Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Bağırsak tarafından Lipit Transport Eğitim için Caco-2 hücreleri kullanarak

19.4K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/53086

⸱

20 Ağustos 2015

 , 
1Department of Pharmaceutical and Biomedical Sciences, College of Pharmacy, California Northstate University, 2Department of Biomedical Sciences, James H. Quillen College of Medicine, East Tennessee State University

Bu makalede

Özet

Caco-2 hücreleri, lipitlerin ve yağda çözünen ilaçların/vitaminlerin enterosit taşınmasını incelemek için in vitro bir model olarak hizmet edebilir. Geçirgen membran sistemi, apikal kısmı bazolateral bölmeden ayırırken, lentivirüs ekspresyon sistemi etkili bir gen aşırı ekspresyon yöntemi sunar. Lipoproteinlerin izolasyonu TEM ile doğrulanır.

Özet

Diyetle yağ emilimi ile ilgili çalışmalar genellikle lenf kanülü ile donatılmış bir hayvan modeli kullanılarak yapılır. Bu hayvan modeli, diyetle alınan yağ emiliminin in vivo modeli olarak yaygın olarak kabul edilse de, ilgili cerrahi teknikler zorlu ve pahalıdır. Hayvan modelinin genetik manipülasyonu da maliyetli ve zaman alıcıdır. Alternatif in vitro model tartışmasız daha uygun fiyatlı, zaman kazandıran ve daha az zorlayıcıdır. Daha da önemlisi, in vitro model, araştırmacıların enterositleri izole bir sistem olarak incelemelerine olanak tanıyarak tüm organizma modelinin doğasında bulunan karmaşıklığı azaltır. Bu makale, insan kolon karsinomu hücrelerinin (Caco-2), lipitlerin ve yağda çözünen ilaçların ve vitaminlerin enterosit taşınmasını incelemek için in vitro bir model olarak nasıl hizmet edebileceğini açıklamaktadır. Caco-2 hücrelerinin uygun bakımını ve lipit karışımlarının hazırlanmasını açıklar; Ve ayrıca geçirgen membran sistemini kullanmanın değerli seçeneğini tartışır. Diferansiye Caco-2 hücreleri polarize olduğundan, geçirgen membran sistemini kullanmanın temel avantajı, apikali bazolateral bölmeden ayırmasıdır. Sonuç olarak, lipit karışımı apikal bölmeye eklenebilirken, lipoproteinler bazolateral bölmeden toplanabilir. Ek olarak, lentivirüs ekspresyon sisteminin Caco-2 hücrelerinde gen ekspresyonunu yukarı regüle etmedeki etkinliği tartışılmıştır. Son olarak, bu makale, transmisyon elektron mikroskobu (TEM) ile bağırsak lipoproteinlerinin başarılı bir şekilde izole edilmesinin nasıl doğrulanacağını açıklamaktadır.

Giriş

4 - diyet yağ ve lipid içinde çözünür ilaçlar ve vitaminler intestinal çalışmaları lenf fistül MODEL 1 kullanılarak in vivo olarak gerçekleştirilebilir. Ancak, ilgili cerrahi teknikler sadece zor değil, aynı zamanda pahalı değil. In vivo kullanılabilmektedir dışkı analizi dayalı yaklaşımlar da, mide-barsak sisteminde 2,5 yüzdesi alımını belirlemek için temel olarak kullanılmaktadır. Bu yazıda anlatılan in vitro model daha düşük maliyetli olduğunu ve ilgili teknikler tartışmalı az zorlayıcı bulunmaktadır. Genetik modifikasyonlar çalışmaları da zaman alıcı, bu in vitro bir model kullanılarak gerçekleştirilmiştir zaman daha ekonomik ve daha az bulunmaktadır.

