Yöntem makalesi

Riboflavin ile Trombosit Ürünleri ve UV Işık Tedavisi: Yüksek Titre Bakteriyel Kontaminasyon Karşı Etkinliği

17.3K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/52820

⸱

24 Ağustos 2015

 ,  ,  ,  , 
1Terumo BCT, Scientific Affairs

Bu makalede

Özet

Trombosit ürünlerinin saklama koşulları, bakteriyel kontaminantların tehlikeli seviyelere çoğalması için ideal bir ortam yaratır. Bu çalışmanın amacı, insan trombosit ürünlerinde yüksek titreli bakteriyel kontaminasyona karşı riboflavin bazlı bir patojen azaltma sürecini değerlendirmek için bir koloni oluşturma testi kullanmaktı.

Özet

Bakteriler tarafından trombosit birimlerinin kirlenmesi uzun nedeniyle sonrası bağış depolama koşulları önemli bir transfüzyon riski olarak kabul edilmiştir. Ürünler, rutin bir ajite çalkalayıcı üzerinde 22 ° C'de bakteri büyümesini teşvik edebilen bir durum saklanır. Trombosit ürün içine inanılan bakteri sayısı çok düşük olduğu halde, bu bakteriler, ciddi yan etkilere yol, çok yüksek bir titre önce transfüzyon çoğalabilir. Bu çalışmanın amacı, trombosit ürünlerinin ortak kirleticiler olarak tespit edilmiştir bakteri panele karşı riboflavin tabanlı patojen azaltma süreci değerlendirmektir. Bu panel aşağıdaki organizmaları dahil: S. epidermidis, S. aureus, S. mitis, S. pyogenes, S. marcescens, Y. enterocolitica, B. neotomae, B. cereus, E. coli, P. aeruginosa, ve K. pneumoniae. Her trombosit ünite yüksek bakteri yükü ile aşılandı ve numuneler b çıkarıldıtedavi öncesi ve sonrasında oth. Bir koloni deneyi oluşturan bir uç noktası sulandırması şeması kullanılarak ön-işleme ve tedavi sonrası bakteri titrelerini belirlemek için kullanılmıştır. Log azalma tedavi öncesi titresi gelen tedavi sonrası titresi çıkarılarak hesaplandı. Aşağıdaki günlük indirim gözlendi: S. epidermidis 4.7 log (99,998%), S. aureus 4.8 log (99,998%), S. 3.7 log (99.98%) Mitis, S. pyogenes 2.6 log (% 99.7), S. marcescens 4,0 log (% 99,99), Y. enterocolitica 3.3 log (% 99,95), B. neotomae 5.4 log (99,9996%), B. cereus 2.6 log (% 99.7), E.coli ≥5.4 log (99,9996%), P. aeruginosa 4.7 log (99,998%) ve K . pneumoniae 2.8 log (% 99.8). Bu çalışmanın sonuçları süreci bakteriyel kontaminasyon ile ilişkili ciddi yan transfüzyon olay riskini azaltmak için yardımcı olabilir öneririz.

Giriş

Trombositlerin transfüzyonu, plazma, eritrositler paketlenmiş ve tam kan ürünleri, modern tıpta önemli bir rol oynamaktadır ve çeşitli tıbbi durumların tedavisinde hayati sıvıyı yerine ve sonuçta hayatlarını kurtarmak için kullanılabilir. Trombositler, ya tam kandan izole ve toplanmış bir transfusable doz halinde veya trombosit aferez sürecinde toplanan Hücresel bir ürünüdür. Vücutta trombositlerin ana rolü yara yerlerinde kanamayı durdurmak ve hemostaz korumaya yardımcı olmaktır. Düşük trombosit hücre sayımı (trombositopeni) muzdarip hastalar spontan kanama olaylarına duyarlı ve trombosit hücresi normal aralıkta geri sayım getirmek için trombositler ile transfüzyon. Toplanan trombosit 5-7 günlük bir süre için saklanabilir ve sabit bir ajitasyon altında iken 22 ± 2 ° C'de saklanır.

Trombosit transfüzyonu özelliklerini hayat kurtarıcı orada nedeniyle co transfüzyon alıcıya hafif bir risk olmaya devam rağmenparazitler, bakteriler ve virüsler 11 ile bu ürünlerin ntamination. Viral nükleik asit testleri uygulanması (NAT), hepatit C virüsü (HCV), Hepatit B virüsü (HBV), insan immüno-ve eksikliği virüsü (HIV) gibi büyük kan yoluyla bulaşan maddeler, viral bulaşma riskini anlamlı derecede düşme 5. Bu ajanlar HIV 1000000 8 uyarınca bağış, HCV için 1.000.000 6.7 başına bağış ve HBV 15 1000000 1,7 başına bağış olmak için Kanada Kan Hizmetleri'nden yeni bir yayın kalıntı riski tahmin ediyor.

