Manşet tekniği, küçük damarların teknik olarak zorlayıcı sütür anastomozlarından kaçınarak farelerde heterotopik servikal kalp nakli modelini kısaltır ve kolaylaştırır. Bu video makalesinde gösterilen teknik ayrıntılar, araştırmacıların bu modeli laboratuvarlarında kurmalarına izin vermelidir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Farelerde Heterotopik Servikal Kalp Nakli
Bu makalede
Özet
Özet
Farelerde heterotopik servikal kalp nakli, nakil ve kardiyovasküler araştırmalarda değerli bir araçtır. Manşet tekniği, küçük damarların zorlu sütür anastomozlarını önleyerek bu modeli büyük ölçüde basitleştirir ve böylece sıcak iskemi süresini azaltır. Abdominal greft implantasyonu ile karşılaştırıldığında, servikal model daha az invazivdir ve implante edilen grefte daha ileri takip muayeneleri için kolayca erişilebilir. Anastomozlar, greftin çıkan aortunun alıcının ortak karotid arteri ile manşet üzerinden çekilmesi ve ana pulmoner arterin dış juguler ven ile manşet üzerinden çekilmesi ile gerçekleştirilir. Uygun manşet boyutunun seçilmesi ve damarların tam mobilizasyonu başarılı bir revaskülarizasyon için önemlidir. İskemi-reperfüzyon (I/R) hasarı, greftin kardiyoplejik bir solüsyon ile perfüze edilmesi ve hipotermi ile en aza indirilebilir. Bu yazımızda, temel mikrocerrahi becerilere sahip cerrahların işlemi yüksek başarı oranıyla gerçekleştirmesine olanak tanıması gereken basitleştirilmiş ve geliştirilmiş bir manşet tekniği için teknik detaylar sunuyoruz.
Giriş
Kalp nakli modeli sıkça I / R-yaralanma, allogreft reddini, nakil sonrası vaskülopatisinin ve imünmodüller ajanların etkinliğini araştırmak için kullanılır. Fare modelleri bilinen immünolojik ve genetik geçmişleri, birçok kendilenmiş ve transgenik suşları ve nispeten düşük maliyetlerle deneysel durumu gibi birçok avantaj birleştirir.
1973 yılında, farelerde abdominal Kalp nakli bir teknik ilk Corry ark 1 tarafından tarif edilmiştir. Bu modelde greftler alıcının abdominal aorta ve vena kava inferior ana pulmoner arter çıkan aort uç-yan anastomoz ile revaskülarize edilmektedir. 1991 yılında, farelerde rahim kalp transplantasyonu için olan bir dikiş tekniği Chen ve ark 2 tarafından tarif edilmiştir. Bu modelde bir retrograd koroner arter perfüzyon gr çıkan aorta alıcının karotis arter anastomoz tarafından kurulanKıç. Venöz kan sağ atriuma, sağ ventrikül içine koroner sinüs yoluyla drene ve alıcı dış şahdamarından (Şekil 1) içine pulmoner arter yoluyla atılır. Karın greft implantasyonu ile karşılaştırıldığında servikal modeli daha az invaziv ve greft yüzeysel konumu ek izlem muayeneleri (örn palpasyon, ekokardiyografi, intravital floresan mikroskopi) 3,4 için çok kolay erişilebilirlik sağlar.
Teknik gelişmelere 5,6 olmasına rağmen, bu modelin daha yaygın kullanımı anastomoz kaçağı ve tromboz insidansının yüksek olan küçük damarların dikilir anastomoz gerçekleştirmek için teknik zorluklar nedeniyle sınırlı kalmıştır. 1991 yılında, Matsuura ve ark. damar duvarı büyük ölçüde servikal Kalp nakli 7 modelini kolaylaştıran bir sentetik silindir, üzerinde dışa dönük olduğu kaf tekniğini tanıttı. Tekniği fu oldurther renal 8, pankreas 9, bacak 10, hepatik 11,12, 13,14 akciğer ve damar nakli 15 de dahil olmak üzere çeşitli deneysel modeller için transplant kabul etmiştir. Dikiş tekniği ile karşılaştırıldığında gereken anastomozlar için zaman ve böylece sıcak iskemi süresi kısadır ve içinde manşet tekniği kullanılarak 16 daha az vasküler komplikasyonları vardır. Ayrıca, yüksek başarı oranı ile işlemi gerçekleştirmek için mikrocerrahi az eğitim ile cerrahlar sağlar. Manşet tekniğinin bir dezavantajı serebral perfüzyon değiştirebilir karotis arter, bir önkoşul ligasyonu olduğunu.