Enterositler tarafından alınır lipit çözünür malzeme lipoproteinler 6,7 içine paketlenmiş olduğundan, lipoproteinlerin üretmek için bu in vitro modelin etkinliği çok önemlidir. iki ana intestinal lipoproteinler kilomikronlar, çok düşük yoğunluklu lipoproteinler (VLDL) vardır. Lipidler mide-bağırsak lümeninde bol mevcut olduğunda çapı 80 nm ya da daha fazlası ile lipoproteinler olarak tanımlanan kilomikronlar, küçük bağırsak tarafından sıkı bir şekilde üretilir. Onlar büyük lipoproteinler olduğundan, şilomikronlar makul en verimli lipit taşıyıcıları vardır. Şilomikron 8 üretebilen bu in vitro modeli, diyet yağ emme, gut lipid çözünür vitamini emme ve oral lipofilik ilaç biyo-incelemek için kullanılabilir. lipoprotein fraksiyonuna lipid çözünür moleküller, vitaminler ya da ilaçların bulunması, ince bağırsakta kendi emilme bir göstergesidir. Daha önce ele alındığı gibi, bu model, oral lipofilik ilaç biyo-6 geliştirmek için de kullanılabilir.

Bu kağıt Caco-2 hücreleri geçirgen zar veya normal doku kültürü yemekleri, nasıl lipit mi muhafaza edilmelidir açıklanırLipoprotein üretimini stimüle etmek için soğutun lentivirüs sentezleme sisteminin etkin aşırı ekspresyonunu gerçekleştirmek için kullanılabilir nasıl hazırlanmalı ve izole lipoproteinler kadar analiz edilmelidir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

CACO-2 hücrelerinin 1. Bakım

  1. Düzenli doku kültürü yemekleri kullanma
    1. (FBS, 37 ° C su banyosu içinde şişe yerleştirerek bir dondurulmuş şişesinden alınan Caco-2 hücreleri çözülme ve hemen önceden ısıtılmış büyüme ortamı (% 15 fetal bovin serumu, 10 ml içeren 10 cm'lik bir doku kültürü kabı eklemek ) Dulbecco Modifiye Edilmiş Eagle Ortamı (DMEM)) 'de.
      1. Caco-2 hücreleri% 50-70 kaynaşmaya ulaştığı zaman, onları 1 bölünmüş: müstakil kadar 37 ° C'de% 0.05 tripsin / 0.53 mM etilendiamintetraasetik asit (EDTA), 3 ml ile hücrelerin inkübe edilmesi ile 6 (15 dk) . Hücre topaklaşmayı önlemek yumuşak pipetleme hücreler karıştırmak için birkaç kez. Önceden ısıtılmış büyüme ortamı 10 ml içeren 10 cm'lik bir doku kültürü kabı tripsinize edilmiş hücre 0.5 ml ilave edilir.
    2. Yavaşça bir sola ve sağa yön ardından ileri ve geri yönde yemeklere birkaç kez sallayın. Yemekler dönen kaçınıngibi eşit olmayan bir hücre dispersiyonu ile sonuçlanabilir.
    3. % 5 CO 2 ile birlikte 37 ° C inkübatör düz bir yüzeye yerleştirin yemekleri. Eğimli yüzeyler de eşit olmayan bir hücre dispersiyonu ile sonuçlanabilir.
    4. Inkübasyon başladıktan sonra büyüme Ortam bir gün değiştirin.
    5. Hücreleri izlemek ve izdiham ulaşmak günü kaydedin. Hücreler bölünür günden itibaren izdiham ulaşmak için yaklaşık 1 hafta sürer.
    6. Hücreler izdiham ulaşmadan haftada iki kez büyüme ortamı değiştirin. Hücreler izdiham ulaştığınızda, her gün büyüme ortamı değiştirmek. Hücreler 7-günler sonrası konfluent olduktan sonra, günlük büyüme ortamı değiştirmek.
      Not: 13-günler sonrası konfluent (Şekil 1) olduğunda hücreler deneyler için hazırız. Hücreler sonunda lipoproteinlerin üreten daha az etkili hale gelecektir yana, 8 sonrası birleşik 13-17-gün arasında olan hücreleri kullanır. Deney yapmak için nasıl adım 3'e gidin.
  2. Geçirgen zar sistemi kullanılarak
    1. Aşama 1.1.1.1 tarif edildiği gibi geçirgen zar ekinde Caco-2 hücreleri, tohum. Yukarıda. Onların hücre büyümesi (iyileşme dönemi) normalde yavaş çünkü dondurulmuş şişesinden alınan hücreler kullanılarak kaçının. Kısaca, önceden ısıtılmış büyüme ortamı 10 ml içeren apikal (üst bölmesi) tripsinize edilmiş hücre 0.5 ml ilave ediniz. Ayrıca, bazolateral bölme (alt bölmesi) önceden ısıtılmış büyüme ortamı 10 ml.
      Not: En iyi uygulama için, bazolateral odasına ilk ve daha sonra apikal odasına büyüme ortamı ekleyin. Eski medya çıkartırken, apikal medya önünde bazolateral ortamı çıkarın. Bu membran rüptürü olabilir polikarbonat membran alay kaçının.
    2. Nedeniyle polikarbonat zardan kötü hücre görünürlüğe, benzer yoğunlukta düzenli bir doku kültürü çanak Caco-2 hücreleri tohum ve hücre izdiham yargılamak için bu yemeğin kullanın.
    3. S izleyinTeps'in 1.1.2-1.1.6, yukarıda.

