Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Chicken İnsan Multipl Miyelom Xenograftlarında Modeli Kurulması Tümör Büyüme, Invasion ve Anjiogenez Eğitim için

12.7K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/52665

⸱

1 Mayıs 2015

 ,  ,  , 
1Department of Internal Medicine V, Innsbruck Medical University, 2Oncotyrol GmbH, 3Tyrolean Cancer Research Institute, 4Division of Vascular Biology, Department of Medical Biochemistry and Biophysics, Karolinska Institute

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

İnsan multipl miyeloma (MM) hücreler, mezenkimal hücreler ve hayatta kalma ve proliferasyon için hücre dışı matris bileşenlerinin destek mikro-gerektirir. Biz tümör büyümesi, işgali ve anjiyogenez üzerine kanser ilaçlarının etkilerini incelemek için engrafted insan miyelom ve mezenkimal hücreler ile in vivo tavuk embriyo modelini kurdu.

Özet

Multipl miyelom (MM), malign plazma hücre hastalığı, çaresiz kalır ve yeni ilaçlar hastaların prognozu iyileştirmek için gereklidir. Nedeniyle, kemik mikro-ve oto / parakrin büyüme faktörlerinin eksikliği insan MM hücrelerinin yetiştirilmesi güçtür. Bu nedenle, insan MM hücreleri üzerinde yeni bir terapötik etkisini incelemek için in vitro ve in vivo kültür sistemlerinde uygun kurmak için acil bir ihtiyaç vardır. Burada, in vitro ve in vivo olarak kompleks 3 boyutlu bir ortamda insan multipl miyeloma hücrelerinin büyümesi için bir model sunmaktadır. MM hücre hatları OPM-2 ve RPMI-8226 transgen GFP ifade transfekte edildi ve insan mezenkimal hücreler ve kolajen varlığında yetiştirilmiştir tip-I üç boyutlu küremsi olarak matris. Buna ek olarak, sferoidler, tavuk embriyo koriyoalantoik membran ı (CAM) üzerinde aşılandı ve tümör büyümesi stereo flöresanlı mikroskobu ile kontrol edilmiştir. Her iki model de yeni terapötik dru çalışma izinkarmaşık bir 3D ortamı ve bir transgen özgü GFP-ELISA greft homojenizasyon sonrası tümör hücre kitlesinin nicelleştirmesinde gs. Ayrıca, onun altında bulunan bir konukçu dokusuna ev ve tümör hücrelerinin invazyonu anjiyojenik tepkilerin bir stereo mikroskop ile günlük olarak takip edilmekte ve insan tümör hücreleri (Ki-67, CD138, vimentin) ya da ana duvar hücreleri kapsayan kan damarları karşı immunohistokimyasal lekeleme ile analiz edilebilir (desmin / ASMA).

Sonuç olarak, onplant sistem karmaşık bir 3D ortamda MM hücre büyümesini ve anjiyogenez okuyan izin verir ve MM hücrelerinin hayatta kalma ve çoğalmasını hedefleyen yeni terapötik bileşikler için tarama sağlar.

Giriş

Multipl miyelom (MM), kemik iliğinde malign plazma hücrelerinin proliferasyonu, kemik lezyonları ve immün yetmezlik 1 ile karakterizedir. Proteazom inhibitörleri (bortezomib) ve immün modülatör ilaçlar (pomalidomid ve lenalidomid) gibi yeni tedavi seçenekleri mevcut olmasına rağmen, MM hala korkunç bir prognoz ile tedavi edilemez bir malignite olmaya devam etmektedir 2. Kötü prognoz, özellikle uzun süreli tedavi ve MM klonlarının seçim baskısı altında, tedaviye değişken yanıtlara katkıda bulunan MM hücre klonlarının olağanüstü heterojenliği ile açıklanabilir 3.

Yeni ilaçların ve bunların kombinasyonlarının in vitro ve in vivo klinik öncesi testleri, gelecekteki ilaç geliştirme için kritik ve zaman alıcı bir adımdır. Bu nedenle, hastalığın biyolojisini daha iyi anlamak ve yeni ilaçların keşfedilmesini sağlamak için yararlı in-vivo MM modelleri gereklidir. Aslında, hematolojik maligniteler ve terapötikler için en iyi ksenotransplantasyon modelleri, şiddetli kombine immün yetmezlik (SCID) fareleri 4-7, obez olmayan diyabetik / SCID (NOD / SCID) fareleri 8,9 veya β-mikroglobulin nakavt NOD / SCID fareleri 10,11 gibi bağışıklık eksikliği olan farelerdir.

