Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Konfokal Optik Görüntüleme ile Rose Bengal Fototromboz

15.6K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/52794

⸱

23 Haziran 2015

 ,  ,  ,  , 
1Department of Cellular and Structural Biology, The University of Texas Health Science Center San Antonio, 2School of Medicine, The University of Texas Health Science Center San Antonio, 3Cell & Tissue Imaging Center, St. Jude Children’s Research Hospital

Bu makalede

Özet

Burada, in vivo olarak bir farenin somatosensoriyel korteksinde bir Rose Bengal fototrombotik pıhtısının indüksiyonu için yarı invaziv bir optik mikroskopi yaklaşımını açıklıyoruz. Görüntüleme prosedürünün teknik yönleri, fototrombotik bir olayın indüksiyonundan uygulama ve veri toplamaya kadar açıklanmaktadır.

Özet

Görüntüleme boyaları ve optik teknolojilerdeki son gelişmeler nedeniyle in vivo görüntüleme tekniklerinin kullanımı artmış ve bozulmamış bir hayvanda hücresel olayları görüntüleme yeteneğine olanak sağlamıştır. Ek olarak, in vivo inme gibi fizyolojik hastalık durumlarını indükleme yeteneği, faydasını arttırır. Burada açıklanan teknik, bir inme sonrasında CNS içindeki hücresel yanıtların fizyolojik değerlendirmesine izin verir ve incelenen diğer patolojik durumlar için uyarlanabilir. Sunulan teknik, tek bir kan damarında fokal iskemik bir olayı indüklemek için ışığa duyarlı boya Rose Bengal'in in vivo lazer uyarımını kullanır.

Video protokolü, bir Rose Bengal fototrombotik olayının indüksiyonu için bir farede somatosensoriyel korteks üzerinde ince kafalı bir kraniyal pencerenin hazırlanmasını ve altta yatan dura maddesi ve beyin hasarını minimumda tuttuğunu göstermektedir. Cerrahi hazırlık başlangıçta özel yapım bir cerrahi/görüntüleme platformu ile diseksiyon mikroskobu altında gerçekleştirilir ve daha sonra ters objektif adaptör ile donatılmış bir konfokal mikroskoba aktarılır. Bu protokol kullanılarak elde edilen temsili görüntülerin yanı sıra hızlandırılmış strok indüksiyon dizileri sunulmaktadır. Bu teknik, aynı alanın sonraki günlerde tekrar tekrar görüntülenebilmesi ve inme sonrası patolojik süreçlerin uzunlamasına in vivo çalışmalarını kolaylaştırması açısından güçlüdür.

Giriş

Hemen Gül Bengal indüksiyon aşağıdaki vivo hücresel yanıtları tekniği tarif izin görselleştirme sağlam bir fare Fototromboz. Rose Bengal (4,5,6,7-tetrakloro-2 ', 4', 5 ', 7'-tetraiodofluorescein) hayvan modellerinde, iskemik inme (fare ve sıçan) ikna etmek için kullanılan ışığa boyadır. Bir 564 nm lazer ışığı ile inceltilmiş kafatası yoluyla kuyruk damarından ve daha sonra aydınlatma aracılığıyla RB bir bolus enjeksiyonunu takiben, trombüs fizyolojik inme 1 neden indüklenir. yöntem aslen 1977 yılında Rosenblum ve El-Sabban'ın tarafından tarif edilmiştir ve daha sonra orta 1980'ler 1,2 Watson tarafından uyarlanmıştır. Kısaca, Rose Bengal, daha sonra, doku faktörü, pıhtılaşma kaskadının bir başlatıcı aktive reaktif oksijen türlerinin üretimi üretir yeşil uyarma ışık (bizim örneğimizde 561 nm lazer) ile ışınlanır. koagülasyon kaskad indüksiyon les iskemik üretirKlinik inme 3 patolojik alakalı iyon.