Trombosit ürünleri her yıl milyonlarca transfüzyon çünkü birçok alıcı potansiyel olarak yaşamı tehdit eden komplikasyonlara maruz 1000 7 ve: bakteri genellikle kamuoyuna daha az dikkat toplamak rağmen, trombosit ürünleri bakteriyel kontaminasyon sıklığı yüksek 1 olarak tahmin edilmiştir Sepsis 6 gibi. Araştırma zamanda bu bakteri yükü göstermektedirkirlenme düşük bölgesinin <100 koloni oluşturan birim (CFU) / ürün 2,16, ancak besin açısından zengin ortam ve oda sıcaklığında depolama öncesinde transfüzyon tehlikeli yüksek titreleri için çoğalırlar bakterilerin kirletici sağlar. Şu anda, trombosit alıcı ulaşmasını bakteri bulaşmış ürünlerin önlemek için yalnızca onaylanmış yöntemler kültür tabanlı sistemler ve bakım testi hızlı noktası kullanımı geçer. Kısaca, kültür tabanlı sistemler için trombosit ürünleri 4-8 ml örnek bir şişe içine trombosit üründen çıkarılır ve inoküle edilir, bunun üzerine bakterilerin ürün olarak çoğalma izin 12-24 saat için 22 ° C'da bir çalkalayıcı üzerinde saklanır besleyici ortamı ihtiva etmektedir. Şişe bakteri üremesi için şişe izleyen bir alet yerleştirilir. Gösterge şişe bakteri üremesini tespit ederse bayraklı ve karşılık gelen trombosit ünitesi atılır. Bu süreç hızlı gro tespit etmede oldukça başarılı ikenkanat organizmalar, yavaş büyüyen türlerin birçoğu böylece transfüzyonu 7,12,14,16,22 için çıkacak yanlış negatif birimler için potansiyel yaratıyor, tespit için yeterince yüksek bir titreye büyümek yok. Bakteriyel yükü önemli ölçüde artmıştır zaman kültür tabanlı algılama sistemlerinin aksine, bakım testi hızlı noktası genellikle trombosit saklama dönemi daha sonra yapılır. Yüksek titreleri bakım testlerinin noktası kültürü temelli sistemlere göre daha az duyarlı olduğu için gerekli ve onlar bir titreye ≥1 x 10 3 CFU / ml 17 ulaştıktan sonra sadece güvenilir bakteri tespit edilmiştir. Ancak bu tür testler örnekleme 1 saat içinde sonuçlar sağlayabilir. Bu testlerin performansı değişkenlik alıcı 9 ölümcül septik reaksiyona neden yalancı negatif ürünün salınımına yol açmıştır.

Trombosit ürünleri bakteriyel kontaminasyon sorununu mücadele için alternatif bir yol patojen azaltma proc rutin kullanımı yoluylakirletici bakterilerin inaktive yerine onları tespit deneyebilirsiniz ess. UV ışığı ile bir arada, bir photosensitizer olarak riboflavin kullanarak, bakteri 3,4,8,10,19-21 riboflavin ve UV .bir kullanımı dahil olmak üzere patojenik kan yoluyla bulaşan kirletici maddelerin geniş bir enfeksiyon oluşturma azaltmak için gösterilmiştir Patojen azaltılması için hafif toksik olmayan mutajenik ve riboflavin ve UV ışığı ile muamele edilmiş bileşenler transfüzyon alıcı hem de kan ürünleri 18 taşıma olanlar için güvenli olduğu gösterilmiştir. Kısaca, riboflavin moleküller, bakteri, parazit, virüs ve herhangi bir çekirdekli hücre (örneğin, beyaz kan hücreleri) nükleik asitleri (DNA ve RNA) ile ilişkilendirebilir. UV ışığına maruz kalma ve böylece nükleik asitlerin replikasyonu ve / veya transkripsiyon önlenmesi ve 13 inaktive organizmanın bırakarak, nükleik asitler (öncelikle guanin bazlar) fonksiyonel gruplarının bir kimyasal değişimini neden riboflavin etkinleştirir. Plaka gibi çekirdeklerini kaybetmiş hücrelersağlar ve kırmızı kan hücreleri, bağlı nükleik asidin eksikliği riboflavin kimyası ile etkilenmez.

