Bir Yukarı Akış Anaerobik Çamur Battaniyesi Reaktörde Deniz tortulları ve Trikloretilen Azaltma gelen Sulfidogenic Çamur Gelişimi

Özet

Mikrobiyal sülfat indirgemesi, çevresel biyoteknolojide büyük önem taşıyan bir süreçtir. Sülfidojenik reaktörlerin başarısı, diğer faktörlerin yanı sıra çamurun mikrobiyal bileşimine bağlıdır. Burada, indirgeyici klorsuzlaştırma amaçları için bir UASB reaktöründeki hidrotermal menfez çökeltilerinden sülfidojenik çamur geliştirmek için bir protokol sunuyoruz.

Özet

Mikrobiyal sülfat azaltımının önemi, çevresel biyoteknolojide sunduğu çeşitli uygulamalara dayanmaktadır. Tasarlanmış sülfat indirgeme, endüstriyel atık su arıtımında, kimyasal oksijen ihtiyacı (KOİ) ve ağır metallerle birlikte büyük konsantrasyonlarda sülfatı gidermek için kullanılır. Prosese en yaygın yaklaşım, ağırlıklı olarak metanojenik granül çamurun sülfidogeneze adaptasyonu yoluyla sülfidojenik çamurun elde edildiği anaerobik biyoreaktörlerdir. Bu işlem uzun zaman alabilir ve çamurdaki metanojenlerin varlığından dolayı alt tabaka rekabetini her zaman ortadan kaldırmaz. Bu çalışmada, hidrotermal menfez çökeltilerinin orijinal mikroorganizma kaynağı olduğu sülfidojenik çamur elde etmek için yeni bir yaklaşım öneriyoruz. Sülfat ve uçucu yağ asitlerinin varlığında gelişen mikrobiyal topluluk, sülfür nedeniyle inhibisyon göstermeden uzun bir süre boyunca sülfat azalmasını sürdürecek kadar geniştir.

Bu protokol, yukarı akışlı anaerobik çamur örtüsü (UASB) tipi bir reaktörde tortulardan çamur üretme prosedürünü açıklar. Ayrıca protokol, çamurun trikloretilen (TCE) gibi oldukça toksik bir organik kirletici modelini indirgeyici klorsuzlaştırma yoluyla uzaklaştırma kabiliyetini gösterme prosedürünü sunar. Protokol üç aşamaya ayrılmıştır: (1) çamurun oluşumu ve UASB'de sülfat indirgeme aktivitesinin belirlenmesi, (2) TCE'nin çamur tarafından uzaklaştırılması deneyi ve (3) TCE indirgemesinden sonra çamurdaki mikroorganizmaların tanımlanması. Bu durumda çökeltiler Meksika'da bulunan bir bölgeden alınmış olsa da, deniz çökeltileri sülfat indirgeyici bakteriler açısından zenginleştirilebilecek doğal bir mikroorganizma havuzu olduğundan, farklı bir tortu kaynağı alınırsa bu prosedür kullanılarak sülfidojenik bir çamur oluşumu işe yarayabilir.

