Yenidoğan Domuzların Lenf Bağırsak Lenf Trunk ve Koleksiyonu Uzun Vadeli Kateterizasyon

Lenf sistemi fizyolojisi ilgili yeterli bir alandır. Lenfatik kateterizasyon Klinik öncesi modeller farklı hayvan türleri ^1-8 oluşur ve lipid ^8-12 ve ilaç metabolizması ^13-15, deneysel tedavi ¹⁷ kanser metastazı ¹⁶ katılan mekanizmaların araştırılması ilaç sanayi ve araştırma kurumları tarafından kullanılan ve bağışıklık fonksiyonu ^{18 -26.} Bu çalışma, lipoprotein metabolizma bileşenlerini ölçmek için bir iç domuz modelinde bağırsak lenf gövde kateterizasyon kullanımını araştırıyor. Lipoprotein metabolizması üretimi ve salgılanması şilomikronlar bölgesinin ve ilişkili lipid ve toplam proteinin değişiklikler yer almaktadır. Yaygın olarak kullanılan kemirgen modellerinde ve insanlar arasında ve gibi lipid metabolizmasında önemli farklılıklar vardır Bunlar beni lipid incelemek için daha karşılaştırılabilir bilgiler verebilir bağırsak lenf toplamak için domuz modelleri kullanılarak, önemli hususlar vardırinsanlar ^27-31 yılında tabolism.

Çeşitli cerrahi teknikler büyük hayvan türlerinde bağırsak lenf toplamak için kullanılır: kranial omuz yaklaşımı (yani, göğüs kanal kateterizasyon) ^5, lateral üst kanadını yaklaşımı ^32-34 ve ventral orta hat veya paramediyan yaklaşım ^22,35. Bu video ayrıntılı olarak bağırsak lenf gövde kateterizasyon için ventral orta hat cerrahi yaklaşım kullanılarak domuzlarda cerrahi prosedürü tanımlamaktadır. Dikkatli cerrahi teknik izin lenfatik kateterizasyon bu yöntem, uzun zaman süreleri boyunca büyük lenf miktarlarda ve kendisine hedef toplamak için.

Bu teknik, çeşitli fizyolojik fonksiyonları inceleyerek birçok disiplinlerle uygulamalar sayısız açar. Uygulamalar içerir, ancak tüm vücut lipoprotein ve lipid metabolizması, immüno-tümör oluşumu ve metastaz, bağırsak fonksiyonu ve developm, bunlarla sınırlı değildirent ve bağırsak inflamatuvar hastalığın ilerlemesi.

video ve yazıda hem anlatılan deney hayvanlarında Tüm işlemler Hayvan Bakım Kanada Konseyi tarafından belirlenen kurallar Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanmış ve takip edildi.

