Yöntem makalesi

Bir Çok Kanallı Çift elektrik alan mikroakışkan Chip kullanarak Akciğer Kanseri Hücreleri Electrotaxis Çalışmaları

DOI:

10.3791/53340

⸱

29 Aralık 2015

 ,  , 
1Research Center for Applied Sciences, Academia Sinica, 2Institute of Biophotonics, National Yang-Ming University, 3Biophotonics & Molecular Imaging Research Center (BMIRC), National Yang-Ming University, 4Department of Mechanical and Mechatronic Engineering, National Taiwan Ocean University, 5Ph.D. Program in Microbial Genomics, National Chung Hsing University

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Elektrotaksi çalışmasında kullanılmak üzere birçok mikroakışkan cihaz geliştirilmiştir. Yine de, bu çiplerin hiçbiri, hücreler üzerindeki eşzamanlı kimyasal ve elektrik alan (EF) etkilerinin verimli bir şekilde incelenmesine izin vermez. Elektrotaksi araştırmalarında kullanılmak üzere daha iyi kontrol edilen bir arada bulunan EF ve kimyasal stimülasyon sunan polimetilmetakrilat bazlı bir cihaz geliştirdik.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bir doğru akım elektrik alanda (dcEF) kapsamında yönlü hücre göçü davranışı electrotaxis olarak adlandırılır. Embriyo gelişimi, hücre farklılaşması ve yara iyileşmesi sırasında hücre hareketi rehberlik fizyolojik dcEF önemli rolü birçok çalışmada gösterilmiştir. Bir electrotaxis tahlil mikroakışkan cips uygulayarak, soruşturma süreci kısalır ve deneysel hatalar en aza indirilir. Son yıllarda, mikroakışkan cihazlar polimerik maddeler (örneğin, polimetilmetakrilat, PMMA, veya akrilik) ya da polidimetilsiloksan (PDMS), yaygın olarak, elektrikli uyarılmaya verilen hücre yanıtları incelenmesinde kullanılmıştır yapılmıştır. Bununla birlikte, bir PDMS cihazı oluşturmak için gereken çok sayıda adımları farklı olarak, uidic çip fl akrilik mikro basit ve hızlı bir yapım aygıtı prototip ve üretim hem de uygundur. Oysa bildirilen cihazların hiçbiri aynı anda kimyasal ve DCE verimli çalışma kolaylaştırmakHücreler üzerindeki F etkileri. Bu raporda, bizim tasarım ve akciğer kanseri hücreleri üzerinde kimyasal ve elektriksel stimülasyon eşzamanlı etkisini araştırmak için akrilik bazlı çok kanallı çift elektrik alan (MDF) yonganın imalat açıklar. MDF yonga tek bir testle elektrik / kimyasal uyarılara sekiz kombinasyonları içerir. Çip ölçüde gerekli deneysel süresini kısaltır hem de electrotaxis çalışmalarda doğruluğu artırır.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bir doğru akım elektrik alanda (dcEF) altında anot ya da katot doğru hareket yapışan hücrelerin davranışı electrotaxis olarak adlandırılır. Hücrelerin electrotactic davranışı embriyojenez, sinir rejenerasyonu ve yara iyileşmesinde önemli bir rol oynar. Bu tür sıçan prostat kanseri hücreleri, 2 göğüs kanseri hücrelerinin, 3 ve akciğer adenokarsinoma hücreleri 4-8 olarak 1 tümör hücreleri uygulanan dcEF altında electrotactic hareketi göstermiştir . Fizyolojik EF bezi dokularda ölçülmüştür. 9,10 Electrotaxis da bezi ile ilişkili tümör hücrelerinde bildirilmiştir. 2,3 kanser hücrelerinin electrotaxis metastaz faktörü olduğu kabul edilir, birlikte ele alındığında. 11 elektriksel yol kontrol dcEF altına kanser hücreleri kanser gelecekteki tedavisi için potansiyel bir yaklaşım olabilir. Ancak günümüzde electrotaxis ayrıntılı moleküler mekanizması hala tartışmalıdır. Bu nedenle, inf bir soruşturmakanser hücre göç elektrik stimülasyonu luence kanseri tedavisi için stratejiler geliştirilmesini kolaylaştırabilir.

