Yöntem makalesi

Aloimmün kaynaklı Vasküler Reddi ve Nakli arterioskleroz Fare Modeli

8.3K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/52800

⸱

17 Mayıs 2015

 ,  , 
1Department of Molecular Biology and Biochemistry, Simon Fraser University

Bu makalede

Özet

Farelerde aort interpozisyon greftlemesi için bir protokol açıklıyoruz. Protokolün amacı, arterlerdeki alloimmün reaksiyonlar ve organ nakli başarısızlığına katkıda bulunan ortaya çıkan arteriyel değişikliklerle ilgili patolojik süreçleri ve terapötik stratejileri incelemek için bir model sağlamaktır.

Özet

Transplant arteriosklerozuna (TA) yol açan vasküler rejeksiyon, kronik kalp nakli yetmezliğinin önde gelen temsilidir. TA'da, alıcının bağışıklık sistemi arter duvarının hasar görmesine ve endotel hücrelerinin ve düz kas hücrelerinin işlev bozukluğuna neden olur. Bu, intimal kalınlaşma ve luminal oklüzyon ile karakterize patolojik bir onarım yanıtını tetikler. Bağışıklık sisteminin vasküler sistem reddine ve TA'ya neden olduğu mekanizmaları anlamak, greft yetmezliğini yönetmek için yeni yolların geliştirilmesini bilgilendirebilir. Burada, vasküler rejeksiyon ve TA'nın patojenik mekanizmalarını incelemek için kullanılabilecek bir fare aort interpozisyon modelini açıklıyoruz. Model, bir donör hayvandan alınan bir aort segmentinin allojenik bir alıcıya aşılanmasını içerir. Arter segmentinin reddi, alloimmün reaksiyonları içerir ve vasküler rejeksiyona benzeyen arteriyel değişikliklerle sonuçlanır. Tanımladığımız temel teknik yaklaşım, vasküler rejeksiyon ve TA ile ilgili belirli soruları yanıtlamak için farklı fare suşları ve hedefe yönelik müdahalelerle kullanılabilir.

Giriş

Geçtiğimiz 30 + yıl içinde, immunsupresif ilaçların gelişmeler nedeniyle akut ret greft reddi azalmış fakat kronik ret ana sorun olmaya devam etmektedir. Kronik kalp transplant reddi ana tezahürü nakli damar sertliği (TA) 1,2 olduğunu. Bu durum, intimal hiperplazi ve allogreft arterlerin vazomotor disfonksiyon ile karakterizedir ve alıcı bağışıklık sisteminin endotel ve düz kas hücrelerinin imünolojik hedefleme bir sonucu olarak gelişir. konak gemiler 3 tutumlu iken sebebiyle yabancı peptit-majör histokompatibilite kompleksi (MHC) tanınması greft damar spesifik hedefleme sadece greft arterlerde ta gelişmesi ile vurgulanır. Buna uygun olarak, alıcı verici veya alıcı T ve B hücreleri 4 yoksun için genetik olarak özdeş olduğu zaman ta deneysel oluşmaz gözlemdir. İmmün aracılı vasküler yaralanma ve disfonksiyonunn, TA 5 intimal kalınlaşma ve fibroz gelişimi, hem de lipid ve ECM proteinleri olarak anormal birikimi neden olur. Iç tabakasındaki kalınlaşma belirgin tüm arteryel ağaç 4-6 boyunca eş olma eğilimindedir. Greft kaybı ve ölüm genellikle allogreft arterlerin 4 lümen tıkanıklığı sonucu ilerleyici iskemi sonucu meydana gelir.

1991 yılında, Mennander ve ark., 7 TA model sıçanlarda aort interpozisyon modeli öncülük etmiştir. Çeşitli gruplar, daha sonra farelerde kullanım için bu prosedürü adapte edilmiştir. Bu modelde, allogreft aort segmentleri TA karşılaştırılabilir özellikler, klinik nakli gözlenen olan lezyonlar gelişir. Bu düz kas-benzeri hücreler ve alıcı lökositlerin 7 birikimi ile karakterize edilen, intimal kalınlaşma içerir. Son 2 yılda bu model, vasküler yaralanma, reddedilme ve TA mekanizmalarına önemli fikir üretmek için kullanılır olmuştur. Bizi olabilired arteriyel patoloji sırasında bağışıklık ve vasküler yanıtlarına ilişkin soruları incelemek. antijen uyumsuzluğu etkileri seçimi uygun bu sorulara cevap yeteneği.

