Gelişim Süreçleri İzleme ve nicel C. elegans Açık kaynak Araçlarını Kullanma

Priyanka Dutta; Christina Lehmann; Devang Odedra; Deepika Singh; Christian Pohl

doi:10.3791/53469

Method Article

Gelişim Süreçleri İzleme ve nicel C. elegans Açık kaynak Araçlarını Kullanma

DOI:

10.3791/53469

⸱

December 16th, 2015

Priyanka Dutta*¹ , Christina Lehmann*¹ , Devang Odedra*¹ , Deepika Singh*¹ , Christian Pohl¹

¹Buchmann Institute for Molecular Life Sciences and Institute of Biochemistry II, School of Medicine, Goethe University

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada C. elegans'ta gelişimsel süreçlerin nasıl izleneceği ve nicelleştirileceği gösterilmektedir. Sunulan yöntemler, kolayca uygulanabilen açık kaynaklı araçlara dayanmaktadır. 3B hücre şekli modellerinin nasıl yeniden yapılandırılacağı, hücre altı yapıların manuel olarak nasıl izleneceği ve kortikal kasılma akışının nasıl analiz edileceği gösterilmiştir.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kantitatif gelişimsel süreçleri yakalayan mutant fenotipleri belirlemek ve tanımlamak için mekanik modelleri ve anahtarı türetmek için çok önemlidir. İşte protokoller embriyo ve yetişkin C hazırlamak için sunulmuştur elegans kısa ve uzun vadeli time-lapse mikroskopi için hayvanlar ve gelişim süreçlerinin takibi ve ölçümü için yöntemler. Sunulan yöntemlerin hepsi C dayanmaktadır kolay kullanılan mikroskop sistemi bağımsız herhangi laboratuvarda uygulanabilir Caenorhabditis Genetik Merkezi'nden edinilebilir ve açık kaynak yazılımına elegans suşları. Modelleme yazılımı iMod kullanarak 3D hücre şekli modeli bir imar,-floresan etiketli hücre içi yapılar çok amaçlı görüntü analiz programı Endrov ve PIVlab kullanarak kortikal kasılma akışının analizi kullanılarak manuel izleme (Time-Çözülmüş Dijital görüntüleme ölçümleri MATLAB Aracı) gösterilmektedir. Bu t bu yöntemler de dağıtılabilir nasıl tartışıldıo kantitatif vezikül akışının izleme izleme farklı modelleri, örneğin, hücre izleme ve soy diğer gelişimsel süreçleri yakalamak.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Floresan proteinleri, genom mühendisliği, ışık mikroskobu ve bilgisayar yumuşak ve donanım sürekli iyileştirmeler ile, benzeri görülmemiş uzay-zamansal çözünürlükte birçok model organizmaların gelişimini kaydetmek artık mümkün. Bu araştırmacılar, daha önce ele olamazdı soru sormak ya da gözden kaçan yönlerini aramak amacıyla bilinen gelişimsel süreçlerini tekrar verir. Bu ilerleme kapsamlı ölçümler ve istatistiksel analizlerle nicel modellere nitel, gayri modelleri dönüştürmeyi amaçlayan niceliksel gelişimsel biyoloji, alanını yol açtı.

Takip hücreleri ve hücre içi yapıların embriyonik gelişim, sinir sistemi aktivitesi ya da hücre bölünme....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

C hazırlanması 1. elegans Embriyolar Zaman atlamalı Mikroskopi mikroboncukları kullanılarak

