Bu el yazması, trigeminal nöropatik ağrıyı incelemek için bir kemirgen modelini tanımlamaktadır. Açıklanan yöntemler, sıçanın infraorbital sinirinin kronik daralma yaralanmasını gerçekleştirmek için cerrahi prosedürleri ve kalıcı ağrı ve allodinin göstergesi olan spontan ve uyarılmış davranıştaki değişiklikleri ölçmek için cerrahi sonrası davranış testlerini içerir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Trigeminal Nöropatik Ağrı Eğitim için Rat adlı infraorbital Sinir (ION-CCI) kronik Daralma Yaralanma
Bu makalede
Özet
Özet
Hayvan modelleri nöropatik ağrının patofizyolojisi ve farmakoloji incelemek için önemli araçlardır. Bu el yazması sıçanlarda trigeminal nöropatik ağrı incelemek için cerrahi ve davranışsal prosedürleri açıklar. Trigeminal nöropatik ağrı sendromları özgünlüğünü karşılamak için, infraorbital sinir (ION) gevşek sinir bağlanarak kronik daralma yaralanma (CCI) tabi tutulur. Içi orbital yaklaşım ortaya çıkarmak ve orbita boşluğuna iyon bağlanması için sunulmuştur. ION Ligasyondan sonra, sıçanlar kendiliğinden davranışının ve kalıcı ağrı ve mekanik alodinya göstergesidir Frey saç uyarılmasına tepki olarak değişiklik gösterir. İki faz davranış değişiklikleri gelişiminde tanımlanabilir. Yüz yıkama, öncelikle sinir yaralı iyon topraklarına yönelik vuruş ile iyon-CCI (faz 1) takip eden ilk haftasında, sıçanlar, yani bir artış ve asimetrik yüz bakım aktivite gösterirler. Bir ayrım yüz gr arasında yapılırİyon-CCI büyük ölçüde etkilenmez daha genel bir vücut bakım davranışı, bir parçası olan davranışları ooming ve yüz o öncesinde ne ölçüde iyon-CCI sonra artmıştır vücut damat, izler ne tımar. Bu dönemde, iyon topraklarının mekanik uyarıya yanıt azalır. Bu cevapsız bir ruhsal duruma aniden bile çok zayıf uyaran yoğunlukları nocifensive davranışı (faz 2) kışkırtmak sayede aşırı aşırı duyarlılığı ile değiştirilir. Bu davranış değişiklikler ve yüz ağrısı belirtileri bildirdi arasındaki benzerlikler fenomenolojik (yani, yüzün zararlı uyarısına yanıt) bağlandı iyon topraklarında disestezidir / parestezi ve mekanik allodininin varlığını düşündürmektedir.
Giriş
Somatosensori sinirlerin hasar çoğunlukla duyu kaybına yol açar. Çok iyi anlaşılmış neden ve nasıl, bazı durumlarda, periferik sinir hasarı, kronik ağrıya yol açar değildir. Sonuç olarak, ağrılı nöropatiler 1 tedavi ve yaşam 2-3 hastaların kalitesinde önemli azalmalar neden zor bir durum kalır. Hayvan modelleri önemli bir araç mevcut ve yeni geliştirilen ilaçların etkinliğini incelemek ve nöropatik ağrının geliştirme ve bakım katılan patofizyolojik mekanizmaları belirlemek için vardır. Translasyonel ağrı araştırmaları için önemli zorluklar arasında belirlenmesi ve (hayvanlarda spontan ağrı ölçüm, yani fizyolojik, akut kişinin bazal durumuna bindirilmiş uyarılmalara prob ile meydan edilmemesi hayvanlarda ağrı varlığına işaret davranışsal ya da diğer belirtiler ). Bu prosedürün genel amacı cerrahi bir neden olduğunuHer iki spontan gelişimine yol açar ve trigeminal nöropatik ağrı ve tedavisi ile ilgilenen mekanizmaları incelemek için kullanılabileceğini nocifensive davranış uyarılmış bir sıçan infraorbital sinir yaralanması.