Son zamanlarda, biyo-mikroakışkan cihazlar in vitro, 12 kimyasal geçişlerini, 13 ve elektrik uyaranlar 4 kesme kuvveti akış hücresel yanıtları eğitim için imal edilmiştir. (Aynı zamanda akrilik olarak da bilinen PMMA) polidimetilsiloksan (PDMS) veya polimetilmetakrilat kullanarak biyo-mikroakışkan cihazların imalatı başarıyla tür deneylerin başarısızlık oranı azalmıştır. Ayrıca, biyolojik konuları araştırmak için bir prototip olarak akrilik esaslı mikroakışkan cihazlar kullanarak PDMS yongaları kullanarak daha basittir. Akrilik bazlı cihazların çeşitli fonksiyonları electrotaxis çalışma için geliştirilmiştir. Ancak, önceki tasarımlara hiçbiri aynı anda electrotaxis çalışma için hücreler üzerinde çeşitli kimyasal koşulların etkilerini ve elektrik-alan test edebiliyoruz. Böylece, bir mikroakışkan cihaz mu geliştirdiltichannel çift elektrik alan (MDF) çip içeren dört bağımsız kültür kanalı ve bir çip sekiz farklı deneysel koşullar.

İlk Hou tarafından bildirilen akrilik esaslı MDF yonga, vd., 8 elektrik stimülasyonu ve çeşitli kimyasal izole kanalları bütünleştirir. Bu kimyasal olarak izole kanal, bir deney kültür hücreleri farklı kullanılabilir. Kanallarda dcEF bir elektrik güç kaynağı tarafından üretilir. İki bağımsız elektrik alanlar, uygulanan elektrik alan kuvveti (EFS) ve 0 EFS ile diğeriyle, her kimyasal izole kanalda yapılmaktadır. Bu şekilde çip daha kontrollü eşlik eden EF ve kimyasal uyarım içerir. Ayrıca, MDF çip içerisindeki kimyasal difüzyon sayısal simülasyon sonuçları çapraz kontaminasyon 24 saat deney süre sonra kanallar arasında meydana geldiğini göstermektedir. 8

Devi ile karşılaştırıldığındaLi tarafından rapor ce ve diğ., 14 MDF çip elektriksel olarak uyarılmış hücrelerin daha da biyokimyasal analiz için izin veren daha geniş bir kültür alanı içerir. Buna ek olarak, MDF çip büyük gözlem alanı ile daha fazla hücre test gözlemlenebilir, yani elektrikle uyarılan hücrelerin göç hızı ve yönetme analizi daha doğrudur. Huang ve ark., 4 ve Tsai ve ark., 15 tarafından bildirilen daha önceki çalışmalar, tek kanal çip tasarımı hücre ya da kimyasal yalnızca tek bir tip test edilmesini sağlar. Bununla birlikte, MDF çip electrotaxis çeşitli kimyasal etkilere, ve aynı zamanda farklı hücre tipleri üzerinde elektriksel uyarım etkilerini araştırmak için kullanılabilir. Diğer bir deyişle, MDF çip kimyasal doz bağımlılıkları etkin çalışma sağlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Tasarım ve MDF Chip Fabrikasyon