İnsan MM'nin fare modelleri bazı yönlerden insan hastalığının fenotipine benzeyebilse de, bağışıklık eksikliği olan fareler akraba evlidir, bu nedenle bir ilaca yalnızca bir bireysel yanıtı simüle eder ve maliyetler çok yüksektir. İmmünosupresyon nedeniyle hayvanlar özel bakım koşulları gerektirir ve farelerde insan MM'sinin aşılanması 6 hafta ila 2 ay gerektirir 9,12, hücreler daha düşük hayvan sağkalım oranları ile teknik olarak zorlu bir prosedür kullanılarak doğrudan kemik iliğine aşılanmadıkça 7,13. Bu nedenle, kök hücre bazlı organoid modelleri 14, doku mühendisliği 15 veya sofistike 3D hücre kültürü modelleri 16 kullanan yeni yöntemler oluşturulmuştur. Yakın gelecekte klinik öncesi ilaç testleri için klasik hayvan deneyleri ile rekabet edecekler, ancak canlı organizmalarda sistemik toksisite testlerinin yerini alamayacaklar.

Tavuk embriyosunun, yumurtadan 17-19 çıkana kadar adaptif immün yanıt eksikliği nedeniyle insan hücrelerinin ve dokularının ksenotransplantasyonu için uygun bir organizma olduğu daha önce gösterilmiştir. Ayrıca, her tavuk embriyosu, tavuk popülasyonundaki genetik çeşitlilik nedeniyle uygulanan ilaçlara veya tümör hücrelerine karşı bireysel bir reaksiyonu yansıtır. Koryoallantoik membran (CAM), tümöre bağlı anjiyogenez 20-22'yi incelemek için iyi kurulmuş bir sistemdir. Solid tümörler TAT'a aşılandığında, proliferasyon, invazyon, anjiyogenez ve metastaz dahil olmak üzere in vivo kanserlerin birçok özelliğini gösterirler 23-27.

Grubumuzun CAM ksenogreft modelleri20,26,27 ile önceki deneyimlerine dayanarak, bir insan 3D kültür sisteminin avantajını ex ovo gelişmekte olan tavuk embriyoları modeliyle birleştiren bir insan MM modeli oluşturulmuştur. Bu MM model sistemi, MM büyüme ilerlemesinin gerçek zamanlı olarak izlenmesine, hücre kütlesinin miktarının belirlenmesine ve klinik öncesi ilaç testine izin verir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Laboratuar Hayvan Refah hatching.The NIH Ofisi, bu alanda (http yazılı kılavuzu sağlamıştır kadar Avusturya hukuk ve ABD kamu sağlık hizmeti kuş embriyo Laboratuvarı Hayvan Refahı Dairesi'ne göre, canlı omurgalı hayvanlar olarak kabul edilmez: // www.grants.nih.gov/grants/olaw/references/ilar91.htm ve NIH Yayın No .: 06-4515).