Giriş

Çevre biyoteknolojisi en önemli katkılardan biri (aşı) kullanılan çamur sülfat indirgeyici koşullar altında gerçekleştirmek mümkün olduğu içinde Biyoreaktörlerin tasarım oldu. Sülfat azalma (SR) COD, ağır metaller ve organik kirletici maddeler, SR çamur ¹ bir arzu edilen özellik yapan bir olgu eşzamanlı çıkarılması ek olarak, sülfat yüksek konsantrasyonda içerir atık su akışlarının tedavi edilmesine imkan verir. Sülfat ile kontamine atık bazı örnekler tabakhane, kağıt, ilaç ve kimyasal imalat sanayi ¹ geliyor. Bununla birlikte, literatürde en metan zerre çamur sulfidogenesis ² uyarlanmıştır zaman çamuru sulfidogenic değinmektedir. Bu adaptasyon yaygın COD / biyoreaktörde SO _{⁴ 2-} oranı manipüle ve çamur ^2,3 olarak metanojenler inhibe kimyasallar eklenerek elde edilir. M uzun bir süre ilave olarakay sulfidogenic granüllerin oluşmasını gerektirir metanojenler ve sülfat redüktör ve sülfürün yüksek konsantrasyonlarda çamurun tolerans arasındaki rekabet biyoreaktör kullanılan sulfidogenic çamur uyarlanması elde edilir, eğer ortaya çıkabilecek temel sorunlardan bazıları ağırlıklı olarak metan çamur indirgeme koşulları sülfata. Bu çalışmada, akışlı anaerobik çamur yataklı reaktörde (UASB) hidrotermal delikleri çökelleri (Punta Mita, Nayarit, Meksika) ağırlıklı sulfidogenic çamur elde etmek için prosedürü açıklar, o zaman biz zaman içinde etkinliğini azaltarak onun sülfat değerlendirmek ve bir deney indirgeyici deklorinasyonu üzerinde uygulama değerlendirmek için. O sitede nedeniyle söz konusu yerde ⁴ yaşayan mikrobiyal topluluğun sergilediği sülfat azaltıcı aktivite sülfidlerin oluşumunu olduğu rapor edilmiştir çünkü sedimanlar yeri seçildi.

Sever varsulfidogenesis için metanojenik taneli çamur adapte üzerinde çökelleri bu sulfidogenic çamur elde al avantajları. Bu avantajlardan bazıları şunlardır: (1) (3) vardır olan çamur adapte metan çamur ile çalışan diğerleri UASB göre sülfid göreceli olarak yüksek konsantrasyonlarda tolere (2), biyoreaktör çalışması için granüller oluşturmak için gerekli değildir, ve asetat tortu oluşumunu teşvik etmek için kültür ortamına dahil uçucu yağ asitlerinin karışımı kullanıldığında bile, metanojenler ile alt-tabaka için bir rekabet.

Deniz Tortular, sülfat, bakteri indirgen bakterileri, fermantasyon ve bakteriler sadece birkaç ^5,6 söz burada halojen giderilmesi için gibi mikroorganizmaların çeşitli doğal bir havuz için bu prosedür sulfidogenesis teşvik etmek için takip edildi. Bu protokolü kullanarak deniz çökelleri geliştirilen konsorsiyum tipi sülfat indirgenmesi ve bu nedenle, yüksek s verimliliği gösterebilir ulfate metanojenler ve sülfat indirgen bakteriler için toksik olarak rapor daha yüksek konsantrasyonlarda sülfüre zamanla aktivitesi ve daha yüksek tolerans azaltır. Öte yandan, bu halojen giderilmesi kapasitesi de protokol burada önerilen ancak orijinal mikrobiyal topluluğun bağlı olabilir izleyerek çökelleri gösterilen olasıdır. Bu varsayım indirgeyici deklorinasyonu solunum veya cometabolism yoluyla oluşabilir gerçeğine dayanmaktadır yapılır, deniz mikrobiyal topluluğun ⁷ terfi edilebilir koşulların her ikisi de. Çamur elde etmek üzere tortulların ekimi, bu uçucu yağ asitleri sülfat indirgen bakteriler çeşitli suşları tarafından kullanıldığı için alt-tabaka olarak asetat, propiyonat ve bütirat karışımı kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Bu asitler, deniz çökelleri ^5,6 karbonlu malzeme üzerinde literatürde çok sayıda haberlere göre, aynı zamanda sık sık deniz çökelleri bulunan karbon bileşiklerinin türüdür.

