Yöntem makalesi

Lazer kaynaklı Koroid Neovaskülarizasyonlarında A Fare Modeli

DOI:

10.3791/53502

⸱

27 Aralık 2015

 ,  ,  , 
1Department of Ophthalmology, Northwestern University Feinberg School of Medicine

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, neovasküler yaşa bağlı makula dejenerasyonunun (AMD) vasküler özelliklerini yeniden yaratan deneysel bir model olan fare lazer kaynaklı koroidal neovaskülarizasyon (CNV) protokolünü sunuyoruz. Bir kez ustalaştıktan sonra, çeşitli deneysel önlemleri test etmek için bir model sistem olarak CNV'yi güvenilir ve etkili bir şekilde indükleyebilir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fare lazerle indüklenen koroidal neovaskülarizasyon (CNV) modeli, neovasküler yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD) araştırmaları için çok önemli bir dayanak noktası modeli olmuştur. RPE ve Bruch membranına hedefe yönelik lazer hasarı uygulayarak, prosedür anjiyogenezi indükler ve neovasküler AMD'de gözlenen ayırt edici patolojiyi modeller.

İlk olarak insan olmayan primatlarda geliştirilen lazer kaynaklı CNV modeli, en sonuncusu fare olmak üzere birçok başka türe de uygulanmaya başlandı. Fare deneyleri avantajlı bir şekilde daha uygun maliyetlidir, deneyler çok daha hızlı bir zaman çizelgesinde yürütülebilir ve çeşitli transgenik modellerin kullanılmasına izin verir. Bununla birlikte, fare gözünün minyatür boyutu, prosedürü gerçekleştirirken özel bir zorluk teşkil eder. Retinayı görselleştirmek için gözün manipülasyonu, lazeri çalıştırmak için ince el becerisi becerilerinin yanı sıra eşzamanlı el-göz-ayak koordinasyonunun uygulanmasını gerektirir. Bununla birlikte, bir kez ustalaştıktan sonra, model, moleküler mekanizmalar, genetik manipülasyonların etkisi ve ilaç tedavisi etkileri gibi neovasküler AMD'nin birçok yönünü incelemek için uygulanabilir.

Lazer kaynaklı CNV modeli, kullanışlı olsa da, hastalığın mükemmel bir modeli değildir. Yabani tip fare gözü aksi takdirde sağlıklıdır ve koryo-retinal ortam insan AMD'sindeki patolojik değişiklikleri taklit etmez. Ayrıca, yaralanmaya bağlı anjiyogenez, AMD'de olduğu gibi yaşa bağlı ve kronik bir hastalık durumunda meydana gelen anjiyogenez ile aynı yolları yansıtmaz.

Eksikliklerine rağmen, lazerle indüklenen CNV modeli, neovasküler AMD'nin zayıflatıcı patolojisini incelemek için şu anda mevcut olan en iyi yöntemlerden biridir. Uygulanması, AMD'nin patogenezinin daha derin bir şekilde anlaşılmasına yol açmanın yanı sıra, şu anda mevcut olan birçok AMD tedavisinin geliştirilmesine katkıda bulunmuştur.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD) 50 1-3 yaş üstü bireylerde körlüğün önde gelen nedenlerinden biridir. AMD iki formda sınıflandırılabilir: atrofik ("kurutmak") AMD ve neovasküler ("ıslak") AMD. Eski ikinci sızıntı, kanama ve fibrozis neden dış retina katmanlarının içine koroid anormal damarların işgali ile karakterize edilirken, retina pigment epiteli (RPE), koriokapillaris ve fotoreseptör coğrafi atrofi ile karakterize ve sonuçta bir körlük 1,2 yol açar. İki formları, neovasküler AMD görme kaybı 1 çoğunluğu oluşturuyor. Onun atrofik muadili şu anda hiçbir tıbbi tedaviler 3 kanıtlamıştır oysa Neyse ki, bu form sayısız etkili farmakolojik tedavi seçenekleri vardır. Neovasküler formu kolaylıkla bir hayvan modelinde yeniden teslim oldu edilmiştir çünkü Ayrıca, temel A'ya daha yaygın olarak erişilebilir olmuşturYeni tedaviler 4 geliştirmek için altta yatan patolojik mekanizmaların keşfetmek MD araştırma.