1. Hücre Kültürü ve lentiviral transfeksiyonu

  1. Kültür MM hücre çizgileri OPM-2, RPMI-8226 ve RPMI1640 ortam maddesi, kemik iliğinden insan mezenkimal kök hücreleri, varlığında,% 10 sığır cenin dana serumu ve 100 IU / ml penisilin, 100 ug / ml streptomisin ve 2 mM glutamin ile desteklenmiş 37 ° C'de% 5 CO2 içinde.
  2. Transfect 5 x 10 ila 30 ul, lipozomal transfeksiyon reaktifi ve transfeksiyon ortamı (10 mi) kullanılarak viral paketleme karışımı (9 ug) DNA ve 3 ug pLenti6 / V5 hedef EGFP vektörü ile 6 HEK 293FT hücreleri. 12 saat sonra, transfeksiyon aracı maddesi çıkarın veve% 10 buzağı serumu ve% 1 temel olmayan amino asitler (NEAA), 10 ml DMEM ortamı ilave edin.
  3. 5 gün sonra, yüzme hücreleri (1000 xg, 5 dakika) santrifüje edilmesinden sonra HEK293FT hücre süpernatantlar toplamak. Başka bir yerde 28 açıklandığı gibi, gerçek zamanlı PCR ile viral titresi belirleyin.
  4. Tam büyüme ortamı içinde 24 oyuklu bir plaka içerisinde EGFP lentiviral parçacıklar (1 x 10 5 parçacıklar) 1 x 10 6 MM hücreleri transfekte. 3 gün sonra, 2 ug / ml kültür ortamına blastisidin ekleyerek seçim süreci başlar. Ticari olarak temin edilebilen EGFP lentivirüs için, 500 ug / ml neomisin kullanın.
  5. Seçimin 2 hafta sonra, MM hücrelerini ifade eGFP kümeleri görünecektir; santrifüj (1000 xg, 5 dk) tarafından hücreleri toplamak ve deneyler için OPM-2 eGFP ve RPMI-8226 eGFP alt hatları olarak genişletmek (bölüm 2 ve 3).

2. 3D-Multipl Miyelom Sferoid Modeli

  1. Chill kollajen tip I çözümü ve 10 x DMEM on buz.
  2. Kollajen matrisi içine 10 x DMEM ortamı içinde 1/10 hacim karıştırın; 7.4 arasında bir pH değerine, asidik kolajen çözeltisi nötralize etmek için NaOH (0.2 N) ilave et; Mağaza kollajen / buz üzerinde, orta bir çözüm.
  3. Transgenik MM hücre hatları (OPM-2 eGFP veya RPMI-8226 eGFP; sfero başına 250.000) karıştırın insan mezenkimal hücreler (50,000 hücre / sfero, yani 30 ul damla) ile.
  4. 15 ml tüpler (1000 xg, 5 dakika) Santrifüj hücre karışımı, hücre peleti soğuk hazırlanan kollajen karışımı (1 mL) ekleyin ve (1.000 ul ucu) ile iyice karıştırın.
  5. Hemen steril parafın film üzerinde 24 oyuklu bir plaka (100 | il ucu ile) kollajen / hücre karışımından 30 ul pipet ve hücre / kollajen karışımı 37 ° C'de (Şekil 1A bakınız), 30 dakika boyunca polimerize izin verir.
  6. 1, 10 ve 100 nM Bortezomibin ihtiva eden 1 ml kültür ortamı ile Bindirme MM sferoidler (Şekil 1B'ye bakınız).
  7. 37 ° C'de inkübasyondan 72 saat sonra, belge tarafından sferoidlerfloresan stereomikroskobi (Şekil 1C bakınız).
  8. GFP ölçümü için, bir reaksiyon tüpü içinde geniş düz çeneli forseps kullanılarak her bir sfero aktarın (Şekil 1D bakınız).

CAM 3. 3D Multipl Miyelom Ksenograft Modeli

  1. Üç gün için özel bir 37 ° C 'de kuş yumurtaları için inkübatöre ve% 70 nemde tavuk yumurtası inkübe edin.
  2. Bundan sonra, açık yumurta ve embriyo transferi hücre kültürü plaka kapağı ile etanol, kare, 10 cm plastik tartım tekneler sterilize etmek ve CAM (Şekil 2A) geliştirmek mümkün olduğu, böylece daha altı gün boyunca "ex ovo" kuluçkaya yatmaktadır.
  3. Hissedilen kolajen tip-I çözeltisi ve buz üzerinde 10 x DMEM, 7.4 olan bir pH değerine asidik kolajen çözeltisi nötralize edilmesi için (N 0.2) NaOH ekleyin, kollajen matris 10 x DMEM ortamı içinde 1/10 hacim karışımı; Mağaza kollajen / buz üzerinde, orta bir çözüm.
  4. Transgenik MM hücre hatları (OPM-2 eGFP veya MixRPMI-8226 eGFP; Insan mezenkimal hücreler ile sfero) başına 250.000 (50.000 hücre / sfero).
  5. 15 ml tüpler Santrifüj hücreleri (1,000 x g, 5 dk; her bir test bileşiği 1 şişe için) hücre pelletine (istenilen çalışma konsantrasyonunda) ilaç ile 1 ml soğuk hazırlanan kollajen karışımı ekleyin ve iyice karıştırın (1000 ul ucu ile birlikte).
  6. 37 ° C'de hücre dışı matrisin polimerizasyonun izin vermek için 30 dakika süreyle de Pate, bir 6 kolajen damla Parafilm (30 ul her) yerleştirin.
  7. (2 cm uzakta embriyodan) 9 gün eski tavuk embriyolarının CAM işlem görmemiş yüzeyine forseps kullanımı ile adım 3,6 Transferi "onplants" (her tavuk embriyo için 4 onplants, Şekil 2B bakınız)
  8. Floresan stereomikroskobi in vivo 37 ° C'de bir yumurta inkübatör büyüme ve% 70 nem, belge ksenograftlarının 5 gün sonra (bakınız Şekil 2c). 5 saat buzdolabında 4 ° C'de hipotermi ile tavuk embriyoları Euthanize.
  9. Bir göz makas ile alttaki CAM dokusu ile xenografts çıkarın ve geniş düz çeneleri ile forseps. GFP ölçümü için bunları kullanın (bölüm 4, Şekil 2D) ya da kan damarları ve / veya işgalci tümör hücreleri (bölüm 5) immünohistokimyasal analizi için.

