Mezenkimal kök hücreler genellikle kemik iliğinden elde edilir ve genişletme kültürü gerektirir. Numuneler işlenmeden önce pıhtılaştığında, pıhtıyı parçalamak için (enzimatik) trombolitik ilaç ürokinaz kullanan bir protokol uygulanabilir. Böylece hücreler serbest bırakılır ve genleşme kültürü için kullanılabilir hale gelir. Bu protokol, yeniden örneklemeye hızlı ve ucuz bir alternatif sunar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bir Enzimatik Yöntem Kaymaklı Kemik İliği Örneklerinden Mezenkimal Kök Hücreler Kurtarma
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Genellikle kemik iliğinden elde edilen mezenkimal kök hücreler (MSC'ler) genellikle genleşme kültürü gerektirir. Protokolümüz, kemik iliğindeki pıhtıları parçalamak ve daha fazla kullanım için MSC'leri serbest bırakmak için klinik derece ürokinaz kullanır. Bu protokol, kemik iliği yeniden örneklemesine hızlı ve ucuz bir alternatif sunar. Kemik iliği, doku mühendisliği ve otolog kök hücre tedavileri için ilginç olan MSC'lerin önemli bir kaynağıdır. Çekilme üzerine kemik iliği, hematopoetik sistemin tamamını içerdiği için pıhtılaşabilir. Elde edilen pıhtılar, genişleme kültürü veya doğrudan kök hücre tedavisi için kaybedilen MSC'leri de içerir. Köpek kemik iliği örneklerinin %74'ünün pıhtı içerdiğini ve pıhtılaşmamış örneklerden beklenen kök hücre sayısının yarısından daha azını verdiğini deneyimledik. Bu nedenle, emek yoğun ve maliyetli kemik iliği yeniden örneklemesini önlemek için bu pıhtıların enzimatik sindirimi için bir protokol geliştirdik. Klinik olarak onaylanmış ve kolayca bulunabilen trombolitik bir ilaç olan ürokinaz, kemik iliği pıhtılarını neredeyse tamamen temizler. Sonuç olarak, tedavi edilen kemik iliği aspiratları, pıhtılaşmamış örneklerle benzer sayıda MSC verir. Ayrıca, ürokinaz tedavisinden sonra hücreler metabolik aktivitelerini ve kondrojenik, osteojenik ve adipojenik soylara farklılaşma yeteneklerini korudular. Protokolümüz, hücrelerin kalitesini etkilemeden pıhtılaşmış kan ve kemik iliği örneklerini kurtarır. Bu, yeniden örneklemeyi geçersiz kılar, numune alma maliyetlerini önemli ölçüde azaltır ve pıhtılaşmış numunelerin araştırma veya tedavi için kullanılmasını sağlar.
Giriş
Mezenkimal kök hücreler (MKH) rejeneratif tıp ve doku mühendisliğinde önemli bir rol oynamaktadır. Onlara otolog tedaviler 2,3 için ideal bir aday kılan, hangi çeşitli hücre tipleri 1 içine ayırt ve aşılamak, göç edebilir. Son zamanlarda, kemik ve kıkırdak onarımı için MKH'lerin kullanarak klinik çalışmalarda, host hastalığı veya kalp hastalığı greft versus 4 başlatıldı. Bu MSC'ler göbek kordonu ya da yağ dokusu hasat edilir, ancak en fazla umut vaat eden sonuçlar kemik iliğinden elde edilen kök hücreleri 5 elde edilmiştir.
iliak kemik iliği önemli miktarda toplamak için izin verir ve bu nedenle aspirasyon 6 ana site olarak hizmet vermektedir. Ancak, aspirat kalitesi çekilen kemik iliği hacmini artması ile azalmaktadır. Kemik iliği aspirasyon ilk 5 ml kaliteli MKH'lerin ihtiva ederken, daha büyük hacimli çekilmesi periferik kan f aspirat seyreltme yol açarçok kanlanan kemik 7 rom. Antikoagülan kullanıldığı sürece Çünkü mevcut megakaryositlerin ve trombosit, kemik iliği aspirasyon, pıhtılaşma yatkındır. Ama bile antikoagülan, pıhtıları oluşabilir.