  1. AutoCAD gibi ticari yazılımlar kullanarak bireysel akrilik tabaka model çizin ve desen kaydedin.
    1. Şekil 1A dört katmanlı akrilik levha desen tasarımı gözden ve inter-katmanlı bağlantıları onaylayın.
  2. Tüm akrilik levha ve CO2 lazer Çizici (Şekil 1B, 2A ve 2B) kullanılarak lazer ablasyon ile çift taraflı bant Üretiyor. 16
    1. Lazer Scriber açın ve kontrol dizüstü cihaza bağlayın.
    2. Ticari yazılımı çalıştırın ve tıklatarak adım 1.1 tasarlanan deseni açık "olarak tasarlanmış desen dosyasını."
    3. Lazer Scriber XYZ sahnede boş akrilik levha ya da çift taraflı bant bir parça yerleştirin.
    4. Bir otomatik Alignmen akrilik levha veya çift taraflı bant yüzeyinde lazer ışınının odak ayarlamaLazer Scriber üreticisi tarafından sağlanan t sopa.
    5. Akrilik levha ya da çift taraflı bant doğrudan işleme için lazer Scriber için tasarlanmış desen gönderin.
  3. Forseps kullanarak akrilik levhalardan koruyucu kağıdı çıkarın ve azot gazı ile yüzeyi temiz darbe.
  4. Akrilik levha Yığın ve 110 ° 45 dakika boyunca ısı ile birleştirme düzeninde 2 kg / cm2 bir basınç altında bir araya bağlamak Akış / elektriksel stimülasyon kanalı düzeneğinin oluşturulması için ° C.
  5. Çip hücre kültürü substrat olarak mikroskop kapak cam hazırlayın.
    1. Bir boyama kavanoza cam kapak koyun ve maddi listesinde deterjan on kat seyreltme ile kavanoza doldurun.
    2. Ultrasonik steri-temizleyici cam kapak ve boyama kavanoza koyun ve 15 dakika boyunca kapak camını temizleyin.
    3. , Boyama kavanoz seyreltilmiş deterjan dökün distile su ile kavanoz dolum ve adımı 1.5 tekrarlayın.2 3 kere.
    4. Çift taraflı bant onu kalarak önce azot gazı ile üfleme temizlenebilir cam kapak kurulayın.
  6. Adım 1.2 desenli çift taraflı bant ile akış / elektrik stimülasyonu kanal montaj temizlenmiş cam kapak yapıştırın.
  7. Süper yapıştırıcı ile MDF yonga düzeneğinin Layer 1 bireysel açıklıklar akrilik adaptörleri 13 adet uyun. MDF yonga düzeneği daha sonra tam (Şekil 2B) 'dir.
  8. Kullanmadan önce, UV ışınlama 30 dakika ile komple MDF yonga takımını sterilize edin.

MDF Chip Tuz Köprüsü Ağı 2. Kurulum

  1. Kullanmak 121 ° C'de 15 dakika bir tutma süresini ayarlayarak Şekil 3B'de gösterilen tüm plastik tüpler, parmak sıkı fındık ve mikrosantrifüj tüpleri sterilize önce Otoklavda ° C.
  2. Orta girişi aracılığıyla MDF yonga tertibatına floroplastik tüpleri (Şekil 3B-i) bağlayınve çıkış adaptörleri Şekil 1A gösterilmiştir.
  3. Şekil plastik borular, orta girişinin Luer konik bağlayın ve çıkış 3B-i 3-yollu stopcocks için.
  4. 3 ml şırınga kullanılarak CO2 -equilibrated fosfat tamponlu salin (PBS) 2.5 ml alın ve giriş plastik tüp 3-yollu şırınga bağlayın. Çıkış plastik tüp 3-yollu boş bir 3 ml şırınga bağlayın. İki şırınga böylece MDF çip sayesinde birbirine bağlanır.
    NOT: 37 PBS inkübe 5 ° C,% 2, -CO hücre kültürü inkübatörü O / N CO2 PBS -equilibrated elde edildi.
  5. Beyaz katı parmak sıkı fındık ile Katman 1 PMMA kağıda mavi açıklıklar ve yeşil adaptörleri (Şekil 1A) Seal (Şekil 3B-iii).
  6. CO 2 ile tuz köprüsü kanalları ve kültür odaları doldurun kurulum aşama 2.4 tarif şırınga içinde PBS -equilibrated. Önlemekkabarcıkların oluşması.
  7. Daha sonra, CO 2 koyun O / N inkübasyon için 37 ° C,% 5, -CO 2 hücre kültürü inkübatöründe MDF çip PBS içerikli -equilibrated. Bu çift taraflı bant içinde çözülmüş hava odaları kabarcıkları oluşturmak için olanak sağlar.
  8. İki şırınga kullanarak kanal hızlı PBS akışı ile kanallarda kabarcıkları uzak yıkayın. Ileri ve geri gerekirse PBS Pompa.
  9. Orta çıkış borusuna bağlanan 3-yollu yoluyla kanallarda PBS boşaltın.
  10. CO2 Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) -equilibrated yeni bir 3 ml'lik şırınga kullanarak, 2.5 mi alır (adım 3.5) ve yenisiyle girişine bağlanmış bir şırınga değiştirin. Orta kanalları doldurun.
  11. Tuz köprüsü, ağın hazırlanması.
    1. Geçici olarak katı somunları (Şekil 3B-iii) yeşil adaptörleri üzerinde (Şekil 1A) kaldırmak ve (> 70 ° C) agaroz içine tuz bri sıcak% 3 enjekteYeşil adaptörleri (Şekil 1A) açıklıktan dge kanalı.
      Not: Sıcak agaroz hazırlanması: 50 ml PBS agaroz bir toz, 1.5 g çözündürülür. Otoklavda 121 ° C'de 20 dakikalık bir tutma süresi ayarı ile sterilize edin.
    2. Sıvı tuz köprüsü kanalın uzunluğu dörtte üçü dolduğunda agaroz enjekte durdurun.
    3. Agaroz enjeksiyondan sonra katı somunları (Şekil 3B-iii) vidalanarak yeşil adaptörleri (Şekil 1A) üzerine gözenekleri kapatın.
    4. Saydam tüp şeklindeki parmak sıkı fındık (Şekil 3B) mavi adaptörleri (Şekil 1A) katı somunları değiştirin.
    5. % 3 boru şeklindeki fındık (Şekil 3B-iv) içine agaroz önceden ısıtılmış yükleyin.
    6. Önce tüp şeklindeki fındık içine Ag / AgCl elektrotlar (Şekil 3B-v) (Şekil 3B-iv) gömAgaroz katılaşma.
  12. Tuz köprüsü ağının kurulumunu tamamladıktan sonra, bir seferde, kültür odalarına tek bölmeyi CL1-5 akciğer kanser hücrelerini enjekte edilir.