Yönetmen, izole yüz tımar sıçanlarda spontan nöropatik ağrının eşsiz bir ölçüsüdür. Infraorbital sinir kronik sıkışma yaralanması (CCI) (ION) ardından sıçanlar, kendiliğinden davranışının ve kalıcı ağrı ve mekanik alodinya 4 göstergesidir dokunma uyarısına tepki olarak değişiklik gösterir. Yüz yıkama, öncelikle sinir yaralı iyon topraklarına yönelik vuruş ile iyon-CCI ardından sıçanlar, yani bir artış ve asimetrik yüz bakım aktivite gösterirler. Yüzün zararlı stimülasyon (örn formalin enjeksiyonu) 5 aksine, olmayan ağrılı duyu bozuklukları (örneğin, tek taraflı burun kılı kırpma, anestezik infraorbital sinir blokajı, VIBRI üzerinde mineral yağ uygulamasıSSAE) değil ya da çok kısa bir süre (örneğin, başlangıcından sonra ilk dakika) davranışı 6 damat karşısında önemli bir değişiklik neden yaptım. Bu iyon-CCI sonra bu anormal tımar yaralı sinir topraklarında kendiliğinden, güçlü caydırıcı duyumları bir davranış tezahürü olduğu sonucuna varılmıştır. İyon-CCI sıçanlarda Bu davranış hastalarında gözlenen spontan ağrı güçlü bir benzerlik taşımaktadır. Daha ileri çalışmalara daha genel bir vücut bakım davranışlarının bir parçası olan yüz damat davranış arasında önemli bir fark tespit ettik (yani, "damat vücudun sırasında yüz tımar"), iyon-CCI büyük ölçüde etkilenmez kalır ve nocifensive yüz damat o ne öncesinde ne ölçüde iyon-CCI 7-9 sonra artar, (yani, "izole yüz damat") damat vücut tarafından izledi. Farmakolojik, vücut tımar sırasında yüz tımar non-spesifik ilaç etkileri için mükemmel bir kontrol ölçümü (oluşturmaktadır Motor fonksiyonlarını bozabilir örneğin, sedasyon). Yüz damat iki tip sırasında ön ayakları hareketleri tam olarak aynıdır.
İyon CCI sıçanlarında da mekanik alodini 4, 10 göstergesidir dokunma uyarısına tepki olarak değişiklik gösteren et. İyon CCI sonraki ilk hafta (ler) boyunca fareler artık hafif veya orta derecede dokunsal (örneğin, von Frey yanıt ) uyaranlara. Bu cevapsız bir ruhsal duruma sonra aniden bile çok zayıf uyaran yoğunlukları nocifensive davranışı kışkırtmak sayede aşırı aşırı duyarlılığı ile değiştirilir. Aşırı duyarlılığı başlangıcı sıçanlar arasında değişebilir, ancak en sıçanlar, üç ila dört hafta sonra, ameliyat sonrası hyperresponsive hale gelmiştir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Etik bildirimi: Hayvanlar tedavi Araştırma ve IASP 11 Etik Sorunlar Komitesi yönergelere göre bakılmaktadır. Protokol, kurumsal Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır.
1. Başlık
- Erkek Sprague-Dawley sıçanları (varış 250-300 gr) kullanın.
- % 40-60 bir nem ve 21 ± 1 ° C bir RT ile koloni odasında katı dipli kafeslerde Ev fareler.
- Libitum su ve yiyecek temin edin.
- Bir ters 00:12 saat aydınlık / karanlık döngüsü altında fareler tutun (20 saat ışıklar).
2. Cerrahi
- Sıçan başına, uzun yaklaşık 6 cm kromik bağırsak ligasyonu (5-0) iki adet hazırlayıp kurutma ve sert ve kırılgan olma önlemek için steril serum fizyolojik koyun.