Kemik iliğinde, MKH toplam hücre havuzunun 8 sadece küçük bir kısmını temsil ve birçok doku mühendisliği veya terapötik uygulamalar 4 kültür genişletilmiş gerekir. Böyle bir kültürün kalitesi büyük ölçüde ilk hücre havuzu, yani bağlıdır., çeşitlilik ve yüksek başlangıç numarası 9. Çekme gelen MKH Düşük sayılar kısmen donör değişkenliği ile açıklanabilir. Diğer taraftan, düşük kaliteli örneklerinden MKH hücre istenilen sayıda ulaşmak için kültürde uzun süre ve genişletilmiş Pasajlanması gerektirir. Her iki durumda da, uzun pasajı hücre yaşlanmasının kaynağıdır ve 10, potansiyel farklılaşmanın aşamalı olarak kaybına yol açabilir. Bu nedenle, hücre y maksimize protokolleri optimizeield ve zararlı etkileri 11,12 geliştirilmesi gerekmektedir engellemek.
Biz köpek MSC ile çalışmaya başladığında neyse pıhtılaşmış insan örnekleri (on bir) daha az sıklıkta iken, biz, yaklaşık üç dört köpek kemik iliği örnekleri pıhtıları içerdiğini görmek için şaşkın. Öte yandan biz pıhtılaşmış örneklerinden MKH çok daha düşük verim gözlenen, hiçbir sürpriz oldu. Pıhtılaşmış numuneler tekrarlanan sorunu çözmek için, biz yeniden örnekleme yerine trombolitik ilaç urokinez kullanarak protokolü geliştirdi.
Trombolitik tedavi, kalp krizi, felç nedeniyle veya istenmeyen pıhtılaşma embolileri neden kan damarlarının tıkanması gibi hayatı tehdit eden durumları ortadan edebilirsiniz. Onlar plazmin ve enzimatik plazminojen aktivatörleri ile fibrin enzimatik bölünme yoluyla pıhtıların bozulması ile çalışır. Hastaların tedavisi için geniş kullanım rağmen, sadece çok az yayın çok kullanılan trombolitik faaliyetler olduğunu varLaboratuvar uygulamaları pıhtılaşmış numuneler kurtarmak için, çoğunlukla lenfositler üzerinde duruluyor. 1987 yılında, Niku ve ark. 13 ve dört yıl sonra fonksiyonel lenfosit sonuçlanan kan pıhtıları eriterek streptokinaz kullanımını tarif De Vis ark. Akış sitometri uygulamaları 14 kan ve kemik iliğinden lösemi hücreleri izole etmek için streptokinaz kullanımı genişletilmiş. Daha yeni bir yayın kanser teşhisinde 15 Alteplaz kullanımını önermektedir. Aynı enzimatik yaklaşımı kullanırken, bizim protokol kök hücre alanındaki araştırmacılar için bir araç sağlamak için multipotent MKH formu kemik iliği izolasyonu üzerinde duruluyor.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
NOT: iliak İnsan kemik iliği aspirasyon Lucerne kantonunda etik kurul onayı ile donör rıza toplanmıştır. Iliak gelen köpek kemik iliği aspiratlan (yakl. 20 mL) ile köpek sahibinin consent.Human ile toplandı ve köpek (yaklaşık. 10 mi), kemik iliği aspiratları, anti-pıhtılaşmış hemen kesilmesinden sonra,% 3.8 sodyum sitrat solüsyonu, 15 ml ilave edilerek ameliyathanede. Numuneler geri aynı gün işleme laboratuar ortamına transfer edilmiştir.