İnme nöronlar, glia, endotel ve bağışıklık sistemi de dahil olmak üzere birçok farklı hücre tiplerinin etkileşimi nedeniyle karmaşık bir patofizyolojisi vardır. En iyi tekniği seçimi, belirli bir hücresel süreç birden hususlar gerektirir incelemek. Deneysel teknikler üç kategoriden birine genel olarak düşmek: in vitro, her biri avantaj ve dezavantajları ile in vivo ve siliko in vitro çalışmalar, doğal ortamdan hücrelerin çıkarılması birincil dezavantajı vardır ve bu nedenle sağlam bir görülen etkileri yeniden olmayabilir. hayvan yaşam. in vivo teknikler artmış öteleme öneme sahip hastalık durumlarının geliştirilmiş deneysel çoğaltma sağlamak. silico olarak genellikle bir hastalık veya hücresel sürecin bilgisayar modelleme anlamına gelir ve giderek sınava potansiyel ilaç etkileşimleri incelemek için kullanılan süreple, toplanan herhangi bir bilgi hala hücreleri veya canlı doku test edilmelidir.

laboratuar ortamında inme ideal bir model insan popülasyonunda görülen benzer patolojik özellikleri göstermelidir. Insan nüfusunun inme ortak fizyolojik özellikleri varken, deneyimli yaralanma türüne bağlı olarak pek çok farklılıklar vardır. Insan nüfusunun İnme çeşitli enfarktüs hacimleri yanı sıra her patoloji ile ilgili mekanizmalar farklılıklara neden olarak küçük veya büyük damar oklüzyonlarını, hemorajik lezyonlar ve arter veya kardiyo-embolisine arter-oluşur. Hayvan inme modelleri kullanan avantajı, insan inme özelliklerini taklit eden tekrarlanabilir infarktlar üretilmesidir. orta serebral arter tıkanıklığı (emboli veya endovasküler filament yöntemleri) hangi modeller uzak MCAO ve fototromboz modeli: En yaygın hayvan inme modelleri kullanarak arter tıkanıklığı sayılabilir. Avantajları BirHer modelin d dezavantajları (4 ve 5) başka bir yerde gözden geçirilmiştir. Küresel iskemik modelleri (MCAO), gerçekleştirmek için nispeten kolay odak inme modelleri daha insan inme daha az alakalı iken. Buna ek olarak, bu yöntemler, yeniden üretilebilir, beyin enfarktüsü lezyonlara neden olan oldukça değişkendir. deneyci MCAO modeller üzerinde açık bir avantaj sağlayarak, onların deneylerini kontrol olarak fototromboz modeli uzun gibi son derece tekrarlanabilir. Bununla birlikte, mikrovasküler hasara modeli asgari penumbra, hücre 6,7 kurtarılabilen olduğu düşünülmektedir alan görüntülemek için tarif edilmiştir. Buna ek olarak, vazojenik ödem ve sitotoksik ödem oluşumu, aynı zamanda görüntüleme alanında aşağıdaki ışınlama indüklenebilir. Bu kısıtlamalara rağmen tekniği inme 8, 9, 10, 11 aşağıdaki birçok fizyolojik süreçlere yeni bir bakış açısı sağlamıştır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Not: Tüm hayvan prosedürleri Teksas Sağlık Bilim Merkezi San Antonio Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanmış ve GELİYORUM kurallar ile uyumlu idi.