1. Cerrahi Anestezi ve Neonatal Domuzlar Cerrahi Hazırlık

1. azaperone (0.3 mg / kg) ketamin hidroklorür (10 mg / kg), deksmedetomidin (15 ug / kg), bir ayrı Hol olarak, 25 kg ihtiva eden bir kas içi sedatif anestetik madde kokteyli ile boyun tabanına yakın domuz premedikasyon.
   Not: Geliştirilmiş intra-operatif ağrı kontrolü için önceden anestezik ilaç kokteyli buprenorfin (0,005-,02 mg / kg) ekleyin.
2. Bir yüz maskesi kullanılarak (500 ml-1000 ml / dk O ₂ 4-5 izofluran%) solunan izofluran inhalasyon gaz ile domuz uyutmak. Bir veteriner laringeal kapsamı (17-25 cm uzunluğunda düz bıçak) kullanarak ses telleri görselleştirmek ve vokal topikal% 10 lidokain spray uygulamakkordonlar. lidokain sprey vokal kord spazm ve havayolu tıkanıklığına olasılığını azaltmak için entübasyon 30-60 sn önce ses telleri temas etmesine izin.
3. Izofluran gaz ile anestezi ses tellerinin arasından bir kelepçeli endotrakeal tüpün (5,0-7,0 mm İç Çap (ID)) geçerek domuz entübe ve bakımını (/ 1,000-2,000 ml 0.5-2.0 izofluran% min O ₂₎ ile bir kapalı ameliyat boyunca anestezi sistemi yeniden soluk devresi. çene sesi ile anestezi düzeyi ve hem pedal ve palpebral refleks tepkilerini nasıl değerlendiriyorsunuz. Süresi Doldu anestezik gaz uzaklaştırılmış ve cerrahi paketi dışında havalandırılır.
4. % 70 izopropil alkol durulama ardından% 2.0 klorheksidin cerrahi fırçalama çözeltisi ile kulağın dış yüzeyini temizleyin. Ameliyat sırasında, bir 20 G kateter intravenöz ile intravenöz sıvı (5-10 ml / kg / saat laktatlı Ringer çözeltisi) temin etmek üzere bir kulak daman kateter. Med dil mukozal yüzeyine bir pals oksimetresi elde edinical bant kalp hızı ve periferik kan oksijenlenme doygunluk _(SpO2) izlemek için.
5. dorsal sırt üstü yatar pozisyonda anestezi domuz yerleştirin ve pubis ventral orta toraks kaudal ventral karın tıraş. İki% 2.0 Klorheksidin cerrahi önlük ve steril su yıkar alternatif bu bölgeyi temizleyin.
6. Cerrahi paketine anestezi domuz aktarın ve% 70 izopropil alkol durulama nihai cerrahi fırçalayın uygulamak, bu kurumasını bekleyin ve sonra hayvan asmak.
7. vücut ısısını izlemek için rektum içine bir rektal sıcaklık probu yaklaşık 2-4 cm yerleştirin. cerrahi işlem sırasında normal vücut sıcaklığına (38-40 ° C) muhafaza edilmesi için bir su sirkülasyon ısıtma pedi üzerinde domuz yerleştirin.
8. karın çevresinde örten kadran desen yerleştirilir dört havlu perdeler ile domuz örtün. karın yaklaşık 5 c lateral boyunca, xiphisternum karşısında ikinci asmak ilk örtüyü yerleştirinKarın orta hat m yanal. (Karşı tarafta olmasına rağmen), yaklaşık 5 cm karın orta hatta yanal karın lateral boyunca yerleştirilir ikinci perde gibi, pelvis ileal kret ve dördüncü drape genelinde üçüncü asmak yerleştirin.
9. altta yatan havlu perdeler üzerinde cerrahi sitesine erişim sağlayan bir yarık açılması ile, büyük bir tablo asmak yerleştirin ve domuz ve tüm cerrahi tabloyu kapsamaktadır. Nihai asmak büyük masa asmak üzerine yerleştirilen tek kullanımlık bir steri-drape olduğunu.