3. Kanser Hücrelerinin Hazırlanması ve Electrotactic Denemeye Kurma

  1. Akciğer kanseri hücre çizgisi CL1-5 düzenli kültürü.
    1. 37 ° C'de, bir 75T hücre kültürü şişesi içinde tam ortam Prof. Pan-Chyr Yang, 17'den elde edilen bir kültür CL1-5 akciğer kanseri hücreleri, % 5 CO2 atmosferinde ° C. Komple ortam DMEM ve% 10 cenin sığır serumu (FBS) oluşmaktadır. Alt-kültür hücreleri, 3 ila 4 gün. Electrotaxis deneyler için kullanılan hücrelerin özgün kaynağından en az 25 pasajlar vardır.
  2. Katlanarak büyüyen CL1-5 hücrelere% 0.25 tripsin tampon maddesi 2 ml ilave edilir ve 37 dakika inkübe 2 Hücre dekolmanı için 5 ° C,% 2, -CO hücre kültür inkübatörüt.
  3. % 10 FBS DMEM 6 ml ayrılması işlemi durdurun ve oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 300 g hücreleri santrifüj. Ardından orta atmak ve 5 ml PBS ile hücre pelet askıya.
  4. PBS hücrelerin sayısını. Daha sonra, oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 300 g 1 x 10 6 hücreleri ve santrifüj alır.
  5. PBS atın. Önceden ısıtılmış CO2 -equilibrated DMEM ile süspanse ve 1 x 10 6 hücre / ml hücre yoğunluğu ayarlanır.
    NOT: 37 tam orta inkübe ° C CO 2 elde etmek için CO 2 hücre kültürü inkübatör O / N DMEM -equilibrated% 5.

