BM12 lenfositlerinin bir C57BL/6 alıcısına transferi, sistemik lupus eritematozusun yerleşik bir modelidir. Burada, bu modeli kullanarak hastalığın nasıl başlatılacağını ve T foliküler yardımcı hücrelerin, germinal merkez B hücrelerinin ve plazma hücrelerinin akış sitometrisi ile nasıl karakterize edileceğini açıklıyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
C57BL / 6 FARELERDE SLE bm12 İndüklenebilir Modeli (SLE)
Bu makalede
Özet
Özet
Sistemik lupus eritematozus (SLE) çeşitli klinik ve immünolojik bulguları olan otoimmün bir hastalıktır. Birkaç spontan ve indüklenebilir hayvan modeli, bm12 transfer modeli de dahil olmak üzere insan hastalığının ortak bileşenlerini yansıtır. Bm12 splenositlerinin veya saflaştırılmış CD4 T hücrelerinin transferi üzerine, C57BL / 6 fareleri hızla büyük frekanslarda T foliküler yardımcı hücreler (Tfh), germinal merkez (GC) B hücreleri ve plazma hücreleri geliştirir ve bunu takiben yüksek seviyelerde dolaşımdaki anti-nükleer antikorlar izler. Bu model, saf bir C57BL / 6 arka planında fareler kullandığından, araştırmacılar nispeten kısa bir süre içinde transgenik veya nakavt fare suşlarında hastalık ilerlemesini hızlı ve kolay bir şekilde inceleyebilirler. Burada, çok renkli akış sitometrisi ile modelin indüksiyonu ve Tfh, GC B hücreleri ve plazma hücrelerinin kantitasyonu için protokolleri açıklıyoruz. Daha da önemlisi, bu protokoller SLE'nin çoğu fare modelinde hastalığı karakterize etmek ve diğer hastalık modellerinde Tfh, GC B hücrelerini ve plazma hücrelerini tanımlamak için de kullanılabilir.
Giriş
Sistemik lupus erythematosus (SLE), anti-nükleer antikor (ANA) üretim ve glomerulonefrit prototip, özelliği kompleks otoimmün bir hastalıktır. Çok sayıda diğer deri dahil olmak üzere, sekeller, kardiyo-pulmoner ve hepatik lezyon bazı kişilerde hastalığı ile ilişkilidir. ABD'de yaygınlık tahminleri kadınların ve azınlıkların 3 özellikle yüksek insidans ile, 150,000-1,500,000 1,2 dan, büyük ölçüde değişmektedir. SLE etyolojisi ayırt etmek zor olsa da, sistemik otoimmünite sonuçlanan çeşitli genetik ve çevresel faktörlerin etkileşimi kaynaklandığı düşünülmektedir.
Çeşitli hayvan modelleri hastalığın başlangıcı ve il....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Hayvan çalışmaları değerlendirme ve laboratuvar Animal Care International Akreditasyon ve Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi Derneği (IACUC) tarafından belirlenen esaslara uygun olarak spesifik patojen içermeyen koşullar altında gerçekleştirildi.
NOT: Bu tür vericiden veya alıcı hayvanlar mümkünse birinin üzerine CD45.1 gibi konjenik işaretleyici ifade birleştirin fareler, bu donör greft verimliliği ve donör CD4 T hücre popülasyonunun spesifik genişleme izlenmesi için izin verir, çünkü. Donör veya alıcı olarak aksi genetiği değiştirilmiş farelerin kullanılması göz önünde olursa, gerilme düzgün B6 arka plana backcrossed edilir ve....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Hastalıklı farelerin kütle ve hücreselliği (Şekil 2) olarak dalak 2-3 kez, sağlıklı farelerin büyüklüğü sergileyen az 14 gün gibi splenomegali gelişir.