1. Kortikal Hazırlama anestezi

  1. Anestezi ikna etmek için oksijen ile karıştırılır% 2-3 isofluorane bir indüksiyon odasında fare yerleştirin. Fare kaynaklı olarak solunum hızı azalma gözlemleyin. Fare burun konisi taşınmaya hazır olup olmadığını belirlemek için fare pençe sıkıştırın. Not: Anestezi seviyesi herhangi in vivo hazırlanmasında önemli bir adımdır ve bakım küresel iskemi neden olacak bir düzeye ikna etmek değil alınmalıdır.
  2. Fare yeterince uyuşturulduktan sonra, cerrahi / görüntüleme platformu hayvan transferi ve burun konisi farenin burnunu yerleştirin ve bir anestezi durumunu korumak için 1-1.2% isofluorane uygulayın. Fare sıcaklık co yatarken olduğundan emin olunntrolled ısıtma yastığı kalan prosedürlerin boyunca vücut ısısını (37 ° C +/- 0.5 ° C) muhafaza etmek. Anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için gözleri üzerine veteriner merhem yerleştirin.
  3. Sistemiyle birlikte sağlanan kuyruk veya ayak klibi kullanarak bir pulse oksimetre sistemini kullanarak fare fizyolojisini izleyin. Solunum hızı 50-65 nefesler / dk arasında muhafaza olup olmadığını kontrol edin. Hayvanın uzun vadeli hayatta kalmasını sağlamak için 97-98% arasında muhafaza edilir bpm ve oksijen doygunluğu 300-450 arasında kalp hızı kalmasını kontrol ediniz.
  4. Fare yeterince uyuşturulduktan sonra, elektrikli makası kullanarak kafatası üzerinde saç tıraş etanol bez ardından kalan saç ve betadin temiz, kaldırın. Steril cerrahi ortamı sağlamak için üç kez bu prosedürü tekrarlayın.

2. Cerrahi Prosedür

  1. Tamamen temizlenmiş ve traşlı kafa derisi ile kranial fissu ortaya çıkarmak için fare kafa derisi 5 mm kesi yapmakres ve bregma bulmak için.
  2. Kafatası örten kalan fasya kaldırmak için steril bir pamuk aplikatör kullanın.
  3. Bregmadan stereotaksik koordinatlarını kullanarak parietal korteks örten kemik doku yapıştırıcı ile bir özel yapılmış paslanmaz çelik yüzük (Şekil 1) Tutkal: yanal -1 -3 mm ve: 2-4 mm. Not: tutkal, genellikle kemik üzerine halka yerleştirilmesinden sonra 2 dakika içinde ayarlar.
  4. Fareyi stabilize etmek ve görüntüleme sırasında hareket etmesini önlemek için bir stereotaksik tutucu (Şekil 2) halkayı yapıştırın.
  5. Cerrahi dereceli mikroskop altında yavaş yavaş bir hız kontrollü dremel benzeri aracını (Meisinger 3.9 mm matkap ucu) o delinmiş gibi alan seviyede tutmak için emin olun kullanarak kafatası içinde 1-2 mm'lik bölümü matkap. Zigzag deseni kullanarak bunu başarmak. Isı önlemek için inşa, düşüğe matkap hızını ayarlamak ve sık sık ara verin.
  6. Kranial kafatası görünüm tırmanmak olduğunda, inceltme devaminceltilmiş yüzey seviyede tutmak için aynı zig zag deseni kullanan bir neşter bıçak kullanarak kafatası kafatası ince tabakalar düzgün çıkarılmasını kolaylaştırmak için. Bir seferde kemik ince tabakalar kaldırmak için hafif bir baskı ile küçük doğrusal vuruş yapmak neşter bıçak ucunu kullanarak. Damar açıkça mikroskop aracılığıyla görülebilir oluncaya kadar bu devam edin.
  7. Deneyci ile deler veya inceltme işlemi sırasında kafatası kırarsan, altta yatan korteks olası hasar hayvan euthanize.
    Not: Fare kafatası yaklaşık 300 um kalınlığında ve iki ince, kompakt kemik tabakaları (dış ve bir iç tabakası) ve kompakt kemik iki tabaka arasına sıkıştırılmış süngersi kemik tabakası oluşur. dış yoğun kemik tabakası ve süngersi kemiğin en geriye kalan küçük kemik yaklaşık 50 um tabaka içinde elde edilen 5 mm delik alanı içinde çıkarılır (Şekil 2B). Visualizdamarsal tirme son bozulmamış inceltilmiş kafatası yaklaşık 50 mikron kalınlığında olmasını sağlayacaktır. Bu kalınlığa inceltilerek zaman kafatası hala nedenle mevcut.