Riboflavin ve UV ışığı teknolojisi ile önceki çalışma klinik olarak anlamlı bakteri yükü (<20 CFU / ürün) 8 kontamine trombosit ürünü taklit etmek amaçlanan bir deney tasarımı kullanılarak bakterilerin seçilmiş bir grup değerlendirdi. Bu çalışmanın amacı, yüksek titre bakteriyel kirlenmeye karşı riboflavin ve UV ışığı sürecini değerlendirmektir (> 1.0 x 10 5 CFU / ml) sistemin toplam bakteri azaltma kapasitesini ölçmek amacıyla plazmada tedavi trombosit ürünleri. Hemovigilance çalışmaları 1 ile toplanan verilere dayalı olarak, genel olarak ortaya çıkan gram negatif ve gram pozitif organizmaların panel bu çalışmada değerlendirme için seçilir ve aşağıdaki türler dahil: Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Streptococcus mitis, Streptococcus pyogenes, Serratia marcescens, Yersinia enterocolitica ,Brucella neotomae, B.cereus (vejetatif formu), Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa ve Klebsiella pneumoniae. B. dışındaki tüm canlılar, cereus, ATCC'den elde edilmiştir ve öncelik kan bileşenlerinden izole edildiğini tespit edilmiş bakteri türleri elde üzerine yerleştirilmiştir. B. cereus bu çalışmada test kontamine trombosit ürününden içten izole klinik türdür.

Protokol

1. Bakteriler Süspansiyon hazırlanması:

  1. Bir çizgili kültür plakasına kaynaktan, aseptik olarak steril bir aşılama döngüsü yoluyla uygun bir büyüme ortamı (Tablo 1), 100 ml içeren 250 ml'lik bir steril şişeye tek bir koloni inoküle.
  2. Düzenli büyüme kontrol 1-2 gün için uygun koşullar altında (Tablo 1) yörüngesel çalkalamalı bir enkübatörde şişeyi yerleştirin. 140 RPM çalkalama hızını ayarlayın.
  3. Aseptik, 23 ° C'de 20 dakika boyunca 3000 x g'de iki steril 50 ml konik tüp ve santrifüj tüpleri içine bakteri süspansiyonu aktarın.
  4. Süpernatant aspire ve steril pepton, 15 ml su ile birlikte her bir bakteri pelletini. Vortex gerekli. Bir boru / kap içine süspanse bakteri kültürü birleştirin.
  5. Stok kültür titresi belirlemek için bölüm 4 başına üç nüsha olarak stok kültürü titre.
  6. Buzdolabında 2 haftaya kadar 4 at için77; 2 ° C kadar gerekli. Yeniden titreye kullanım sırasında kültür, adım 4.8.

2. Trombosit Ürün Hazırlığı:

  1. Akredite bir kan bankasından bir standart aferez trombosit insan ürünü toplayın. Trombosit ürün aşağıdaki toplama şartlara uygun olmalıdır: 90-360 ml hacmi ve 0.8 -3.8 x 10 6 plateletler / ul konsantrasyon.
    1. Trombosit ürünü patojen azaltılması için işlemden önce 2 saat en az dinlenmiş emin olun. Bu 2 saat boyunca çalkalama olmaksızın, bir trombosit inkübatörde 22 ± 2 ° C 'de ürünler saklayın. İki saat sonra trombosit ürün trombosit kuluçka makinesi içinde 22 ± 2 ° C'de çalkalandı olduğundan emin olun. Kadar 22 saat sonrası toplama ürünü kullanın.
  2. 3 ml'lik bir enjektör 2 ml lik bir numuneyi çıkarın kullanarak trombosit ürününün pH değeri 22C ölçmek için uygulanır. Ürün sağlamak için bir kan gazı analizörü kullanın pH> 6.6 vardır. Bir hematolojik analizör kullanarak trombosit ürünün trombosit konsantrasyonunu ölçmek için aynı örneği kullanın. Ürün 0,80-3,8 x 10 6 plateletler / ul toplama konsantrasyon gereksinimini karşılar olun.
  3. Görme trombosit ürünün girdap değerlendirir. Ürün sahip bir "0" ürün atılır girdap.
  4. Direkt beyaz ışık kaynağı altında trombosit çantasını tutun ve kısaca trombosit çanta sıkın. Görme trombosit numunenin dönen desen gözlemlemek. Aşağıdaki ölçeğini kullanarak ürünü Puan.
    NOT: 2 - Pozitif Girdap: Güçlü kontrast ile tüm torbaya boyunca görünür homojen olmayan Swirling. 1 - Intermediate Girdap: Bazı homojensizlik görünür, ama sadece birkaç yerde ve kötü kontrast. 0 - Negatif Girdap: öncesi ve trombosit çanta sıkma sonra kalan Bulanık homojenlik