Deneysel koroid neovaskülarizasyon (KNV) ilk hayvan modeli Ryan ve arkadaşları tarafından geliştirilmiştir. insan olmayan primatlar 5. Neovasküler AMD görülene benzer anjiyojenez ile sonuçlanan bir lokal enflamatuar bir yanıt neden olduğu lazer fotokoagülasyon ile Bruch zarının Bu model bağlı kopma. Anjiyogenez sonrası lazer indüksiyon histopatolojik ilerleme modelinin geçerliliğini 6 doğruladı neovasküler AMD, taklit bulunmuştur. Insan olmayan primatlar insanlara en çok benzeyen anatomi sunuyoruz, ama ne yazık ki, kolayca genetik manipüle edilemez, bakımı pahalı ve hastalığın ilerlemesi 7 yavaş bir zaman kursumuz var. Buna karşın bir, kemirgen modelleri çok daha düşük maliyetli sürdürmek, genetik göreli kolaylıkla manipüle edilebilir, ve cou hızlı bir çok şey varhastalık ilerlemesinin rse (deney ay karşısında haftalık bir zaman ölçeğinde yapılabilir). Bu albino hayvanlarda görselleştirmek için çok zor olduğu gibi bu deneyler sadece pigmentli kemirgenlerde yapılmalıdır.

İlk sonlarında 90 en 10 Campochiaro grubu tarafından geliştirilen fare lazer kaynaklı CNV modeli, son çalışmalar 11-16 çoğunda baskın bir hayvan modeli olarak büyümüştür. Nedeniyle CNV karmaşık ve hala belirsiz patogenez, lazer modeli gelecekte insan kullanımı için yeni tedavi modaliteleri değerlendirmek için anjiyogenez sürüş moleküler mekanizmaları inceleyerek kadar ıslak AMD araştırma tüm yönleriyle uygulanmıştır. Örneğin, Sakurai ve diğ. ve Espinoza-HEIDMANN ve diğ. transgenik fareler ve farmakolojik tükenme tedavileri 15, 16 kullanılarak KNV gelişimi üzerine makrofajlar etkisini araştırmak için lazer modeli kullanılır. Giani ve ark. ve Hoerster diğ. görüntüye kullanılan optik koherens tomografi (OCT) lazer kaynaklı KNV ilerlemesini karakterize ve Ekim görüntüleme 12,17 görülen bulgulara histopatolojik bulguları karşılaştırmak için bir çaba CNV. Son olarak, anti-anjiyogenik ajanlar intravitreal enjeksiyonunu içeren çalışmalar insan denemeleri için ön koşul olarak kullanılan ve neovasküler AMD 10,18,19 yönetiminde kullanılan anti-VEGF ajanların ilk nesil gelişmekte hayati önem oylandı.

Deneysel CNV için alternatif modeller KNV ikna etmek için cerrahi yöntemler kullanmaktadır. Bu prosedür, pro-anjiyojenik maddeler enjekte içerir (VEGF aşırı eksprese eden örneğin, rekombinant viral vektörler, RPE hücreleri ve / veya polistiren boncuklar subretinal enjeksiyon) anjiyojenezi 8,20 neden amacıyla, neovasküler AMD görülen artış olarak VEGF ifadesini taklit etmek. Bununla birlikte, bu yöntem, neovaskülarizasyonun büyük ölçüde düşük bir oranda verir; Bu çalışmalar, bu KNV gösterdiC57 / BL6 fareleri iki ayrı fare 8,14 aynı gerginlik lazer fotokoagülasyon yönteminde görülen ~% 70 başarı oranı karşı enjeksiyonlar 31% 'unda görülür. Bu nedenlerden dolayı, ve insan olmayan primatlar karşı kemirgenler kullanmanın avantajları göz önüne alındığında, lazer kaynaklı KNV'ların fare modeli en neovasküler AMD çalışma deneyleri 8 KNV'nin standart hayvan modeli haline gelmiştir.