3. Mikroskop Set-up

  1. Objektif İnverter sahip bir ters mikroskop sistemi (konvansiyonel, konfokal veya iki foton sistemleri) kullanın. Not: Bu standart dik mikroskop kullanılması da mümkündür. sınırlayıcı faktör evre ve hedefleri arasındaki boşluk olacak. Sahneye Değişiklikler bu kurulum gerçekleştirmek için gerekli olabilir.
  2. Kenara mikroskop tabanını bulunan bir ölçüye sahneye cerrahi / görüntüleme platformu sabitleyin. Not: Platform hedefi altında, cerrahi / görüntüleme platformu dikey hareketini sağlamak için bir laboratuvar jack kullanılarak yapılır. laboratuar jakı dört silindirik kutup yapıştırılmış bir plakaya monte edilir. (Bakınız Şekil 2).
  3. 20x içeren objektif İnverter yerleştirinkranial pencere üzerinde objektif. Mikroskop okülerlerinde bakarak kranial pencere bulmak ve görüntüleme alanındaki hedefi konumlandırmak için harici bir ışık kaynağı kullanın. Not: Görüntüleme alanı damarsal varlığı ile ifade edilecektir.
  4. Su bazlı hedefleri için, yapay beyin omurilik sıvısı (aCSF) kullanan orta vadesi potansiyeli (; 30 mM KCI; 130 mM NaCl 200 mM NaHCO 3,,, 30 mM HEPES ve 100 mM glukoz KH 2 PO 4 12 mM) görüntüleme sırasında kafatası boşluğuna kaçağı (Şekil 3).

4. Rose Bengal Boya hazırlanması, Yönetim ve İnme İndüksiyon

  1. Yapay beyin omurilik sıvısı (CSF), Rose Bengal, bir taze 20 mg / ml solüsyon hazırlamak; filtre ve uygulamadan önce sterilize edin. Yeniden ya da karışık edildikten sonra Gül Bengal tutmayın. Her bir deney için taze bir çözüm olun.
  2. Rose Bengal s ise bir 0.1 mi kuyruk damarı enjeksiyonuBir 561 nm lazer ile kranial pencere konserve çözümün yeterli enjeksiyonu sağlamak. Not: Rose Bengal, beyin damar sisteminde, enjeksiyondan sonra 5 saniye içinde görselleştirilecektir. Tüm gemi Gül Bengal ile doldurulmalıdır.
  3. Rose Bengal boya yeterli enjeksiyonunu takiben, belirli bir lezyon hacminin yeniden üretilebilirlik sağlamak için damar çapı (40-80 um) göre tromboz için uygun bir kap seçin. Kan akış yönü bakarak arterler ve venler arasında ayrım: arterler küçük çaplı damarları büyük çaplı hareket edecek, damarlar büyük çaplı damarları daha küçük hareket. Rose Bengal enjekte edildiğinde bu, kolayca görselleştirme ile gerçekleştirilir.
  4. Aşağıdaki gibi mikroskop ayarını değiştirin:
    1. Bekleme süresini artırın. Not: Bu kullanılmaktadır mikroskop sistemine bağlı olarak değişir.
    2. % 100 lazer gücünü artırın.
    3. Kullanarak 1 kare / sn zaman dizisi görüntüleri toplayınMaksimum tarama hızı.
  5. Istikrarlı bir pıhtı damar içinde oluşana dek fareyi tarayın. Not: Bu genellikle sürekli tarama 5 dakika içinde ulaşılır (Bakınız Şekil 4).
  6. Gül Bengal kullanarak pıhtı oluşumu indüksiyon sonrasında, geri mikroskop Görüntüleme alanından fareyi çıkarın. Dikkatle kranial kafatası paslanmaz çelik halkasını çıkartın. Herhangi bir kanama kranial pencereyi inceleyin. Kanama oluşursa, deney sonlandırın.
  7. Kafatası üzerinde insizyon kapatmak için 6.0 monofilament sütür kullanın. Enfeksiyonu önlemek için dikiş hattı boyunca antibiyotik merhem yerleştirin. Buprenex (0.05 mg / kg), ağrı yönetimi için üç gün boyunca deri altından her 12 saatte enjekte edilir.
  8. Tamamen uyanık ve serbestçe hareket kadar anestezi çıkarıldıktan sonra bir kurtarma odasına fare dönün.
  9. Daha sonra daha fazla araştırma için temiz bir kafes fare dönün.