2. Gene overekspresyonu

  1. Normal transfeksiyon yaklaşımı kullanarak
    1. Yukarıda 1.1.1.1.-1.1.4 de tarif edildiği gibi bir doku kültürü tabağına Caco-2 hücreleri, tohum.
      Not: hücreler yaklaşık% 40-50 konfluent olduğunda, transfekte hazırdır.
    2. Mikrosantrifüj tüpü içinde düşük serum ortamında 472 ul transfeksiyon reaktifi 67 ul ekle. Tüp duvar ile sulandırılmamış transfeksiyon reaktif temasından kaçının.
    3. PLL3.7 23 ug transfeksiyon reaktifi / düşük serum ortamında karışımına, yeşil flüoresan protein (EGFP) 9 Geliştirilmiş ekleyin.
    4. Oda sıcaklığında 20 dakika süreyle inkübe karışımı.
    5. DMEM içinde% 10 FBS 8 ml Caco-2 hücreleri, büyüme ortamı değiştirin.
    6. Damla damla çanak DNA / transfeksiyon reaktif / azaltılmış serum medya karışımı ekleyin.
    7. Yavaşça ileri ve ba yemekleri birkaç kez sallayınBir sola ve sağa yönde takip ckward yön.
    8. 37 ° C inkübatör çanak yerleştirin.
    9. Kuluçka başladıktan sonra büyüme ortamı 10 ml her gün bir çanak ortamı değiştirin.
    10. Gen ifadesini izleyin.
      1. 4 ', 6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) ile boyanmamış olan gen ekspresyonunu izlemek. Floresan mikroskobu kullanılarak, yeşil hücrelerin yüzde belirler. yüzde transfeksiyon verimini gösterir.
      2. DAPI boyama ile gen ifadesini izleyin.
        1. Fosfat tamponlu salin (PBS) ile üç kez hücreler yıkanır.
        2. PBS (oda sıcaklığında 10 dakika inkübasyon) içinde% 4 formaldehit, 10 ml ekleyerek hücreleri saptamak.
        3. PBS üç kez hücreleri yıkayın.
        4. 500 DAPI,% 1 BSA,% 0.01 digitonin: 1 içeren PBS 8 ml ile oda sıcaklığında 15 dakika süreyle karanlıkta inkübe hücreleri.
        5. PBS üç kez hücreleri yıkayın.
        6. U, bir flüoresan mikroskop şarkı, mavi (Şekil 2 üst panel) ki bu yeşil / mavi göreli hücre sayısını belirler. hesaplanan yüzde transfeksiyon verimini gösterir.
  2. Lentivirüs aşırı sistemi 10 kullanılarak
    1. 15 cm'lik bir doku kültürü çanağı içinde Tohum, insan embriyonik böbrek (HEK) 293T hücreleri (DMEM içinde% 10 FBS büyüme ortamı olarak).
      Not: hücreler yaklaşık% 60-70 konfluent olduğunda, transfekte hazırdır.
    2. Mikrosantrifüj tüpü 11 düşük serum ortamı 1133 ul transfeksiyon reaktifi 162 ul ekle. Tüp duvar ile sulandırılmamış transfeksiyon reaktif temasından kaçının.