Tam MHC bariyerleri boyunca nakli, organ transplant reddi dahil olmak üzere bilinen immün cevapların kapsamlı bir değerlendirmesini sağlar. Bu greft türetilmiş hücreler tarafından sunulan doğrudan CD4 ve CD8 T hücresi tanıma ve yabancı peptit-MHC hedef içerir, dolaylı CD4 (ve muhtemelen CD8), T hücresi tanınması ve sunucu hücreler alıcının antijen tarafından sunulan greft türetilen alloantijenlere hedeflenmesi ve antikor vasküler hücre yüzeylerinde 8 alloantijenlere aracılı tanınması. Bununla birlikte, tam bir MHC-uyumsuz deneylerde yaralanması vasküler müdahale, klinik olarak gözlenenden daha farklı olabilir. Johnson ve ark. 9 gösterdi, bu en iyi şekilde tam bir MHC uyumsuzluğu bariyer boyunca nakledilen aort interpozisyon greft bölgesineointimal Hücreler, alıcı kökenli olup donör kökenlidir. Bu en intimal düz kas hücreleri, donor kaynaklı 9,10 insan nakli gözlenenden farklıdır. Bu sınırlama için hesap için, küçük doku uygunluk antijeni uyumsuzlukları genelinde aşılama barındırır alternatif deneysel modeller daha yakından klinik transplantasyon 11 gözlenen benzeyen vasküler yanıtları tetikleyen geliştirilmiştir. Bu alternatif modeller önemli sonuçlar için izin yaparken TA, tamamen klinik ortamda meydana olanlar yeniden teslim olmayan küçük histokompatabilite antijen uyumsuz greft vasküler ret neden immünolojik süreçlerin gelişimini sürücü damar yanıtları ile ilgili yapılacak. Örneğin, küçük doku uygunluk antijenleri aşı reaktif antikorlar 12 ile kötü tanınır. Yukarıdaki hususlar göz önüne alındığında, patolojik sorunlarınızda dikkate almak önemlidiraort interpozisyonu modelinde kullanılan antijen uyumsuzluğu türünü seçerken üzerinde incelenen. Burada fare aort interpozisyon aşılama için ayrıntılı bir protokol açıklar. Biz tam MHC-uyumsuz farelerde aynı protokolü diğer antijen uyumsuz fare suşları arasında aşılama için kullanılan arasındaki interpozisyonu aşılama açıklar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu çalışmada tüm protokoller gözden ve Simon Fraser Üniversitesi hayvan bakım etik kurul tarafından onaylandı. Kullanım Balb / cYJ (H2 d) donör fare ve C57BL / 6 (H2 b) alıcı fareler allojenik tepkilerini incelemek. Fareler 8-12 haftalık yaş arası deneyler için kullanılır. Kadın ya da erkek ya fareler kullanın. Singenik kontroller C57Bl / 6 alıcıya içine C57Bl / 6 donörden aort kesimleri oluşmaktadır.

1. Donör ve Alıcı Hazırlık

Not: donör ve alıcı Hem anestezi ve greft iskemi en aza indirmek için ameliyattan önce hazırlanır. Enjekte anestezikler inhale anestezik teslimat için gerekli ekipman ile hayvanın tıkanıklığı önlemek için protokolde kullanılır. Bununla birlikte, eğer arzu edilirse, inhalasyon anestezi uygun bir alternatiftir. Anestezik ilk enjeksiyon, tüm prosedür tamamlamak için yaklaşık 90 dakika sürer. Greft İskemik zaman daha az than 30 dakika.

  1. Ketamin intraperitonal enjeksiyonu ile fare anestezisi (100 mg / kg; 10 mg / ml) ve ksilazin (10 mg / kg; 1 mg / ml). Fare 10 ila 15 dakika içinde sedasyon edilecektir. Hayvan ayak pedi yağlı kısmını sıkıştırarak anestezi derinliğini değerlendirin. Gerektiği gibi hayvan çekme refleksi sergilemek değil dek, anestezik kokteyl orijinal dozunun 1/3 yönetme. Her kokteyl uygulanır yakından sonra solunum hızını izleyin. Ameliyat sırasında, forseps bir çift ile karın ön duvarı sıkıştırarak anestezi seviye her 15 dakika değerlendirmek. fareler derinden 60 ila 90 dakika süreyle anestezi kalmalıdır.
  2. Anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için bir göz merhemi ile farenin gözleri yağlayın.
  3. Pubis ortalarından toraks karın ventral bölgeye mümkün olduğunca cilde yakın saçları tıraş. Herhangi bir cilt nick özellikle dikkatli olun. Bu i absorbe edilebilir çünkü tüy dökücü krem ​​kullanmayınCildi nto ve inflamatuar olabilir.
  4. Isıtma tablo veya ped üzerinde bir havlu üzerine yatar pozisyonda hayvan yerleştirin.
  5. % 2 kloroheksidinler ile bir ön fırçalama ile cerrahi siteyi temizleyin. Cerrahi alan en üst düzeye çıkarmak için geniş bir çalışma alanı hazırlayın. Cerrahi bölge merkezinde ovma başlatın ve bir doğrusal ya da dairesel bir şekilde dışarıya hareket eder. Gazlı atınız. Bu işlemi en az 5 kez daha tekrarlayın. Aynı bölgede bir alkol hazırlık pad uygulayın. Alkol kuruduktan sonra, steril gazlı bez ile Betadinede çözüm ve örtü ile temiz alanı hazırlamak.