3. Riboflavin ve UV Süreci:

  1. Transteril bir tüp yerleştirme aygıtı kullanılarak bir riboflavin ve UV ışığı aydınlatma ve saklama torbasına trombosit ürünü Sfer. Transferden sonra bir boru macunu kullanarak boş trombosit ünitesi toplama torbası kaldırma ve biyolojik tehlikeli atık olarak boş çanta atın.
  2. Hafif koruyucu dış şal gelen stok solüsyonu riboflavin, 500 mcM 35 ml'lik kese çıkarın. Steril dok işleme ve saklama torbasına giriş hattı üzerine riboflavin kiti. Içindekiler trombosit ünitesine boşalmasına izin verin.
  3. Riboflavin kesesinden set riboflavin çantası / arıtma ve depolama çanta asmak ve yavaşça işleme ve depolama çanta dışarı ve riboflavin torbaya kalan havayı ifade eder. Trombosit ürünün küçük bir miktar sağlamak, aynı zamanda trombosit ürüne herhangi bir kalıntı riboflavin durulama riboflavin torba içine eksprese edilir. Riboflavin ve trombosit çözüm işleme ve saklama torbasına geri drenaj izin ver ve sonra giriş hattını kelepçe. Boş riboflavin çanta bize kaldırBir tüp mühürleyen ing ve biyolojik tehlikeli atık olarak boş çanta atın.
  4. Steril dok aydınlatma ve saklama torbasına giriş hattı üzerine dişi şırınga konnektörü ile 6 "boru hattı. Kadın şırınga konnektörü üzerine 10 ml şırınga varil (pistonu çıkartın) takın.
  5. Aseptik bir pipet aracılığıyla şırınga içine stok bakterilerin 5 ml ekleyin. Giriş hattı kelepçeyi açın ve bakteriler trombosit ürüne içine boşaltın. Bazı trombosit ürün, 10 ml şırınga ağzına geri akmasına izin verilerek bir şırınga gövdesi içinde durulayın. 10 ml şırınga gövdesi çıkarın.
  6. Aseptik 30 ml şırınga takmak ve trombosit ürünün içine karıştırılır stok bakteri sağlamak için giriş bağlantı noktası iki kez en az yıkayın. Ürün iyice karıştıktan sonra, temiz bir 5-10 ml'lik bir şırınga kullanın ve 2 ml ön-muamele numuneyi çıkar. Aşılama aşamasından tanıttı havayı sağlamak, yeni bir şırınga kullanılması veya adım örnekleme kaldırılır.
    1. Bölüm 4 başına tedavi öncesi örneği titre.
  7. Arıtma ve depolama çantasından giriş satırını kaldırın ve ürünü tartın.
  8. Aydınlatıcı içine Ürünü yerleştirin ve standart bir trombosit tedaviye başlamak için ekrandaki komutları izleyin.
    1. Operatör ID girin.
    2. Güvenli ve Aydınlatıcı plakaya çanta monte edin.
    3. Barkod okuyucu veya manuel giriş tuş takımını kullanarak Aydınlatıcı içine Numune Kimliği girin.
    4. Tarama ürün tipi.
    5. Kuvars kelepçesini kapatın.
    6. Aydınlatma cihazı otomatik olarak enerji 6.24 J / ml teslim edecek. Tipik tedavi süresi 5-10 dakika sürer.
  9. Tedavi ve saklama torbasına örnek ampul hattı üzerine dişi şırınga konnektörü ile 6 "boru hattı tedavisi steril rıhtım ardından. Ürün, teknikte iyi karıştırılır sağlanması ve daha sonra bir 5 ml şırınga takın ve 2 ml'lik bir tedavi sonrası numuneyi çıkar.
    1. Post-tedavi sam titrebölüm 4 başına ple.