içeriği "> Son olarak, dünya çevresinde yer alan ve diğer su organlarında bulunan en zehirli bileşiklerin bazıları trikloroetilen (TCE) ve perkloroetilen (PCE) gibi klorlanmış çözücülerdir. Bu bileşikler, toksik değildir, sadece insan ancak Ayrıca mikroorganizmalar, halen ABD'de Çevre Koruma Ajansı tarafından öncelikli kirletici olarak kabul edilir, özellikle TCE, ^8. Bu çalışmada biz vardır sulfidogenic çamur konsantrasyonlarında TCE azaltma kapasitesini test edildiği bir deneme önerdi metanojenik koşullar ^9,10 altında klorlu bileşikler biyolojik ayrışma için bildirilen aralık. Bu klorlu bileşiklerin biyodegradasyonu üzerine araştırmanın en metanojenik koşullar ^9,10 altında yapılmıştır olduğunu belirtmekte yarar var. Biz bu protokolü önerilen TCE ile deney bir olduğunu düşünün Çamurun potansiyel uygulamalar iyi bir örnektir. Bu deneyin amacı e olduTCE çamur ve aktivitesini azaltarak sülfat TCE etkisi toleransı olarak değerlendirir. (1) (2) COD kaldırmak ve (3) kaldırmak, sülfat kaldırın: klorlu bileşiklerin biyodegradasyonu üzerine araştırmanın en metanojenik şartlarda yapılmasını dikkate alarak, bu protokol bir çamur oluşumu eşzamanlı için kullanılabilir önerir klorlanmış bileşikler. Bir adım daha, (ek sülfat ve KOİ için) metanojenik koşullar altında değerlendirilemez iki koşulu TCE ve ağır metallerin uzaklaştırılması eşzamanlı üzerine çamur değerlendirmek olabilir.

Protokol

Protokol adımları için 1. Programı rakam. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

1. Çamur Oluşumunda Marine Sedimanlarını toplayın

1. (Nedeniyle daha yüksek bir sülfat azaltıcı aktivite gösterebilir sülfidlerin varlığı için) hidrotermal delikleri yakın veya organik madde enkaz saptanabilir bir alana ya bir cana denizaltı alanlarını belirlemek.
2. Bu çalışmanın amacı doğrultusunda, tortu yaklaşık 3 veya 4 kg almak ve örnekler kapalı suyu boşaltın. Karanlık plastik torbalara örnekleri yerleştirin. Hiçbir soğutma gereklidir.
3. Hemen kullanılacak değilse laboratuarda kez buzdolabında örnekleri ile çanta tutmak. Bu çalışma, samp amacı doğrultusundales kullanmadan önce haftalarca veya aylarca buzdolabında olabilir.
4. Tortu numunesi (yani, 1 ya da 2 kg) büyük bir kısmını almak ve tortular bulunabilir karbonlu malzemenin büyük çöp ya da mevcut olabilecek bazı kayaların ortadan kaldırmak için uygun bir elek (0.2 cm) kullanın.
   Not: Bu durumda, 0,20 cm çaplı (in 0,0767) içindeki bir kafes kullanılmıştır ama bu numune içinde parçacıkların büyüklüklerine göre farklı boyutta olabilir.
   1. Ağ üzerinden tortu geçtikten sonra, porsiyon homojen olduğunu tanıtmak için seçilen kısmını karıştırın.
   2. Standart yöntemler ¹¹ takip ederek dalgalı askıda katı madde (VSS) içeriği belirlemek için ayrılmış küçük örnekleri (yani 2 3 g) atın.
      Not: adımlara 1.4 1.2 Şekil 2'ye bakınız.

Sediment örneklerinin 2. Fotoğraf rakam.(A) sediment örnekleri hemen sonra çekilen. (B) Tortu örneği örgü geçtikten sonra. Uçucu askıda katı madde öncesinde (VSS) belirlenmesi tartmak için alınan (C) Numune. Petri kabı sterilize edilmesi gerekmez. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