ELISA ile EGFP Protein Niceleme 4.

  1. 0.5 mi, RIPA tamponunun 200 ug / ml proteaz inhibitörleri ihtiva eden her bir AA sfero veya kesilmiş xenograft aktarın.
  2. Buz üzerinde bir doku homojenleştirici ile sfero / xenograft homojenize.
  3. Sıvı nitrojen içinde üç dondurma / çözülme-döngüleri ve 37 ° C su banyosu gerçekleştirin.
  4. 20 dakika (12,000 g), ve mağaza süpernatanları 4 ° C'de santrifüje homojenat.
  5. Numuneleri ELISA kiti deney tamponu (200 ul) içinde 1:20 seyreltilir. Üreticinin protokolüne uygun olarak, biyotinile edilmiş anti-GFP antikorları kullanılarak ticari bir GFP ELISA kiti ile GFP düzeyleri ölçülür.

5. ImmunohiKan gemiler ve istila Tümör Hücrelerinin stochemical Analizi

  1. 4 ° C'de /% 4 paraformaldehit O'da N CAM alanı ile eksize ksenograftları sabitleyin.
  2. Gömme kasetlerin içine sabit xenografts yerleştirin ve artan kademeli alkol serisi (% 50,% 70,% 80,% 95 etanol, ksilol ve parafin, her adım 60 dk) ile bir doku gömme istasyonu içine aktarabilirsiniz.
  3. Bir Benchtop döner mikrotom kullanılarak Bölüm ksenogrefleri (5 um). 56 ° C'de cam slaytlar O / N üzerinde parafin kesitler pişirin.
  4. Iki kez damıtılmış su ile azalan bir kademeli alkol serisi ile Deparaffinize bölümler (ksilol,% 95,% 80,% 70,% 50 etanol, iki kez damıtılmış su, her bir adım, 10 dakika).
  5. Bir antijen alma çözeltisi bir su banyosu (95 ° C, 20 dakika) içinde antijen alımı gerçekleştirmek (sitratla tamponu; pH 7.0; hacim 100 ul).
  6. 30 dakika boyunca 100 ul% 3 H 2 O 2 / metanol endojen peroksidaz etkinliğini bloke eder.
  7. PBS içeren Blok bölümleri45 dakika boyunca (hacim 100 ul)% 10 fetal dana serumu.
  8. PBS oda sıcaklığında% 1 fetal buzağı serumu ihtiva eden seyreltilmiş primer antikor (1 ug / ml) 100 ul ile 1 saat için leke.
  9. PBS içinde 3-kere yıkandıktan sonra, oda sıcaklığında PBS,% 1 fetal buzağı serumu ihtiva eden biyotinile edilmiş ikincil antikor (0.1 ug / ml) ile 1 saat süreyle inkübe edin.
  10. PBS içinde 3-kere yıkandıktan sonra, üreticinin talimatlarına uygun olarak, avidin / biyotin-kompleksi (ABC) ve diaminobenzidin (DAB) alt-tabaka çözeltisi ile renk reaksiyonu gerçekleştirmek.
  11. 5.11. Hematoksilen ile çifte damıtılmış su, karşıt Bölümleri aktararak reaksiyonu durdurmak ve sentetik montaj ortamı ile bölümleri monte edin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