Bu videoyu yazıda farelerde servikal Kalp nakli için geliştirilmiş ve basitleştirilmiş manşet tekniği sunuyoruz.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bütün deneyler Alman Kalp Merkezi Münih ve Bavyera, Almanya (Gz. 55.2-1-54-2532.3-17-13) Hükümeti tarafından kabul edildi. Hayvanlar belli bir patojen serbest tesis içinde yer ve Tıbbi Araştırmalar Ulusal Derneği ve Ulusal Bilimler Akademisi tarafından verilen "Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Kılavuzu" ile formüle "Laboratuar Hayvan Bakımı İlkeleri" ile uyumlu insan bakım alınmıştır Fen ve Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH Yayın no. 86-23, 1985 revize) tarafından yayınlandı.
NOT: İki kavisli bir forseps ve damar dilatatörler dahil steril mikrocerrahi aletlerin tam bir set, prosedür (Şekil 2a) için gereklidir. Perioperatif antibiyotik profilaksisi rutin gerekli değildir, ancak, bağışıklığı bozulmuş hayvanlarda endike olabilir. Hayvanlar, terminal izofluran inhalasyonu ile sakrifiye edildi.
Donör Hazırlama ve Aşı Hasat
- Intraperitonal (ip) ile hayvan midazolam enjeksiyonu (5.0 mg / kg), medetomidin (0.5 mg / kg) ve fentanil (0.05 mg / kg vücut ağırlığı) anestezisi. Operatif sahada yatar pozisyonda fare yerleştirin ve pedal çekme refleksi cerrahi toleransı onaylayın.
- Klorheksidin ile cilde üç kez dezenfekte ve orta hat karın kesisi gerçekleştirin. Inferior vena kava maruz sola ıslak bir gazlı bez ile bağırsakları geri çekin.
- Antikoagülasyon inferior vena kava ile 0.4 ml serum fizyolojik içinde sulandırılmış heparin 50 IU enjekte edilir. Heparin sonrası damar 1 dakika İnsizyon.
- Diyaframı açın ve kalp maruz ikili torakotomi gerçekleştirin. Ön göğüs duvarı superiora yansıyan ve bir kelepçe ile yerinde tutulur.
- Timus çıkarın ve açıkça aort ve pulmoner gövdede arasındaki bağ dokusunu incelemek. Sağ superior vena kava İnsizyon.
- Düzeyinde harekete çıkan aort delinme30 G iğne ile brakiyosefalik gövde 5 ml şırınga üzerine monte ve yavaş yavaş 4 ° C soğuk kardiyoplejik çözeltisi 3 ml aşırı baskı olmadan retrogradually kalbi serpmek. Koroner dolaşım içine hava girmesini önleyin. Ayrıca kardiyak arrest geliştirmek için greft üzerine buz tuz çözeltisi bırakın.
- Brakiosefalik gövde kökeni proksimale aort transect.
- 8-0 ipek ile kalbe yakın alt ve üst venae hem kava inferior bağlanır ve bitişik harfler distal onları transect.
- Kadar distale mümkün olduğunca pulmoner gövde ücretsiz teşrih. 8-0 ipek ile çatallanma yakın pulmoner arterleri bağlanır ve distalde onları transect.
- Tek bir 8-0 ipek ligatür ile hep birlikte pulmoner venlerin bağlanır ve onları transect.
- Donörden kalbini çıkarıp implantasyon kadar buz gibi soğuk kardiyoplejik solüsyon içinde saklayın.
2. Alıcı Hazırlık
- HazırlamakBir No. 11 neşter veya mikroskop altında bir makas ile polimid boru keserek anastomozlar için manşet. Manşet, bir silindirik gövde ve damar kelepçesi yerleştirilmesi için bir uzantı (çevresinin 1/3), 1 mm (Şekil 2b) bir uzunluğu, her oluşur.
- Hayvan anestezisi ve yukarıda tarif edildiği gibi, cerrahi tolerans teyit etmektedir. Sıvı replasmanı için 0.25 ml ılık tuzlu su solüsyonu subkutan (sc) enjekte edilir.
- Elektrikli tıraş makinesi kullanarak sağ servikal bölgenin saç çıkarın ve sıcak bir pad üzerinde bir yatar pozisyonda hayvan yerleştirin. Solunum tehlikeye sokabilir, bu kadar ön uzuvları gerilmeden kaçınarak bant ipliklerini bacakları sabitleyin. Kuruluğunu önlemek için oftalmik merhem kullanarak gözleri örtün. Cerrahi siteyi klorheksidin ile üç kez dezenfekte edin.
- Juguler çentik sağ mandibular açıdan enine deri kesi olun.
- Açık açık ext seferberernal juguler ven. Iki kutuplu bir forseps ile yan dalları cauterize ve bunları transect.
