA örten ince fasya açın.
NOT: Bu süreçte, femoral sinir kolayca konuronun duvara kolayca deler ve kanamaları çok ince olduğu için ide, ancak bitişik femoral ven yakın ilgi gerektirir. anahtar teknik arter kendisine odaklanmak; sürece diseksiyon yakın arterin yürütülen olarak, herhangi bir kaza sonucu damar hasarı önlenebilir. - SFA döngüye sonra, sivrisinek forseps ile dikiş tutun ve hafifçe aşağı doğru çekin. Bu manevra kolay daha diseksiyon yapar, ama çok zorla çekmeyin arter zarar vermemek için.
- Proksimale 9-0 naylon sütür ile femoral arter (CFA) ortaya çıkarmak ve döngü arter diseksiyon devam edin.
NOT: Genellikle, epigastrik arter (Şekil 1B) bir nokta distalinde CFA döngü tel yerleştirilmesi için yeterli. Aynı şekilde sivrisinek forseps ile CFA dikiş döngü tutun. - Yukarı CFA sütür döngü çekin ve SFA sütür döngü aşağı SFA ve derin femoral arter (DFA) çatallaşmayı ortaya çıkarmak. DFA, CFA büyük şube,uyluk kas (Şekil 1B) doğru gider.
NOT: tel sonra DFA'dan eklenecektir. - Ekstra dikkatli Döngü DFA bitişik ven arterin altında karışık çünkü. Venden kanama durumunda, gazlı bez ile bir 30- ila 60 sn, basit bir sıkıştırma genellikle hemostaz üretmek için yeterlidir.
- DFA 9-0 naylon sütür ile döngüye sonra, her üç dikiş döngüler (Şekil 2A) onların doğru pozisyonlarda olduğundan emin olun.
- Distale mümkün olduğunca bifurkasyonundan bir noktada arter bağlanması için DFA diseksiyonu ile devam edin. Ekstra dikiş kesin ama iki ucu DFA tel ekleme yapma kolay stabilize sivrisinek forseps ile tutulabilir, böylece belli bir uzunluğa bırakın.
3. Tel Yaralanması oluşturma
- DFA aracılığıyla Tel takın
- Geçici hemostat kurmak için CFA, SFA ve DFA sütür süzün.
- DF küçük bir delik açınMicroscissors için uygun değildir. Bir 0.015 inç çaplı bir tel için yeterince büyük bir delik genişletmek için kavisli microtweezers ipuçlarını yerleştirin (Şekil 2B arter ve tel arasındaki boyut farkı gösterir).
- DFA'da bir delik yapmadan önce, CFA sütür döngü gevşetin ve hafifçe kelepçe / donuk uçlu microtweezers ile DFA birkaç kez sıkın. Bu manevra tel ekleme kolaylaştırmak için son derece arteriyel çapını genişletir. PBS ile iyice tel Rutubet zamanda yumuşak sokulması için önemlidir.
- DFA'da bir delik yaparken, arter duvarı kırpmak, ama küçük bir v şekilli nip yapmak ve manipülasyon için keskin uçlu microtweezers ile flep çimdik yok.
- DFA üzerinde yeterince-genişlemiş delikten teli takın. CFA etrafında dikiş döngü gevşeterek ederken yavaşça iliak arter doğru tel ilerlemek. 5-8 mm çoğu durumda tüm CFA uzunluğu karşılamak için yeterli olduğunu (Şekil 2C ). Arteriyel perforasyon genellikle fare kaybına neden olduğu gibi zorla tel sokmayın. Uzunluğu yaklaşık 15 mm tel kısaltılması işleme yardımcı olur.
- Min 1 için içeride Tel bırakın
- Optimal uzunlukta tel taktıktan sonra, arter duvarı daraltabilir 1 dakika bırakın. Kurumasını önlemek için PBS ile tel ve arterler ıslatın. Başka bir 9-0 naylon dikiş bu bekleme süresi boyunca kablo ekleme noktasına DFA proksimal çevresinde yerleştirilebilir. Bu dikiş tel çıkarılmasını takiben DFA delik kapatmak için daha sonra kullanılacaktır.
- Tel Al ve Kan Akışı Devam
- Damar kanülasyon forseps ile tel tutun ve onu nazikçe geri çekin; Tel sorunsuz alınabilir olmalıdır. Nazik rotasyon ile tel geri çekerek, genellikle arter duvarına tel bağlılık kaynaklanan herhangi bir direnç, üstesinden gelmek için yardımcı olur. Yine, güçlü bir manevra hayvan kaybına neden olabilir.
- Birtel almak fter, 9-0 naylon sütür ile çatallanma noktasında DFA Arter. SFA kan çıkışı tehlikeye atacağını bifürkasyonun, çok yakın Arter etmeyin.
- Normal kan akışını sürdürmek için SFA ve CFA dikiş döngüler gevşetin. CFA tel yerleştirme (Şekil 2B) tarafından iyi genişletilmiş olduğunu unutmayın.
4. Cilt Kapatma ve Ameliyat Sonrası Bakım
- Kontrol kanar. Küçük sızıntı basit sıkıştırma durdurulabilir; bazı büyük arter kanamaları bir 11-0 naylon sütür ile dikiş gerektirir. Bu dikildi arterler sonunda arter tıkanıklığına neden olur.
- Cilt Zımbalar (genellikle 3-4 zımba) ile yara cilt kapatın. Klorheksidin cerrahi çözüm uygulayarak sterilize yara alan tutun.
