Yöntem makalesi

AC-6 Besleyici Sistemi kullanılarak Ortak Lenfoid progenitörlerin dan Fare plazmositoid dendritik hücreler İn Vitro Nesil

8.2K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/53211

⸱

23 Kasım 2015

 ,  , 
1Graduate Institute of Immunology, National Taiwan University College of Medicine, 2Department of Biochemistry, Chang Gung University College of Medicine, 3Molecular Medicine Research Center, Chang Gung University College of Medicine

Bu makalede

Özet

Bu çalışmada, Flt3 ligandı varlığında ortak lenfoid progenitörleri AC-6 besleyici hücrelerle birlikte kültürleyerek verimli bir şekilde pDC üretebilen bir in vitro kültür sistemi sunuyoruz.

Özet

Plazmasitoid dendritik hücreler (PDC) I enfeksiyona veya enflamatuar yanıtlar sırasmda yanıt olarak aktive olmuş (IFN-I) üreten hücreler interferon güçlü bir tipidir. Ne yazık ki, pDC fonksiyonunun çalışma lenfoid organlarda düşük frekansta tarafından engellenmektedir, in vitro DC nesil için mevcut yöntemler ağırlıklı pDC'lerde üzerinde CDCS üretimini tercih. İşte biz verimli in vitro ortak lenfoid atalarıdır (CLPs) den PDC oluşturmak için benzersiz bir yaklaşım sunuyoruz. Spesifik olarak, iletişim kuralı, kemik iliğinden CLPs arındırmak ve Flt3 ligand mevcudiyetinde γ-ışınlanmış AC-6 besleyici hücreler ile coculturing ile PDC oluşturmak için nasıl ayrıntıları açıklanan. Bu kültür sisteminin benzersiz özelliği CLPs AC-6 hücreleri altında göç ve Arnavut kaldırımlı alan oluşturan hücreler, PDC genişletilmesi için kritik bir adım haline olmasıdır. Morfolojik olarak farklı DCler, yani PDC ve CDCS 7, bir bileşim ile yaklaşık 2 hafta sonra elde edildiOptimal koşullarda% 0-90 PDC. Tipik olarak, bu yöntemle üretilen pDC'lerde sayısı kabaca tohumlu CLPs sayısı 100 mislidir. Bu nedenle, bu sağlam bu hücrelerin gelişimi ve fonksiyonu içine daha ileri çalışmalar kolaylaştırmak için gereklidir pDC'lerde sayıda üretmek için hangi yeni bir sistemdir.

Giriş

Dendritik hücreler (DC) bağışıklık tepkilerini 1 kontrolünde önemli bir rol oynamaktadır profesyonel antijen sunan hücrelerdir. DH'ler, heterojen olsa da, genel olarak iki popülasyon olarak sınıflandırılabilir, konvansiyonel DCler (CDCS) ve plazmasitoid DCler (PDC) 2,3. Lenfoid organlara ek olarak, CDCS ve PDC aynı zamanda, akciğer, bağırsak, deri 2 dahil olmak üzere dokuların bulunurlar. CDCS ve pDC'lerde morfolojisi dendrit gibi projeksiyonlar ve daha plazma hücre benzeri olma pDC'lerde şeklini gösteren CDCS ile farklıdır. Buna ek olarak, ortak bir fare DC markör, CD11c, daha çok pDC'lerde göre daha CDCS üzerinde ifade edilir. PDC 2 için, MHC sınıf II yüksek seviyeleri ve kostimülatör moleküller, her ikisi de CD24 + CDCS, - CDCS ve CD11b - Ayrıca, CDCS daha CD11b + CD24 ayrılabilir. Olgun PDC, diğer yandan, selektif Siglec-H ve BST2 4 ifade ettiği gösterilmiştir. Functionally, CDCS PDC olduğundan daha sunan hücrelerin iyi antijen; Ancak, PDC Ben virüs enfeksiyonu veya enflamatuar stimülasyon 5 üzerine interferon türü geniş bir miktarda üretebilir.