- Pentobarbital ile hayvan (60 mg / kg, ip) anestezi ve atropin (0.1 mg / kg, ip) ile tedavi edilir. Bir bacak ve Pinchi uzatarak anestezi düzeyini izlemekbir tırnak ile ayak parmakları arasında cilt web ng yeterli basınç uygulandığında sağlamak. Hayvan onun uzuv esnek olmadığından emin olun. Gerekirse, ek pentobarbital yönetmek.
- Bir orta hat kafa derisi insizyon gözün merkezine eşit uzaklıktadır anterior ve posterior ile yaklaşık 25 mm arasında yapılabilir, böylece sıçan tıraş.
- Stereotaksik çerçeve içinde sıçan başını düzelt veya başka sıçan başını sabitleşmek. Vücut ısısını korumak için ısıtılmış bir pad üzerinde sıçan yerleştirin.
- Kurumasını zarar görmesini önlemek için her iki göze oftalmik merhem sürün.
- Daha sonra betadine, alkol ile traş kafa alanı fırçalayın.
- Kafatası ve burun kemiği açığa orta hat kafa derisi kesi olun.
- 2.16 arasındaki adımları 2.9 gerçekleştirmek için bir operasyon mikroskobu kullanın.
- Bir pamuk uçlu çubuk ve Dumont forseps bir çift kullanarak, maksiller, frontal, gözyaşı ve elmacık kemiklerinin oluşturduğu serbest yörüngeye, kenarını parçalara ayır. Çubukla kadar kullanınolası kanama kan ak.
- Ion erişim vermek yavaşça Ion üstün haçlar anterior etmoid sinir overstretch vermemeye dikkat ederek, hassas bir pamuklu çubukla yörünge içeriğini saptırmak için. Hassas bir pamuk uçlu çubuk ve yayma hareketi ile Dumont forseps bir çift kullanarak, çevredeki bağ dokusundan ION ücretsiz parçalara ayır. Olası kanama kan emmesi için bez kullanın.
- Bir ligasyonu gerçekleştirmek için, aşağı frontal kemik boyunca kromik bağırsak tek parça bir ucunu itin, İyon medial ve ION birkaç milimetre paralel ve aşağı ilerlemek. Bağ şimdi İyon ve frontal kemik arasındaki yerinde tutulur.
- Ligature yakın yerleştirmek ION altında 45 derece açılı Dumont forseps ucu kayma. Yavaşça forseps bitişik harfleri ve bahşiş ortaya çıkarmak için yanal ION çekin. Kavrama forseps ile ligature ve ION altından yanal forseps çıkarın.
- Ligature her iki ucu daha az ya da eşit uzaklıkta ION dan kadar orbita boşluğuna bitişik harfleri çekin.
- Ligature iki ucu bir "kayma düğüm" daralma derecesi üzerinde mükemmel denetime izin ve iyon karşı düğüm slayt olun. Sinir çapı ancak fark miktarda azalır, böylece bir iyon daraltmak için daha düğüm kaydırın. Daralma miktarı sabit tutulur ve böylece (örneğin, kaymasını önlemek için bir yarık düğüm) kayma düğüm üstüne normal bir düğüm yapın.
- Düğümden serbest uçlarından yaklaşık 2 mm bırakmak bitişik harfler kesin.
- Aynı prosedür, ilk dışında ikinci bir ligasyon 2 mm yapmak için (2.11 2.15 adımları) tekrarlayın.
- Sham için 2.10 adımları 2.2 gerçekleştirin.
- Polyester dikişlerle (4-0) kullanarak kafa derisi kesi kapatın ve sıçan ısıtılmış pad üzerinde kurtarmak için izin verir. Yeterli eksilerini kazanmış olan gözetimsiz kadar hayvan bırakmayınciousness sternum yatma korumak ve tamamen iyileşti kadar diğer hayvanların şirkete hayvan dönmez.
- Nöropatik ağrı gelişimi üzerindeki önleyici analjezik etkileri önlemek için, ameliyat sonrası ağrı için analjezi uygulamaları yoktur.
3. Davranış Testi Prosedürü
- Sıçanlar ameliyat öncesi test etmeden önce barınma koşulları en az 8 gün boyunca iklime alışmaları için izin verir.