Urokinaz 1. Hazırlama (önce 1 st Kullanımı)
- Üreticinin talimatlarına uygun olarak steril fosfat tamponlu salin (PBS) ile ürokinaz sulandırın: 10 ml'lik bir şırınga kullanılarak, septum-giriş şişeye 10 ml PBS ekleyin. Ml başına 50.000 enjeksiyon üniteleri (U) elde etmek için dönen kuru madde çözülür.
- S içine 500 ul alikotları (25.000 U her) hazırlanmasıterile tüpler. Mağaza alikotları -20 ° C ve en az 6 ay için gerekli olan zaman kullanın.
2. Hazırlama Adımları (Önceki Her Kemik İliği Tedavisi)
- Ürokinaz bir kısım pıhtılaşmış kemik iliği aspiratı başı (25,000 U), (25 ml aspirasyon hacmi başarıyla 25000 U, tek bir kısım ile tedavi edilmiştir) çözülme.
- 37 ° C su banyosu veya sallayarak inkübatör ısıtın.
Pıhtısı 3. Enzimatik Digest
- Işleme sırasında kemik iliği örneklerinin mikrobiyal kontaminasyonu önlemek için bir laminer akış biyogüvenlik kabininde tüm çalışmaları gerçekleştirin. Potansiyel bulaşıcı insan malzeme ile çalışırken, koruyucu eldiven yanı sıra dikkatli taşıma kullanımı tavsiye edilir.
- Bir steril 50 ml tüp üstünde bir 100 um hücre süzgecinden yerleştirin. Dikkatle süzgeç eğerek veya pıhtı malzemesinin dolaşırım, hücre süzgecinden kemik iliği aspiratını dökün. Için steril bir pipet ucu kullanarakFiltre örgü ile daha iyi akış.
NOT: PBS ile pıhtı yıkanmasıyla, örneğin, pıhtı herhangi bir seyreltme kaçının. Urokinaz dolaylı hareket ve serum bileşenlerini (yani., Plazminojen) etkili sindirmek için biyopsi gerektirir. Pıhtı malzeme ile işlem devam ederken, filtre ürünü adım 3.6 de kullanılana kadar oda sıcaklığında muhafaza edilebilir. - Steril forseps kullanarak boş bir hücre kültürü çanak içine kemik iliği pıhtı malzemeyi aktarın. Yaklaşık 2 ile 3 mm Steril bir bisturi bıçağını kullanarak küçük parçalar halinde çöpleri kesilir.
- Steril pensler kullanılarak 50 ml'lik bir reaksiyon tüpüne pıhtı küçük parçalar aktarın. Kıyılmış pıhtı ıslak görünüme sahiptir emin olun. Kuru görünüyorsa, nemlendirmek için adım 3.1 den bazı süzülen kullanın.
- Yukarı ve aşağı pipetleme 5 ml mikrotitre pipet kullanarak 5 kez ile pıhtı çiğnemek. Örnek ürokinazın 1 kısım ekleyin. 37 ° C'de ya da bir su banyosunda ya da 30 dakika boyunca inkübe edinBir sallayarak (hafifçe) inkübatör.
- Yukarı ve aşağı pipetleme 5 ml pipet kullanarak 5 kez ile triturate. Bir biyogüvenlik kabini bu adımı gerçekleştirin. 37 ° C'de 30 dakika süreyle inkübe edilir. İnkübasyondan sonra, 5 ml'lik bir pipet kullanılarak 5 kez çiğnemek. Adım 3.2 filtrata ile havuz taze 100 mikron hücre süzgeç üzerinden geçmek.
- Santrifüj 500 x g'de 10 dakika süre ile oda sıcaklığında hücre süspansiyonu. Süpernatantı atın. Aşağıda açıklanan veya MSC genişleme kültürü için laboratuvar standart prosedüre göre medya hücre pelet yeniden askıya.