4. Bakteriyel Titre

  1. Tedavi öncesi ve sonrası numune titresi tahmin ve her bir numunenin bir bitiş noktası seri seyreltme gerçekleştirmek için gerekli 5 mi seyreltme borulannın uygun bir şekilde hazırlayabilecektir. Aseptik pepton su 1.8 ml gerekli tüpleri doldurun.
  2. Titre, bir 10-misli seri seyreltme şeması kullanılarak her numune. Aseptik ilk seyreltme tüpü (10 -1) için sulandırılmamış numuneden 0.2 ml aktarın. Vortex bu seyreltme tüpü ve transfer sonraki seyreltme tüp 0.2 ml. Dilüsyonları gerekli numara ile seri seyreltme devam edin.
    1. Aseptik aktarımı, her seyreltme oranından 100 ul uygun bir agar plaka (Tablo 1) kaplanacak.
  3. Steril bir hücre serpme kullanarak, eşit, her agar plaka üzerine numuneyi dağıtmak.
  4. (Ters çevirin ve uygun şartlarda plakalar inkübe düzenli büyüme kontrol 1-2 gün Tablo 1).
  5. 30-300 koloniler ile plakaları sayın. Daha fazla, 300 koloni içeren plaklar (TNTC) saymak için çok sayıda kabul edilir. En az 30 koloni içeren levhalar niceleme limitinin (LOQ) altında olduğu kabul edilir.
  6. Her test numunesinin titresi hesaplayın ve CFU / ml olarak sonuçları kaydedin.
    1. CFU / ml hesaplamak için aşağıdaki denklemi kullanın:
      figure-protocol-1
    2. Düşük seyreltme plaka üzerinde koloniler varsa, Saptama (LOD) Limiti'ni hesaplamak için aşağıdaki denklem kullanın:
      figure-protocol-2
      ve
      figure-protocol-3
      Nerede:
      N p parçacıklar (CFU) en az sayıda =güvenle tespit edilebilir Ü.
      Bir mikroorganizma tespit edilmemiş olacağını p = olasılık; bir mikroorganizmanın tespit etmek için bir% 95 güven, p, 05 =.
      Ml V = toplam ürün hacmi
      plaka v = hacim kaplama (ml) x seyreltme seviyesi
  7. Negatif Kontrol, iki agar plakaları her birine seri seyreltmeleri kullanılır pepton su 0.5 ml plaka. Test edilecek aynı levha tipinde kullanın. Ters çevirin ve 1-2 gün aralıklarla büyüme kontrol etmek için uygun koşullarda plaka kuluçkaya yatmaktadır.
    1. Büyüme ya agar plaka üzerinde görülürse, kullanılan pepton şişe su atılmalıdır; Çalışmanın sonuçları da geçersiz olur.
  8. Pozitif Kontrol, yeniden titresi kullanılan bakterilerin stok kültür için. Ters çevirin ve 1-2 gün aralıklarla büyüme kontrol etmek için uygun koşullar plakalar inkübe. Titre kaydının CFU / ml log 1.0 ± olmalıdırÇalışma için ed stok titre (bölüm 1.5 bakınız) geçerli kabul edilecek.

Sonuçlar

On bir farklı bakteri türlerinin azaltılması riboflavin ve UV ışığı göre PRT işlemi kullanılarak değerlendirildi. Bu ajanlar trombosit ürünleri daha yaygın kirletici bazılarını temsil ve pozitif beş Gram ve altı Gram negatif organizmalar bulunur. En az altı trombosit ürünler organizma başına değerlendirilmiş ve her bir ürünün trombosit ürünü bakteri> 1.0 x 10 5 CFU / ml son titresi elde etmek için yeterli bakteri ile aşılandı. Önceki tedavi etmek için örnek bir trombosit ürünü hemen riboflavin ve UV işlemi ile muamele edildi ve bundan sonra, tedavi öncesi titresi belirlemek için uzaklaştırılmıştır. Aşağıdaki günlük azalmalar gözlenmiştir trombosit ürünleri tedavi sonrasında: S. epidermidis 4.7 log (99,998%), S. aureus 4.8 log (99,998%), S. 3.7 log (99.98%) Mitis, S. pyogenes 2.6 log (% 99.7), S. marcescens 4,0 log (% 99,99), Y. enterocolitica 3.3 log (% 99,95), B.neotomae 5.4 log (99,9996%), B. cereus 2.6 log (% 99.7), E. coli ≥ 5.4 log (99,9996%), P. aeruginosa 4.7 log (99,998%) ve K. pneumoniae 2.8 log (% 99.8) (Şekil 2). Riboflavin ve UV işlem için yukarıda belirtildiği gibi tüm birimler sistem özellikleri bir araya geldi. Ek redüksiyon testi S. ile gerçekleştirildi buffy coat türetilmiş tabakalar kullanılarak pyogenes. Anlamlı bir fark S. azaltılması gözlendi aferez trombositler karşı ince beyaz tabaka elde edilen trombositler içinde pyogenes (veriler gösterilmemiştir).