Her iki CDCS ve PDC kısa ömürlü olduğu ve bu nedenle, sürekli kemik iliği (BM) 6,7 içindeki progenitörlerinden doldurulan olmalıdır. Öldürücü ışınlanmış farelere sık miyeloid progenitör (cmps) ve ortak lenfoid progenitörleri (CLPs) adoptif nakli CDCS ve PDC her iki soy 8-10 elde edilebileceğini göstermektedir. Ancak, RAG1 / 2 ifade ve IgH lokus 11,12 olarak yeniden düzenlenmiş DJ kesimleri sahip pDC'lerde bir alt kümesi vardır. Bu hücreler, aynı zamanda B220 işaretleyicinin ifadesi, bir nükleik asit-algılama reseptörleri (TLR7 / TLR9) ve transkripsiyon faktörlerinin (SPIB ve Bcl11a) 13 de dahil olmak üzere B limfositleri üzerinde, moleküler benzerlikler, lenfoid imzaları olduğuna inanılmaktadır tüm sahiptir. Bu nedenle, CLPs nedeniyle soy benzerlik pDC'lerde in vitro nesil için iyi seçimler olabilir.

İnsanlarda ve farelerde hem CDCS ve pDC'lerde sıklığı çok düşük olsa da 6 DH'ler, özellikle de CDCS (örneğin, GM-CSF ya da 11,14 Flt3 ligandı gibi sitokinlerin mevcudiyetinde BM ya da progenitörlerinden in vitro üretilebilir FL ) besleyici içermeyen sistemler kullanılarak 11,15,16. Ancak ne yazık ki, bu FL 11,15,16 kullanılarak in vitro pDC'lerde sayıda üretilmesi mümkün değildir. Daha önce PDC verimli AC-6 besleme sistemi 17 kullanarak CLPs in vitro olarak üretilebilir olduğunu gösterdi. Kültür sisteminde AC-6 stromal hücre çizgisi kullanılarak avantajı, hücre-hücre temas ve CLPs gelen pDC'lerde çok sayıda üretilmesini destekleyen sitokinlerin salgılanmasını sağlamasıdır. Bu sistem ile, üretim oldukça sağlamdır olmasına rağmen, aşağıda anlatılan prosedürlerin dikkat çoğaltma i gereklidirn emri pDC'lerde verimli nesil sağlamak.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

C57BL / 6 vahşi tip fare, National Laboratory Animal Center (NLAC), Tayvan 'den satın alınmıştır. Tüm fareler yetiştirilir ve belirli bir patojen içermeyen koşullar altında tutuldu. Protokoller ve hayvan kullanımı prosedürleri gözden ve Tıp Ulusal Tayvan Üniversitesi Koleji Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu (İzni No: 20120075) tarafından onaylanmıştır. Ayrıca, araştırmacılar deneyler yaparken hayvanlarda ağrı, acı veya sıkıntı potansiyelini azaltmak için her türlü çabayı. Eldiven yukarıda açıklandığı Tüm işlemler oda sıcaklığında gerçekleştirilmiştir.

AC-6 Besleyici hücreler hazırlanması 1.

Not: AC-6.21 (AC-6 kısaca) (I. Weissman, Stanford Üniversitesi tarafından temin edilmiştir) stromal hücre hattı 18 RPMI içinde muhafaza edilmelidir 15% ısı ile inaktive edilmiş fetal büyükbaş hayvan serumu (FBS) ile takviye edilmiştir. Besleyici hücreler olarak hizmet etmek, AC-6 hücreleri-γ ışınlanmış 3000 rad (30Gy) onların çoğalmasını önlemek için ko-kültür bir gün önce ile vardır. Not inciOnların geçit sayısı 20 üzerinde ise ac-6 hücre bakım sırasında kalabalık bırakılırsa kendi farklılaşma destekleyen yeteneğini kaybetmek eğilimindedir ya.

  1. Yıkama AC-6 hücreleri, bir sefer 1 mL Dulbecco fosfat tamponlu tuz (DPBS) ile aspirasyon ile DPBS çıkarın. AC-6 37 o C'de 3-5 dakika boyunca 0.8 ml tripsin çözeltisi (% 0.05 tripsin ve DPBS içinde 0.5 mM EDTA), sonra% 5 CO2 ve hücreler kültür ortamı 10 hacim için ile seyreltilmesi, reaksiyonu durdurmak Treat tek bir hücre süspansiyonu yapmak.
  2. 5.9x10 tohum AC-6 hücre 4 hücre / kuyu içine 12-kuyu plakaları ve% 5, 37 o C'de inkübe CO 2 O / N.
    Not: AC-6 hücrelerinin yoğunluğu cdc nesil lehine olacak bir alt yoğunluğu gibi çok önemlidir. 5.9x10 yoğunluğunda Tohum de AC-6 CLPs gelen pDC'lerde türetilmesi için optimal olan bir sonraki gün, birleşik duruma ulaştılar sağlayacak / 4 hücreleri.
  3. Γ-ışınlama ile 3000 rad (30 Gy) AC-6 hücreleri ışın tedavisi.
    Not: Ac-6 ışın tedavisi için kullanılan doz, çoğalan hücreler önlemek ve henüz CLPs DC'lerin farklılaşması için gereken sitokinleri ve hücre-hücre teması sağlamak için yeterince uzun bir canlı tutmak için optimize edilmiştir.
  4. Kültür ortamı basınçla (% 10 ısı ile inaktive edilmiş FBS, 50 ug / ml gentamisin ve 50 uM β-mersaptoetanol ile RPMI) tam RPMI 1 ml ile değiştirin.