    3. Ekle 24 pLL3.7 eGFP (ya da başka bir yapı) ug, 15.6 REV karşılık elemanının ug (RRE), REV 6.0 ug, ve transfeksiyon reaktifi / r içine veziküler stomatit virüsü glikoprotein 8.4 ug (VSVG)educed serum ortamında karışımı ile gerçekleştirilmektedir.
    4. Oda sıcaklığında 20 dakika süreyle inkübe karışımı.
    5. DMEM içinde% 10 FBS ve 16 ml büyüme ortamı değiştirin.
    6. Damla damla çanak DNA / transfeksiyon reaktif / azaltılmış serum medya karışımı ekleyin.
    7. Yavaşça bir sola ve sağa yön ardından ileri ve geri yönde yemeklere birkaç kez sallayın. Bu noktada müstakil HEK293T hücrelerinin bazılarını görmek için normaldir.
    8. Inkübatör çanak yerleştirin.
    9. Kuluçkalamadan 24 saat sonra, büyüme ortamı, 25 ml çanak ortamı değiştirin.
    10. Ertesi gün, lentivirüs (birinci toplama) içeren büyüme ortamı toplar.
    11. Adımı yineleyin 2.2.10 fazla lentivirüs (ikinci toplama) toplamak için.
    12. (5 dakika boyunca 2.500 xg) birinci ve ikinci toplama havuzu ve santrifüj hücre enkaz kaldırmak.
    13. Tek kullanımlık şişe üstü filtre (0.45 mikron gözenek) ile toplama Filtre veRT (JA-20 rotor) 2 saat süre ile 31.400 x g'de santrifüje toplama virüsü konsantre edilir. Pelet bulunduğu santrifüj tüpünün dibine işaretleyin. Süpernatant tortusundan ayırma, ve yaklaşık 15 dakika boyunca oda sıcaklığında ters tüpü terk.
    14. 1X PBS, 100 ul virüs içeren pelletini. Kabarcıkları kaçının.
    15. -80 ° C 'de konsantre edilir virüs saklayın. Donma-çözülme döngüleri kaçının.
    16. Titrasyon ile, Caco-2 hücreleri nakletmek için gerekli virüs optimal miktarının belirlenmesi. Maliyet tasarrufu için, 24-çukurlu plaka (iyi büyüme ortamı / 0.3 ml) kullanılarak titrasyonu için 10 cm'lik bir doku kültürü çanağı kullanın.
      1. Konsantre edilmiş virüs artan miktarlarda ekleyin (0, 1, 2, 5, 10, 25, ve 50 ul / kuyucuk)% 40-70 konfluent Caco-2 hücreleri için polibren (nihai konsantrasyon = 5 ug / ml) ile takviye edilmiştir. 1.1.2 tarif edildiği gibi hafifçe 24 oyuklu plaka çalkalayın.
      2. Onların gen ifadesini Monitör (Adım 2.1.10.) (Şekil 2 alt4 paneller).
    17. Transgen ifadesi genellikle sürekli olduğundan, gelecek deneyler için transdüse hücreleri korumak ve sürekli olarak gen ifadesini izlemek (Adım 2.1.10.).