2. Uçtan uca anastomoz Prosedürü

  1. Donör Operasyonu
    1. Işlem boyunca aseptik teknik koruyun. Kullanmadan önce% 0.5 hızlandırılmış hidrojen peroksit solüsyonu ile tüm tezgah ve cerrahi masa yüzeylerini temizleyin. Sarın ve kullanmak için önce tüm cerrahi aletler, Gauzes, perdeler ve önlük otoklav. Bir buhar ile araçların sterilite doğrulamaHer pakette yer sterilizatör gösterge şeridi. Steril cerrahi eldiven kullanılır ve ameliyatlar arasında atılmaktadır. Birden ameliyatlar için sıcak cam boncuk sterilizatör ile kullanımlar arasındaki cerrahi aletler sterilize edin.
    2. 8-30X büyütme ameliyat mikroskop altında steril örtü ile sarılmış temiz, ince pleksiglas gemide yatar pozisyonda donör fare yerleştirin.
    3. Bölüm 1.1 belirtildiği gibi yeterli cerrahi anestezi olduktan sonra, cerrahi ile devam edin.
    4. Steril makas kullanarak, xiphoid sürecine pubis, tek bir orta hat alt boyuna karın kesi yapmak.
    5. Karın duvarları küçük retraktör açık kullanma boşluğu ortaya çıkarmak.
    6. Aplikatörler steril pamuk uçlu kullanarak, yavaşça superior hayvan sol için bağırsakları geri çekin ve tuzlu su çözeltisi ile nemlendirilmiş gazlı bez ile örtün. Altta üreme organları hareket ettirin ve infrarenal aorta ve inferior vena kava (IVC) bulun. Moisperiyodik tuzlu su çözeltisi ile on maruz dokular.
    7. Tıbbi No. 5 forseps kullanarak, çatallanma sol renal arter düzeyinden, IVC dan aorta ayırın. Aorta yakın küçük dalları Arter 10-0 polyamid monofilament sütür kullanın.
    8. Donörün aort IVC ayrılır sonra, nemli bir gazlı bez ile maruz kalan boşluğu kapsamaktadır, tuzlu su ile kap doyurulması ve steril bir alanı üzerine bir kenara donör ayarlayın. Donör (solunum ve kardiyovasküler fonksiyon ve anestezi derinliği) her 15 dakikada durumunu kontrol edin. (Adımlar 2.2.7 2.2.1) aşağıda tarif edildiği gibi aort izole, alıcı işletim başlayın.
    9. Alıcı aort IVC ayrılmış ve bir kenara edildikten sonra, mikroskop altında donör dönün. Çapraz kelepçe (proksimal ve ilgi segmente uzak) donör aort, iki adet 4 mm mikrovasküler kelepçeler ile ayrı yaklaşık 5 mm.
    10. Vannas-Tübingen Microscissors kullanılarak,abdominal aorta küçük bir greft parçası (uzunluk olarak 3-4 mm) transeksiyonu.
    11. Bir şırıngaya bağlanmış bir 25 G 5/8 iğne kullanarak, Heparinli (100 U / ml), tuzlu su çözeltisi ile eksize aort yıkayın. Kap ile temas etmez iğne ucu sağlanması.
    12. Heparinli yerleştirin aort (100 U / ml) tuz buz üzerinde çözüm ve bir kenara koyun. Hala derin anestezi altında, mikrovasküler kelepçeler serbest iken. Kansız bırakılarak donör Euthanize.
    13. Eksizyonun 30 dakika içinde donör gemi implante. Bu aort daha büyük bir uzunluğa kesilmesiyle birden çok alıcı için bir donör kap kullanmak mümkün olsa da, en az 30 dakika iskemi zaman tutun.
  2. Alıcı Operasyonu
    1. Donör operasyonda olduğu gibi, operasyon boyunca aseptik teknik koruyun.
    2. 8-30X büyütme ameliyat mikroskop altında steril örtü ile sarılmış ince bir pleksiglas gemide yatar pozisyonda alıcı fare yerleştirin.
    3. AfHayvan çekilme refleksi sergilemek olmadığında yeterli anestezi sağlanması ter, cerrahi ile devam edin.
    4. Steril makas kullanarak, xiphoid sürecine pubis, tek bir orta hat alt boyuna karın kesi yapmak.
    5. Karın duvarları küçük retraktör açık kullanma boşluğu ortaya çıkarmak.
    6. Aplikatörler steril pamuk uçlu kullanarak, yavaşça superior hayvan sol için bağırsakları geri çekin ve tuzlu su çözeltisi ile nemlendirilmiş gazlı bez ile örtün. Altta üreme organları hareket ettirin ve infrarenal aorta ve IVC bulun. Tuzlu su çözeltisi ile periyodik maruz kalan dokuların nemlendirin.
    7. Çatallanma sol renal arter düzeyinden, IVC dan aorta ayırın. Gerekirse, aort yakın küçük dalları Arter 10-0 poliamid monofilament sütür kullanın.
    8. Çapraz kelepçe (proksimal ve ilgi segmente uzak) aort, iki adet 4 mm mikrovasküler kelepçeler ile ayrı yaklaşık 5 mm.
    9. Vannas-Tübingen microscissors kullanarak, tek bir yatay aortatomi yapmak ve donör aort greft karşılamak için abdominal aorta küçük bir kesimini (en fazla 0,5 mm) rezeke.
    10. Heparinli (100 U / ml), tuzlu su çözeltisi ile eksize aort yıkayın. Donör aort greft alıcının transeksiyon aort uçları bağlamak için uygun uzunlukta olmalıdır.