figure-results-1
Tablo 1: riboflavin ve UV ışığı kullanılarak değerlendirildi bakteriyel tür için büyüme koşulları. Trombosit ürünleri kirletebilir gösterilmiştir hem Gram negatif ve Gram pozitif bakterilere oluşan bir panel, bu çalışma için seçilmiştir. Büyüme yaymak için kullanılan koşulları (sıcaklık ve ortam türü) ve titer organizmalar gösterilir.

figure-results-2
Şekil 1: Riboflavin ve UV ışığı patojen azaltma süreci. Riboflavin 500 uM nominal konsantrasyonda% 0.9 tuzlu su içinde çözülmüştür. Çözüm, her trombosit ürünün içine bağlanmış ve süzülmüş steril oldu. Bakteriler, her trombosit birimine aseptik eklenmiş ve daha sonra UV enerji (yaklaşık 6-10 dakika) 6.2 J / ml ile muamele edilmiştir. Bu in vitro tedavi sonrası trombosit ünitesi nihai bakteri titresi belirlemek için numune alındı ​​çalışma.

figure-results-3
Şekil 2:., Riboflavin ve UV ışığı Riboflavin ile muamele edilmiş ve UV ışığı trombosit ürünleri yaygın bakteriyel kirletici bakteri yüklerini azaltmak için kullanılan, farklı bakteri türlerinin indirgenmesi. Günlük 10 indirim farkıOrtalama tedavi öncesi titresi ve ortalama tedavi sonrası titresi arasında. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Tartışma

Bakteriyel tarama kan bankacılığı kurumlarında yaygın bir uygulama haline geldi ve birçok yerde için bakteri bulaşmış trombositlerin transfüzyonu önlemek için birincil yöntem olarak hizmet vermektedir. Bakteriyel tarama genellikle S. gibi hızlı büyüyen Gram negatif bakterilerin çoğunluğu yasaklamakta rağmen marcescens, E. E. coli, E. cloacae, bu S. gibi yavaş büyüyen Gram pozitif bakteriler tespit için mücadele aureus, Streptococcus spp., ve S. epidermidis 8. Ne yazık ki, bu üç Gram pozitif bakteriler, hasta mortalite 1 yol açmıştır Kirlenmiş trombosit birimleri ve bu üç organizmalar içeren trombosit ürünleri transfüzyonu% 50 yukarı sorumlu tutulmaktadır.

En az bir organizma, tipik 4-8 ​​mi tarama numunesi içinde bulunan ve böylece bakteriyel tarama kadar yeterince yüksek olması için trombosit ürün bakteriyel titresi dayanır. Bir bakteri 4-8 ml'lik numune hacminde çekilecek için bakteriyel titre yeterince yüksek değilse, cihaz yanlış negatif olarak işaretlenmesi ve transfüzyon için serbest bırakılır. Bakteriyel tarama için alternatif bir yaklaşım, tüm trombosit birimler yapılabilir ve bu işlevsel olmayan olarak kirlenmesine neden olan organizmaları hale getirebilir proaktif bir süreç istihdam olabilir.

Bu çalışmada, bakterilerin yüksek titerleri bilerek riboflavin ve UV ışığı patojen indirgeme işleminin toplam redüksiyon kapasitesini test etmek için trombosit birimlere ilave edildi. Bakteriyel yükleri, bu çalışmada test edilen, ancak çok normal bağış esnasında kan ürünlerinde bulunan edilen miktarlardan, bu çalışma riboflavin ve UV ışığı işlemi önemli bir kontamine trombosit biriminde canlı bakteri titresi azaltmak mümkün olduğunu göstermeye yarar 5.4 log (bakteri kontamine 99,7-99,9996% azalma) (Şekil 2) 2.6. Bir sahih edinmek içinte log azalma değeri, bakteri titre adımları yaparken operatör hassas pipetleme becerileri ile birlikte iyi aseptik teknik olması çok önemlidir. Seri seyreltmeler performans Imprecise pipetleme hataların birikmesi, böylece doğru titre ölçümüne neden olabilir.

