Yetişkin İnsan Fibroblastları türetilmesi ve Genişletilebilir Sinir Progenitör Hücreler içine Doğrudan Dönüşüm

Sandra Meyer; Philipp Wörsdörfer; Katharina Günther; Marc Thier; Frank Edenhofer

doi:10.3791/52831

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Yetişkin İnsan Fibroblastları türetilmesi ve Genişletilebilir Sinir Progenitör Hücreler içine Doğrudan Dönüşüm

15.4K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/52831

⸱

29 Temmuz 2015

Sandra Meyer¹^,² , Philipp Wörsdörfer¹ , Katharina Günther¹ , Marc Thier²^,³ , Frank Edenhofer¹^,²

¹Institute of Anatomy and Cell Biology, University of Würzburg, ²Institute of Reconstructive Neurobiology, University of Bonn, ³German Cancer Research Center, Heidelberg

Bu makalede

Özet

Uyarılmış pluripotent kök hücrelerin üretilmesi otolog nakli türetilmesi için ilginç umutları sağlar. Ancak, pluripotent devlet ve zahmetli yeniden farklılaşma yoluyla ilerleme hala klinik çeviri engellemektedir. Burada erişkin insan fibroblast türetme ve uyarılmış nöral progenitör hücrelerin içine doğrudan dönüşüm ve nöral soy içine sonradan farklılaşmayı açıklar.

Özet

Somatik hücre içine yetişkin deri fibroblastlardan uyarılmış pluripotent kök hücre (iPSCs) ve sonraki farklılaşma Nesil histokompatibilite engelleri aşmak otolog nakli türetilmesi için ilginç umutları sağlar. Ancak, pluripotent devleti ve istenen soy içine sonradan tam farklılaşma yoluyla ilerleme nedeniyle ilgili neoplastik potansiyeli ve genomik istikrarsızlık iPSC teknolojisinin klinik çeviri için bir barikat olmaya devam etmektedir. Son zamanlarda, ve diğerleri, somatik hücreler, sadece bu şekilde, pluripotent durumda ilerlemeyi engellemeyi, tanımlanmış faktörleri kullanılarak iPSCs halinde değil, aynı zamanda multipotent somatik kök hücrelerin farklı tiplerine dönüştürülemez gösterdi. Özel olarak, indüklenen nöral projenitör hücreler (iNPCs), insan fibroblast doğrudan dönüştürme, hücre değiştirme, hastalık modelleme gibi çeşitli uygulamalar için yeni bir otolog hücre kaynağı olasılığını habercisidirve ilaç tarama. Burada, zamanında yoktur Oct4, Sox2, Klf4 ifadesi, hem de c-myc göre iNPCs içine deri biyopsisi ve etkin doğrudan dönüştürme ile, yetişkin insan primer fibroblastlar izolasyonunu tarif eder. Sox2 pozitif nöroepitelyal koloniler indüksiyon 17 gün sonra ortaya çıkar ve iNPC hatları monoklonal izolasyon ve genişlemesi ile etkin bir şekilde tespit edilebilir. Indüksiyon aşamasında enfeksiyon ve lösemi inhibitör faktör takviyesi viral çokluğu hassas ayar kadar% 0.2 dönüşüm verimi elde etmek için kritik faktörleri temsil etmektedir. Şimdiye kadar, hastaya özgü iNPC hatları fazla 12 geçişleri için genişletilmiş ve eşit örneğin Nestin ve Sox2 ifadesi olarak nöral kök / progenitör hücrelerin morfolojik ve moleküler özellikleri göstermek mümkündür. sırasıyla Tuj1 ve GFAP karşı boyama tarafından değerlendirilecek iNPC hatları nöronlar ve astrositler içine ayırt edilebilir. Sonuç olarak, türev ve korkunç için sağlam bir protokol raporBöyle otolog sinir hücre değişimi ve hastalık modelleme gibi biyomedikal uygulamalarda bir hücresel kaynak sağlayabilir stabil genişletilebilir nöral progenitör hücrelerin içine insan fibroblastlar ct dönüşüm.

Giriş

2006 yılında Yamanaka ve arkadaşları ilk kez bir pluripotent devleti ¹ içine somatik hücre yeniden programlanması olasılığını gösterebilir. Bu farksızlaşma Oct4, Sox2, Klf4 ve c-Myc murin fibroblast dört transkripsiyon aşırı ifadesi ile faktörleri elde edilmiştir. oluşturulan adlandırılan uyarılmış pluripotent kök hücreler (iPSCs), embriyonik kök hücrelerin (ESCs) fonksiyonel eşdeğerliği gösterir ve bu nedenle, yetişkin organizmanın bütün hücre tiplerine ayırt edilebilir. Daha sonra iPSCs için yeniden programlama bir yıl insan fibroblastlar ² için elde edilebilir. Hayvan modellerinde deneyler iPSC türetilmiş hücreler, genel olarak, Parkinson has....