    11. Ortotopik pozisyonda donör aort greft yerleştirin ve alıcının bununla ilgili greft anatomik oryantasyon uyan, alıcının sonuna kadar vericinin greft ucunu anastomoz.
    12. Yavaşça kabın tunika eksterna kavramak ve hafif tıbbi No.5 forseps kullanılarak da tersine çevrilmesi. Forseps kullanarak, alıcının rezeke gemiye donör aort greft güvence altına almak için damar duvarının tam kalınlığı boyunca 10-0 poliamid monofilament sütür bağlı iğne sürücü. Damar açma kapama nedeniyle t kapalı olmadığından emin olmak için özenGeminin arka duvarının o yanlışlıkla dikiş.
    13. Sürekli dikişler için, greft, üst ve alt uçları, hem de 9:00 kalmak sütür koyun. 03:00 den greft üst ucunda başlayarak, 2 koşu dikişlerle rezeke uçları anastomoz ve fiyatının dikişine dikiş sabitleyin.
      1. Üzerinde greft çevirin ve menşe fiyatının dikiş toplantı geminin parçası dorsal çalışan dikiş devam ediyor. Gemide fazla baskı uygulamadan sabitleyin. Alt anastomoz için dikilmesi tekrarlayın.
        Not: kesintiye dikişler damar kalmak ameliyat dikiş iplikleri arasında üç ayrı dikişlerle anastomoz olduğu dışında sürekli bir dikiş ile aynı şekilde başlar. Anastomoz süresi genellikle 20 dakikadır.
    14. Anastomoz tamamlandıktan sonra, retrograd kan akış ve anastomoz sitelerin sızıntı kontrol etmek için izin uzak mikrovasküler kelepçe bırakın. Bir kaçak, immediatel varsay kusurlu siteyi kapatmak için bir dikiş yerleştirin. Sitelerde hiçbir kanama yoksa, o zaman yakın kelepçe bırakın.
    15. Nakli inceleyin ve greft kan tıkanıklığı ve proksimal ve alıcının geminin distal kısmı olup olmadığını kontrol edin. Vericinin ve alıcının hem kap içinde Dinç darbe desen kan serbestçe akan olduğunu birincil göstergesidir. Forseps çifti kullanarak, yavaşça kalmak sütür bir ucunu kavramak ve biraz geminin arka duvarını incelemek için gemi ters çevrilecek.
      Not: anastomoz sitelerinin her iki ucunda damar duvarının bir kırışma olmalıdır. Kelepçeler çıkarıldıktan sonra fakir kan akımı tromboz bir işaretidir.
    16. Pamuk uçlu aplikatörler kullanarak, karın boşluğuna bağırsakları dönün.
    17. Castroviejo iğne tutucu ve Graefe forseps ile sürekli dikiş kullanarak 5-0 polipropilen sütür ile karın duvarı kapatın. Aynı cilt katmanı kapatınsubkütiküler kapatma kullanarak dikişler.
    18. Transplant tamamlanmasından hemen Torbugesic (1 mg / kg) im uygulayın.
    19. Amacıyla, hemen, atipamezol (1 mg / kg), ketoprofen (5 mg / kg) vermek ve Laktatlı Ringer çözeltisi deri altına ısıtılmıştır.
    20. Ameliyattan hemen sonra, bir su battaniye gecede (12 saat) altında ısıtılmış bir kafes fareler yerleştirin. Anestetik-iyileşme döneminde, temiz ve kuru bir engelsiz alanda yalnız hayvanları yerleştirin. Çizgi temiz bir kağıt havlu ile (otoklav) kafes ve yaklaşık 20 ° C ile 22 su battaniye sıcaklığını ayarlamak. Kafes katta kuru ve ıslak tanecikleri ad libitum sağlayın.
      Not: Ameliyat sonrası bakımın önemli bir bileşeni anestezi ve cerrahi kurtarma sırasında, gerektiği gibi, hayvan ve uygun müdahale gözlemdir. izlenmesi gerekli yoğunluğu hayvanla değişecektir ve eş olarak derhal anestezik iyileşme döneminde daha olabilirDaha sonra ameliyat sonrası iyileşme için mpared.
    21. Sürekli tamamen kurtarmak kadar izlenen geçirmiş anestezi sahip hayvanların izlemek. Hayvan yardımsız sternal yatma korumak gerekir ve gözetimsiz bırakılmamalıdır önce bu sakin ve ağrı serbest görünmesi gerekir.
    22. Her iki deri altından, üç günlük bir süre için buprenorfın (0.1 mg / kg BID) ve ketoprofen (5 mg / kg SID) verin.
    23. Üç gün en az anestezi kurtarma sırasında kardiyovasküler ve solunum fonksiyon, vücut ısısı ve postoperatif ağrı veya rahatsızlık izleyin. Ek bakımı gibi dehidrasyon ve elektrolit kaybı en aza indirmek için analjezikler ve diğer ilaçlarla ve parenteral sıvı idaresi olarak, gerekli olabilir.
    24. Arka bacaklarda motor fonksiyonunu gözlemleyerek nakli ameliyatı başarı değerlendirin. Nakli tam bir başarı hayvanlardaki kurtarma üzerine derhal olmalı arka bacak ve kuyruk, engelsiz kan akışını içerirEl ve ikinci gününde arka bacaklarda hiçbir felç ile tam iyileşme