- Submandibuler bezden ven ile izdiham düzeyinde ligatures arasındaki dış juguler ven bölün.
- Manşet harici juguler ven çekin ve manşet uzantısı üzerinde bir damar kelepçe koyarak proksimale gemi tıkamak. Bitişik harfleri çıkarın ve 01:10 heparinli serum fizyolojik ile damar lümeni sulamak.
- Manşet üzerinde damar duvarını Evert ve önceden belirlenmiş bir çevresel 8-0 ipek ligatür ile sabitleyin.
- Sternocleidomastoid kasının yüzeysel kısmını çıkarın.
- Sağ karotis arter harekete geçirmek ve karotis bifurkasyonu altındaki ligatures arasındaki gemi transect.
- Manşet ile karotis arter çekin ve manşet uzantısı üzerinde bir Yaşargil kelepçe koyarak proksimale gemi tıkamak. Bitişik harfleri çıkarın ve 01:10 heparinli serum fizyolojik ile damar lümeni sulamak.
- Yavaşça dilate bir gemi dilatatörle arter lümen, manşet üzerinde damar duvarını tersine çevrilmesi ve önceden belirlenmiş bir çevresel 8-0 ipek ligatür ile sabitleyin.
- Greft implantasyonu için yeterli yer kazanmak için, submandibular bezin sağ lobunu çıkarın.
- Implantasyon kadar nemli ameliyat alanını tutun.
3. Greft İmplantasyonu
- Başaşağı medial odaklı aorta ve pulmoner arter yanal ile alıcı servikal bölgede greft yerleştirin.
- Karotis arter ile manşet üzerine greft aorta çekin ve çevresel 8-0 ipek ligatür ile anastomoz sabitleyin.
- Onun ön yönü üzerinde akciğer gövde insizyon ve dış juguler ven ile manşet üzerine çekin. Yine çevresel 8-0 ipek ligatür ile anastomoz sabitleyin.
- Karotid arter çözülmesini aşağıdaki dış juguler ven kelepçeyi çıkarın. Kalpler kanla hemen doldurur. R artırmak içineperfusion greft üzerine 37 ° C sıcak tuzlu su çözeltisi bırakın. Normalde kalp bir dakika içinde sinüs ritmi geliştirir. Venöz yerinde manşet uzantısını kaldırın.
- Doğru greft pozisyonunu sağlamak, anastomozlar torsiyon olmadan gerilimsiz ve damarları olmalıdır. Bu beri cilt koterize gemiler yara iyileşmesini bozabilir etmeyin. Kanama genellikle kendiliğinden durur. Tek bir 8-0 sürekli dikiş ile cilt kapatın.
4. Ameliyat Sonrası Bakım
- Sıvı replasmanı için 0.25 ml ılık tuzlu su solüsyonu sc enjekte edilir.
- Narkotik nalokson (1,2 mg / kg), flumazenil (0.5 mg / kg) ve sternal yatma muhafaza edilmesi için yeterli bilinci yerine kadar sıcak bir pedi üzerinde hayvan sol sc atipamezol (2,5 mg / kg vücut ağırlığı) enjekte antagonize etmek. Herhangi bir anormal davranış kaydetmek için en az bir saat daha hayvan gözlemleyin. Tamamen geri kazanılması kadar diğer hayvanların şirkete ameliyat geçirmiş bir hayvan iade etmeyinKırmızı.
- Buprenorfin ile önleyici analjezi sağlamak (0.05 mg / kg sc günde üç kez) ya da işlemden sonra 72 saat içinde minimum bir süre için yerel kurumsal protokole göre alternatif bir analjezi.
- Cerrah ve bir veteriner hayvanları düzenli olarak görmelisiniz. Kilo kaybı>% 15, halsizlik, şişme veya cerrahi yan enfeksiyon hayvanlar durumunda terminal izofluran inhalasyonu ile ötenazi.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Ekibimiz başarıyla yaklaşık 20 eğitim ameliyatlarından sonra açıklanan teknik gerçekleştirebilir. En zorlu kısmı kolayca geri çevirir ve çoklu girişimler duvarın yırtılmaya yol açabilir, çünkü manşet üzerinde karotis arter damar duvarını tersine çevrilmesi için olduğunu. Eğitim döneminden sonra, ortalama toplam ameliyat süresi 60 ± 8 dk idi. Yaklaşık 20 dakika donör hasat, servikal damarlar ve anastomoz ve cilt kapatılması için 15 dakika hazırlanması için 25 dakika gereklidir.
