İzole sıçan kalbi, iskemi reperfüzyon hasarı için kalıcı bir modeldir. Burada, yerinde aort kanülasyonu, kalbin Langendorff perfüzyonu, simüle edilmiş iskemi-reperfüzyon hasarı ve iskemik hakaretin derecesini doğrulamak için enfarktüs boyama yoluyla bir sıçandan atan kalbin çıkarılması sürecini açıklıyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Langendorff-perfüze sıçan Hearts indüksiyon ve İskemi-reperfüzyon Hasarı Değerlendirilmesi
Bu makalede
Özet
Özet
Akut ortamda iskemi reperfüzyon hasarını çevreleyen biyokimyasal olaylar, miyokard infarktüsü ve göğüs cerrahisinin kardiyak komplikasyonları için yeni tedavi seçeneklerinin geliştirilmesinde büyük önem taşımaktadır. Bazı ilaçların miyokard'ı iskemi reperfüzyon hasarına karşı ön koşullandırma yeteneği, çok az başarı ile çok sayıda klinik çalışmaya yol açmıştır. İzole kalp modeli, iskemi-reperfüzyon yaralanması penceresinden önce veya bu pencere içinde herhangi bir zaman noktasında uygulanan çeşitli farmakolojik müdahalelerin etkileri de dahil olmak üzere, iskemi reperfüzyon hasarının fonksiyonel etkilerinin gerçek zamanlı olarak akut olarak gözlemlenmesine olanak tanır. Kısa süreli iskemi kalbi iskemik hasara karşı ön koşullandırabileceğinden, önceden koşullandırılmamış miyokardın fonksiyonel değerlendirmesine izin vermek için in situ aort kanülasyonu yapılır. Basınç oluşumunun gerçek zamanlı ölçümünü sağlamak için sol ventriküle tuzlu su dolu bir balon yerleştirilir. İskemik hasar, perfüzyon tampon akışının kesilmesi ve ardından reperfüzyon ile simüle edilir. Hem iskemi hem de reperfüzyonun süresi, herhangi bir zaman noktasında biyokimyasal olayları incelemek için modüle edilebilir. Langendorff izole kalp modeli, iskemi ve reperfüzyonu etkileyen sistemik olayların dikkate alınmasına izin vermese de, iskemi reperfüzyon hasarı penceresindeki akut fonksiyonel ve biyokimyasal olayların yanı sıra farmakolojik müdahalenin kardiyak ön ve son koşullandırma üzerindeki etkisinin incelenmesi için mükemmel bir modeldir. Bu protokolün amacı, Langendorff modelinde in situ aort kanülasyonu ve kalp eksizyonu takiben iskemi/reperfüzyon hasarının nasıl yapılacağını göstermektir.
Giriş
Hem iskemi ve reperfüzyon kardiyak tepkiyi altında yatan olaylar izahı aort kros-sıkma 2. gerektiren miyokard infarktüsü 1 ve kardiyak cerrahi işlemlerin tedavi geliştirilmesi esastır. Iskemi reperfüzyon hasarının in vivo modelleri, çok kullanışlı bir son nokta analizi sağlarken, gerçek zamanlı olarak, akut iskemi reperfüzyon hasarının fonksiyonel etkilerinin araştırılması için etkili değildir. In vivo iskemi reperfüzyon modelleri genellikle reperfüzyon sırasında infarkt önemli değişkenlik ve kalbe ilacın doğrudan teslim üretmek içinde Ayrıca, zordur. iskemi reperfüzyon hasarının incelenmesi için bir Langendorff izole ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Burada listelenen tüm işlemler Güney Carolina Tıp Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanmıştır. Burada tarif edilen deneyler, akut, hayatta olmayan deneylerdir. Bu nedenle, var göz merhemi hiçbir kullanımı ve steril bir çalışma paketi gerekli değildir. Ötanazi kalbin hasat sırasında eksanguinasyon yoluyla elde edilir.