4. Electrotactic Denemeye Kurma

  1. MDF yonga çıkışından, yonga içine hücreleri 1 × 10 6 / ml 0.3 ml, enjekte.
  2. Hücre kültürü inkübatör hücre numaralı seribaşı MDF yonga inkübe (37 ° ayarlanabilir 2-4 saat boyunca ° C'de ve% 5 CO2).
  3. MDF mikro Kurakışkan sistemi.
    1. Şeffaf indiyum kalay oksit cam (İTO) ısıtıcının üzerine MDF mikroakışkan sistemi takın. MDF yonga ve İTO cam arasındaki kırpılmış bir K-tipi termokupl ile MDF çip sıcaklığını ölçün. Bir oransal-integral-türev (PID) kontrolör ile İTO ısıtıcı kontrol edin. 37 MDF mikroakışkan sistem inkübasyon sıcaklığı ayarlayın PID kontrolörü ile ° C.
      NOT: İTO ısıtıcı imalat ve hücre kültürü ısıtma sisteminin kurulumu önceki raporlarda açıklanmıştır 18,19.
    2. Ters bir mikroskop bilgisayar kontrollü XYZ motorlu sahnede sıcaklık kontrollü MDF yonga takımını takın. Motorize kademe kullanılması adımında 5,1 tarif edilmektedir. Dört kanallı şırınga pompası ile girişler yoluyla kültür odalarına tam orta Pompa.
  4. 20 ul / saat akış hızında MDF yonga içine tam orta pompa. Out kültür atık(Şekil 3A'da "atık" olarak gösterilen) mikrosantrifüj tüpleri içinde toplanır sağlar.
  5. MDF çip, 37 ° C'de 16-18 saat boyunca inkübe hücreleri.
  6. Orta değiştirmek için, 10 dakika boyunca 20 ul / dakikalık bir akış hızında her bir kültür odasına, sırasıyla 50, 25, 5 ve 0 uM kinaz inhibitörü ihtiva eden bir ortam, pompa.
    Not: 10.6 mg kinaz inhibitörü steril su 3 ml ekleyerek Rho-ilişkili protein kinaz inhibitörü Y27632 bir 10 mM stok çözelti hazırlayın. % 10 FBS DMEM ortamı kullanılarak sırasıyla, 50, 25, 5 uM ila 10 mM stok solüsyonu ile seyreltilir.
  7. 37 ° C'de başka bir 60 dakika boyunca kinaz inhibitörü hücreleri inkübe edin. / Saat 20 ul orta akış hızını ayarlayın. Aynı kültür sıcaklığı kullanımı ve sonraki adımlarda, yukarıda tarif edilen akış oranı.
  8. Çip üzerinde Ag / AgCl elektrotlar aracılığıyla MDF çip bir DC güç kaynağı bağlamak için elektrik telleri kullanın.
  9. Seri bir ampermetre i bağlamakn elektrik devresi. MDF çip elektrik akımını izlemek için ampermetre kullanın.
  10. DC güç kaynağı açın ve V. 15 ila 19 güç kaynağı voltajını ayarlayarak 86,94 uA geçerli ampermetre ayarlamak
    Not: Ohm kanunu göz önüne alındığında bir toplu malzeme içinden akan elektrik akımı, örneğin, electrotactic odasında kültür ortamıdır, E = G / (σA eff), σ (= 1,38 Ω -1 m - 1) 'dir Kültür ortamı, (0.07 mm yüksekliğinde x 3 mm genişlik için = 0,21 mm2) bir eff iletkenliği electrotactic bölmenin etkili kesit alanı ve 300 mV / mm oluşturmak için gerekli olan elektrik akımı (I) MDF çip EF 86,94 uA.

5. Toplama ve Hücre Görüntüleri Analizi

  1. MATLAB GUI programını kullanarak motorlu aşamasını kontrol. Mikroskobik monte MDF mikroakışkan sistemiylepe, motorlu sahne kullanarak gözlem bölgelerine çipi taşıyın.
  2. Dijital Tek lensli refleks (SLR) kamerayı kullanarak Tutanak hücre görüntüleri mikroskop üzerine monte edilmiş.
  3. 2 saat boyunca 15 dakika aralıklarla 4X objektif lens kullanarak mikroskopik resimleri al.
  4. Hücre migrasyon analizi.
    1. NIH ImageJ 1.47 V çalıştırın
    2. Hücrenin sentroid final pozisyonlarına ilk mesafeyi analiz edin.
    3. "Görüntü Sırası" "Dosya" → "Import" → gidin ve hücre göçü analizi için dokuz görüntüleri içe. İlk görüntü sıfır defa sonucudur, ve son görüntü 120 dakika sonucudur.
    4. → "Ölçümleri ayarla" "Analiz" gidin ve yanındaki kutunun "Centroid" onay
    5. "Serbest Seçimler" ikonuna tıklayın.
    6. İlk görüntüde seçili hücrelerin kenarına betimliyor.
    7. "Düzenle" ye gidin → "Seçim" → "Müdür Ekle"
    8. Dokuzuncu görüntüye gidin ve ilk görüntüde seçilen aynı hücrelerin kenarına betimliyor. Hücre pozisyonları sekizinci görüntülere ikinci kullanılarak izlenebilmektedir.
    9. → "Müdür Ekle" "Düzenle" → "Seçim" Git
    10. Tekrarlayın 90 ila 100 hücrelerden veri toplamak için 5.4.5 5.4.9 için yineleyin.
    11. Seçilen hücrelerin ilk ve son pozisyonlar sonucunu elde etmek için → "Tedbir" "Analiz" gidin.
      NOT: Geçiş hızı hr başına ortalama hücre hareketi uzunluğu olarak tanımlanır. Yönetme (anottan katoda) dcEF vektörü ve nihai konumunda bir hücrenin başlangıç ​​noktasından vektörü arasındaki açıdır kosinüsü olarak tanımlanır. Yönetme katoda doğru göç hücreler için anot doğru göç hücreler için -1 ve +1 olduğunu. Rastgele mi bir grup içinhücreler ızgara, yönetme 0. 2