5. Daha sonraki Günlerinde Boyuna Görüntüleme

  1. Sonraki gün sonrası Fototromboz boyuna görüntüleme gerçekleştirmek için aşağıdaki yöntemleri kullanır.
    1. Yöntemlerin Bölüm 1'de açıklandığı gibi fare anestezisi.
    2. Yeterli anestezi sırasında önceden delinmiş görüntüleme alanını örten cilt yeniden açmak için herhangi bir kalıntı sütür kaldırarak saç derisini yeniden açın.
    3. Kafatası örten kalan fasya kaldırmak için steril bir pamuk aplikatör kullanın.
    4. Önceki görüntüleme alanını örten kemik doku yapıştırıcı ile bir özel yapılmış paslanmaz çelik yüzük (Şekil 1) Tutkal.
    5. Fareyi stabilize etmek ve görüntüleme sırasında hareket etmesini önlemek için bir stereotaksik tutucu (Şekil 2) halkayı yapıştırın.
    6. Daha önce inceltilmiş kafatası altında yatan damar bulun. Daha önce neden pıhtı varlığını doğrulamak için, FITC-dekstran kuyruk damarı enjeksiyonu kullanın.
    7. In kapatmak için 6.0 monofilament sütür kullanınKafatasının üzerinde eksizyondur. Enfeksiyonu önlemek için dikiş hattı boyunca antibiyotik merhem yerleştirin. Buprenex (0.05 mg / kg), ağrı yönetimi için üç gün boyunca deri altından her 12 saat enjekte edilir.
    8. Tamamen uyanık ve serbestçe hareket kadar anestezi çıkarıldıktan sonra bir kurtarma odasına fare dönün.

İnme indüksiyon 6. Doğrulama (Post-mortem)

  1. Bir çalışmanın bitiminde, Şekil 5'te gösterildiği gibi 2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür (TTC) boyama kullanarak strok hacmini doğrulayın. Tam bir yöntem 12'de bulunabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bu yöntemin amacı, bir 561 nm lazer ışığı ile inceltilerek kafatası kuyruk damarından ve daha sonra aydınlatma aracılığıyla RB bir bolus enjeksiyonu takiben hayvan modellerinde, bir iskemik inme (fare ve sıçan) neden oldu. Şekil 4 'de resim olarak 0, 1, 1.5 ve 2 dk'da alanının ışınlanması sonra tek bir tekne içinde pıhtı oluşumunun ilerlemesini göstermektedir. Pıhtı oluşumu öncesinde, tüm geminin Rose Bengal serbest akan nedeniyle beyazdır. Kabın ışınlama indüksiyonu şu var kabın kısımlar halind...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

İnsan uygulamaya hayvandan deneysel inme patofizyoloji çevirmek için yetenek yetersizliği ile rahatsız olmuştur. Ancak, bu tür fototromboz modeli olarak hayvan modellerinde, kullanımı gelişmiş inme patofizyolojisi anlayış ve inme sonrası nöro sağlamak için yeni tedavi yaklaşımları keşif için izin verir. Küçük kortikal vuruş ve Fototrombotik modeli tarafından üretilen microinfarctions yüksek oranda görüldüğü ve Amerika Birleşik Devletleri nüfusunun (yaklaşık 11 milyon kişi) her yıl 16 yaklaşık yüzde 4 etkileye...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarını olduğunu beyan ederim.