Splenositler sırayla ışık dağılım (SSC-A tarafından FSC-A) kapılı, çift (FSC-A tarafından FSC-W veya H), canlı hücreleri (canlılık boya düşük boyama), ve CD4 + TCRβ + (Şekil ortadan kaldırılması Şekil 3A). Donör hücreleri CD45.1 ve CD45.2 (Şekil 3B, sol .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bm12 indüklenebilir modeli SLE hücresel ve moleküler süreçler incelemek için nispeten kolay ve etkili bir yoldur. Çok kendi antigenine karşı yönlendirilen adoptively transfer CD4 T hücrelerinin aktivasyonu kronik, burada açıklandığı gibi, akış sitometresi ile ölçülebilir TFH GC B hücreleri ve plazma hücrelerinin birikmesine yol açar. Hızla ve kolayca SLE hastalarında meydana benzeyen ve sonuçta otoantikorların patolojik birikimini yöneten otoimmün germinal merkez süreçlerinde aday genler ve yeni tedavilerin rolü sorguya.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma kısmen Lupus Araştırma Enstitüsü, NCI hibe CA138617, NIDDK hibe DK090978, Charlotte Schmidlapp Ödülü (E.M.J.'ye) ve Albert J. Ryan Bursu (J.K.'ye) tarafından desteklenmiştir. Cincinnati Çocuk Hastanesi Tıp Merkezi Romatoloji Bölümü'ndeki Araştırma Akışı Sitometri Çekirdeği tarafından sağlanan ve kısmen NIH AR-47363, NIH DK78392 ve NIH DK90971 tarafından desteklenen destek ve enstrümantasyon için minnettarız.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| B6. SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ | Jackson Laboratuvarı | 001162 | CD45.1+ BoyJ fare suşu |
| B6(C)-H2-Ab1bm12/KhEgJ | Jackson Laboratuvarı | 001162 | Bm12 fare suşu |
| FastDigest PsuI | Life Technologies | FD1554 | Genotipleme için kısıtlama sindirim enzimi |
| 1X RBC Lizis Tamponu | eBioscience | 00-4333-57 | |
| IMDM | GE Sağlık | SH30228.01 | |
| Plazma Ayırma Tüpü (PST) | BD | 365974 | Dipotasyumlu kan alma tüpü EDTA |
| Serum Ayırma Tüpü (SST) | BD | 365967 | Pıhtı aktivatörü ile kan alma tüpü / SST Jel |
| Ficoll | GE Healthcare | 17-1440-02 | Yüksek yoğunluklu hücre ayırma çözümü |
| Lympholyte-M | Cedarlane | CL5030 | Yüksek yoğunluklu hücre ayırma çözeltisi |
| GL-7-biotin | eBioscience | 13-5902-82 | |
| Streptavidin-BUV395 | BD | 564176 | |
| CD138-BV421 | BioLegend | 142508 | |
| CD4-BV510 | BioLegend | 100559 | |
| TCR ve beta;-BV605 | BD | 562840 | |
| CD45.1-BV711 | BioLegend | 110739 | |
| CD45.2-FITC | BioLegend | 109806 | |
| PD-1-PE | BioLegend | 135206 | |
| CD19-PerCP | BioLegend | 115532 | |
| Fas-PE-Cy7 | BD | 557653 | |
| CXCR5-APC | BioLegend | 145506 | |
| Sabitlenebilir Canlılık Boyası ef780 | eBioscience | 65-0865-18 | |
| CD4-BV421 | BioLegend | 100443 | |
| 1.2 ml FACS tüp ekleri, raflı | ABD Bilimsel | 1412-1400 | |
| BD Falcon & trade; Yuvarlak Tabanlı Borular | BD | 352017 |
Kaynaklar
- Helmick, C. G., Felson, D. T., et al. Part I. Arthritis Rheum. Estimates of the prevalence of arthritis and other rheumatic conditions in the United States. 58, 15-25 (2008).
- Lupus Foundation of America Web Site. , Available from: http://www.lupus.org/answers/entry/what-is-lupus (2015).
- Somers, E. C., Marder, W., e....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