Miyokard I / R...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Biz çeşitli deneysel ortamlarda% 90 üzerinde bir başarı oranı ile 200 kalp nakli tamamladık. Burada anlatılan teknik ile, tam bir prosedür, deneyimli bir cerrahın 60 dakika içinde yapılabilir. Organ ihale öncesi servikal damarları hazırlayarak toplam greft iskemi süresi 20 dakika ile sınırlı olabilir. Implantasyon (sıcak iskemi süresi) için zaman sütür tekniği 16 oranla manşet tekniği kullanılarak önemli ölçüde daha kısadır.
Bunun yerine sadece daha önce 5,17 açıklandığ...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
M.-A. Deutsch, Dr. Rusche Forschungsprojekt (2014), Deutsche Stiftung für Herzforschung ve Deutsche Gesellschaft für Thorax- Herz- und Gefäßchirurgie tarafından desteklenmektedir. M. Krane, Deutsche Stiftung für Herzforschung (F/37/11), Deutsches Zentrum für Herz Kreislauf Forschung (DZHK B 13-050A; DZHK B 14-013SE) ve Deutsche Forschungsgemeinschaft (KR3770/7-1; KR3770/9-1)
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Forseps JFC-7.2 | S & T | P-00036 | Kavisli uç 0,20 mm |
| Damar dilatatörü D-5a | S & T | S-00124 | |
| Adventita makas | S & T | S-00102 | |
| Vasküler kelepçe B-1V | S & T | S-00396 | |
| Yaşargil Klips | Peter Lazic | 65,097 | 3,5 mm uzunluk |
| Bipolar forseps | Micromed | 148-100-011 | uç 0,25 mm |
| Poliimid tüpler | River Tech Medical | 19-24 gauge | |
| 8.0 ipek ligatürler | Catgut | ||
| Custodiol HTK çözeltisi | Temel İlaçlar |
Kaynaklar
- Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. Heart transplantation in congenic strains of mice. Transplant Proc. 5, 733-735 (1973).
- Chen, Z. H. A technique of cervical heterotopic heart transplantation in mice. Transplantation. 52, 1099-1101 (1991).
- Martins, P. N. Assessment of graft function in rodent models of heart transplantation. Microsurgery. 28, 565-570 (2008).
- Schramm, R., et al. The subepicardial microcirculation in heterotopically transplanted mouse hearts: an intravital multifluorescence microscopy study. J Thorac Cardiovasc Surg. 134, 210-217 (2007).
- Liu, F., Kang, S. M. Heterotopic heart transplantation in mice. J Vis Exp : JoVE. 238, (2007).
- Gong, W., et al. Introduction of modified cervical cardiac transplant model in mice. Exp Clin Transplant. 10, 158-162 (2012).
- Matsuura, A., Abe, T., Yasuura, K. Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique. Transplantation. 51, 896-898 (1991).
- Chen, H., Zhang, Y., Zheng, D., Praseedom, R. K., Dong, J. Orthotopic kidney transplantation in mice: technique using cuff for renal vein anastomosis. PloS one. 8, e77278(2013).
- Maglione, M., et al. A novel technique for heterotopic vascularized pancreas transplantation in mice to assess ischemia reperfusion injury and graft pancreatitis. Surgery. 141, 682-689 (2007).
- Sucher, R., et al. Orthotopic hind-limb transplantation in rats. J Vis Exp : JoVE. , (2010).
- Kamada, N., Calne, R. Y. Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage. Transplantation. 28, 47-50 (1979).
- Oldani, G., Lacotte, S., Morel, P., Mentha, G., Toso, C. Orthotopic liver transplantation in rats. J Vis Exp : JoVE. , (2012).
- Okazaki, M., et al. A mouse model of orthotopic vascularized aerated lung transplantation. Am J Transplant. 7, 1672-1679 (2007).
- Suzuki, H., Fan, L., Wilkes, D. S. Development of obliterative bronchiolitis in a murine model of orthotopic lung transplantation. J Vis Exp : JoVE. , (2012).
- Zou, Y., et al. Mouse model of venous bypass graft arteriosclerosis. Am J Pathol. 153, 1301-1310 (1998).
- Zhou, Y., Gu, X., Xiang, J., Qian, S., Chen, Z. A comparative study on suture versus cuff anastomosis in mouse cervical cardiac transplant. Exp Clin Transplant. 8, 245-249 (2010).
- Niimi, M. The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3000 operations by one surgeon. J Heart Lung Transplant. 20, 1123-1128 (2001).
- Arras, M., Autenried, P., Rettich, A., Spaeni, D., Rulicke, T. Optimization of intraperitoneal injection anesthesia in mice: drugs, dosages, adverse effects, and anesthesia depth. Comp Med. 51, 443-456 (2001).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