3. Doku Toplama

Not: Önceden belirlenmiş bitiş noktaları istenen analizin tipi ve antijen uyumsuzluğu doğasına bağlı olarak 3-60 gün arasında değişir. Genellikle, intimal kalınlaşma tam MHC uyumsuz fare suşları arasında naklinden sonra günde 30 sağlamdır.

  1. Ketamin intraperitonal enjeksiyonu ile fare anestezisi (100 mg / kg; 10 mg / ml) ve ksilazin (10 mg / kg; 1 mg / ml). Hayvan ayak pedi yağlı kısmını sıkıştırarak anestezi derinliğini değerlendirin. Hayvan çekilme refleksi sergilemek vermediğinde cerrahi ile devam edin.
  2. Su ve% 70 alkol ile biten cerrahi siteyi temizleyin.
  3. Emici ped ile kaplı bir tepsi üzerinde yatar pozisyonda hayvan yerleştirin.
  4. Büyük bir orta hat boyuna kesi ile karın boşluğuna açın. Boşluğu ortaya çıkarmak için bir öz-istinat retraktör yerleştirin, IVC birabdominal aorta d.
  5. Yavaşça tıbbi No. 5 forseps bir çift kullanarak komşu IVC nakledilen donör aort segmenti ayırın. Nakledilen geminin adventisya şerit değil, özellikle dikkatli olun.
  6. Tüm yol torakal girişine torakal her iki yanında kaburga ile keserek göğüs boşluğu Açığa. Perikard ortaya çıkarmak ve hemostat bir çift göğüs kafesi sabitlemek için superiorda göğüs ön duvarı Reflect.
  7. Kalp ortaya çıktığında, 25 G 5/8 sol ventrikül içine (bir şınngaya bağlanmış) iğne ve heparinize 0.1 ml (100 U / ml), tuzlu su çözeltisi ile aynı hizada yerleştirin.
  8. Makas kullanarak, kan, heparinize tuzlu ve fiksatif perfüzyon sırasında vücudu terk etmesi için sağ atrium kaldırın. % 4 paraformaldehid 5 ml veya sıvı çalışır berrak kadar hayvan serpmek. Ötenazi sağlamak için kalbin çıkarın.
  9. Vergi damar segmentini nakledilen ve% 4 para sokmakBir saat daha fazlası için formaldehid. Nakledilen Ekim gemiyi (optimum kesim sıcaklık) matrisi ve flaş dondurma ayarlayın. Bölüm 8 um kalınlığında ayarlanmış bir kriyostat altında gemi. Hematoksilen Eozin ve ve / veya Verhoeff-van Gieson (van Gieson) elastik boyası ile Leke bölümleri.