2. Biyoreaktör Kurma

1. Bu çalışmanın amacı için, alternatif olarak 3 L'lik bir toplam çalışma hacmi olan bir UASB reaktörü kullanmak, cam, 1 ya da 2 L hacimli cam reaktörü kullanır.
2. Tortulların VSS içeriğine göre tortu miktarını hesaplamak L 1 in VSS 5 g aşı olarak kullanılmak üzere
3. Hesaplamasından sonra sediment miktarı çok büyükse, biyoreaktör daha sonra yaklaşık% 25 ila% 30 hacmi yerine sedimanlar tarafından işgal edilmesi gerektiğini dikkate alın.
   1. Bunun beri VSS içeriği kaydedinmikrobiyal topluluk biyoreaktörde zenginleştirilmiş zaman değişecektir. VSS içerik biyoreaktörde aktivitesini azaltarak sülfat hesaplamalar için gereklidir.
4. Biyoreaktörde bazal ortam ve tampon çözeltisinin nihai konsantrasyonu, Guerrero Barajas ve arkadaşları tarafından rapor benzer olduğundan emin olun. (2014) ^12.
   1. Sedimanlar, bazal ortamda, tampon çözelti ve uçucu yağ asitlerinin son hacimleri reaktörün nihai çalışma hacmine eşit olduğundan emin olun. Bazal ortam tarifi ¹² iz metaller ve vitaminler çözümü için uygun konsantrasyonlarını içermektedir.
   2. (Örneğin, 2, 3 ya da 4 adım 2.4 bildirilen kat daha fazla konsantre edilir) bu sulandırıldığında sağlamak için, bunun kullanılan reaktörün çalışma hacmi için uygun bir konsantrasyonda bazal ortam ve tampon çözeltisinin bir stok solüsyonu hazırlayın Guerrero-Barajas'ın ve arkadaşları tarafından rapor edilen konsantrasyonda. (2014)^12).
      Not: bazal ortam için stok solüsyonu, ancak tampon çözelti sadece açılışta gereklidir, her zaman gereklidir. Bu saatten sonra tampon çözeltisi eklemek gerekli değildir.
   3. 1: 1 oranında bir 2,5 COD asetat, propionat ve butirat: uçucu bir yağ asitlerinin bir stok çözelti hazırlayın. Sodyum asetat bazal ortamda dahil hesaplamalar için dikkate alın. Reaktör içinde nihai COD yoğunluğu 2,7 g / L olmalıdır.
      Dikkat: Davlumbaz bu çözüm hazırlayın. Bu çözümün hazırlanması için nitril eldiven ve gözlük takın. Dikkate Şekil 3 'de gösterilmiştir, uçucu yağ asitleriyle sülfat reaksiyonların stokiyometrisi al.
   4. Reaktöre sülfat iyonu (SO ₄ ^2-) 4.000 mg / L'lik bir son konsantrasyon sağlamak için uygun bir konsantrasyonda sodyum sülfat bir stok çözeltisi (SO ₄ Na ₂₎ hazırlayın. Alternatif olarak, inci içerirnihai yerine sülfat sürece stok çözeltisinden eklemeden bazal ortam içinde gerekli sülfat e miktarı (SO ₄ ^2-) konsantrasyonu doğru.
5. Bu reaktörün alt ulaşmak emin olmak için taban ortamının bir kısmı ile karıştırılır reaktörde tortu yerleştirin.
   1. Uçucu yağ asitleri çözeltisi ve sülfat çözeltisi ile karıştırılır bazal ortam ve tampon çözeltisinin geri kalanı ekleyin. Uçucu yağ asitlerinin çözeltisi sıvı içine dökülmüş olduğundan emin olun. Not: Davlumbaz bu adımı gerçekleştirin.
   2. Geri dönüşüm pompasına bağlantıları ve reaktörün hatları ayarlayın. / Dak 60 ml geri dönüşüm akış hızını ayarlayın. 34 ° C 'de bir temperatürdeki gözde biyoreaktör ayarlayın. Düzenli sıcaklık değişimleri olup olmadığını kontrol edin, küçük (yani, 34 ± 1.7 ° C)
   3. Gaz değiştirme kolonuna bağlantılarını ayarlayın.
      Not: adımlara 2.5 2.1 Şekil 4'e bakınız.

Şekil VFA (asetat, propiyonat ve bütirat) ile sülfat indirgenmesi 3. Stokiometri. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 4. UASB reaktörü. (A) İlk kez. (B) Sürekli rejim operasyonu 300 gün sonra. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Reaktör 3. Operasyon Mikroorganizmaların Sulfidogenesis ve Büyüme Destekleme

Not: inokulum v tüketmek için izinyağ asitleri ve sülfat olatile. Bu amaçla, sülfat, sülfit ve COD tüketim için, ilk analiz gerçekleştirmek için bir hafta boyunca bekleyin.