Genişleme Hücre Kültürü ve CFU Tabaklar 4. Tohumculuk
- Alfa-MEM,% 10 fetal sığır serumu (FBS), 100 U / ml penisilin, 100 mg / ml streptomisin ve 2.5 mg / ml amfoterisin B ile desteklenmiş: bazal ortam, 50 ml (eritrositler ve mononükleer hücrelerinden oluşan) hücreler yeniden süspanse . hücreleri bir Neubauer Chambe kullanarak Tripan Mavi çözeltisi içinde seyreltilmiş 01:10 Sayısır.
- 5 x 10 7 hücre / cm2 yoğunluğunda, hücre kültürü şişelerinde, hücreler plaka ve 37 ° C'de nemlendirilmiş bir kuluçka makinesi içinde inkübe edilir. Varsa, hipoksik (% 5 oksijen) koşulları kullanın. CFU tahlili kontrolü için, 10 cm çapında bir hücre kültürü çanağı içinde 10 9 hücreleri plaka.
- Diğer hücreler, süspansiyon devam ederken, kültür, 3 gün sonra, mezenkimal kök hücreler, hücre kültür kaplarına eklenir. 5 ng / ml temel fibroblast büyüme faktörü (bFGF) ile desteklenmiş bazal ortam maddesi ile ortam kullanın. CFU tahlili kontrolü için, aynı şekilde hücre kültürü çanak davranın.
- Ortam haftada üç kez değiş tokuş, 2 haftada bir toplam hücre kültürü devam edin. Hücreler% 80 confluency aşarsanız, tripsinizasyonla bölünmüş. CFU tahlili kontrolü için, aynı şekilde medya alışverişi, ancak iki hafta kurs için hücreleri bölmek değil.
CFU tahlili için 5. Giemsa
- Tabak başına Giemsa çözeltisi 10 ml hazırlayın: İnceltilmişute stok solüsyonu (gliserol 7.6 g / l Giemsa: metanol) 01:10 steril su (her zaman taze bir çalışma seyreltme hazırlamak).
- Hücre kültürü çanak ortamı çıkarın ve PBS ile hücreleri yıkayın. Petri sıvı uygulanırken çok temkinli olun ve hücreleri yıkama kapalı kaçının.
- Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca saf metanol içinde hücreleri saptamak. Metanol atın. Giemsa çözeltisi ilave edin ve 37 ° C'de, nemlendirilmiş bir kuluçka makinesi içinde, 60 dakika boyunca inkübe edin.
- PBS ile iki kez yıkanır. Hava bir kağıt havlu üzerine ilk plaka kafasını kurulayın. Elle kolonileri sayın. Bu, en iyi plakanın arkasında bir işaretleyici kalem kullanılarak elde edilmektedir.
6. MSC Farklılaşma
- Köpek MKH farklılaşma
NOT: Köpek MKH dört hafta için uygun medya ile stimülasyonu ile kondrojenik, osteojenik ve adipojenik soy içine ayırt edildi. - Için Adipogenic farklılaşma, 4 x 10 5 ce de tek tabaka kültür MKHaşağıdaki gibi rf / cm 2, iki farklı kültür koşulları alternatif;
- DMEM Glutamax,% 3 FBS, 100 ünite / ml penisilin, 100 mg / ml streptomisin, 2.5 ug / ml amfoterisin B ve 170 mM insülin içeren adipogenesis muhafaza ortamında kültürü.
- 3,% FBS,% 5 tavşan serumu, 1 uM deksametazon ile desteklenen koruma aracına sahip adipogenesis indükleyici ortamdan Kültür, 500 uM 3-izobutil-1-metilksantin, 33 uM biyotin, 5 uM roziglitazon ve 16 17 uM pantotenat içerebilir.
- Yağ Kırmızı O ile boyanarak lipid damlacıkları Revel. Kısaca,% 10 formaldehid ile hücrelerin tespit PBS ile yıkayın ve izopropanol içinde% 0.35 yağ-kırmızı O ile boyanır.