Bu çalışmada toplanan veriler düşük seviyede, klinik olarak anlamlı bakteriyemi (<20 CFU / birim) karşı sistemi meydan riboflavin ve UV ışınlarına, önceki çalışmaları destekler. Bir önceki çalışmada gerçek bir klinik kirlenme olayı taklit etmek için tasarlanmış ve sonuçlar riboflavin gösterdi ve UV ışığı 7 günlük trombosit saklama süresi boyunca bakteri gelişimini önlemede etkili oldu. Önceki çalışmada elde edilen verilere dayanarak Modelleme trombosit ürünleri bakteriyel kontaminasyon mevcut risk tahminleri mevcut seviyeleri 8'den kadar 98 kadar% azalma olabileceğini düşündürmektedir. Riboflavin ve UV ışığı süreci bakteriyel ekrana olumlu karşılaştırırSadece klinik olarak anlamlı bakteri yükü 8 ile meydan okuduğunda trombosit birimlerinde bakteriyel kirleticileri tespit etmek için bir% 66 etkinliğini göstermiştir ing.

Bütün teknolojiler gibi, trombosit ürünleri PRT tedavisi bakteri bulaşmış trombosit birimleriyle kendi sınırlamaları vardır ilişkili komplikasyonları önlemek için. PRT sistemleri bakteri sporlarına karşı etkili değildir ve PRT sistemi kalan endotoksin hala alıcı septik çarpmasına neden olabilir Gram negatif bakterilerin yüksek titreleri inaktive olabilir böylece bile endotoksin inaktive yok. Bakteriler yüksek titreleri yaymak için önce PRT iyi depolama sırasında erken yapılır.

Bu iki çalışmanın kombinasyonu ile gösterildiği gibi, sonuç olarak, riboflavin ve UV ışığı işlemi hem Gram negatif ve Gram pozitif organizmaların bakteri yüklerini azaltan, ve bakteriyel tarama için uygun bir alternatif sunar. Rutin davranıyorriboflavin ve UV ışığı ile g trombosit ürünleri de virüsler ve parazitler gibi diğer kan yoluyla bulaşan ajanların potansiyel iletimini azaltarak yararı vardır.

Açıklamalar

Bu yazının tüm yazarlar halen Terumo MKC, Mirasol PRT sisteminin geliştirici ve üreticisi tarafından istihdam edilmektedir. Bu video-makale için Yayın ücretleri Terumo MKC tarafından ödenen oylandı.

Teşekkürler

Yazarların teşekkür hakkı yok.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Mirasol aydınlatıcıTerumo BCTN/A
Mirasol Tedavi/Saklama ÇantasıTerumo BCTN/A
Hematoloji AnalizBeckman-CoulterAc & bull; T fark 
Kan Gazı Analiz CihazıSiemensRapidLab 1265 
Steril Yerleştirme CihazıTerumo BCTTSCD
Trombosit İnkübatörüHelmerPC2200
Orbital İnkübatör ÇalkalayıcıLab-Line4628
Kuru İnkübatörFisherIso-temp
Sınıf II A/B3 Biyogüvenlik KabiniTermo-forma1286
Boru MühürleyenSebraAkıllı Mühürleyen II
Masa Üstü SantrifüjIECCentra GP8R
10 ml ŞırıngaBD309604
30 ml ŞırıngaBD309650
5 ml Seyreltme TüpüVWR211-0058
50 ml Konik TüpCorning430290
MikropipetGilsonP-200
MikropipetRaininR-200
Tekrar PipetiEppendorf4780
1-200 & mikro; l Filtre UcuCostar4810
25 ml Tek Kullanımlık Serrolojik PipetCostar4489
5 ml Tek Kullanımlık Serrolojik PipetCostar4487
35 ml 500 & mikro; M RiboflavinTerumo BCT35 mL 500 & mikro; M 
BBL221547İnfüzyonu ile Brucella Agar
TeknovaB9993
Pepton SuyuBD257087
Triptikaz Soya SuyuBD299113
Triptikaz SoyaAgar RemelR01917
Isı İnaktive At SerumuGibco26050
Cihazı % 5 At Kanı Beyin Kalp