1. Inkübasyon bir hafta KOİ analizi yapmak için sıvı 5 ila 7 ml örnek almak sonra, sülfat ve sülfür içeriği ve ^{pH, 13} standart yöntemler ¹¹ aşağıdaki.
   1. Metilen mavisi yöntemi ¹³ izleyerek (670 nm dalga (λ) at) sıvı spektrofotometrik olarak sülfür analiz edin.
      1. 25 ml'lik bir volumetrik şişe içine (ağ / ağ% 2), bir çinko asetat çözeltisi 5 ml yerleştirin çinko asetat çözeltisine numunenin hızlı bir şekilde 200 ul ekle.
      2. Bir N, N'-dimetil-p -fenilendiamin oksalat 2,5 ml ilave edilir (DMP) çözeltisi (% 0.2 ağ / ağ 20% _H 2 ₄₎ ve demir / w (III), amonyum sülfat çözeltisi (10%, 125 ul % 2 H ₂ SO _{4) ve} volümetrik bir şişede 25 mi damıtılmış su ile birlikte w. Reaksiyon için 30 dakika bekleyinmavi renk stabilize edildiği zaman. ¹³ oluşmasına.
         Not: En az 15 dakika bekleyin, ama en fazla 60 dk spektrofotometre örneklerini test etmek için. Spektrofotometre mavi nihai çözümün okuma yürütün.
   2. Standart yöntemlere göre ¹¹ sülfat analiz edin. Burada, bir türbidimetrik yöntemi kullanarak baryum sülfat gibi sülfat ölçmek.
      1. Bir iyileştirme çözeltisi 5 ml yerleştirin (hidroklorik asit HCI 1: 1) 25 ml volümetrik bir şişede, daha önceden santrifüj numune 1 ml (11.320 x g), distile su ile volümetrik şişeye 25 ml tam ekleme ve baryum klorür 1 g ekleyin.
      2. Bir girdabın içinde 1 dakika için çözüm karıştırın. Formu ve 420 nm dalga boyunda ¹¹ (λ) olarak spektrofotometre numune okumak için baryum sülfat için 4 dakika bekleyin.
   3. Standart yöntemlere göre ¹¹ COD analiz edin. Seçenek olarak ise, bir COD Determina kullanımıtion kiti.
      1. COD belirlenmesinden önce, belirlenmesi uğratabilecek kalan sülfür kaldırmak için (11.320 xg) iyice numuneyi santrifüj. Gerekirse, iki kez santrifüj: İlk kez hemen örnek ve ikinci kez aldıktan sonra 6 veya 8 saat bekleyin ve sonra COD analiz yapmak.
      2. COD saptama kiti bir reaksiyon şişesine örnek 2 ml ilave edilir şişenin kapatılması ve hafif çalkalama ile karışım homojenleştirin. Başka bir reaksiyon şişesine damıtılmış su 2 ml ekleyerek boş hazırlamak ve karışım homojen hale getirilir.
      3. 2 saat boyunca 150 ° C 'de sindirim reaktörde şişeleri yerleştirin. Şişeleri çıkarın ve onları karanlıkta soğumasını bekleyin. 620 nm'lik bir dalga boyunda spektrofotometre flakon okumaları al.
   4. Gaz değiştirme sütunundan gaz hacmini edinin.
2. Sülfat tüketilen başka bir 5 ila 7 gün öncesine kadar kadar bekleyin. Sülfat ve COD bir tüketilmesi gerekirpproximately% 85 ila% 90 öncesinde yeni bir beslemeli kesikli başlatılır.
3. Sülfat (ve COD) tüketilen sonra tamamen adımı tekrarlayın 2.4. Her seri için taze orta ve yeni besinleri sağlar.
4. Tekrarlayın 3.1 ve 3.2 adımları tekrarlayın. Bu noktada her parti 7 ila 10 gün arasında sürmelidir.
5. 3 ila 4 toplu tamamlandığında, adım 2.4 tekrarlayın fakat 4 g / L KOİ konsantrasyonu artırır.
6. Adımı yineleyin 3.1 ve 3.2 adım.
   1. Adımı tekrarlayın 3.3 ama 6 g / L KOİ konsantrasyonu artırır.
   2. Bu 10 g / L kadar kademeli COD konsantrasyonunun arttırılması 3.6 ve 3.6.1 tekrarlayın.
      Not: Zaman (d) karşı sülfat konsantrasyonu (mg / L) sunar grafik olun.
7. Sülfat tüketimi az 24 saat içinde% 80 üzerinde ve bu daha bir hafta oluştuğunda, sürekli moda reaktörün çalışmasını geçin. Sürekli modu için 24 saat sonra, hidrolik bir tutma süresine (HRT) ayarlamak 4 g / L ve COD'deki sülfat konsantrasyonunu korumak10 g / L'de.
   Not: Zamanla sülfat tüketimi olmalıdır Daha hızlı.