Greft 4. Morfolojik Analizi

Not: TA intimal kalınlaşma 13 ile karakterizedir. Bu modelde, intimal kalınlaşma ve lümen boyutunda bir azalma elde edilen bağışıklık aracılı vasküler yaralanma şiddetine yansıtıcıdır. Syngraft kontrol allojenik bağışıklık tepkilerinin yokluğunda damarların temel özelliklerini belirlemek için kullanılır. Bu kontroller, aynı zamanda, cerrahi prosedürün bir sonucu olarak ortaya çıkar arteriyal hasar değerlendirme izin verir. Syngrafts hiçbir intimal kalınlaşma olmalıdır.

  1. Endotel hücre içinde alanı ölçmek, intimal kalınlaşma ve lümen tıkanıklığı incelemek içintabaka, internal elastik lamina (IEL) ve bir görüntü analiz yazılımı ile elastik van Gieson lekeli arter segmentlerinde harici elastik lamina (EEL). Aşağıdaki parametreler TA yansıtıcı arter değişiklikleri belirlemek için kullanılabilir.
    1. Mutlak intimal alanını ölçün: internal elastik lamina içinde bölgeyi - endotel hücre tabakasının içinde bölgede. Bu ta işaretidir intimal genişleme, mutlak bir ölçüm sağlar.
    2. Internal elastik lamina içinde alan - alan dış elastik lamina içinde: Mutlak medial alan ölçün. Bu arada bir damar duvarının bu bölgeye immün aracılı değişikliklerin bir sonucu olarak ortaya çıkabilir, medial veya bozunma büyüme mutlak ölçüm sağlar.
    3. Dış elastik lamina içinde alan olarak toplam damar alanını ölçün. Bu immünolojik hasar sonucunda genişleme veya daralma arter içeren damar yeniden bir ölçüm sağlar.
    4. Tedbir(internal elastik lamina içinde alan - endotel hücre tabakası içinde bölge) / (dış elastik lamina içinde alan - internal elastik lamina içinde bölge): intima / Medya. Bu intimal genleşme göreceli bir ölçümünü sunar ve damar boyutunda farklılıklar için normalleştirir.
    5. % Luminal daralması ölçün: [(internal elastik lamina içinde bölgeyi - endotel hücre tabakası içinde alan) internal elastik lamina ile / alan)] * 100. Bu intimal genişlemesi ve damar duvarının yeniden (içe veya dışa doğru) bir kombinasyonu kaynaklanan lümen oklüzyon ölçüde, bir ölçü sağlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bu modelde, bir Balb / cYJ fare abdominal aort, bir C57BL / 6 alıcı infrarenal aort içine yerleştirilir. Bu allogreft arterler hedef Alloimmün tepkilerin kapsamlı bir değerlendirmesini sağlar. Bu modelde immün aracılı vasküler yaralanma intimal kalınlaşma, luminal daralmasının ve immün hücre toplanmasından sonuçlanan vasküler onarım yanıtları başlatır (Şekil 1 ve 2). Bu kriterler daha sonra Alloimmün tepkilerin şiddeti, vasküler ret, ve TA için bir okuma olarak hizmet vermektedir. Prose...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Immün aracılı vasküler reddi ve TA araştırılması için de faydalıdıdr farelerde aşılama aort araya yerleştirilmesi için bir protokol tanımlamışlardır. Bu model TA nedenleri olarak, yeni terapötik stratejilerin geliştirilmesini araştırmak için kullanılabilir. Bu TA 14,17-21 adaptif bağışıklık, sitotoksik T hücre yanıtları, sitokinin aracılık ettiği bir CD4 T hücre yanıtlarının efektör ve antikor-aracılı greft hasarının önemli bir rol oluşturulması için geçmişte kullanılmıştır. Farelerde Arter nakli nedeniyle ha...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Hiç kimse.