3D multipl miyelom küremsi deneylerinde hedef bileşiklerin in vitro analizlerde

In vitro olarak, birincil insan AA hücrelerin kültürlenmesi sınırlama kemik iliğinden hücre dışı büyüme matrisi ve destekleyici primer insan mezenkimal hücreler kullanarak, insan MM hücre hatları için yeni 3D, in vitro kültür modellerinde kuruldu (Şekil 1A, B). EGFP transgenik MM hücre hatları küremsilerde 3D büyüme sonrası görselleştirme ve MM tümör ki...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Refrakter MM için yeni terapötik maddelerin geliştirilmesi ilaçların insan MM hücrelerinin duyarlılığını değerlendirmek için daha az zaman alıcı ve pahalı in vivo sistemlerini gerektirmektedir. Şimdiye kadar, sadece birkaç in vivo sistem yeni bir anti-miyeloma terapisi klinik öncesi değerlendirilmesi için kullanılabilir. Bunların hepsi birleşik kütüphaneler 29 büyük ölçekli tarama için kendi sınırlamaları vardır.

İnsan MM hücreleri için en iyi güncel modeller oldukça bağışıklık eksikli...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarını var

Teşekkürler

Yazarlar, immünohistokimya ve tavuk embriyolarının hazırlanmasındaki mükemmel teknik yardımı için Bayan Cornelia Heis'e teşekkür etmek istiyor. Bu çalışma, Avusturya Bilim Fonu (FWF Hibe No. P19552) ve Avrupa Birliği (AB FP7 projesi Optatio No: 278570) tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
RPMI-8226 hücreleriDSMZACC 9STR profilli
OPM-2 hücreleriDSMZACC 50STR profilli
İnsan mezenkimal kök hücreleri PromoCellPC-C-12974
HEK293FT hücreleri InvitrogenR700-07
RPMI1640 Orta SigmaAldrichR0883
Fetal Sığır Serumu  HyCloneThermoScientificSH30070.03
L-Glut-Pen-Strep solüsyonuSigmaG6784
DMEM MediumGibco31966
NEAASigma Life SciencesM7145
Transfeksiyon Ortamı/Opti-MEM Gibco51985
eGFP lentiviral partiküllerGeneCopoeiaLPP-EGFP-LV105Kullanıma hazır viral partiküller
pLenti6/V5Dest6 eGFP vektörüInvitrogenPN 35-1271yazarlardan
ViralpowerTM ambalaj karışımı InvitrogenP / N 35-1275
Transfeksiyon reaktifi / Lipofectamin 2000Invitrogen11668-027
BlasticidinInvitrogenR210-01
Neomisin BiochromA2912
Kollajen Tipi1   Sıçan KuyruğuBD Biosciences354236
DMEM tozuYaşam TeknolojileriArt.Nr. 10338582
plitidepsinPharmamar
bortezomibLKT Lab., Inc.B5871
SPF-beyaz tavuk yumurtasıCharles NehriDöllenmiş  beyaz Leghorn  tavuk yumurtası
Plastik tartı teknelerineoLabArt.Nr. 1-1125ex-ovo kültürü için
Petridish kare (Kapaklar)SimportEx-ovo kültürü içinD210-16
RIPA Tamponu (10x)Hücre Sinyali#9806
Proteaz İnhibitör TabletlerRoche11 836 170 001
Komple Mini EDTA içermeyen
GFP ELISACell Biolabs, Inc.AKR-121
Histocette IIİthalatM493-6
PFA  %37Roth7398.1
DPBSLonzaBE17-512F
Etanol absolutNormapur20,821,321
Roti-HistolRothArt.Nr.6640.4
ParaplastSigmaA6330
SuperFrost Mikroskop SlaytlarıR. Langenbrinck Ürün No.
Labor- u. Medizintechnik03-0060
DakoCytomation Yıkama Tamponu 10xDakoCytomationCode-No-Nr.
S 3006
Hedef Alma Çözeltisi (10x)  pH 6,1DAKOKod-Nr.
S 1699
H2O2Merck
m-a-hu ASMA klonu 1A4DAKOM0851
m-a-hu CD138 klonu MI15DAKOM7228
m-a-hu Vimentin klonu V9DAKOM0725
m-a-hu Desmin klonu D33DAKO  M0760
m-a-hu Ki67  klon MIB-1   DAKO  M7240
biyotinile keçi anti-fare IgGVektör Laboratuvarları A.Ş.BA-9200
Vectastain Elite ABC KitiVektör Laboratuvarları A.Ş.# PK-6100
HIZLI DAB Tablet Seti.Sigma Biyokimyasallar# D4293
Mayer' s haemalaun solüsyonuMerck1,092,490,500
Roti HistokittRothArt.Nr.6638.2
Tezgah üstü döner mikrotomThermo Electron, Shandon Finesse ME+
Doku gömme istasyonuLeica, TP1020
Yumurta Kuluçka MakinesiGrumbach BSS160
Stereo floresan mikroskobu, bir dijital kamera (Olympus E410) ve esnek soğuk ışık ile donatılmıştır.Olympus, SZX10
Ultra Turrax IKA T10Homojenizatör