M9 tampon bir damla içine bir solucan seçim (platin tel) kullanılarak gebe erişkin solucanlar aktarın ve şiddetle ajitasyon ve daha sonra bir diş çekme / pipet üzerine monte edilmiş bir göz boşluğunu kullanarak M9 bitişik düşüş her solucan aktararak, ilk tarafından bakterileri temizlemek ya da sivri uçlu bir cam kılcal kullanın.
, HPO _4, 5 g NaCl M9 tamponu (1 L M9 tamponu 3 g KH ₂ içeren PO _4, 6 g ₂ Na 20 mikron çapında polistiren tanecikler 10 kat ihtiva eden bir dispersiyon ile seyreltilir ve....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protokolleri 2, 3, ve 4, yabani tip C. gonadlar zaman atlamalı görüntüleme kullanılarak elegans yetişkin yapılır (soy OD58 (unc-119 (ED3) III; ltIs38 [pAA1, pasta-1 :: GFP :: PH (PLC1delta1) + unc-119 (+)]), bir tohum çizgisi promotörden bir membran işaretleyici ifade ). Gonad dönüş odaklanarak, germ hücrelerinin bir 3D model mikroskopi verileri (Şekil 2) oluşturulur. Bu model, hücrelerin geçiş proksimal kol distal formu ise hücre boyutu değişiklikleri analiz etmeyi sağlar rachis organ.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Geliştirme izleme nesnesi üzerinden, özellikle de nükleer takibi, bu C merkez desenlendirme mekanizmaları aydınlatmak mümkün olmuştur elegans ^1,23,24 Embriyogenez. Yüksek verim için bu stratejiyi genişletilmesi, ek desenlendirme kurallarını ortaya çıkarmak için ve desenlendirme anlamak için nasıl bir yöntem de novo ¹⁰ kuralları önermek son zamanlarda mümkün olmuştur. Birçok mutantlar için, ancak, kesin desen kusurları hala bilinmemektedir. Burada açıklanan yöntemler kendi.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

CP laboratuvarındaki araştırmalar Deutsche Forschungsgemeinschaft (EXC 115; 1756 İÇİN) ve LOEWE Araştırma Kümesi Ubiquitin Ağları. CP ayrıca Avrupa Birliği Çerçeve Programı 7 (Marie Curie Eylem Projesi 326632) tarafından da desteklenmektedir.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
Name	Company	Catalog Number	Comments
Stereo mikroskop	Motic/VWR	OT4005S	diseksiyonu ve montajı için stereo mikroskop
,	Polysciences	18329	Embriyo montajı
20 & mikro; m
Poliboncuk Polistiren Mikroküreler,	Polysciences	876	Yetişkin hayvan montajı
0.1 ve mikro; m
Mikroskop slaytları	VWR	631-0902	Yetişkin hayvan montajı
Kapak camı 18x18 mm	VWR	631-1331	Embriyo/yetişkin montajı
Kapak camı 24x60 mm	VWR	631-1339	Embriyo montajı
Neşter	VWR	233-5455	Embriyo diseksiyonu
Silikon boru	VWR	228-1501	Ağız pipeti için hortum
30 mm PTFE membran filtre	NeoLab	Jul-01	Ağız pipeti için filtre
Kılcal tüpler	VWR	621-0003	Ağız pipeti için pipet ucu
Vazelin	Roth	E746.1	Embriyo/yetişkin montajı
Agar	Roth	5210.5	Yetişkin hayvan montajı
Potasyum-di-hidrojenfosfat	Roth	P018.2	M9 tampon
Di-sodyum-hidrojenfosfat	Roth	P030.2	M9 tampon
Sodyum klorür	Roth	3957.1	M9 tampon
VisiScope İplik Eğirme Diski Konfokal Sistem	Visitron Systems	n/a	Konfokal mikroskopi

Poliboncuk Polistiren Mikrokürelerin

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sulston, J. E., Schierenberg, E., White, J. G., Thomson, J. N. The embryonic cell lineage of the nematode Caenorhabditis elegans. Dev. Biol. 100 (1), 64-119 (1983).
Kimmel, C. B., Warga, R. M. Tissue-specific cell lineages originate in the gastrula of the zebrafish. Science.....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Gelişim Süreçleri İzleme ve nicel C. elegans Açık kaynak Araçlarını Kullanma

In This Article

Summary

Abstract

Introduction

Protocol

Results

Discussion

Disclosures

Acknowledgements

Materials

References

Reprints and Permissions

Tags

Related Articles