Teşekkürler

Bu çalışma Sağlık Araştırma ve Kalp ve M.Ö. & Yukon İnme Vakfı (KİK) Kanada Enstitüleri hibe ile desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
C57BL / 6J (H-2b)Jackson Laboratuvarları, Bar Harbour MESuşu # 000664
Balb / cBYJJackson Laboratuvarları, Bar Harbour MESuşu # 001026
Ketamin Hidroklorür Enjeksiyonu USP 100 mg / mlKetaleanDIN 00612316
Ksilazin Enjeksiyonu 20 mg / mlRompumDIN 02169592
Ketoprofen Enjeksiyonu 100 mg/mlAnafenDIN 01938126
Butorphanol Tartarat enjeksiyon 10 mg / mlTorbugesicDIN 008450000
Buprenorfin Enjeksiyonu 0.3 mg / mlReckitt BenckiserBN 5241
Atipamezol hidroklorür steril enjekte edilebilir çözeltiAntisedanDIN 02237744
Heparin Sodyum Enjeksiyonu, USP, 1.000 birim / mlMcKesson DağıtımDIN 02264315
Gözyaşı doğal oftalmik merhemAlconDIN 02082519
StereomikroskopLeicaM80
%0.9 Sodyum Klorür, sterilBaxter Corporation
Laktasyonlu Zil Sesi s solüsyonu, sterilBaxter Corporation
%0.9 Sodyum Klorür Enjeksiyonu, steril, 10 mlBaxter Corporation
Alkol Hazırlama PedleriLoris
Povidone İyotBetadin
Kloroheksidin Glukonat %4 w/vGermi-Stat
Siyah Poliamid MonofilamentAROSurjik AletlerT4A10Q07
Sütür, 10-0 sütür, 70 mikronCorporation
Blue monofilament sütür 5-0, P3 iğneEthicon8698G
1 ml ŞırıngaBDREF 309659
10 ml ŞırıngaBDREF 309604
25 G ile 1cc TB insülin şırıngası
7/8, hipodermik iğneBDREF 305124
27 G 1/2, hipodermik iğneBDREF 305109
Colibri Ekartör - 1,5 cm yayılmış 4 cmGüzel Bilim Aletleri17000-04
S& T CAF-4 Forseps uygulayan klips, kilitsizGüzel Bilim Araçları00072-14
Supergrip forseps, S & TGüzel Bilim Araçları00632-11
Tıbbi No.5 forsepsGüzel Bilim Araçları11253-20
Lexer Bebek MakasıGüzel Bilim Araçları14078-10
Mikro Adson forseps tırtıklıGüzel Bilim Araçları11018-12
Vannas-Tübingen mikromakasGüzel Bilim Araçları15003-08
Mikro kelepçeler, b-1; 3,5 mm x 1 mm; 7mm uzunlukGüzel Bilim Aletleri00396-01
Graefe-forseps, 10cm 1x2 dişGüzel Bilim Aletleri11054-10
Kilitli ve tungsten çeneli CastroviejoGüzel Bilim Araçları12565-14
Sıcak cam boncuk sterilizatörüInotech 250IS-250 - Steri-250
Dokumasız gazlı bezlerProgene
Pamuk Uçlu AplikatörlerPüriten
Sakal DüzelticiWahl
Isıtma yastığıGüneş ışını
28 G 1/2 BD REF 309309