Bağırsak Lenfatik Trunk 2. Abdominal Cerrahi ve Kateterizasyon

1. Altta yatan karın kasları ortaya çıkarmak için bir neşter bıçağı ile 20 cm'lik cilt kesi olun. parietal periton maruz mono-polar elektrokoter (20 Watt ayarı) ile karın kas katmanları İnsizyon. Karın iç organları ve lenfatik damar erişmek için Metzenbaum makas ile parietal periton bir 20 cm doğrusal segmenti açın.
2. tüm cerrahi işlem için sıcak (37 ° C) steril serum fizyolojik ile tüm dokuların nemlendirin. Yavaşça karın boşluğuna gelen kolon, çekum, ileum ve jejunum da dahil olmak üzere bağırsak büyük bir kesimi kaldırın ve üst karın, karaciğer ve lenf damarı erişmek için domuz soldan onu exteriorize. yavaşça bağırsak desteklemek için bir askı oluşturmak için ek havlu perdeler ile pozisyonunda batın bağırsak sabitleyin.
3. Lenfatik damar bulun, yaklaşık 4 cm sağ renal ven, 6 cm kuyruk-medial kaval ustabaşı ventral ve pankreas ^22,36,37 yakın karaciğer sağ lobunda visseral yönü altında kranial-medial bırakır. Portal ven ^36,37 sağ ventral kesimine bitişik bir saydam bir yapı olarak lenfatik damar belirlemek.
4. lenfatik vess ayırınEl nazikçe Q-tip uygulayıcılar ile bağlı doku uzak alay ile çevredeki fasya gelen. kabın yan taraflarından çevreleyen dokudan ayrılır sonra, ince bir küt uçlu forseps teknenin altında bir "tüneli" açıklığı oluşturur.
5. ince forseps ile lenfatik altında üç 2-0 ipek sütür geçirin. , Tıkamak dilate ve lenf ile gemi doldurmak için ilk olarak en kaudal dikiş Arter. Kasıtlı lenfatik kateteri sabitlemek için nispeten uzun bu sütür (4 cm) uçlarını bırakın. diğer iki dikiş birbirinden 1,0 cm ayrılmış ve güvenli kaudal sütür kranial 1.0-1.5 cm yaklaşık olarak yerleştirin. damar içine kateter hızlı emniyete için izin vermek için bir 'tek gevşek bağ kravat' bu iki sütür bırakın.
   Not: En kaudal lige sütür ve (iki kafatası sütür) orta sütür arasında bulunan lenfatik segment kateterizasyon için sitedir. SU ile ilgiliGerekirse Ture malzemesi, 2-0 polyglactin sütür 2-0 ipek dikişlerle yerine geçebilir.
6. iris makas ile damar içine küçük bir delik kesin ve ince künt forseps ile gemi dilate. kabına bir eğimli ucu ile özel kateter tüp (4.06 Dış Çap (OD) x 2.31 mm ID) yaklaşık 1.0-1.5 cm yerleştirin ve yerine kateteri sabitlemek için iki kranial sütürler kravat. Geminin kateteri sabitlemek için kaudal dikiş uzun dikiş uçlarını kullanın.
7. ılık serum fizyolojik ile bol miktarda batın bağırsak yıkayın ve yavaşça bağırsak doğru anatomik konumlandırılmasını sağlayan karın boşluğuna geri getirin.
8. (Paralumbar fossa 5-10 cm ventral) Sol orta kanadında kateter exteriorize. bir neşter ile bir cilt kesi yapmak ve kateterin eksteriorizasyon için bir açıklık oluşturmak için deri yüzeyine karın boşluğuna bir Noktalayıcıyı geçmektedir. Karın cav kateteri exteriorize büyük Kelly forseps kullanabilirtrokar deliğinden Sığ.
9. yuvarlak (konik) iğne ile 2-0 polyglactin dikiş basit sürekli dikiş deseni ile parietal periton kapatın. yuvarlak iğne 2-0 polyglactin sütür ile basit bir kesintiye dikiş deseni ile karın kas katmanları kapatın.
10. Bir kesim iğne 2-0 polyglactin sütür ile bir subkütiküler desen cilt kapatın. Bir çanta-string dikiş deseni ile deri ve kesme iğne 2-0 naylon sütür ile batın kateter sabitleyin.
11. hala yerleştirme kolaylığı ve kurtarma sırasında domuz stresi azaltmak için anestezi sırasında domuz üzerinde uzmanlaşmış bir ceket yerleştirin.

3. Post-cerrahi Kurtarma ve Lenf Koleksiyonu

1. önce inhalasyon anestezi kesilmesi yaklaşık 10 dakika, hemen cerrahi sonrası analjezi sağlamak için kas içi bupenorphine (0.1 mg / kg) yönetmek. bupenorphine devam (0.1 mg / kg) 24-48 saat koruması için her 12 saatameliyat sonrası analjezi.
2. ameliyat sonrası komplikasyonlar için 7 gün boyunca her 8-12 saat domuz izleyin.
3. etilendiamin tetraasetik asit (EDTA) ile kaplanmış ve antibiyotikler ile takviye edilmiş 500 ml polipropilen yıkama şişeleri lenf, toplamak; penisilin (6000 IU), streptomisin (6 mg) ve amfoterisin B (3 mg), 7 günlük bir süre boyunca her 12 saat süredir.