Fare 2. İzole BM Hücreleri

  1. CO 2 boğulma ve servikal dislokasyon ile fareler Kurban. Bir diseksiyon tepsiye yerleştirin fareler ve% 70 etanol ile sterilize edin. Orta karın bir kesi yapın ve alt ekstremite cilt kapsayan dahil farenin distalinde cilt kaldırın.
  2. Yarı steril kaput fareler parçalara ayır. Femur ve fibula bırakın, diz ekleminin altında yukarıda femur ve fibula klibi. Makas kullanarak kemiklerden kasları ayırın ve RPMI tamamlamak ml 5 içeren 6 cm'lik petri kemikleri yerleştirin.
  3. Bir steril kültür kaputu taşıyın. Tam RPMI ile 27G iğnesi bağlı bir 3 ml şırınga doldurun. Makas kullanarak kemiklerin iki ucunu kesti ve yavaşça her iki ucundan bir kez tam RPMI enjekte edilerek kemiklerin dışarı iliği temizlemesini 27G iğne takın.
  4. Hücreler yukarı ve aşağı 3-5 kez iğne olmadan şırınga kullanılarak kültür çanak nazik pipetleme tek bir hücre süspansiyonu hazırlayın.
  5. 500 x g'de 5 dakika boyunca santrifüj hücreleri ve süpernatantı süzün.
  6. 1 ml tampon maddesi ACK (150 mM NH4CI, 10 mM KHCO 3, 0.1 mM EDTA) 1 dakika için inkübe edilmesi ve tam RPMI 10 hacim ile inceltilerek reaksiyon durdurularak ile lizleyin kırmızı kan hücreleri. Hücreler yerçekimi tarafından ölü hücre kümeleri ve doku artıkları aşağı pelet için 5 dakika bekletin.
    Not: Bu nedeni canlı hücrelerin yerleşme hücre kaybına neden olacak gibi en fazla 5 dk durmayın.
  7. Yeni bir tüp bırakarak enkaz yavaş yavaş decant hücre içeren süpernatantOrijinal tüp arkasında.
  8. Daha sonra, pelet hücreleri çıkarmak ve süpernatant atmak için 500 xg'de 5 dakika santrifüj.
  9. Toplam dengeleme hücrelerin tekrar FACS tampon maddesi (1x PBS +% 2 FBS + 1 mM EDTA) ul 100 (tipik olarak 4-6 x 10 7 BM hücreleri bir fareden elde edilir).

