Burada, kantitatif gerçek zamanlı PCR (RT-PCR) ve yerinde hibridizasyon (ISH) kullanan arşivlenmiş Formalin-Sabit, Parafine Gömülü (FFPE) veya taze dondurulmuş prostat kanseri (PCa) klinik dokularında mikroRNA (miRNA) ekspresyon analizleri için basitleştirilmiş bir protokolü açıklıyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Prostat Kanseri Klinik Dokularındaki miRNA İfade Analizleri
Bu makalede
Özet
Özet
Prostat kanseri (PCa) klinik yönetiminde kritik bir meydan okuma hastalığı taraması, tanısı, prognozu ve tedavisi için günümüzde kullanılan biyolojik belirteçlerin yetersizliği ile ortaya atılır. Son yıllarda, mikroRNAlar (miRNA'lar) prostat kanseri tanı ve prognoz gibi umut verici alternatif biyomarkerları ortaya çıkmıştır. Ancak, prostat kanseri için etkili biyomarkırların olarak miRNA'lar gelişimi ağır klinik dokularda onların doğru algılama dayanır. miRNA genellikle tümör heterojenite, örnekleme hataları, stromal kirlenme vb miRNA bir arada kullanarak arşivlenmiş FFPE veya taze donmuş prostat kanseri, klinik örneklerin analizleri için bu makalenin amacı basitleştirilmiş iş akışı tanımlamaktır nedeniyle zorlu prostat kanseri klinik örneklerin analizleri kantitatif gerçek zamanlı PCR (RT-PCR) ve in situ hibridizasyon (ISH). Bu iş akışı içinde, biz FFPE gelen miRNA çıkarılması için mevcut metodolojiler ve dondurulmuş prostat tissu optimizees ve ifade miRNA RT-PCR tabanlı Taqman-prob ile analiz eder. Dayanan problar - Ayrıca, ISH için optimize edilmiş bir yöntem, kilitli nükleik asit (LNA) kullanılarak prostat dokularında formiRNA algılama analiz tarif eder. Bizim optimize miRNA ISH protokol prostat kanseri dokusu slaytlar veya prostat kanseri dokusu mikrodizileri (TMA) tatbik edilebilir.
Giriş
Prostat bezi kanseri erkekler arasında kanserle ilişkili ölümlerin önde gelen nedenlerinden biri olan yaygın tanı erkek kanseridir. ABD'de, bir 220.800 yeni vaka tahmin ve 27540 ölüm 2015 1 rapor edilecektir.
Prostat kanseri tümörleri tembel ya da çok agresif olabilir ders-derece değişken hastalığı olan heterojen bir hastalıktır. Prostat kanseri, klinik yönetiminde kritik bir meydan okuma hastalığı taraması, tanısı, prognozu ve tedavisi 2 şu anda kullanılan yöntemler / biyomarkerların yetersizliği ile ortaya atılır. Güncel tarama yöntemleri prostat spesifik antijen (PSA) testi ve prostat biyopsisi 3 ta....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Formalin ile sabitlenmiş, parafine gömülmüş (FFPE) ya da dondurulmuş, prostat kanseri örnekleri SFVAMC elde edildi. Numuneler SFVAMC radikal prostatektomi uygulanan prostat kanserli hastaların idi. Yazılı bilgilendirilmiş onam tüm hastalar alındı ve çalışma İnsan Araştırmaları UCSF Komitesi tarafından onaylandı. Seçenek olarak ise, prostat kanseri doku mikrodizileri, ticari kaynaklardan temin edilerek MiRNA ISH ile analizler için kullanılmıştır. Analiz prostat kanseri hastaları için Klinikopatolojik ve takip bilgileri toplanmıştır.
1. Doku numuneleri
- H & E, üreticinin protokolü aşağıdaki bir mikrotom ve leke kullanılarak 10 u....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
RT-PCR ile LCM birincil prostat kanseri, klinik örneklerde miR-203 İfade profil analizleri (Şekil 1)
RT-PCR LCM primer prostat kanseri dokularında göre miR-203 ekspresyonunun analiz eder ve bir kontrol olarak kullanılmıştır Saini ve ark., 15 RNU48 tarif edildiği gibi eşleştirilir, bitişik normal bölgeler gerçekleştirilmiştir. Aşağıdaki tablo, komşu normal dokulara göre prostat kanseri tümör dokularında göre miR-203 ekspresyonunu özetlemektedir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu yazıda, arşivlenmiş FFPE veya taze donmuş prostat kanseri, klinik dokularda profilleme miRNA ifade basitleştirilmiş iş akışını açıklar. Prostat kanserinde, çeşitli çalışmalar prostat kanseri başlatılması, ilerlemesinde ve metastazında microRNA önemli bir rol oynadığını düşündürmektedir. Ancak, çelişkili sonuçlar genellikle miRNA çıkarma beri belirli bir miRNA 22 üzerinde elde edilen ve yöntemler çok farklıdır analizlerin. Prostat kanseri prognoz, teşhis ve tedavi için alternatif bir prostat kanseri biyobel.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların herhangi bir mali açıklaması bulunmamaktadır.
Teşekkürler
Biz yazının hazırlanması ile yaptığı destek ve yardım için Dr. Roger Erickson teşekkür ederim.
Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri, Ulusal Kanser Enstitüsü tarafından desteklenen
(Hibe Numarası RO1CA177984, RO1CA138642), prostat kanseri (BX001604) VA programı projesi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Mikrotom | Leica Biyosistemleri | RM2255 | |
| Arcturus Autopix | LCM1621/LCM1110 | Alternatif olarak, Life Technolgies'ten Arcutus Xt sistemi kullanılabilir. | |
| CapSure Makro LCM Kapakları | Yaşam Teknolojileri | LCM0211 | |
| miRNeasy FFPE Kiti | Qiagen | 217504 | |
| 7500 Hızlı Gerçek Zamanlı PCR Sistemi | Uygulamalı Biyosistemler/ Yaşam Teknolojileri | 4351106 | |
| Taqman MicroRNA Ters Transkripsiyon kiti | Uygulamalı Biyosistemler/ Yaşam Teknolojileri | 4366596 | |
| Taqman Fast Universal PCR master mix | Uygulamalı Biyosistemler/ Yaşam Teknolojileri | 4352042 | |
| Exiqon | 99002-01 | için DIG etiketli LNA probu | |
| Roche | 11442074001 | ||
| Ön hibridizasyon çözümü | Biochain | K2191050-1 | |
| Hibridizasyon çözümü | Biochain | K2191050-2 | |
| Engelleme çözümü | Biochain | K2191050-8 | |
| AP konjuge anti-digoksigenin antikoru | Biochain | K2191050-7 | |
| Sulu montaj ortamı | Vektör Laboratuvarları | H-5501 ve nbsp; | |
| Trizol (guanidin izotiyosiyanat-fenol reaktifi) | Life Technologies | 15596-018 | |
| Harris hematoksilen | Statlab | SL200 | |
| Eozin | Statlab | SL201 |
Kaynaklar
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics. CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).
- Shen, M. M., Abate-Shen, C. Molecular genetics of prostate cancer: new prospects for old challenges. Genes Dev. 24 (18), 1967-2000 (2010).
- Sequeiros, T., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