Kaynaklar

  1. Brecher, M. E., Hay, S. N. Bacterial contamination of blood components. Clin. Microbiol. Rev. 18 (1), 195-204 (2005).
  2. Brecher, M. E., Holland, P. V., Pineda, A. A., Tegtmeier, G. E., Yomtovian, R. Growth of bacteria in inoculated platelets: implications for bacteria detection and the extension of platelet storage. Transfusion. 40 (11), 1308-1312 (2000).
  3. Cardo, L. J., et al. Pathogen inactivation of Leishmania donovani infantum in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light. Vox Sang. 90 (2), 85-91 (2006).
  4. Cardo, L. J., Salata, J., Mendez, J., Reddy, H., Goodrich, R. Pathogen inactivation of Trypanosoma cruzi in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light. Transfus. Apher. Sci. 37 (2), 131-137 (2007).
  5. Dodd, R. Y. Current viral risks of blood and blood products. Ann. Med. 32 (7), 469-474 (2000).
  6. Dodd, R. Y. Bacterial contamination and transfusion safety: experience in the United States. Transfus. Clin. Biol. 10 (1), 6-9 (2003).
  7. Dumont, L. J., et al. Screening of single-donor apheresis platelets for bacterial contamination: the PASSPORT study results. Transfusion. 50 (3), 589-599 (2010).
  8. Goodrich, R. P., Gilmour, D., Hovenga, N., Keil, S. D. A laboratory comparison of pathogen reduction technology treatment and culture of platelet products for addressing bacterial contamination concerns. Transfusion. 49 (6), 1205-1216 (2009).
  9. Greco-Stewart, V. S., et al. Serratia marcescens strains implicated in adverse transfusion reactions form biofilms in platelet concentrates and demonstrate reduced detection by automated culture. Vox Sang. 102 (3), 212-220 (2012).
  10. Keil, S. D., et al. Inactivation of Plasmodium spp. in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light. Transfusion. 53 (10), 2278-2286 (2013).
  11. Kleinman, S., Chan, P., Robillard, P. Risks associated with transfusion of cellular blood components in Canada. Transfus. Med Rev. 17 (2), 120-162 (2003).
  12. Larsen, C. P., Ezligini, F., Hermansen, N. O., Kjeldsen-Kragh, J. Six years' experience of using the BacT/ALERT system to screen all platelet concentrates, and additional testing of outdated platelet concentrates to estimate the frequency of false-negative results. Vox Sang. 88 (2), 93-97 (2005).
  13. Mundt, J. M., Rouse, L., Van den Bossche, J., Goodrich, R. P. Chemical and Biological Mechanisms of Pathogen Reduction Technologies. Photochem. Photobiol. , (2014).
  14. Murphy, W. G., et al. Screening platelet concentrates for bacterial contamination: low numbers of bacteria and slow growth in contaminated units mandate an alternative approach to product safety. Vox Sang. 95 (1), 13-19 (2008).
  15. Brien, S. F., et al. Current incidence and residual risk of HIV, HBV and HCV at Canadian Blood Services. Vox Sang. 103 (1), 83-86 (2012).
  16. Pearce, S., Rowe, G. P., Field, S. P. Screening of platelets for bacterial contamination at the Welsh Blood Service. Transfus. Med. 21 (1), 25-32 (2011).
  17. Ramirez-Arcos, S., Kou, Y., Perkins, H. Evaluation of a universal point-of-issue assay for bacterial detection in buffy coat platelet components. Vox Sang. 107 (2), 192-195 (2014).
  18. Reddy, H. L., et al. Toxicity testing of a novel riboflavin-based technology for pathogen reduction and white blood cell inactivation. Transfus. Med. Rev. 22 (2), 133-153 (2008).
  19. Ruane, P. H., et al. Photochemical inactivation of selected viruses and bacteria in platelet concentrates using riboflavin and light. Transfusion. 44 (6), 877-885 (2004).
  20. Tonnetti, L., Proctor, M. C., Reddy, H. L., Goodrich, R. P., Leiby, D. A. Evaluation of the Mirasol pathogen reduction technology system against Babesia microti in apheresis platelets and plasma. Transfusion. 50 (5), 1019-1027 (2010).
  21. Vanlandingham, D. L., et al. Photochemical inactivation of chikungunya virus in plasma and platelets using the Mirasol pathogen reduction technology system. Transfusion. 53 (2), 284-290 (2013).
  22. Walther-Wenke, G., et al. Monitoring bacterial contamination of blood components in Germany: effect of contamination reduction measures. Vox Sang. 100 (4), 359-366 (2011).

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Riboflavin UV TedavisiTrombosit ÜrünüPatojen AzaltmaLog Azaltma AnaliziUç Nokta DilüsyonuUV Işığına Maruz BırakmaTrombosit SaklamaBakteriyel İnaktivasyonTransfüzyon Güvenliği
Riboflavin ile Trombosit Ürünleri ve UV Işık Tedavisi: Yüksek Titre Bakteriyel Kontaminasyon Karşı Etkinliği
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.