3. FACS Analizi ve CLPs sıralanması

  1. Fc reseptörleri bloke etmek için 1-2 dakika için, anti-CD16 / 32 (hibridom üstte yüzen klonu 2.4G2, 50 ul / tepkime veya 1-2 ug / reaksiyonu) FACS tampon maddesi içinde hücrelere (adım 2.9) ekleyin.
    Not: Anti-CD16 / 32, aynı zamanda granülositler, monositler ve B lenfositleri içeren Fc reseptörlerini eksprese eden hücrelere antikorların spesifik olmayan bağlanmasını önlemek üzere ilave edilir Fc blok olarak adlandırılır.
  2. Aynı zamanda ortam ışığını kaçınarak, buz üzerinde 15 dakika süre ile (4x10 7 hücreleri için) Aşağıdaki fluoresan boya-etiketli antikorlar ile hücreleri boyayan. Antikorlar: PE-konjuge soy belirteçleri, anti-CD3 içeren (0.2 ug her biri) (17A2), anti-CD8 (53-6,7), anti-B220 (RA3-6B2), anti-CD 19 (eBio1D3), anti-CD11b (M1 / 70), anti-Gr-1 (RB6-8C5), anti- Thy1.1 (HIS51), anti-NK1.1 (PK136), anti-TER119 (TER-119), ve anti-MHC-II (Nimr-4), 0,2 ug anti-c-Kit PerCP Cy5.5- (2B8), 1 ug anti-Sca-1-FITC (D7), 0.4 ug anti-M-CSFR-APC (AFS98) ve 0,2 ug anti-IL-7Rα-PE-Cy7 (A7R34).
  3. 500 x g'de 5 dakika boyunca 3 ml FACS tamponla hücreleri ve santrifüj yıkayın.
  4. 300 ul FACS hücreler 40 mcM hücre süzgecinden tampon ve filtre hücreleri tekrar süspansiyon.
  5. Kalan hücrelerin kurtarmak ve aynı hücre süzgeci kullanılarak tüp ayırma steril FACS nüfuz etmeye ek bir 100 ul FACS tamponu ile tüp yıkayın.
  6. Sinyal tespiti için uygun filtre ve voltajlar kullanılarak boyanması hemen sonra akım sitometri analizi yapın. PE- ve PE-Cy7-labelded antikorları ve 633 nm las algılamak için 561 nm lazer, FITC-, PerCP-Cy5.5 etiketli antikorları tespit etmek için 488 nm lazer kullanıner APC-etiketli antikor tespit etmek için.
  7. C-kit int Sca-1 int M-CSFR - - IL-7Rα + (adım 3.2 lekeli gibi) hücre sıralayıcı kullanılarak sırala dışarı CLPs aşağıdaki belirteçler lin göre. Bir yastıkta tam RPMI 8 ml içeren 15 ml tüp sıralanır hücreleri toplayın.
  8. Çalışmasının sonunda hücre sıralayıcı ile gösterildiği gibi kriteri hücrelerinin mutlak sayısı kaydedilir. Tipik haliyle, 5x10 4 CLPs bir fare BM'lerine elde edilebilir.

4. Coculture CLPs ve AC-6

  1. , 500 x g'de 10 dakika boyunca aşama 3,7 kriteri hücreleri Santrifüj süpernatantı çıkarın ve 5x10 4 hücre / ml civarında bir hücre yoğunluğuna elde etmek için yeterli tam RPMI hücre pelletini. Tohum 500 hücre / çukur olarak aşama 1.4'te hazırlanan besleyici hücreleri ihtiva eden 12 oyuklu plaka.
  2. Her bir oyuğa 100 ng FL 19 ml / (hu-Flt3L-Ig M. Manz, Üniversite tarafından sağlanan bir ekspresyon sistemi kullanılarak in-house olarak üretilmiştirty Hastanesi Zürich, İsviçre) ve 37 o C, mikroskop altında DC gelişme periyodik görsel izleme ile% 5 CO 2 inkübe.
    Not: Piyasada mevcut rekombinant insan FL veya fare FL DC gelişimini desteklemek için hu-Flt3L-Ig için bir yedek olarak kullanılabilir.
  3. 12. günde süpernatan hücreleri toplamak ve elde edilen süpernatantlar birleştiren tam RPMI ortamına 0.5 ml ile bir kez kuyu yıkayın. Bir hücre kazıyıcı ile yapışık hücrelere 0.5 mL taze orta ekleyin ve hurda.
  4. 500 x g'de 5 dakika boyunca hücre içeren her iki parçadan orta ve santrifüj birleştirin.
  5. 50 ul FACS tampon Durusu süpernatant ve tekrar süspansiyon hücreleri. 50 ul anti-CD16 / 32 hibridom süpernatant ekleyin ve Fc reseptörleri bloke etmek için 1-2 dakika inkübe edilir.
  6. Numaralandırmak ve müteakip antikorlar (0,05 ug her biri), anti-CD11c-APC (N418), anti-CD11b-FITC, anti-B220 ve-PE tüm hücreleri leke.
  7. Tarif olarak yıkayın ve santrifüj hücreleriadım 3.3, d.
  8. CD11c + 100 ul FACS tamponu kapısı hücrelerinin yeniden süspanse ve CDCS (CD11c + CD11b + B220 -) için analiz ve pDC'lerde (CD11c + CD11b - B220 +) 17.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