3. Lipoprotein salgılanmasını uyararak

  1. Düzenli doku kültürü çanak kullanma
    1. Oleik asit, 50 mg, lesitin, 40 mg, ve sodyum taurokolat ve 48 mg karıştırılarak bir 100X yağ karışım hazırlayın. (8 yemekler için yeterli) PBS ile 900 ul hacim kazandırın. Kuvvetli bir şekilde lipit karışımı karıştırın.
    2. Büyüme ortamı 89.1 ml 100X lipit karışımı 900 ul ekleyin. Mix ve lipid içeren medya filtre. oleik asit, lesitin, ve sodyum taurokolat ve nihai konsantrasyonlar (1X) 2.0 mM, 1.36 mM ve sırası ile 1.0 mM vardır.
    3. Hücrelere lipid içeren ortam, 10 ml ilave edilir.
    4. 37 4 saat boyunca lipit-içeren ortam ile inkübe hücreleriC inkübatör °.
    5. PBS üç kez hücreleri yıkayın.
    6. Lipoprotein salgılanmasını toplamak için hücrelerin büyüme ortamı 10 ml ilave edilir.
    7. 37 ° C kuluçka makinesi içinde 2 saat süreyle inkübe edin.
    8. Lipoprotein içeren medya toplayın.
  2. Geçirgen zar sistemi kullanılarak
    1. Adımları 3.1.1-3.1.2 lipit karışımı hazırlamak için.
    2. Apikal bölmeye lipid içeren ortam 10 ml ve bazolateral bölmeye büyüme ortamı 10 ml ilave edilir.
    3. 37 ° C kuluçka makinesi içinde 4 saat süreyle inkübe edin. Bazolateral bölme lipoprotein ihtiva eden ortam toplayın.

4. lipoprotein İzolasyon (Şekil 3)

  1. Santrifüj (5 dakika boyunca 2.000 xg) lipoprotein içeren medyanın hücre enkaz kaldırmak.
  2. 50 ml'lik bir tüp içine ortamı süzün.
  3. Ortam, sodyum klorür 5.95 g ekleyin.
  4. Sa Eğermple TEM ile analiz edilecektir, lipoproteinlerin bütünlüğünü korumak için 1 proteaz önleyici kokteyl tablet ekleyin.
  5. Su ile 23 ml hacmi (1.2 g / ml NaCI yoğunluk çözeltisi) getirin.
  6. Tamamen çözünmüş çözülür.
  7. Polikarbonat ultrasantrifüjdeki tüp içine çözeltinin Tümünü süzün.
  8. Yavaşça, 0.5 ml, su (1.0 ug / ml yoğunlukta), 1.2 ug / ml yoğunlukta çözelti kaplar.
  9. Hacimce ağırlıkça değil tüp dengeleyin.
  10. Yavaşça T865 rotor tüpler yükleyin.
  11. 4 ° C'de 24 saat boyunca 429.460 x g'de ultrasantrifüjdeki örnekleri dönerler.
  12. Hemen Nazik pipetleme üst 0.5 ml solüsyon izole. Mümkün olduğunca hareketsiz tüp tutun.

5. TEM analizi

  1. (A / h) ile pH 6,0'a ayarlanır% 2 fosfotungstik asit 5 ml hazırlayın.
  2. (: 0.2 mikron gözenek boyutu) bir şırınga filtresi ile% 2 fosfotungstik asit Filtre.
  3. Steril bir çanak lipoprotein numunenin 20 ul bırakın.
  4. Bir sonraki aynı yemeğin üzerine örnek süzülmüş% 2 fosfotungstik asit 20 ul bırakın.
  5. Yavaşça donuk yan numune üzerinde oturan bir EM ızgara bırakın.
  6. 1 dakika süre ile, oda sıcaklığında inkübe edilir.
  7. Yavaşça ızgara örneği kaldırmak için bir filtre kağıdına EM ızgara tarafı dokunun.
  8. Yavaşça donuk tarafı% 2 fosfotungstik asit dayayarak EM ızgara bırakın.
  9. 1 dakika süre ile, oda sıcaklığında inkübe edilir.
  10. Yavaşça ızgara fosfotungstik asit ayrılması için bir filtre kağıdı üzerinde EM ızgara yan dokunun.
  11. Bir TEM kullanarak, lipoproteinler (Şekil 4) görüntüleri yakalamak.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