4. Sülfat Etkinlik Testi Azaltılması

1. Bu test öncesinde, sürekli rejim altında biyoreaktör kalan sülfat konsantrasyonunda% 10'dan daha az varyasyon sunmaktadır emin olun.
2. Herhangi bir günde, tek HRT döngüsü ve davranış adımı 2.4 sonra reaktör durdurmak. Aşama 2.4.3 için 10 g / L'lik bir konsantrasyon COD kullanın.
3. Biyoreaktör beslenir sonra, sıvının 5 7 ml numune almak ve COD, sülfat, sülfit (adım 3.1) ve pH, her saat için analiz gerçekleştirmek. Üretilen gaz hacmini kaydedin.
4. Literatürde ¹⁴ göre aktivitesini azaltarak sülfat hesaplayın.
   
   

SRA = sülfat aktivitesini azaltarak (mg _COD-H 2 S) / gVSS * d

m, H ₂ 2 S olarak ifade edilen

VSS = uçucu askıda katı madde konsantrasyonu

t = zaman (d veya saat)

5. Mg / L zamanla sülfit konsantrasyonuna karşı sülfat tüketimi yüzdesini gösterir gelen grafikleri olun. Zamanla KOİ tüketiminin yüzdesini gösterir grafikleri olun. Zamanla pH değişimi gösteren grafikler olun.

5. Trikloroetilen (TCE) Azaltma Testi

1. Bu test öncesinde biyoreaktör sürekli rejim altında çalışan ve kalan sülfat konsantrasyonunda% 10'dan daha az varyasyon sunmaktadır olduğundan emin olun. Biyoreaktörde sülfat azalma% 90 daha az ise bu testi başlatmak etmeyin.
2. Biyoreaktör sıvı faz içinde bu bileşiğin nihai konsantrasyon 300 uM olmalıdır dikkate alarak trikloroetilen bir stok çözeltisi (TCE) hazırlayın. Partitioni dikkate34 ° C 'de TCE için Henry's Kanunu boyutsuz katsayısına (H') kullanarak, tepe boşluğuna bileşiğin ng. TCE için H'at 34 ° C 0,4722 olan.
   
   Dikkat: fumehood bu çözüm hazırlayın ve eldiven ve gözlük kullanılmalıdır.
   1. Örneğin, bir 5000 mcM stok çözümü için, takip şekilde hesaplamak:
      