4-6x10 7 BM hücrelerinin toplam tipik haliyle femur ve bir 6-8 hafta yaşında, vahşi tipli C57BL / 6 fare tibya izole edilmiştir. CLPs sıralamak için, toplam BM hücrelerinin soy belirteçleri (CD3, CD8, B220, CD19, CD11b, Gr-1, Thy1.1, NK1.1, TER119 ve MHC-II), anti karşı PE-konjuge antikor ile boyanır c-Kit PerCP / Cy5.5, anti-Sca-1-FITC, anti-M-CSFR-APC, anti-IL-7Rα-PE / Cy7, analiz edilir ve bir hücre sınıflandıncısı ile kriteri. CLP için sıralama strateji Şekil 1 'de gö...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Burada CLPs küçük bir sayı, özellikle bir in vitro kültür DClerin sağlam oluşturulması için bir sistem ve PDC tarif eder. Bu kültür sisteminin benzersiz besleyici olarak AC-6 hücreleri, stromal hücre çizgisi, kullanımına bağlıdır. Bu yaklaşım, IL-7, SCF, M-CSF ve FL 20 gibi yalnızca sitokinleri sağladığı gösterilmiştir, ancak, aynı zamanda, gerekli hücre-hücre teması 21 DC gelişimini desteklemek. AC-6 hücreler, birkaç progenitörlerin 8,16,22 in vitro DC gelişme çalışıla...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Teşekkürler

Biz Dr teşekkür ederiz. Belirteçlerin temin Markus Manz ve Irving Weissman. Biz de sırasıyla Tıp ve NTU hastanenin Ulusal Tayvan Üniversitesi Koleji'nde Akış Sitometrik Analizi ve Birinci Hücre Sıralama Çekirdek Tesisi ve İkinci Çekirdek Laboratuvarı tarafından sağlanan hizmeti kabul. Bu çalışma Bilim ve Teknoloji, Tayvan Bakanlığı tarafından desteklenen (EN 102-2320-B-002-030-My3) ve Ulusal Sağlık Araştırma Enstitüleri, Tayvan (IHUK-EX102-10256SI ve IHUK-EX103-10256SI).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Anti-fare Ly6g / Ly6c (PE), klon RB6-8C5Biolegend108408astar işaretleyici
Anti-fare NK1.1 (PE), klon PK136Biolegend108708linage marker
Anti-fare  CD11b (PE), klonM1/70 Biolegend101208astar işaretleyici
Anti-fare CD19 (PE), klon eBio1D3Biolegend115508astar işaretleyici
Anti-fare B220 (PE), klon RA3-6B2Biolegend103208astar işaretleyici/FACS
Anti-fare CD3 (PE), klon 17A2Biolegend100308astar işaretleyici
Anti-fare CD8a (PE), klon 53-6.7Biyoefsane100707astar işaretleyici
Anti-fare MHC-II (PE), klon NIMR-4Biolegend107608astar işaretleyici
Anti-fare Ter119 (PE), klon TER-119Biolegend116208astar işaretleyici
Anti-fare Thy1.1 (PE), klon HIS51eBioscience12-0900-83astar işaretleyici
Anti-fare M-CSFR (APC), klon AFS98Biolegend135510FACS
Anti-fare c-Kit (PerCP/Cy5.5), klon 2B8Biolegend105824FACS
Anti-fare Sca-1 (FITC), klon D7Biolegend108106FACS
Anti-fare IL-7Ra (PE/Cy7), klon A7R34Biolegend135014
FACS Anti-fare CD11c (PerCP/Cy5.5), klon N418Biolegend117328FACS
Anti-fare CD11b (FITC), klon M1/70Biolegend101206
FACS FACSAria IIIBD BiosciencesHücre sıralayıcı
FACS sıralama tüpü BD Biosciences352054
FlowJo FlowJoLLCAkış analizi yazılımı