- Ameliyat öncesi test edilmeden önce en az bir kez günde üç gün boyunca test prosedürüne sıçan alıştırmak.
- 60 W kırmızı ampul tarafından sağlanan ışık ile karanlık bir odada Davranış test test alanının merkezini aydınlatma ama loş ve karanlık oda geri kalanı çevresi bırakarak merkezinin üstünde 1 m askıya aldı.
- Ani işitme uyarılması parazitleri azaltmak için yeterli arka plan gürültü olduğundan emin olun. Gerekirse, beyaz gürültü sağlamak.
- Yüz bakım davranışlarının gözlenmesi
- Tyatak olmadan kapalı plastik kafes içinde test odasına koloniden bir tek sıçan ransport. Not: İdeal olarak, bu minimal dış uyaranlara ile kısa bir yolculuk olmalı.
- Yatak olmadan kapalı, şeffaf plastik kafese sıçan yerleştirin (UxGxY: 24 cm x 14 cm x 17 cm) geri bir video kamera önünde yansıtılmış bir ile.
- Hayvanın davranışının bir 10 dakika kayıt olun. Kayıt sırasında, emin deneyi test odasında mevcut olmadığından emin olun.
- Bir sonraki hayvan yerleştirmeden önce gözlem kafesini temizleyin.
- Kaydedilen davranış sıçan deneysel durumuna kör bir deneyci tarafından analiz edilir emin olun.
- 10 dakika kayıt sırasında her yüz bakım bölüm kaydını yapın. Not: Yüz bakım forepaws yüz alanları ile temas ettirildiği hareket kalıpları olarak tanımlanır.
- Yüz bakım davranışı iki tür arasında bir ayrım yapmak. Bir dizi öncesinde ne de takip ediyor, ne varsatımar gövde (yani, yüz dışındaki bir vücut alanının bakım), izole yüz damat olarak bölüm sınıflandırır. Vücut tımar önce veya yüz damat hemen sonra yapılırsa, vücut tımar sırasında yüz damat olarak bölüm sınıflandırır.
- Yüz bakım ataklarının sayısını belirler.
- Içi bölüm alanı olarak 4 saniyeyi geçmez yüz damat eylemler arasında bir süreyi kategorize (yani tek bir bölüm içinde yüz damat eylemler arasında bir duraklama).
- Inter-bölüm alanı (yani, iki bölüm arasındaki yüz damat eylemlerin tam bir kesinti) olarak 4 sn aşıyor yüz damat eylemler arasındaki süreyi sınıflandırır.
- Mekanik uyarım testi
- Yatak ile kapalı kafeste test odasına koloniden kadar 6 hayvan gruplarında Ulaştırma sıçanlar. Bu minimal dış uyaranlara ile kısa bir gezi olduğundan emin olun.
- Yeribireysel yatak takımları ile şeffaf plastik kafeslerde sıçan: menteşeli kapaklı (lxwxh 24 cm x 14 cm x 17 cm) kolayca açılıp kapatılabilir, böylece.
- Beş von Frey tüyleri kademeli bir dizi kullanın. Not: kıllar bükmek için gereken kuvvet 0,015 g, 0,127 g, 0,217 g, 0,745 g, 2,150 g, ve bir.
- 10 dakika boyunca gözlem kafesine sıçan ve ulaşan hareketleri alıştırmak. Her 30 sn, kapağı açın ve yavaşça bir plastik çubuk ile kafesin duvarına dokunun.
- Hayvan (yani dört pençeleri zemine yerleştirilen birlikte, ne hareketli ne de dondurucu, ancak davranış sergileyen koklama) bir koklama / hayır lokomosyon durumundayken, vibrissal pad merkezine yakın iyon sınırları içinde ilk von Frey saçı uygulamak , mystacial burun kılı çevreleyen kıllı deri üzerine.
- Aşağıdaki yanıtı kategorilerden 4 birine ait stimülasyon hayvanın tepkisi Puan.