1 görüntüler, normal 13-gün sonrası birleşik Caco-2 hücreleri Şekil. Kubbe-şekilli yapılar ve hücre içi lipid damlacıkları görünümü farklılaşmış Caco-2 hücreleri için karakteristiktir. Caco-2 hücreleri tohumlama sırasında eşit dağılmış değil, onlar kümelenir ve yemeğin belirli alanlarda sarmak olacaktır; ve herhangi bir hücrelerde olmadan çanak birkaç alanları olacaktır. Swirling ve eğimli bir yüzeye çanak yerleştirilmesi kaçınılmalıdır. Bu post-birleşik Caco-2 hücreleri yeni büyüme ort...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu yazıda, kullanılabilecek iki sistem Caco-2 hücreleri, yani düzenli doku kültürü çanak ve geçirgen zar açıklanmıştır korumak için. geçirgen zar sistemi kullanmanın faydaları apikal ayrılmasını ve bazolateral bölmeleri ve lipid karışımı inkübe ve aynı zamanda lipoprotein salgılanmasını toplamak için yeteneği vardır. Ancak, geçirgen zar ekler pahalıdır, ve polikarbonat membran iyi bir hücre görünürlüğü izin vermez. Bu in vitro modelin avantajlarından biri genetik manipülasyon çalışmaları daha ekonomik ve daha a...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarın açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

Bu çalışma, California Northstate Üniversitesi Eczacılık Fakültesi'nden (AMN'ye) Tohum Hibe Ödülü tarafından desteklenmiştir. Yazarlar, bu makalenin yayın maliyetini karşıladığı için California Northstate Üniversitesi Eczacılık Fakültesi'ne ve bu makalenin düzenlenmesindeki yardımları için George Talbott'a teşekkür eder.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
DMEMVWR16750-112Hücre eklemeden önce büyüme ortamını ayrı doku kültürü kabında önceden ısıtın
FBSFisher3600511Serumumuzu ısıtmıyoruz
VWR45000-660Hücreler tripsin tedavisinden önce PBS ile yıkanabilir 
Geçirgen membran sistemiFisher720017310 cm çanak, 3 mm gözenek boyutu, polikarbonat membran
10 cm çanakFisher08-772-EDoku kültürü kabı
15 cm tabakFisher08-772-24Doku kültürü kabı
24 oyuklu plakaFisher12565163Doku kültürü plakası
Lipid bazlı transfeksiyon reaktifiFisherPRE2691Diğer transfeksiyon reaktifi ile ikame edilebilir
Azaltılmış serum ortamıInvitrogen11058021Transfeksiyon
için pLL3.7 eGFPAddgene11795https://www.addgene.org/11795/
Şişe üstü filtreFisher97611200,45 mm gözenekli
PolybreneFisherNC984045410 mg / ml
Oleik asitSigma01383-5GDonma-çözülme döngüsünü önleyin
Lesitin FisherIC10214625Yumurta lesitini 
Sodyum taurokolatFisherNC9620276Ürün durduruldu; Alternatif katalog numarası: 50-121-7956
Proteaz inhibitörü kokteyl tableti (EDTA içermez)Fisher5892791001Esas olarak TEM analizine ihtiyaç duyan numuneler için kullanılır
Polikarbonat ultrasantrifüj tüpüFisherNC9696153Birden çok kez yeniden kullanmak tüpü çökertecektir
Ultrasantrifüj tüpü kapağıFisherNC9796914Tüpü/kapağı rotordan çıkarmak için bir alet gereklidir
ŞırıngaFisher50-949-261Tek Kullanımlık
Şırınga filtresiFisher09-719CGözenek boyutu = 0,2 mm; naylon
Fosfotungstik asitFisherAC208310250% 2 fosfotungstik asit hazırlamak için, pH 6.0
CımbızFisher50-238-62Ekstra ince ve güçlü ipuçları
Formvar/karbon ızgaraFisher50-260-34Formvar/karbon film kare ızgara 400 Bakır