- 7 x 10 3 hücre / cm2 ve aşağıdaki teşvik de tek tabakalı Osteogenik farklılaşma kültür MSC'ler için:
- Gelişmiş DMEM (Gibco) + GlutaMAX,% 5 FBS, 100 ünite / ml penisilin, 100 mg / ml streptomisin, 2.5 ug / ml amfoterisin B, 501 M L-askorbik asit 2-fosfat, 10 mM beta-gliserofosfat, 100 nM deksametason.
- Von Kossa leke (% 5 AgNO 3) ile mineralizasyon mevduat belirleyin. Kısaca,% 10 formaldehid ile hücrelerin tespit% 5 damıtılmış su içinde iyodinin 3 ile PBS ve leke ile yıkayın.
- Kondrojenik farklılaşma
- Bir sünger şeklindeki tıbbi cihazdan Kesme küpleri (her iki tarafta da, 3 mm), liofilize kollajen tip I'den oluşturulur ve hücreler 17 desteklemek için iskele malzemesi olarak kullanılır.
- 4 x 10 6 hücre / ml (~ 70,000 hücre / küp) konsantrasyonda küpler üzerine Tohum MSC'ler.
- Ortam eklenmesinden önce, hücreler 30 dakika boyunca küp uymak için izin verir.
- DMEM / F12 + Glutamax,% 2.5 FBS, 100 ünite / ml penisilin, 100 mg / ml streptomisin, 2.5 ug / ml amfoterisin B, 40 ng / ml deksametazon, 50 ug / ml askorbik oluşan kondrojenik ortam MSC-kollajen yapıları korumak asit 2-fosfat,50 ug / ml L-prolin, 1x İnsülin-Transferrin-Selenyum X ve büyüme faktörü-β1 transforme 10 ng / ml olmuştur.
- Yapılar bölümlerde proteoglikanlarla birikimini görselleştirmek için alcian mavi boyama kullanın. Kısaca,% 0.01 H 2SO 4 ve 0.5 M guanidin hidroklorür içinde çözülmüş% 0.4 alcian mavisi ile bölümlere göre O / N leke. Daha sonra, yıkama bölümleri% 40 DMSO ve 0.05 M MgCl2 30 dakika boyunca yıkanmıştır. Hücreler nükleer fast red ile zıt.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
ile birlikte onlar bizim laboratuvar (Şekil 1A) geldi köpek kemik iliği örneklerinin% 74 (n = 54) pıhtıları içerdiği gerçekler bize MKH önemli sayıda pıhtıları içinde tuzağa inanıyorum yaptı, bu örneklerden MSC verimi düşmüştür . Gerçekten de, kesit pıhtı malzemesinin basit bir DAPI leke yüksek yoğunluklu (Şekil 1B) çekirdekli hücrelerin varlığını teyit eder. Bu sonuçta urokinez kullanarak protokolü geliştirmek için bize tetikleyen genişleme kültürü için mevcut MSC düşük sayılar, yol aç...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Hasta sadece küçük bir ek iş ameliyathanede personel tarafından yapılmalıdır avantajı ile, (bizim durumumuzda özellikle omurga cerrahisi olarak) ameliyat geçiren iken rutin kemik iliği örnek. Numuneler hemen çekilmesinden sonra, sodyum sitrat ile karıştırılır olsa onlar işleme laboratuarda geldi, birçok örnekleri kısmen pıhtılaşmış idi. Bu aşamada, pıhtılaşmış numuneler yerine örnekleme ayrı bir ek müdahale yine yerel veya genel anestezi gerektiren 6 olacaktır. Bu katkı, klinik personeli ve donör hem de istek...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma İsviçre Ulusal Vakfı Hibe CR3I3_140717/1 ve İsviçre Parapleji Vakfı tarafından desteklenmiştir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Bazal Orta Bileşenler | |||