Kaynaklar

  1. Hartwig, C., et al. Fcgamma receptor-mediated antigen uptake by lung DC contributes to allergic airway hyper-responsiveness and inflammation. Eur. J. Immunol. 40, 1284-1295 (2010).
  2. Merad, M., Sathe, P., Helft, J., Miller, J., Mortha, A. The dendritic cell lineage: ontogeny and function of dendritic cells and their subsets in the steady state and the inflamed setting. Annu. Rev. Immunol. 31, 563-604 (2013).
  3. Mildner, A., Jung, S. Development and Function of Dendritic Cell Subsets. Immunity. 40, 642-656 (2014).
  4. Swiecki, M., Colonna, M. Unraveling the functions of plasmacytoid dendritic cells during viral infections, autoimmunity, and tolerance. Immunol. Rev. 234, 142-162 (2010).
  5. Liu, Y. J. IPC: professional type 1 interferon-producing cells and plasmacytoid dendritic cell precursors. Annu. Rev. Immunol. 23, 275-306 (2005).
  6. Merad, M., Manz, M. G. Dendritic cell homeostasis. Blood. 113, 3418-3427 (2009).
  7. Ghosh, H. S., Cisse, B., Bunin, A., Lewis, K. L., Reizis, B. Continuous expression of the transcription factor e2-2 maintains the cell fate of mature plasmacytoid dendritic cells. Immunity. 33, 905-916 (2010).
  8. Karsunky, H., Merad, M., Cozzio, A., Weissman, I. L., Manz, M. G. Flt3 ligand regulates dendritic cell development from Flt3+ lymphoid and myeloid-committed progenitors to Flt3+ dendritic cells in vivo. J. Exp. Med. 198, 305-313 (2003).
  9. Manz, M. G., Traver, D., Miyamoto, T., Weissman, I. L., Akashi, K. Dendritic cell potentials of early lymphoid and myeloid progenitors. Blood. 97, 3333-3341 (2001).
  10. D'Amico, A., Wu, L. The early progenitors of mouse dendritic cells and plasmacytoid predendritic cells are within the bone marrow hemopoietic precursors expressing Flt3. J. Exp. Med. 198, 293-303 (2003).
  11. Sathe, P., Vremec, D., Wu, L., Corcoran, L., Shortman, K. Convergent differentiation: myeloid and lymphoid pathways to murine plasmacytoid dendritic cells. Blood. 121, 11-19 (2013).
  12. Shigematsu, H., et al. Plasmacytoid dendritic cells activate lymphoid-specific genetic programs irrespective of their cellular origin. Immunity. 21, 43-53 (2004).
  13. Reizis, B., Bunin, A., Ghosh, H. S., Lewis, K. L., Sisirak, V. Plasmacytoid dendritic cells: recent progress and open questions. Annu. Rev. Immunol. 29, 163-183 (2011).
  14. Inaba, K., et al. Generation of large numbers of dendritic cells from mouse bone marrow cultures supplemented with granulocyte/macrophage colony-stimulating factor. J. Exp. Med. 176, 1693-1702 (1992).
  15. Naik, S. H., et al. Development of plasmacytoid and conventional dendritic cell subtypes from single precursor cells derived in vitro and in vivo. Nat. Immunol. 8, 1217-1226 (2007).
  16. Onai, N., et al. Identification of clonogenic common Flt3+M-CSFR+ plasmacytoid and conventional dendritic cell progenitors in mouse bone marrow. Nat. Immunol. 8, 1207-1216 (2007).
  17. Chen, Y. L., et al. A type I IFN-Flt3 ligand axis augments plasmacytoid dendritic cell development from common lymphoid progenitors. J. Exp. Med. 210, 2515-2522 (2013).
  18. Whitlock, C. A., Tidmarsh, G. F., Muller-Sieburg, C., Weissman, I. L. Bone marrow stromal cell lines with lymphopoietic activity express high levels of a pre-B neoplasia-associated molecule. Cell. 48, 1009-1021 (1987).
  19. Onai, N., Obata-Onai, A., Tussiwand, R., Lanzavecchia, A., Manz, M. G. Activation of the Flt3 signal transduction cascade rescues and enhances type I interferon-producing and dendritic cell development. J. Exp. Med. 203, 227-238 (2006).
  20. Szilvassy, S. J., et al. Leukemia inhibitory factor upregulates cytokine expression by a murine stromal cell line enabling the maintenance of highly enriched competitive repopulating stem cells. Blood. 87, 4618-4628 (1996).
  21. Arcanjo, K., et al. Biochemical characterization of heparan sulfate derived from murine hemopoietic stromal cell lines: a bone marrow-derived cell line S17 and a fetal liver-derived cell line AFT024. J. Cell. Biochem. 87, 160-172 (2002).
  22. Onai, N., et al. A clonogenic progenitor with prominent plasmacytoid dendritic cell developmental potential. Immunity. 38, 943-957 (2013).
  23. Whitlock, C. A., Muller-Sieburg, C. E. Long-term B-lymphoid cultures from murine bone marrow establishment and cloning by using stromal cell line AC 6.21. Methods Mol. Biol. 75, 231-248 (1997).
  24. Chen, Y. -L., Chang, S., Chen, T. -T., Lee, C. -K. Efficient Generation of Plasmacytoid Dendritic Cell from Common Lymphoid Progenitors by Flt3 Ligand. PLoS ONE. 10 (8), e0135217(2015).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Ak SitometrisiFlt3 LigandArnavut Kald r m Alan Olu turan H crelerKemik li i zolasyonuH cre K lt rGama I nlamaH cre Ay klama

İlgili makaleler