Fare gözü ile çalışmak için bir minik, narin bir dokudur. Retina görselleştirmek için göz Manevra zordur ve ustalık elde edilene kadar çok pratik gerektirir. Bu görev hakim ve baskın olmayan el ile öğrenmiş olmalıdır gerçeği ile karmaşık. Retina görselleştirmek için gerekli ince hareketleri öğrenmiş edildikten sonra Dahası, her iki el ve lazer işletim ayak pedalı arasındaki koordinasyon önemlidir. Bu yazıda, lazer kaynaklı KNV yordam katılan fiziksel manipülasyonlar tüm öğrenme zorlukları damıtmak çalıştıoperatörler bu model ile hızlı bir başarı elde yardımcı olacak bir rehber haline edure.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm hayvanlar Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım 2013 Edition Kılavuzu uyarınca tedavi edilir, Görme ve Oftalmoloji (ARVO) Oftalmik ve Vizyon Araştırma Hayvanların Kullanım Tablosu Araştırma Derneği ve Kurumsal Hayvan tarafından onaylanmış Bakım ve Northwestern Üniversitesi için kullanın Komitesi.

Not: Aşağıdaki prosedür bir operatör tamamen yapılabilir; görevler buna göre bölünmüş olan ancak çok daha verimli iki operatörleri ile yapılmaktadır.

1. Lazer ve Ön lazer Station hazırlayın

  1. Kolayca erişilebilir olabilir lazer ve yarık lamba yerleştirin. Lazer açın ve parametrelerini ayarlamak önceden belirlenmiş (örneğin 75 mikron spot büyüklüğü, 100 mW güç, 100 milisaniye süre).
    DİKKAT: emin olun operatör tüm hayvan ve lazer güvenlik, kişisel koruyucu ekipman ve ilgili lazer güvenlik işaretleri prosedür odası dışında görüntülenen giyer.
    1. Herhangi bir deneysel hayvan kullanmadan önce, bir kalibrasyon, deneysel olmayan fareyi kullanarak İdeal parametreler bulmak. Lazer parametreleri kullanılan lazer bağlıdır. İdeal parametreleri düzgün odaklı olduğunda sürekli "balon" oluşmasına neden olur düşük lazer güç ayarı tarafından belirlenir. Uygun "balon" oluşumu ile lezyonun örneğin videoyu izleyin.
  2. Anestezi, sıcak hayvan, doku mendil ve tüm göz damlaları (Tropikamid, Tetrakain ve yapay gözyaşı) operatöre ulaşılabilecek kolayca böylece ön lazer istasyonu hazırlayın.
    1. Hayvan sıcak olun olup anestezi kaynaklı hipotermi önlemek için ilk fare içine anestezik enjekte önce sıcaklık (37 ° C) düzeltmek için önceden ısıtılmış.
  3. Isı tutma ve lazer işlemi başladıktan sonra sıcak kalabilir, böylece sıcak fare sahne yerleştirin.