      TCE gaz fazı konsantrasyonu = (0,4722) * (5.000) = 2.139 uM. TCE bu miktar üst kısmında olacağı stok çözeltisinin hazırlanması için, bu konsantrasyon içerir.
      Ardından stok solüsyonu sıvı (su), gerçek TCE konsantrasyonu olacaktır: 5000 + 2139 = 7139 uM. TCE yoğunluğu = 1.43 g / ml olmuştur. Mg için 7139 mcM dönüştürmek ve daha sonra TCE yoğunluğunu kullanarak stok çözümü için TCE hacmini hesaplamak.
      Not: TCE stok çözeltisi m konsantrasyonununay daha düşük 5.000 uM, örneğin, 3000 veya 1000 uM, bu çözeltinin kadar hacmi, sıvı faz hacmine göre biyoreaktöre verilebilir bağlıdır.
3. , TCE için gaz kromatografisinde standart eğrileri hazırlayın -1,2-dikloroetilen, trans -1,2-dikloroetilen, vinil klorür ve eten sis. TCE stok çözeltisi için 5.2 tarif edilen aynı prosedürü takip ederek, cis bu bileşiklerin bir stok çözeltiden -1,2-dikloroetilen ve trans -1,2-dikloroetilen standart eğrileri hazırlayın. Standartlara (gaz silindirleri) her gaz konsantrasyonu sulandırarak vinil klorür ve eten standart eğrileri hazırlayın.
   1. 20 ila 300 uM aralığında bu bileşiklerin standart eğrileri hazırlayın. Guerrero-Barajas'ın ve arkadaşları tarafından bildirilen yöntem kullanınız. (2011), gaz kromatografisiyle bu bileşiklerin analizi için ^15.
      Dikkat: Bu standı hazırlayınard Bir fumehood çözümler ve eldiven ve gözlük kullanılmalıdır.
4. Herhangi bir günde, tek HRT döngüsü ve davranış adımı 2.4 sonra reaktör durdurmak. Aşama 2.4.3 için 10 g / L'lik bir konsantrasyon COD kullanın.
5. Biyoreaktör beslenir sonra, 5.2 hazırlanan bir stok çözeltiden biyoreaktör içinde sıvının doğrudan TCE ekleyin biyoreaktör sıvı faz içinde nihai konsantrasyonu 300 uM TCE olmalıdır. 12 saat için HRT olarak ayarlayın.
   1. Tek HRT döngüsünün sonunda KOİ, sülfat ve sülfür için sıvı (500 ila 1000 ul) ve davranış analizi örnek almak (3.1.1, 3.1.2 ve 3.1.3 numaralı adımları). Headspace (100 ul 250) örnekleri alın ve gaz kromatografisinde -1,2-dikloroetilen, trans -1,2-dikloroetilen, vinil klorür ve eten sis, TCE için analiz yapmak.
6. Adımı yineleyin 2.4. Aşama 2.4.3 için 10 g / L'lik bir konsantrasyon COD kullanın.
7. Biyoreaktör 9 üzerinde sunulur kadar herhangi bir TCE azaltma testi tekrarlamak etmeyinBiyoreaktörde kalan% 0 sülfat azalması ve daha az% 10 varyasyonu, hem de, sülfat redüksiyon ve sülfattır.
8. 5.4, ​​5.5 ve 5.6, iki ya da üç kat daha fazla tekrarlayın.
9. Sadece bir TCE azaltma testi bittikten sonra mikroorganizmaların tanımlanmasını yapmak için sediment örnekleri (0.5 gr) atın. 2 ya da 3 TCE azaltma testlerinden sonra yapın.

TCE Azaltma Deney sonrasında Etkinlik Testi azaltılması 6. Sülfat

1. 4. adımı yineleyin tamamen.