Teşekkürler

Bu çalışmanın finansmanı AG007218 ve NIH F32 AG031606 tarafından sağlandı.

Görüntüler, UTHSCSA, NIH-NCI P30 CA54174 (UTHSCSA'da CTRC) ve NIH-NIA P01AG19316 tarafından desteklenen Çekirdek Optik Görüntüleme Tesisinde oluşturulmuştur.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Reaktifler
Rose BengalSigma330000
İzofluran AnestezikMWI Veteriner Malzemeleri088-076
Vetbond1469SB1469SB
aCSF 126 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 1.25 mM NaH2< / sub>PO4< / sub>, 2 mM MgCl2< / sub>, 2 mM CaCl2< / sub>, 10 mM glikoz ve 26 mM NaHCO3< / sub> (pH 7.4).
[header]
Ekipman
Diseksiyon MakasıBiyoendüstriyel Ürünler500-410
Ameliyat makası 14 cmBiyoendüstriyel Ürünler12-055
Forseps Dumont High Tech #5 stil, düzBiyoendüstriyel ÜrünlerTWZ-301.22
LabJack 132X80Optosigma Co123-6670
Labjack 8X 8Optosigma Co145-1110
Stereotaksik kurulumdan kulak çubuğu tutucusuStoelting/Cyborg51654
Dispomed Labvent Kemirgen anestezi makinesiDRE, Inc.15001
Tech IV İzofluran buharlaştırıcıDRE, Inc.34001
F Hava KabıDRE, Inc80120
Bain devresi solunum tüpüDRE, Inc86111B
Balin tüpü için kemirgen adaptörüDRE, Inc891000
O2 oksijen tankları için regülatörDRE, IncCE001E
Kemirgen indüksiyon odasıDRE, Inc15004C
Ethicon İpek 6-0; P-3 iğneli 18 inçSütür Express1639G
Objektif invertör Optik AdaptörLSM teknolojileri
Foredom matkap Çift voltaj 110/120Foredom134.53
Meisinger 3,9 mm matkap ucuMeisinger(Ref#310 104 001 001 009)
için Platform