Kaynaklar

  1. Billingham, M. E. Graft coronary disease: the lesions and the patients. Transplant Proc. 21, 3665-3666 (1989).
  2. Foegh, M. L. Chronic rejection--graft arteriosclerosis. Transplant Proc. 22, 119-122 (1990).
  3. Libby, P., Pober, J. S. Chronic rejection. Immunity. 14, 387-397 (2001).
  4. Tellides, G., Pober, J. S. Interferon-gamma axis in graft arteriosclerosis. Circulation research. 100, 622-632 (2007).
  5. Johnson, D. E., Gao, S. Z., Schroeder, J. S., DeCampli, W. M., Billingham, M. E. The spectrum of coronary artery pathologic findings in human cardiac allografts. The Journal of heart transplantation. 8, 349-359 (1989).
  6. Gao, S. Z., Alderman, E. L., Schroeder, J. S., Silverman, J. F., Hunt, S. A. Accelerated coronary vascular disease in the heart transplant patient: coronary arteriographic findings. Journal of the American College of Cardiology. 12, 334-340 (1988).
  7. Mennander, A., et al. Chronic rejection in rat aortic allografts. An experimental model for transplant arteriosclerosis. Arterioscler Thromb. 11, 671-680 (1991).
  8. Choy, J. C. Granzymes and perforin in solid organ transplant rejection. Cell Death Differ. 17, 567-576 (2010).
  9. Johnson, P., Carpenter, M., Hirsch, G., Lee, T. Recipient cells form the intimal proliferative lesion in the rat aortic model of allograft arteriosclerosis. Am J Transplant. 2, 207-214 (2002).
  10. Minami, E., Laflamme, M. A., Saffitz, J. E., Murry, C. E. Extracardiac progenitor cells repopulate most major cell types in the transplanted human heart. Circulation. 112, 2951-2958 (2005).
  11. Yu, L., et al. AIP1 prevents graft arteriosclerosis by inhibiting interferon-gamma-dependent smooth muscle cell proliferation and intimal expansion. Circ Res. 109, 418-427 (2011).
  12. Miller, C., DeWitt, C. W. Cellular and humoral responses to major and minor histocompatibility antigens. Transplant Proc. 5, 303-305 (1973).
  13. Tsutsui, H., et al. Lumen loss in transplant coronary artery disease is a biphasic process involving early intimal thickening and late constrictive remodeling: results from a 5-year serial intravascular ultrasound study. Circulation. 104, 653-657 (2001).
  14. Rossum, A., Enns, W., Shi, P., MacEwan, G. E., Choy, J. C. Bim regulates allogeneic immune responses and transplant arteriosclerosis through effects on T cell activation and death. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 34, 1290-1297 (2014).
  15. Ho, M. K., Springer, T. A. Tissue distribution, structural characterization, and biosynthesis of Mac-3, a macrophage surface glycoprotein exhibiting molecular weight heterogeneity. J Biol Chem. 258, 636-642 (1983).
  16. Inoue, T., Plieth, D., Venkov, C. D., Xu, C., Neilson, E. G. Antibodies against macrophages that overlap in specificity with fibroblasts. Kidney international. 67, 2488-2493 (2005).
  17. Shi, C., et al. Immunologic basis of transplant-associated arteriosclerosis. Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 4051-4056 (1996).
  18. Skaro, A. I., et al. CD8+ T cells mediate aortic allograft vasculopathy by direct killing and an interferon-gamma-dependent indirect pathway. Cardiovasc Res. 65, 283-291 (2005).
  19. Tellides, G., et al. Interferon-gamma elicits arteriosclerosis in the absence of leukocytes. Nature. 403, 207-211 (2000).
  20. Wang, Y., et al. Interferon-gamma induces human vascular smooth muscle cell proliferation and intimal expansion by phosphatidylinositol 3-kinase dependent mammalian target of rapamycin raptor complex 1 activation. Circ Res. 101, 560-569 (2007).
  21. Soulez, M., et al. The perlecan fragment LG3 is a novel regulator of obliterative remodeling associated with allograft vascular rejection. Circ Res. 110, 94-104 (2012).
  22. Choy, J. C., Kerjner, A., Wong, B. W., McManus, B. M., Granville, D. J. Perforin mediates endothelial cell death and resultant transplant vascular disease in cardiac allografts. Am J Pathol. 165, 127-133 (2004).
  23. Choy, J. C., et al. Granzyme B induces endothelial cell apoptosis and contributes to the development of transplant vascular disease. Am J Transplant. 5, 494-499 (2005).
  24. Reis, E. D., et al. Dramatic remodeling of advanced atherosclerotic plaques of the apolipoprotein E-deficient mouse in a novel transplantation model. Journal of vascular surgery. 34, 541-547 (2001).
  25. Potteaux, S., et al. Suppressed monocyte recruitment drives macrophage removal from atherosclerotic plaques of Apoe-/- mice during disease regression. J Clin Invest. 121, 2025-2036 (2011).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Aortik nterpozisyonAlloimm n Reaksiyonlarntimal Kal nla maL men Daralmasmm nohistokimyasal AnalizMikrocerrahi TeknikFare Aort Greftimm n H cre Birikimi

İlgili makaleler