- Olarak cevap tam bir eksikliği kategorize0 puan.
- Puan olarak bir uyarıcı algılama (yani sıçan uyarıcı nesneye doğru başını çevirir ve uyarıcı nesne daha sonra keşfediliyor) kategorize 1.
- Bir geri çekilme reaksiyonu kategorize (yani., Sıçan yavaşça başını açar veya briskly geriye stimülasyon uygulandığı zaman, bazen tek bir yüz uyarılmış alana ipsilateral mendil çeker oluşur) olarak skoru 2.
- (Bir kaçış / saldırı yanıtı kategorize yani., Sıçan, ya da aktif uyaran nesneyi saldıran yaparak kafes duvara bir çömelmiş pozisyon üstlenmeye uyarıcı nesneden uzak gövdesini hareket ettirerek ya pasif, teşvik nesnesi ile daha fazla temas önler ısırma ve skor 3 gibi) hareketleri kapma.
- Skor 4 olarak damat asimetrik yüz (yani sıçan uyarılmış yüz alana doğru yönlendirilmiş, en az üç yüz yıkama vuruş kesintisiz bir dizi görüntüler) sınıflandırır.
- Her bir hayvan içinde, stimu geçerlidiryoğunluk bir artan li. Bir uyarıcı yoğunluğu bir tarafına uygulanmış sonra, bir sonraki uyan yoğunluğunda geçmeden önce, diğer tarafa uygulanmaktadır. Ipsilateral ve kontralateral tarafları teşvik sırayı Rastgele. Hayvan Her stimülasyon önce koklama / hayır lokomosyon durumda olması gerektiğini unutmayın.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
İyon-CCI sıçanları izole yüzü damat (Şekil 1) harcanan süreyi güçlü bir post-operatif artış göstermektedir. Daha sonra artış ilk post-operatif hafta sonunda zirveleri ve aşağıdaki hafta boyunca azalır. En son çalışmalar anlamlı bir ila üç hafta boyunca arttığı bakım yüzü bulduk. Sahte işlemden geçirilmiş sıçanlarla Yüz bakım davranışı daha az ya da etkilenmez.
İyon-CCI sıçanları da ilk post-operatif hafta (Şekil 2) sırasında iyon topraklarının ipsilateral me...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
İyon-CCI modelinin en ilginç yönü, kendiliğinden olmayan uyarılmış (nöropatik) ağrı eşsiz bir ölçü sağlamasıdır. Spinal sinir modelleri kullanarak nöropatik ağrı çoğu hayvan çalışmaları, sadece nocifensive davranışları ele (örn., Seslendirme ve yoksunluk cevabı), mekanik veya termal uyarılara 12 aşırı duyarlılık yansıtan. Ancak, hastaların baş klinik şikayeti devam eden ağrı, değil hiperaljezi veya allodini 13 olduğunu.
Bu makale İyon CCI, izole damat yüzü (spo...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
Yazarlar, IoN-CCI modelinin ilk yazarı Bart Vos† tarafından yapılan çalışmayı kabul ederler.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Kromik katgüt | Dynek | CG504 | |
| Nembutal (pentobarbital) | Eczane | ||
| Atropin | Küçük | ||
| Makası - Favorita II | Aesculap | GT104 | |
| Stereotaksik alet | Çalma | 51600 | |
| Oftalmik merhem (Liposik) | Eczane | ||
| Homeotermik monitör sistemi | Harvard Aparatı | PY8 50-7221-F | |
| Pamuk aplikatörü | Eczane | ||
| Hassas pamuklu çubuk | Qosina | 10225 | |
| Ameliyat mikroskobu | Kaps | SOM 62 | |
| Dumont #5 forseps | Güzel Bilim Araçları | 11251-10 | |
| Dumont forseps - Mikro künt uçlar (#5/45) | Güzel Bilim Araçları | 11253-25 | |
| Makas - künt uçlar | Güzel Bilim Araçları | 14574-09 | |
| Polyester sütürler - Mersilene (4-0) | Ethicon | R871H | |
| Dijital video kamera | Sony | HDR-CX330E | |
| Semmes-Weinstein Von Frey Anestezimetre kiti | Stoelting | 58011 |
Kaynaklar
- Jensen, T. S., Gottrup, H., Sindrup, S. H., Bach, F. W. The clinical picture of neuropathic pain. Eur J Pharmacol. 429 (1-3), 1-11 (2001).