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

MDF cihazın imalat ve montaj

Akrilik bazlı MDF çip şematik bir diyagramı Şekil 1A 'de gösterilmiştir. Dört akrilik levhalar, tek cam kapak, 13 akrilik adaptörleri ve çift taraflı bant bir parça tamamlandı MDF yonga (Şekil 2D) montajında ​​kullanılmıştır. MDF cihazda sadece dört bağımsız kültür kanalı vardır. Ancak, on-chip tuz köprüsü ağ yongası sekiz segmentlerinde sekiz fark...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz zor olması MDF yonga Layer 1 üzerine akrilik adaptörleri kalarak sürecini bulundu. Süper yapıştırıcı sadece 1 ila 2 ul uygulama sıkıca MDF çip üzerine adaptörü uyması yeterlidir. Tutkal Büyük miktarlarda süper yapıştırıcı ve bağlı başarısızlık tamamlanmamış bir polimerleşmesinde sonuçlandı. Akrilik adaptörleri sıkıca MDF çip üzerine yapıştırılır Bir kez, mikroakışkan sistemde sıvı kaçağı nadiren meydana geldi. Buna ek olarak, vakum odasının içine O / N inkübasyon çift taraflı bant / cam kapak veya çift taraflı bant ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Tayvan Bilim ve Teknoloji Bakanlığı tarafından mali olarak desteklenmektedir (Sözleşme no. MOST 103-2113-M-001 -003 -MY2) ve Nanobilim ve Nanoteknoloji Araştırma Programı, Academia Sinica, Tayvan.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Reaktif< / güçlü >
DMEM ortamıGibco, Invitrogen, ABD12800-017
Fetal Sığır SerumuGibco, Invitrogen, ABD16000-044
TripsinGibco, Invitrogen, ABD25200-072
PBSTemel ÖmürBL2651
Y-27632 (hidroklorür)Cayman Chemical Co10005583
agarozLONZO, ABDSeaKem LE AGAROSE
şırıngaTerumo3 ml Luer konik
3 muslukNiproLuer konik
PMMA (akrilik)HiShiRon Industries CO., Ltd, Tayvankalınlığı 1 mm, 2 mm
akrilik adaptörKuanMin Technology Co., Ltd, Taichung, Tayvan1/4-28 bağlantı noktası, 10x10x6 mmözelleştirilmiş
somunThermo Fisher Scientific Inc.UPCHURCH: P-206x, P-200x, F120x, P-659, P-315x
Mikroskop kapak camıDeckgl ve auml; ser, Almanya24x60 mm
çift taraflı bant3MPET 8018
süper yapıştırıcı3MScotch Liquid Plus Süper Yapıştırıcı
TFD4 deterjanFranklab, FransaTFD4
ultrasonik steri temizleyiciLEO ULTRASONIC CO., LTD., Tayvan
Termo bağlayıcıKuanMin Technology Co., Ltd, Taichung, Tayvanözelleştirilmiş
CO2 lazer yazıcıLTT grubu, TayvanISL-II
oransal integral-türev (PID) denetleyiciJETEC Electronics Co., JapenTTM-J40-R-AB,
K tipi termokuplTECPELTPK-02A
4 kanallı şırınga pompasıKdScientific, ABD250P
DC güç kaynağıGWInstek, Tayvan
XYZ motor aşamasıTanLian, EO Co. Ltd., Tayvanözelleştirilmiş
ters mikroskopOlympus, JaponyaCKX41
dijital SLR fotoğraf makinesiCanon, Japonya60D
ile