| PenStrep 100X | Gibco | 15140122 | |
| İnsan FGF-basic | Peprotech | 100-18B | |
| MEM Alpha, Nükleositli, stabil Glutamin | Amimed | 1-23S50-I | |
| FBS Isıyla | Etkisiz Amimed | 2-01F36-I | |
| Amfoterisin B | Aplikesi | A1907 | |
| Adipojenik Orta Bileşenler | |||
| DMEM-HAM F12 + GlutaMAX | Amimed | 1-26F09-I | |
| İnsülin | Sigma | I5500 | |
| Tavşan serumu | Gibco | 16120099 | |
| Deksametazon | Applichem | D4902 | |
| 3-İzobutil-1-metilksantin | Sigma | I5879 | |
| Biotin | Sigma | B4639 | |
| Rosiglitazone | Sigma | R2408 | |
| Pantotenat | Sigma | P5155 | |
| Yağ Kırmızısı-O | Sigma | O0625 | |
| Osteojenik Orta Bileşenler | |||
| L-askorbik asit 2-fosfat | Sigma | A8960 | |
| ß-gliserofosfat | Sigma | G9422 | |
| Gümüş nitrat (AgNO3) | Sigma | S6506 | |
| Kondrojenik Orta Bileşenler | |||
| Biopad - sünger şekilli tıbbi cihaz | Euroresearch | ||
| L-prolin | Sigma | P5607 | |
| İnsülin-Transferrin-Selenyum X | Gibco | 51500056 | |
| İnsan dönüştürücü büyüme faktörü-β 1 | Peprotech | 100-21 | |
| Alcian Blue 8GX | Sigma | A3157 | |
| Nükleer hızlı kırmızı | Sigma | N8002 | |
| Jenerik | |||
| Tri-Sodyum sitrat dihidrat | Uygulaması | A3901 | |
| PBS | Uygulaması | 964.9100 | |
| Ürokinaz | Medac | 1976826 | |
| % 0.5 Tripsin-EDTA | Gibco | 15400054 | |
| Giemsa leke | Uygulaması A0885 | ||
| Formaldehit | Uygulaması | A0877 | |
| Sülfürik asit (H2SO4) | Uygulama | A0655 | |
| Dimetil sülfoksit (DMSO) | Uygulama | A1584 | |
| Magnezyum klorür (MgCl2) | Uygulama | A3618 | |
| Guanidin hidroklorür | Applichem | A1499 | |
| Sarf malzemeleri | |||
| 50 ml reaksiyon tüpü | Axygen | SCT-50ML-25-S | |
| 10 ml şırınga | Braun | 4606108V | |
| Sterican iğnesi (22G) | Braun | 4657624 | |
| 1.7 ml Mikrotüpler | Brunschwig | MCT-175-C | |
| 100 ve mu; m hücre süzgeci | Falcon | 6.05935 | |
| steril forseps | Bastos Viegas, SA | 489-001 | |
| steril neşter | Braun | 5518059 | |
| Primaria hücre kaplama kabı | Falcon | 353803 | |
| C-Chip Neubauer Geliştirilmiş | Bioswisstech | 505050 | |
| hücre kültürü şişesi - Şişe T300 | TPP | 90301 | |
| Ekipman | |||
| Mikrobiyolojik biyogüvenlik kabini sınıf II | Skan | 82011500 | |
| su banyosu | Memmert | 1305.0377 | |
| Stripetler Serolojik Pipet 5ml | Corning | 4487-200ea | |
| mikroskop | Olympus | CKX41 | |
| nemlendirilmiş inkübatör Heracells 240 | Thermo bilimsel | 51026331 | |
| Heraeus Multifuge 1S-R | Termo bilimsel | 75004331 |
Kaynaklar
- Jiang, Y., et al. Pluripotency of mesenchymal stem cells derived from adult marrow. Nature. 418 (6893), 41-49 (2002).
- Uccelli, A., Moretta, L., Pistoia, V. Mesenchymal stem cells in health and disease. Nat Rev Immunol. 8 (9), 726-736 (2008).
- Bartholomew, A., et al. Mesenchymal stem cells suppress lymphocyte proliferation in vitro and prolong skin graft survival in vivo. Exp Hematol. 30 (1), 42-48 (2002).