- Ameliyat sonrası tedavileri uygulayın. Buprenorfin subkutan enjeksiyonu ile fare ağrıyı kontrol. Bu suf kavuşana kadar ısınma pad üzerinde fare tutmaksternum yatma korumak için bilinç ficient. Diğer hayvanların şirket olmadan temiz bir kafes içinde Evi onu tamamen iyileşene kadar.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Ameliyatı takiben dört hafta, tel yaralı femoral arter hasat ve neointima oluşumunu analiz etmek için bir parafin blok örneği olun. Yukarıda tarif edilen genel anestezi neden. Hemen göğüs açın ve sol ventrikül bir 20-gauge kelebek iğne takın. Bir infüzyon şişe hattını bağlayın. % 4 paraformaldehid (genellikle 10-20 ml, her biri), ardından PBS damla infüzyon yoluyla perfüzyon fiksasyon gerçekleştirin. Hayvan daha sonra tel yaralı CFA çıkar ve 4 ° C'de gece boyunca% 4 paraformaldehid düzeltmek 20 dakika fizyo...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
tel yaralanma prosedürü, biz 12-16 haftalık bir yaş erkek C57BL / 6 fareler kullanıldı sürece onların anatomik yapıları benzer olarak. 4 Bu yazıda farelerin tüm suşları için geçerlidir. Bizim ön çalışmalardan öğrendiğimiz gibi, 10 haftadan küçük farelerin femoral arter genellikle tel ekleme oldukça zorlu olduğunu çok küçük. Diğer yandan, 16 haftadan daha yaşlı farelerin tel ekleme teknik olarak daha kolay olan, ancak çok büyük bir çeşitlilik neointimal hiperplazi neden olma eğilimindedir. Dişi fareler erkekle...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar herhangi bir rakip mali çıkar beyan etmemektedir.
Teşekkürler
Bu çalışma, Wisconsin Ortaklık Programı Yeni Araştırmacı Ödülü (ID 2832), Ulusal Kalp, Akciğer, Kan Enstitüsü R01 Hibesi (HL-068673) ve T32 eğitim Bursu (HL-110853) tarafından desteklenmiştir. Dr. Melina Kibbe'nin Northwestern Üniversitesi'ndeki grubuna yararlı bilgiler sağladıkları için teşekkür ederiz.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Sabit Çekirdekli Tel Kılavuz | Cook | G02426 | Çap 0.015 inç, Düz |
| Dilatasyon Forseps | Roboz | RS-4927 | Kavisli, künt uçlar |
| Dumont Tweesers #5 | Dünya Hassas Aletler | 14095 | Düz, keskin uçlar |
| Dumont Damar Kanülasyonu Forseps | Dünya Hassas Aletler | 503373 | |
| McPherson-Vannas Makas | Dünya Hassas Aletler | 501234 | |
| Sivrisinek Forseps | Dünya Hassas Aletler | 501291 | |
| Ethilon Naylon Sütür 9-0 | Ethicon | 7717G | 9-0, Siyah Naylon Monofilament |
| Mikro AROSuture, Steril 11-0, 70 mikrometre, MET Point | AROSurjik | VT4A00N07 | 11-0, Siyah Naylon Monofilament |
| 3M Hassas Çoklu Atış DS Tek Kullanımlık Cilt Zımba | 3M | DS-25 |
Kaynaklar
- Dzau, V. J., Braun-Dullaeus, R. C., Sedding, D. G. Vascular proliferation and atherosclerosis: new perspectives and therapeutic strategies. Nat Med. 8 (11), 1249-1256 (2002).
- Hui, D. Y. Intimal hyperplasia in murine models. Curr Drug Targets. 9 (3), 251-260 (2008).
- Ferns, G. A., Avades, T. Y. The mechanisms of coronary restenosis: insights from experimental models. Int J Exp Pathol. 81 (2), 63-88 (2000).
- Sata, M., et al. A mouse model of vascular injury that induces rapid onset of medial cell apoptosis followed by reproducible neointimal hyperplasia. J Mol Cell Cardiol. 32 (11), 2097-2104 (2000).
- Xu, Q. Mouse models of arteriosclerosis: from arterial injuries to vascular grafts. Am J Pathol. 165 (1), 1-10 (2004).
- Lv, L., Meng, Q., Ye, M., Wang, P., Xue, G. STAT4 deficiency protects against neointima formation following arterial injury in mice. J Mol Cell Cardiol. 74C, 284-294 (2014).
- Zhu, B., Kuhel, D. G., Witte, D. P., Hui, D. Y. Apolipoprotein E inhibits neointimal hyperplasia after arterial injury in mice. Am J Pathol. 157 (6), 1839-1848 (2000).
- Fu, Y., Duru, E. A., Davies, M. G. Effect of metabolic syndrome on the response to arterial injury. J Surg Res. , (2014).
- Kuhel, D. G., Zhu, B., Witte, D. P., Hui, D. Y. Distinction in genetic determinants for injury-induced neointimal hyperplasia and diet-induced atherosclerosis in inbred mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 22 (6), 955-960 (2002).
- Cooley, B. C. Mouse strain differential neointimal response in vein grafts and wire-injured arteries. Circ J. 71 (10), 1649-1652 (2007).
- Ishigami, N., et al. Deficiency of CuZn superoxide dismutase promotes inflammation and alters medial structure following vascular injury. J Atheroscler Thromb. 18 (11), 1009-1017 (2011).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