2. Fare Anestezi ve Pre-lazer Hazırlık

  1. Enjekte önceanestezi ing, hiçbir deformiteleri veya kornea netlik (örn katarakt) azaltmak anormallikleri vardır sağlamak için makroskopik göz inceleyin.
  2. Fareyi tartılır.
  3. Tutanak ağırlığı, cinsiyet, ve hayvan kimlik numarası.
  4. 20 g bir fare için, 0.20 ml ksilazin / Ketamin Kokteyli enjekte; ağırlığı kullanılarak, anestezi, uygun miktarda hesaplamak 10 mg / kg ksilazin TD tribromoethanol 250 mg / kg (örneğin, 100 mg / kg ketamin hidroklorür kurum tarafından verilen ilkelere dayalı olarak kullanılmak üzere tribromoethanol OR 0.25 mi). Matematiksel hatalarını azaltmak amacıyla 1 g artışlarla ağırlığı başına önceden hesaplanmış dozajların bir tablo yazıldı.
  5. Scruff fare ve enjekte anestezi intraperitoneal adımda 2.4 hesaplamalara dayalı.
  6. Sıcak hayvan fare yerleştirin ve fare tamamen ayak tutam (yaklaşık 3-5 dakika) yoluyla pedal refleksini kontrol ederek anestezi kadar bekleyin.
  7. Silin, bir doku Roll up ve Aspirat önlemek için farenin burun alanını korumakSıvı roll-off iyon. Rulo yan fare ve topikal anestezi için her bir göz içine tetrakain hidroklorür damla (yaklaşık 30 ul) yerleştirin. Çözelti etkili olması için 2 dakika bekleyin.
  8. Pupil dilatasyonu topikal tropikamid bir damla adımı yineleyin 2.7. Seçenek olarak ise, dilatasyon fenilefrin hidroklorür (% 2.5) kullanımı.
  9. Çözümler etkili olması için 2 dakika bekleyin; Bu süre boyunca sıcak üzerinde hayvan tutun.
  10. Uygun zaman geçtikten sonra, hızlı bir şekilde fare sahnede fare koyun ve yarık lamba çene geri kalanı sahne yerleştirin.
  11. Düşük ışık parlaklığına biyomikroskopta açın ve pupilla dilatasyonu derecesini kontrol edin. Öğrenci yeterince (yaklaşık 2,5-3 mm) dilate değilse, sıcak hayvana fare dönmek ve bekleyin. Alternatif olarak, tropikamid başka damla yönetmek. Göz yeterince dilate sonra, lazer prosedürüne devam edin.

3. Lazer Prosedürü

Not: Diğer p emin olunersons odasında lazer korumalı yarık lamba göz parçasından uzakta koruyucu gözlük