- Wang, S., Qu, X., Zhao, R. C. Clinical applications of mesenchymal stem cells. J Hematol Oncol. 5, 19(2012).
- Baksh, D., Song, L., Tuan, R. S. Adult mesenchymal stem cells: characterization, differentiation, and application in cell and gene therapy. J Cell Mol Med. 8 (3), 301-316 (2004).
- Malempati, S., Joshi, S., Lai, S., Braner, D. A., Tegtmeyer, K. Videos in clinical medicine. Bone marrow aspiration and biopsy. N Engl J Med. 361 (15), e28(2009).
- Cuthbert, R., et al. Single-platform quality control assay to quantify multipotential stromal cells in bone marrow aspirates prior to bulk manufacture or direct therapeutic use. Cytotherapy. 14 (4), 431-440 (2012).
- Veyrat-Masson, R., et al. Mesenchymal content of fresh bone marrow: a proposed quality control method for cell therapy. Br J Haematol. 139 (2), 312-320 (2007).
- Lazarus, H. M., Haynesworth, S. E., Gerson, S. L., Rosenthal, N. S., Caplan, A. I. Ex vivo expansion and subsequent infusion of human bone marrow-derived stromal progenitor cells (mesenchymal progenitor cells): implications for therapeutic use. Bone Marrow Transplant. 16 (4), 557-564 (1995).
- Bertolo, A., et al. An in vitro expansion score for tissue-engineering applications with human bone marrow-derived mesenchymal stem cells. J Tissue Eng Regen Med. , (2013).
- Casiraghi, F., Remuzzi, G., Abbate, M., Perico, N. Multipotent mesenchymal stromal cell therapy and risk of malignancies. Stem Cell Rev. 9 (1), 65-79 (2013).
- Bonab, M. M., et al. Aging of mesenchymal stem cell in vitro. BMC Cell Biol. 7, 14(2006).
- Niku, S. D., Hoon, D. S., Cochran, A. J., Morton, D. L. Isolation of lymphocytes from clotted blood. J Immunol Methods. 105 (1), 9-14 (1987).
- De Vis, J., Renmans, W., Segers, E., Jochmans, K., De Waele, M. Flow cytometric immunophenotyping of leukemia cells in clotted blood and bone marrow. J Immunol Methods. 137 (2), 193-197 (1991).
- St Antoine, A., et al. Application of thrombolytic drugs on clotted blood and bone marrow specimens to generate usable cells for cytogenetic analyses. Arch Pathol Lab Med. 135 (7), 915-919 (2011).
- Kisiel, A. H., et al. Isolation, characterization, and in vitro proliferation of canine mesenchymal stem cells derived from bone marrow, adipose tissue, muscle, and periosteum. Am J Vet Res. 73 (8), 1305-1317 (2012).
- Bertolo, A., et al. Influence of different commercial scaffolds on the in vitro differentiation of human mesenchymal stem cells to nucleus pulposus-like cells. Eur Spine J. 21, Suppl 6. S826-S838 (2012).
- Makridakis, M., Roubelakis, M. G., Vlahou, A. Stem cells: insights into the secretome. Biochim Biophys Acta. 1834 (11), 2380-2384 (2013).
- Benvenuti, S., et al. Rosiglitazone stimulates adipogenesis and decreases osteoblastogenesis in human mesenchymal stem cells. J Endocrinol Invest. 30 (9), RC26-RC30 (2007).
- Jaiswal, N., Haynesworth, S. E., Caplan, A. I., Bruder, S. P. Osteogenic differentiation of purified, culture-expanded human mesenchymal stem cells in vitro. J Cell Biochem. 64 (2), 295-312 (1997).
- Patel, A. Tissue banking for research--bench to bedside and back--myth, reality or fast fading reality at the dawn of a personalised healthcare era. Cell Tissue Bank. 12 (1), 19-21 (2011).
- Smith, H. W., Marshall, C. J. Regulation of cell signalling by uPAR. Nat Rev Mol Cell Biol. 11 (1), 23-36 (2010).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