Mikroorganizmaların 7. Kimlik

1. Yaklaşık 0.5 g her çamur numuneleri almak ve standart metot ^{12'ye göre} RNA toplam çıkarma yapıyoruz.
2. (RT-PCR) amplifikasyonu bir adım ^12, polimeraz zincir reaksiyonu, ters transkripsiyon ile birlikte 16S rRNA geni yükseltin ve yürütmek.
3. Yükseltmek veya ilk yaklaşım olarak literatürde ¹¹ önerildiği olanları kullanmak için primerler tasarlayın. Amplif izleyinication Prosedür literatürde ¹² önerdi.
4. 16S rRNA kitaplıkları oluşturmak. PCR amplikonları, bir klonlama-kit ¹¹ kullanılarak klonlanabilir. Tipik haliyle, her plaka (bir PCR ürünü temsil eden her bir koloni) 10 koloni klonlanabilir. Literatürde ¹² önerilen prosedüre göre sıralama için plazmid DNA hazırlanması.
5. Fragmanlarının sıralama yürütün. Literatürde ¹² önerilen prosedüre göre daha önce tarif edilen PCR amplifikasyonu için bir protokol (aşama 7,4) ve bir klon PCR dış ürün yaklaşık 1400 bp yeniden yükseltmek. E. Rekombinant plazmid izole edin olarak E. coli kolonileri literatürde ¹² önerdi. M13 evrensel primerler ¹² ile sıralama için kısmi işlemi yapmak etmeyin.
6. Dizileri analiz yapmak. Clustal X kullanarak nükleotid dizileri hizalayın ve elle metin editörü ayarlayın. NCBI databas BLAST aramaları gerçekleştirmeke. (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/Blast.cgi) ^12.
7. Nükleotid dizisi üyelik numaralarını edinin. Karşılık gelen erişim numaraları (yani, JQ713915eJQ713925 amplikonlar gelen sekanslar için), ¹² altında, EMBL nükleotid dizisi veritabanı (Gen Bankası / EMBL / DDBJ) 'de tanımlanan klonlann nükleotid dizilerini bırakın.

Sonuçlar

Biyoreaktör içinde sülfat indirgenmesi tipik bir davranış, Şekil 5 'de gösterilmiştir. Bu işlem sülfat indirgenmesi ilk haftalarında yavaş olacak fark etmek önemlidir. Bununla birlikte yavaş zaman sülfat üzerinden% 90 tüketim aşı sülfat indirgen bakteriler zenginleştirilmiş nedenle sülfat azaltılması ve yeteneğine sahip mikrobik topluluk, gelişmekte olduğunu gösterir. Şekilde, farklı dönemlerde sülfat indirgeme zamanla hızını artırarak olduğunu göstermektedir. Başlangıçta, toplu sülfat 20 gün sonra kend...

Tartışma

Çevre biyoteknoloji sulfidogenesis birkaç uygulamaları, bakteri fermente atıksu arıtımında olduğu ile konsorsiyum sülfat indirgeyici bakterilerin metabolizmasının en çok kullanılan uygulamalardan biri vardır. UASB reaktörleri yüksek sülfat konsantrasyonları ile endüstriyel atıksu arıtma ana mühendislik yaklaşımları arasında yer almaktadır. Bu çalışmada, bir UASB reaktörünün deniz çökelleri gelen sulfidogenic çamurun elde etmek için bir protokol mevcut. Deniz çökelleri bir sulfidogenic çamur elde etmek için protokol çerç...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
trikloroetilen ve nbsp;	sigma Aldrich	251402
cis-1,2-diklorotetilen	sigma Aldrich
trans-1,2-dikloroetilen	sigma Aldrich	D-62209
vinil klorür scotty standart	supelco		1.000 ppm v/v nitrojen
eten scotty standart	supelco		%99 saflık
pompa	Masterflex		Model 7553-75
spektrofotometre	herhangi bir
mikrosantrifüj,	herhangi bir
gaz geçirmez şırınga	herhangi bir		100 ve 200 mikrolitre
UASB cam reaktör	herhangi bir		tasarım altında
gaz kromatografı	herhangi bir		FID dedektörü
kılcal kolon, SPB-624	supelco
pH metre	herhangi bir
viton boru,	Masterflex
bazal ortam reaktifleri	herhangi bir
eser metal reaktifi,	herhangi bir
vitamin çözeltisi reaktifi
sodyum sülfat	herhangi bir
uçucu yağ asidi	herhangi bir
KOİ belirleme kiti	HACH		aralığı 0-15.000 mg/L
TOPO-TA klonlama kiti pCR® 4.0	Invitrogen, US
S.N.A.P. TM Miniprep Kiti	Invitrogen, Birleşik Krallık
Pure link TM Hızlı Plazmid Miniprep kiti	Invitrogen