Kaynaklar

  1. Kuehl, W. M., Bergsagel, P. L. Multiple myeloma: evolving genetic events and host interactions. Nat.Rev.Cancer. 2 (3), 175-187 (2002).
  2. Kumar, S. K., Gertz, M. A. Risk adapted therapy for multiple myeloma: back to basics. Leuk.Lymphoma. , (2014).
  3. Prideaux, S. M., Conway, O. E., Chevassut, T. J. The genetic architecture of multiple myeloma. Adv.Hematol. 2014, 864058(2014).
  4. Chauhan, D., et al. A novel orally active proteasome inhibitor ONX 0912 triggers in vitro and in vivo cytotoxicity in multiple myeloma. Blood. 116 (23), 4906-4915 (2010).
  5. Kuehl, W. M. Mouse models can predict cancer therapy. Blood. 120 (2), 238-240 (2012).
  6. Nefedova, Y., Gabrilovich, D. Mechanisms and clinical prospects of Notch inhibitors in the therapy of hematological malignancies. Drug Resist.Updat. 11 (6), 210-218 (2008).
  7. Yaccoby, S., Barlogie, B., Epstein, J. Primary myeloma cells growing in SCID-hu mice: a model for studying the biology and treatment of myeloma and its manifestations. Blood. 92 (8), 2908-2913 (1998).
  8. Dazzi, F., et al. Normal and chronic phase CML hematopoietic cells repopulate NOD/SCID bone marrow with different kinetics and cell lineage representation. Hematol.J. 1 (5), 307-315 (2000).
  9. Lock, R. B., et al. The nonobese diabetic/severe combined immunodeficient (NOD/SCID) mouse model of childhood acute lymphoblastic leukemia reveals intrinsic differences in biologic characteristics at diagnosis and relapse. Blood. 99 (11), 4100-4108 (2002).
  10. Feuring-Buske, M., et al. Improved engraftment of human acute myeloid leukemia progenitor cells in beta 2-microglobulin-deficient NOD/SCID mice and in NOD/SCID mice transgenic for human growth factors. Leukemia. 17 (4), 760-763 (2003).
  11. Pearce, D. J., et al. AML engraftment in the NOD/SCID assay reflects the outcome of AML: implications for our understanding of the heterogeneity of AML. Blood. 107 (3), 1166-1173 (2006).
  12. Li, M., et al. Combined inhibition of Notch signaling and Bcl-2/Bcl-xL results in synergistic antimyeloma effect. Mol.Cancer Ther. 9 (12), 3200-3209 (2010).
  13. Tassone, P., et al. A clinically relevant SCID-hu in vivo model of human multiple myeloma. Blood. 106 (2), 713-716 (2005).
  14. Ranga, A., Gjorevski, N., Lutolf, M. P. Drug discovery through stem cell-based organoid models. Adv.Drug Deliv.Rev. 69-70, 19-28 (2014).
  15. Pereira, R. F., Barrias, C. C., Granja, P. L., Bartolo, P. J. Advanced biofabrication strategies for skin regeneration and repair. Nanomedicine.(Lond). 8 (4), 603-621 (2013).
  16. Fischbach, C., et al. Engineering tumors with 3D scaffolds). Nat.Methods. 4 (10), 855-860 (2007).
  17. Boulland, J. L., Halasi, G., Kasumacic, N., Glover, J. C. Xenotransplantation of human stem cells into the chicken embryo. J.Vis.Exp. (41), (2010).
  18. Deryugina, E. I., Quigley, J. P. Chapter 2. Chick embryo chorioallantoic membrane models to quantify angiogenesis induced by inflammatory and tumor cells or purified effector molecules. Methods Enzymol. 444, 21-41 (2008).