Lipoprotein ApoB48, Trigliserid, Kolesterol ve toplam Protein 4. Niceleme Lenf Toplanan

1. 4 ° C'de 5 dakika boyunca 1800 x g'de lenf santrifüjleyin. Süpernatant toplayın ve trigliserid, kolesterol ve toplam proteinin miktar tayini için kullanın.
2. seyreltilmemiş bir numunesidir, örnek bir 1:20 seyreltilmiş damıtılmış su ve 1 seyreltilmiş bir son örneği: damıtılmış su ile 100, üç numune halinde süpernatant bölün.
3. Bir ticari olarak temin edilebilir kit ile, kolesterol seviyelerini ölçmek için seyreltilmemiş süpernatant kullanın.
4. 1:20 ve 1:10 kullanarak0 seyreltilmiş numuneler ticari olarak temin edilebilir kit sırasıyla bisinkoninik asit toplam protein tahlili ile, trigliserid ve toplam protein düzeylerini ölçmek için.

Lenf ³⁸ Toplanan Lipoprotein ApoB48 5. miktarının belirlenmesi,

1. Uyarlanmış bağışıklık Western Blot yöntemiyle ³⁸ ile lipoprotein ApoB48 konsantrasyonunu belirleyin. % 3-8 tris-asetat- sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile ayırın toplam lenf.
2. bir anti-keçi sekonder antikor ile birleştirmiş, sonra: Bir polivinil florür membran (0,45 mikron) ayrılmış proteinler aktarın ve ApoB (4.000 1) bir keçi poliklonal antikor ile kuluçkaya yatmaktadır.
3. saflaştırılmış kemirgen ApoB48 protein standardı ile doğrusal dansitometrik karşılaştırma kullanılarak kemilüminesans ile lipoprotein ApoB48 niceliğini.

Yenidoğan domuz bağırsak lenfatik gövde lenfatik kateterizasyon 7 günlük süre içinde yaklaşık 1 L merkezi lenf / 24 saat toplanmasını sağlar. Bu deneylerde elde lenf lipid metabolizması, yani toplam lenf protein, ApoB48 kolesterol, trigliserid, toplam protein ve kolesterol bileşenlerini ihtiva etmiştir. Tablo 1 vurgulamaktadır üç domuz toplanmış lenf örneklerinden bu lipit bileşenleri temsil miktarları. Özellikle, lenf akışı ve lipid bileşenleri in-line bağırsak lenfatik damarların aşağıdaki diğer araştırmacılar tarafından bildirilen merkezi lenf değerleri ile (lenf 570 ± 158-979 ± 284 ml / 24 saat 25 360 ± 120 MLL / 24 saat akar vardır 1080 720 ± ml / 24 saat 26 trigliserid 687 ± 110 mg / dl 9 kolesterol 63.1 ± 5.6 mg / dl 9); lenfatik geminin içinde kateterin uygun yerleşimini gösteren.

Şekil 1. Yenidoğan domuz bağırsak lenf ApoB48 ve ApoB100 lipoproteinlerin katkısını gösteren bir temsilci Western blot analizi. Lenf üç toplananDomuzlar 1.006 g / ml yoğunluk gradyan ultrasantrifüjleme protokolü kullanılarak ayrılır. Şekil ApoB100 türetilmiş plazmanın yaklaşık% 15 ile kontaminasyon küçük bir miktar gösterir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Ameliyat sonrası. Sonuçlar mea tekrarlanır 7 gün yenidoğan domuzlar toplanan bağırsak lenf Tablo 1. BileşenleriLenf Sures ve ifade (n = 3) ortalama ± SD

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.