1. Deneysel hazırlanması
- Sabit bir basınç veya sabit akış Langendorff perfüzyon Aparatı 4 ya ayarlayın.
- Tadil edilmiş bir Krebs Henseleit tamponu 4 L hazırlayın (mM olarak: 112 NaCl, 5 KCl, 1.2 MgSO 4, 1 K 2 HPO 4, 1.25 Ca....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
sol ventrikül balon aparatı müteahhitlik sol ventrikül (Şekil 1) tarafından geliştirilen basınç gerçek zamanlı izleme sağlar. Daha önce 7 tarif edildiği gibi, bu basınç izleme ventriküler fonksiyon parametrelerinin çoğu hesaplamak için kullanılabilir. Bu hesaplamalar, başlangıç aşaması olarak reperfüzyon fazı yapılan her bir grup içinde birden fazla izleri üzerinden ortalaması alınmış, ve daha önce 9 yapmış gibi farmakolojik müdahale, kardiyak ön koşullandırma neden olup olmadığı.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
İzole perfüze sıçan kalp başarıyla iskemi reperfüzyon hasarı 9 kardiyak önkoşullama üzerindeki farmakolojik müdahalenin etkisini araştırmak için kullanılabilir. Ancak, tekrarlanabilir sonuçlar sağlamak için standardize edilmelidir prosedüre bazı temel adımlar vardır. Sistem içinde 37.4 ° C arasında bir sıcaklık muhafaza hatta hafif ve hipotermi hipertermi kalp önkoşullanma 10,11 neden olabilir, kritik öneme sahiptir. ketamin ile uzun süreli maruz kalp önkoşullama 12 engel olabilecek kalp.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.
Teşekkürler
Bu yayın Güney Carolina Tıp Üniversitesi akademik ev, NIH / NCATS Hibe Numarası UL1 TR000062 ile, South Carolina Klinik ve Translational Research (SCTR) Enstitüsü tarafından desteklenmiştir. Ek destek DRM VA liyakat ödülü BX002327-01 tarafından sağlandı. DJH NIH / NCATS Hibe Numarası TL1 TR000061 tarafından ve NIH Hibe Numarası T32 GM008716 tarafından desteklenmiştir. DENİZ NIH Hibe Numarası T32 HL07260 tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Sodyum Klorür | Sigma Aldrich | S3014 | |
| Potasyum Klorür | Sigma Aldrich | P9541 | |
| Magnezyum Sülfat | Sigma Aldrich | 203726 | |
| Potasyum Fosfat Dibazik | Sigma Aldrich | RES20765-A7 | |
| Kalsiyum Klorür Dihidrat | Sigma Aldrich | C8106 | |
| Sodyum Bikarbonat | Sigma Aldrich | S5761 | |
| D-Glikoz | Sigma Aldrich | G8270 | |
| Oktanoik Asit | Sigma Aldrich | C2875 | |
| 2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür | Sigma Aldrich | T8877 | |
| Tıbbi Basınç Dönüştürücü | MEMSCAP | SP844 | |
| Masterflex Peristaltik Pompa | Cole Parmer | EW-07521-40 | |
| Masterflex Kolay Yük Pompa Kafası | Cole Parmer | EW-07518-10 | |
| Isıtmalı sirkülasyonlu su banyosu | Lauda | M3 | |
| Boru Akış Modülü | Transonic | TS410 | |
| Modüler Araştırma Konsolu | Transonic | T402 | |
| Hat içi akış sensörü | Transonic | ME2PXN | |
| PowerLab Veri Toplama Cihazı | AD Instruments | PL3508 | |
| LabChart veri toplama yazılımı | AD Instruments | MLU60/8 |
Kaynaklar
- Bainey, K. R., Armstrong, P. W. Clinical perspectives on reperfusion injury in acute myocardial infarction. American Heart Journal. 167 (5), 637-645 (2014).
- Beyersdorf, F. The use of controlled reperfusion strategies....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