  19. Deryugina, E. I., Quigley, J. P. Chick embryo chorioallantoic membrane model systems to study and visualize human tumor cell metastasis. Histochem.Cell Biol. 130 (6), 1119-1130 (2008).
  20. Kern, J., et al. GRP-78 secreted by tumor cells blocks the antiangiogenic activity of bortezomib. Blood. 114 (18), 3960-3967 (2009).
  21. Ribatti, D., Nico, B., Vacca, A., Presta, M. The gelatin sponge-chorioallantoic membrane assay. Nat.Protoc. 1 (1), 85-91 (2006).
  22. Ribatti, D. The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for tumor biology. Exp.Cell Res. , (2014).
  23. Dohle, D. S., et al. Chick ex ovo culture and ex ovo CAM assay: how it really works. J.Vis.Exp. (33), (2009).
  24. Kobayashi, T., et al. A chick embryo model for metastatic human prostate cancer. Eur.Urol. 34 (2), 154-160 (1998).
  25. Koop, S., et al. Fate of melanoma cells entering the microcirculation: over 80% survive and extravasate. Cancer Res. 55 (12), 2520-2523 (1995).
  26. Martowicz, A., Spizzo, G., Gastl, G., Untergasser, G. Phenotype-dependent effects of EpCAM expression on growth and invasion of human breast cancer cell lines. BMC.Cancer. 12, 501(2012).
  27. Martowicz, A., et al. EpCAM overexpression prolongs proliferative capacity of primary human breast epithelial cells and supports hyperplastic growth. Mol.Cancer. 12, 56(2013).
  28. Geraerts, M., Willems, S., Baekelandt, V., Debyser, Z., Gijsbers, R. Comparison of lentiviral vector titration methods. 6, 34(2006).
  29. Farnoushi, Y., et al. Rapid in vivo testing of drug response in multiple myeloma made possible by xenograft to turkey embryos. Br.J.Cancer. 105 (11), 1708-1718 (2011).
  30. Wunderlich, M., Krejci, O., Wei, J., Mulloy, J. C. Human CD34+ cells expressing the inv(16) fusion protein exhibit a myelomonocytic phenotype with greatly enhanced proliferative ability. Blood. 108 (5), 1690-1697 (2006).
  31. Hideshima, T., Mitsiades, C., Tonon, G., Richardson, P. G., Anderson, K. C. Understanding multiple myeloma pathogenesis in the bone marrow to identify new therapeutic targets. Nat.Rev.Cancer. 7 (8), 585-598 (2007).
  32. Parikh, M. R., Belch, A. R., Pilarski, L. M., Kirshner, J. A three-dimensional tissue culture model to study primary human bone marrow and its malignancies. J.Vis.Exp. (85), (2014).
  33. Schuler, J., Ewerth, D., Waldschmidt, J., Wasch, R., Engelhardt, M. Preclinical models of multiple myeloma: a critical appraisal. Expert.Opin.Biol.Ther. 13, Suppl 1. S111-S123 (2013).
  34. Kirshner, J., et al. A unique three-dimensional model for evaluating the impact of therapy on multiple myeloma. Blood. 112 (7), 2935-2945 (2008).
  35. Jilani, S. M., et al. Selective binding of lectins to embryonic chicken vasculature. J.Histochem.Cytochem. 51 (5), 597-604 (2003).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Tavuk Embriyo ModeliT m r B y me AnaliziGFP Ekspresyon l mKoryoallantoik Membran GreftiStereo Floresan Mikroskopimm nohistokimyasal BoyamaGFP ELISA Kantifikasyonunsan Mezenkimal H creleriTip I Kolajen Matrisi
Chicken İnsan Multipl Miyelom Xenograftlarında Modeli Kurulması Tümör Büyüme, Invasion ve Anjiogenez Eğitim için
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.