Kaynaklar

  1. Drover, V. A., et al. CD36 deficiency impairs intestinal lipid secretion and clearance of chylomicrons from the blood. J Clin Invest. 115 (5), 1290-1297 (2005).
  2. Nauli, A. M., et al. CD36 is important for chylomicron formation and secretion and may mediate cholesterol uptake in the proximal intestine. Gastroenterology. 131 (4), 1197-1207 (2006).
  3. Nauli, A. M., Zheng, S., Yang, Q., Li, R., Jandacek, R., Tso, P. Intestinal alkaline phosphatase release is not associated with chylomicron formation. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 284 (4), G583-G587 (2003).
  4. Lo, C. -M., et al. Why does the gut choose apolipoprotein B48 but not B100 for chylomicron formation. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 294 (1), G344-G352 (2008).
  5. Jandacek, R. J., Heubi, J. E., Tso, P. A novel, noninvasive method for the measurement of intestinal fat absorption. Gastroenterology. 127 (1), 139-144 (2004).
  6. Nauli, A. M., Nauli, S. M. Intestinal transport as a potential determinant of drug bioavailability. Curr Clin Pharmacol. 8 (3), 247-255 (2013).
  7. Tso, P., Nauli, A., Lo, C. M. Enterocyte fatty acid uptake and intestinal fatty acid-binding protein. Biochem Soc Trans. 32 (Pt 1), 75-78 (2004).
  8. Nauli, A. M., Sun, Y., Whittimore, J. D., Atyia, S., Krishnaswamy, G., Nauli, S. M. Chylomicrons produced by Caco-2 cells contained ApoB-48 with diameter of 80-200 nm. Physiol Rep. 2 (6), (2014).
  9. Rubinson, D. A., et al. A lentivirus-based system to functionally silence genes in primary mammalian cells, stem cells and transgenic mice by RNA interference. Nat Genet. 33 (3), 401-406 (2003).
  10. Li, M., Husic, N., Lin, Y., Snider, B. J. Production of lentiviral vectors for transducing cells from the central nervous system. J Vis Exp. (63), e4031(2012).
  11. Pottekat, A., et al. Insulin biosynthetic interaction network component, TMEM24, facilitates insulin reserve pool release. Cell Rep. 4 (5), 921-930 (2013).
  12. Van Greevenbroek, M. M., van Meer, G., Erkelens, D. W. Effects of saturated, mono-, and polyunsaturated fatty acids on the secretion of apo B containing lipoproteins by Caco-2 cells. Atherosclerosis. 21 (1), 139-150 (1996).
  13. Levy, E., Yotov, W., Seidman, E. G., Garofalo, C., Delvin, E., Ménard, D. Caco-2 cells and human fetal colon: a comparative analysis of their lipid transport. Biochim Biophys Acta. 1439 (3), 353-362 (1999).
  14. Luchoomun, J., Hussain, M. M. Assembly and secretion of chylomicrons by differentiated Caco-2 cells. Nascent triglycerides and preformed phospholipids are preferentially used for lipoprotein assembly. J Biol Chem. 274 (28), 19565-19572 (1999).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Ge irgen Membran SistemiSodyum Klor r Yo unluk Gradyanli Ultrasantrif jlemeTransmisyon Elektron MikroskobisiLipoprotein Salg lanmasKilomikron AnaliziLentiviral Ekspresyon Sistemintestinal Lipoprotein zolasyonuLipid Kar m Haz rlama
Bağırsak tarafından Lipit Transport Eğitim için Caco-2 hücreleri kullanarak
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.