Kaynaklar

  1. Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis. Annals of Neurology. 17, 497-504 (1985).
  2. Rosenblum, W. I., El-Sabban, F. Platelet aggregation in the cerebral microcirculation: effect of aspirin and other agents. Circulation Research. 40, 320-328 (1977).
  3. Owens, A. P. 3rd, Mackman, N. Sources of tissue factor that contribute to thrombosis after rupture of an atherosclerotic plaque. Thrombosis Research. 129, Suppl 2. S30-S33 (2012).
  4. Carmichael, S. T. Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose. NeuroRx : the journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutics. 2, 396-409 (2005).
  5. Manual of stroke models in rats. , 332 CRC Press. (2009).
  6. Herz, R. C., Kasbergen, C. M., Hillen, B., Versteeg, D. H., de Wildt, D. J. Rat middle cerebral artery occlusion by an intraluminal thread compromises collateral blood flow. Brain Research. 791, 223-228 (1998).
  7. Brint, S., Jacewicz, M., Kiessling, M., Tanabe, J., Pulsinelli, W. Focal brain ischemia in the rat: methods for reproducible neocortical infarction using tandem occlusion of the distal middle cerebral and ipsilateral common carotid arteries. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism : Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 8, 474-485 (1988).
  8. Zheng, W., et al. Purinergic receptor stimulation reduces cytotoxic edema and brain infarcts in mouse induced by photothrombosis by energizing glial mitochondria. PloS One. 5, e14401(2010).
  9. Zheng, D. M., Wewer, J., Lechleiter, J. P. 2Y. 1R. -initiated IP3R-dependent stimulation of astrocyte mitochondrial metabolism reduces and partially reverses ischemic neuronal damage in mouse. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 33, 600-611 (2013).
  10. Witte, O. W., Stoll, G. Delayed and remote effects of focal cortical infarctions: secondary damage and reactive plasticity. Advances in Neurology. 73, 207-227 (1997).
  11. Hagemann, G., Redecker, C., Neumann-Haefelin, T., Freund, H. J., Witte, O. W. Increased long-term potentiation in the surround of experimentally induced focal cortical infarction. Annals of Neurology. 44, 255-258 (1998).
  12. Kramer, M., et al. TTC staining of damaged brain areas after MCA occlusion in the rat does not constrict quantitative gene and protein analyses. Journal of Neuroscience Methods. 187, 84-89 (2010).
  13. Blinder, P., Shih, A. Y., Rafie, C., Kleinfeld, D. Topological basis for the robust distribution of blood to rodent neocortex. Proceedings of the National Academy of Sciences. 107, 12670-12675 (2010).
  14. Nishimura, N., Rosidi, N. L., Iadecola, C., Schaffer, C. B. Limitations of collateral flow after occlusion of a single cortical penetrating arteriole. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 30, 1914-1927 (2010).
  15. Nishimura, N., Schaffer, C. B., Friedman, B., Lyden, P. D., Kleinfeld, D. Penetrating arterioles are a bottleneck in the perfusion of neocortex. Proceedings of the National Academy of Sciences. 104, 365(2007).
  16. Blum, S., et al. Memory after silent stroke: Hippocampus and infarcts both matter. Neurology. 78, 38-46 (2012).
  17. Heinsius, T., Bogousslavsky, J., Van Melle, G. Large infarcts in the middle cerebral artery territory Etiology and outcome patterns. Neurology. 50, 341-350 (1998).
  18. Wardlaw, J. What causes lacunar stroke. Journal of Neurology, Neurosurgery & Psychiatry. 76, 617-619 (2005).
  19. Inoue, Y., et al. Ischemic stroke under anticoagulant therapy]. Rinsho shinkeigaku. Clinical Neurology. 50, 455-460 (2010).
  20. Tiannan Wang, W. C., Xie, Y., Zhang, W., Ding, S. Controlling the Volume of the Focal Cerebral Ischemic Lesion through Photothrombosis. American Journal of Biomedical Sciences. 2, 33-42 (2009).
  21. Head, B. P., Patel, P. Anesthetics and brain protection. Current Opinion in Anaesthesiology. 20, 395-399 (2007).
  22. Kirsch, J. R., Traystman, R. J., Hurn, P. D. Anesthetics and cerebroprotection: experimental aspects. International Anesthesiology Clinics. 34, 73-93 (1996).
  23. Koerner, I. P., Brambrink, A. M. Brain protection by anesthetic agents. Current Opinion in Anaesthesiology. 19, 481-486 (2006).
  24. Gelb, A. W., Bayona, N. A., Wilson, J. X., Cechetto, D. F. Propofol anesthesia compared to awake reduces infarct size in rats. Anesthesiology. 96, 1183-1190 (2002).
  25. Bhardwaj, A., Castro, I. A., Alkayed, N. J., Hurn, P. D., Kirsch, J. R. Anesthetic choice of halothane versus propofol: impact on experimental perioperative stroke. Stroke; A Journal Of Cerebral Circulation. 32, 1920-1925 (2001).
  26. Barretto, R. P., Messerschmidt, B., Schnitzer, M. J. In vivo fluorescence imaging with high-resolution microlenses. Nature Methods. 6, 511-512 (2009).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

İnce Kafatası Kranyal PenceresiSomatosensoriyel KorteksLazer EksitasyonuFototromboz İndüksiyonuTTC BoyamaSerebral Enfarkt TespitlemeBoylamsal In Vivo GörüntülemeFare İnme Modeli
Konfokal Optik Görüntüleme ile Rose Bengal Fototromboz
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.