Bu yöntem, kanser hücresinin sferoidlerden çevredeki bir 3B matrise invazyonunu değerlendirir. Sferoidler, asılı damla kültürü yöntemi ile üretilir ve daha sonra bazal membran malzemeleri ve tip I kollajenden oluşan bir matrise gömülür. Spheroidlerin istilası daha sonra izlenir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bir Kanseri Hücre Sfero Testi 3D ortamda Invasion Değerlendirmek için
Bu makalede
Özet
Özet
Kanser hücre hatlarının istilacı doğasının metastatik potansiyelleri ile ilişkili olduğu düşünülmektedir. Bununla birlikte, çoğu geleneksel tahlil, bu istilacı özellikleri üç boyutlu bir ortamda incelemez ve elde edilen veriler, biyolojik uygulanabilirliğin azalmasından muzdariptir. Burada, hücre hatlarının istilacı yeteneğini fizyolojik olarak ilgili bir ortamda görselleştirmek için bir yaklaşım sunulmaktadır. Kanser hücresi sferoid istila testi, ilk olarak bir hücre kültürü kabının kapağından sarkan ortam damlaları içinde sferoidler oluşturmak için yerçekimini kullanır. Daha sonra, bu sferoidler, bazal membran malzemeleri ve tip I kollajen karışımından oluşan bir 3D matrise gömülür. Kanser hücresinin sferoidlerden çevredeki matrise çıkışı daha sonra zaman içinde izlenir. Burada açıklanan yöntem, farklı hücre tiplerinin kokültüründen sonra invazyonu, ilaçların/inhibitörlerin dahil edilmesini veya hücre dışı matris (ECM) bileşenlerindeki değişiklikleri incelemek için değiştirilebilir.
Giriş
Kanser hücre hareketi gibi davranışlar dolaşım sistemi 1 içine bazal membran ve giriş yoluyla işgali kolaylaştırır göz önüne alındığında, metastatik potansiyelin belirleyici olduğu bilinmektedir. Motilite üzerinde en çok araştırma yaygın bir üç boyutlu (3D) matris içinde hücrelerin hareketi olacak aslında nasıl bu aynı hücrelerin daha fazla temsilcisi olduğunu olma yolunda hızla ilerliyor olsa hücreler, iki boyutlu (2D) ayarında nasıl davrandığını odaklanmıştır vivo 2 davranır. 3D kültür sistemleri giderek büyüme kinetikleri ve ilaç duyarlılık 3, hücre morfolojisi değişir hücresel davranışları incelemek için kullanıl....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Sferoidlerin 1. Üretim
- Bir PBS kullanarak 70% konfluansa ~ adherent kanseri hücre kültürleri ayırarak damla kültürleri asılı tek hücre süspansiyonu hazırlamak% 0.05 tripsin-EDTA solüsyonuna maruz bırakılarak, ardından yıkama.
- Hücre kültür ortamı ile tripsin solüsyonu nötralize ve hücre süspansiyonu, bir kısım kullanarak hücreleri sayın. Not: Hücre hattı bağlıdır belirli bir hücre kültür ortamı, test edilen. Hücre kültür ortamı genellikle DMEM +% 10 FBS olduğu, ATCC medya önerileri uygulayın. Daha fazla bilgi Malzemeleri Tablo bulunabilir.
- Hücre kültür ortamı 20 ul damla başına 500-1000 hücre ekimi için izin vermek için bir seyreltme gerç....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Sferoid invazyon testi kullanılarak (Şekil 1), kanser hücre soylarının bir paneli, hem de bazal membran malzemeleri ve tip I kolajen oluşan 3 boyutlu bir matris içinde implantasyon sonrası sergilenen hücre egress miktarı için küreler oluşturma kabiliyetleri için test edildi (Tablo 1). Bu sonuçlar, her kanser hücre çizgisi, in vitro olarak bir epitel morfolojisi sahip hücre çizgileri düzenli ve düzgün agrega üretme eğilimindeydi iyi biçimli sferoidler, yaratacaktır göstermektedi.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu çalışma, bir küremsi yayılması deneyinin (Tablo 1) kanser hücre soylarının bir paneli performansını değerlendirildi. Genel olarak, sferoid oluşumu hücre-hücre birleşme varlığı küremsi benzeri mimari oluşumunu teşvik fazla epitelyal dönük hücre hatları, gelişmiş olduğunu fark. MDA-MB-231 hücreleri gibi, bir epitelyal mezenkimal geçiş geçirmiş bilinen hücre hatları, dolayı azaltılmış E-, N- ve P-kadherin ifadesi 16 büyük olasılıkla Asılı damla kültüründe parçacıklarının oluşturmazlar.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.
Teşekkürler
NIH hibe P30 CA051008 ve T32 CA009686 (ATR) tarafından desteklenir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Matrigel Büyüme Faktörü Azaltılmış | Corning | CB-40234 | |
| Kollajen Tip I, Sıçan Kuyruğu, 100 mg | Millipore | 08-115 | |
| DMEM | Yaşam Teknolojileri | 11995-065 | |
| RPMI 1640 Orta | Yaşam Teknolojileri | 11875-093 | |
| PBS | Yaşam Teknolojileri | 10010-023 | |
| 0.05% Tripsin-EDTA | Yaşam Teknolojileri | 25300-054 | |
| Fetal Sığır Serumu, Isı ile İnaktive Edilmiş | Omega Scientific | FB-12 | |
| 100 mm TC ile Muamele Edilmiş Yemekler | Corning Incorporated | 430167 | |
| 24 kuyulu TC ile muamele edilmiş Plakalar | NEST Biyoteknoloji | 702001 | |
| Olympus IX-71 Ters Mikroskop | |||
| Hücre hatları, RPMI + %10 FBS'de tutulan BT-474 ve LNCaP hücrelerinin beklentisi ile DMEM + %10 FBS'de tutuldu. |
Kaynaklar
- Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. Metastasis: Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites. Nat Rev. Cancer. 2 (8), (2002).
- Schmeichel, K. L., Bissell, M. J. Modeling tissue-specific signaling and organ function in three dimensions.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