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. McCaig, C. D., Rajnicek, A. M., Song, B., Zhao, M. Controlling cell behavior electrically: current views and future potential. Physiol Rev. 85, 943-978 (2005).
  2. Djamgoz, M. B. A., Mycielska, M., Madeja, Z., Fraser, S. P., Korohoda, W. Directional movement of rat prostate cancer cells in direct-current electric field: involvement of voltagegated Na+ channel activity. J Cell Sci. 114, 2697-2705 (2001).
  3. Pu, J., et al. EGF receptor signaling is essential for electric-field-directed migration of breast cancer cells. J Cell Sci. 120, 3395-3403 (2007).
  4. Huang, C. W., Cheng, J. Y., Yen, M. H., Young, T. H. Electrotaxis of lung cancer cells in a multiple-electric-field chip. Biosens Bioelectron. 24, 3510-3516 (2009).
  5. Huang, C. W., et al. Gene expression of human lung cancer cell line CL1-5 in response to a direct current electric field. PLoS One. 6, e25928(2011).
  6. Sun, Y. S., Peng, S. W., Lin, K. H., Cheng, J. Y. Electrotaxis of lung cancer cells in ordered three-dimensional scaffolds. Biomicrofluidics. 6, 14102-1410214 (2012).
  7. Tsai, H. F., et al. Evaluation of EGFR and RTK signaling in the electrotaxis of lung adenocarcinoma cells under direct-current electric field stimulation. PLoS One. 8, e73418(2013).
  8. Hou, H. S., Tsai, H. F., Chiu, H. T., Cheng, J. Y. Simultaneous chemical and electrical stimulation on lung cancer cells using a multichannel-dual-electric-field chip. Biomicrofluidics. 8, (2014).
  9. Faupel, M., et al. Electropotential evaluation as a new technique for diagnosing breast lesions. Eur J Radiol. 24, 33-38 (1997).
  10. Szatkowski, M., Mycielska, M., Knowles, R., Kho, A. L., Djamgoz, M. B. Electrophysiological recordings from the rat prostate gland in vitro: identified single-cell and transepithelial (lumen) potentials. BJU Int. 86, 1068-1075 (2000).
  11. McCaig, C. D., Song, B., Rajnicek, A. M. Electrical dimensions in cell science. J Cell Sci. 122, 4267-4276 (2009).
  12. Das, T., Maiti, T. K., Chakraborty, S. Traction force microscopy on-chip: shear deformation of fibroblast cells. Lab Chip. 8, 1308-1318 (2008).
  13. Lin, F., Butcher, E. C. T cell chemotaxis in a simple microfluidic device. Lab Chip. 6, 1462-1469 (2006).
  14. Li, J., Zhu, L., Zhang, M., Lin, F. Microfluidic device for studying cell migration in single or co-existing chemical gradients and electric fields. Biomicrofluidics. 6, 24121-2412113 (2012).
  15. Tsai, H. F., Peng, S. W., Wu, C. Y., Chang, H. F., Cheng, J. Y. Electrotaxis of oral squamous cell carcinoma cells in a multiple-electric-field chip with uniform flow field. Biomicrofluidics. 6, 34116(2012).
  16. Cheng, J. Y., Wei, C. W., Hsu, K. H., Young, T. H. Direct-write laser micromachining and universal surface modification of PMMA for device development. Sensors and Actuators B: Chemical. 99, 186-196 (2004).
  17. Chu, Y. W., et al. Selection of invasive and metastatic subpopulations from a human lung adenocarcinoma cell line. Am J Respir Cell Mol Biol. 17, 353-360 (1997).
  18. Cheng, J. Y., Yen, M. H., Kuo, C. T., Young, T. H. A transparent cell-culture microchamber with a variably controlled concentration gradient generator and flow field rectifier. Biomicrofluidics. 2, 24105(2008).
  19. Cheng, J. -Y., Yen, M. -H., Hsu, W. -C., Jhang, J. -H., Young, T. -H. ITO patterning by a low power Q-switched green laser and its use in the fabrication of a transparent flow meter. Journal of Micromechanics and Microengineering. 17, 2316(2007).
  20. Pu, J., Zhao, M. Golgi polarization in a strong electric field. J Cell Sci. 118, 1117-1128 (2005).
  21. Zhao, M., Bai, H., Wang, E., Forrester, J. V., McCaig, C. D. Electrical stimulation directly induces pre-angiogenic responses in vascular endothelial cells by signaling through VEGF receptors. J Cell Sci. 117, 397-405 (2004).
  22. Yao, L., Shanley, L., McCaig, C., Zhao, M. Small applied electric fields guide migration of hippocampal neurons. J Cell Physiol. 216, 527-535 (2008).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Kinaz nhibit rleriH cre GAkrilik ipElektriksel Stim lasyonKimyasal Stim lasyonKanser H cre G

İlgili makaleler