- Meyer Rosberg, K., et al. Neuropathic pain a multidimensional burden for patients. Eur J Pain. 5 (4), 379-389 (2001).
- Meyer Rosberg, K., et al. Comparison of the SF 36 and Nottingham Health Profile in patients with chronic neuropathic pain. Eur J Pain. 5 (4), 391-403 (2001).
- Vos, B. P., Strassman, A. M., Maciewicz, R. J. Behavioral evidence of trigeminal neuropathic pain following chronic constriction injury to the rats infraorbital nerve. J Neurosci. 14, 2708-2723 (1994).
- Clavelou, P., Pajot, J., Dallel, R., Raboisson, P. Application of the formalin test to the study of orofacial pain. Neurosci Lett. 103, 349-353 (1989).
- Vos, B. P., Hans, G., Adriaensen, H. Behavioral assessment of facial pain in rats face grooming patterns after painful and non-painful sensory disturbances in the territory of the rats infraorbital nerve. Pain. 76 (1-2), 173-178 (1998).
- Deseure, K. R., Adriaensen, H. F. Comparison between two types of behavioral variables of non evoked facial pain after chronic constriction injury to the rat infraorbital nerve. Comp Med. 52 (1), 44-49 (2002).
- Deseure, K., Adriaensen, H. Nonevoked facial pain in rats following infraorbital nerve injury a parametric analysis. Physiol Behav. 81 (4), 595-604 (2004).
- Deseure, K., Hans, G. Behavioral study of non evoked orofacial pain following different types of infraorbital nerve injury in rats. Physiol Behav. 138, 292-296 (2015).
- Deseure, K., Koek, W., Adriaensen, H., Colpaert, F. C. Continuous administration of the 5 hydroxytryptamine1A agonist (3-Chloro-4-fluoro-phenyl)-[4-fluoro-4-[[(5-methyl-pyridin-2-ylmethyl) -amino]-methyl]piperidin-1-yl]-methadone (F 13640) attenuates allodynia like behavior in a rat model of trigeminal neuropathic pain. J Pharmacol Exp Ther. 306 (2), 505-514 (2003).
- Zimmerman, M. Ethical Guidelines for investigations of experimental pain in conscious animals. Pain. 16, 109-110 (1983).
- Mogil, J. S., Crager, S. E. What should we be measuring in behavioral studies of chronic pain in animals. Pain. 112 (1-2), 12-15 (2004).
- Backonja, M. M., Stacey, B. Neuropathic pain symptoms relative to overall pain rating. J Pain. 5 (9), 491-497 (2004).
- Imamura, Y., Kawamoto, H., Nakanishi, O. Characterization of heat hyperalgesia in an experimental trigeminal neuropathy in rats. Exp Brain Res. 116, 97-103 (1997).
- Chichorro, J. G., Zampronio, A. R., Souza, G. E., Rae, G. A. Orofacial cold hyperalgesia due to infraorbital nerve constriction injury in rats reversal by endothelin receptor antagonists but not non steroidal anti inflammatory drugs. Pain. 123 (1-2), 64-74 (2006).
- Kramer, P. R., Bellinger, L. L. Meal Duration as a Measure of Orofacial Nociceptive Responses in Rodents. J Vis Exp. (83), e50745(2014).
- Rossi, H. L., et al. Characterization of bilateral trigeminal constriction injury using an operant facial pain assay. Neuroscience. 224, 294-306 (2012).
- Anderson, E. M., et al. Use of the Operant Orofacial Pain Assessment Device (OPAD) to Measure Changes in Nociceptive Behavior. J Vis Exp. (76), 50336(2013).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
Daha fazla makale keşfet