  1. Bu ideal optik sinir görselleştirme (3.1.2 bakınız) konumlandırılmış böylece fare sahnede fare yerleşimini ayarlayın.
    1. Yatay yatıyor böylece diğer azından bir tarafında baş ve kuyruk, lamba ışın yarık dik, sahibine fare yönlendirmek. İdeal fare yerleştirme kapak kayma uygulandıktan sonra çok daha kolay optik sinir görselleştirme yapacaktır.
    2. Daha yakın lazer operatörü baş bir ~ 170 ° 'lik açıyla yani hafifçe fare çevirin.
    3. Kararlı ve nerede operatörün eli ince manipülasyon için yeterli alana sahip olacak olduğu bir pozisyonda yine lambayı yarık henüz mümkün olduğunca o fare kadar yakın olduğundan emin olun.
  2. Fare ideal yerleştirilmesinden sonra, bir 25 mm x 25 mm ebadındaki bir cam lamel yapay gözyaşı çözeltisi bir damla yerleştirin.
    1. Farenin opp suni gözyaşı çözümün bir damla yerleştirinosite göz - Bu sağlayacaktır göz sulu ve yardım gecikme katarakt olduğunu.
  3. Başparmak ve işaretçi parmakları arasında lamel köşesini tutun; konumu ve böylece cam iki parmak uçları arasında sıkılır.
  4. Yavaşça destek ve el stabilizasyonu için hayvanın vücudu etrafında kalan üç parmaklarını sarın. Pozisyon eli böylece cam lamel kolayca farenin göze yerleştirilebilir.
    1. Bilek El titreme azaltmak için sağlam bir yüzey üzerinde stabilize olduğundan emin olun.
  5. Kararlı pozisyon elde edildikten sonra, dikkatle farenin gözün üzerine (hala yapışık yapay gözyaşı damla ile) cam lamel basın.
    1. Lamel lazer ışını yayılımını veya yansımasını önlemek amacıyla lazer ışını mümkün olduğunca dik olarak konumlandırılmış emin olun. Lamel kornea düzleştirmek için bir kontakt lens gibi davranır.
  6. Toggle unt odak yarık lamba ile ve serbest el ile bakmakil retina görülebilir. Retina görüntülenmiştir yere bağlı açık sarı / kırmızı renk olacak, farklı, kırmızı damarlar görünür olacaktır.
  7. Yavaş ve dikkatli bir optik siniri görüntülenmesi kadar fare kafasını ve / veya lamel işlemek. Optik sinir o yayılan çok sayıda gemi ile, sarı renkli olacaktır.
  8. Operatör optik sinirin görselleştirme onaylamıştır sonra, ışın odaklama lazeri açın.
  9. Lazer ışını açıldıktan sonra, istenilen pozisyona (optik sinir yaklaşık 1 disk çapı) ışını odaklama lazer manevra.
  10. Göz fundus RPE üzerinde lazer ışınını odaklanın. Uygun odak keskin ve net lazer ışını sahip sağlanır. Işını amaçlayan yarık lamba odak veya yeniden pozisyon cam lamel geçiş, oval ya da odak dışı görünüyorsa.
  11. Hedefleme ışını RPE odaklanmıştır sonra, lazerin ayak tetiği kullanarak lazer yönetimini başlatmak.
    1. Intraoküler önlemek için retina damarları önlemek için emin olun oraji.
  12. Hemen lazer uygulamasından sonra bir kabarcığın görünüm için izleyin. Lazer atış hatları net ve hiçbir şekilde puslu olmamalıdır.
    1. Lazer atış kabarcığı oluşumuna yol açmaz ise, ya da darbe alan (genel ort başarılı etkisi net, keskin tanımlı sınırına kötü tanımlanmış dairesel kenarlıklı bulutlu bir görünüm) puslu görünüyor, ya da kanama lazer uygulamasından sonra görülürse, DEĞİL yapmak gelecek analizi için bu lezyonlar bulunur.
  13. Tekrarlayın istenen tüm CNV pozisyonları için 3.10-3.12 (genellikle 3'te, 6, 9, ve optik sinir etrafında 00:00 pozisyonları) yineleyin. Lazer indüksiyonlar optik sinir yaklaşık aynı mesafede uygulanırsa, yeniden yoğunlaşma gerekli olmamalıdır. Ancak, retina bulunabilecek ışını refocusing ardışık lazer idareleri arasında gerekli olabilir fare göz ve küçük değişimlerin güçlü eğrilik.
  14. Bir dizüstü konumu ve e sonucu rekorach lazer atış idaresi ve sonuç (başarılı, puslu, kanama vb.) göz için her uygulanan vurdu. Kullanılmadığı zaman stand-by modunda lazer yerleştirmek emin olun.
  15. Gerekirse istikrar ve yeni bir lamel için ters elinizi kullanarak, fare, diğer göz için 3.1-3.14 tekrarlayın.
  16. İstenen tüm lazer çekim uygulanır sonra lazer kapatın ve yarık-lamba.
  17. Anestezi kurtarma için sıcak üzerinde lamel ve yer fareyi atın. Makroskobik herhangi bir yaralanma için göz kontrol ve sulandırılmış göz tutmak ve potansiyel gelecek katarakt gelişimini önlemek için yapay gözyaşı çözümün bir damla yerleştirin. Fare anestezi kurtarır sonra kafese geri döner.
AVERTIN AVERTIN AVERTIN XYL / KET XYL / KET
Fare Ağırlık (g) Doz (mg / kg) Çözelti konsantrasyonu (mg / ml) Anestetik doz (mi) Doz (mg / kg) Anestetik doz (mi)
15 250 20 0,1875 100 mg / kg ketamin; 10 mg / kg ksilazin 0.15
16 250 20 0,2 100 mg / kg ketamin; 10 mg / kg ksilazin 0.16
17 250 20 0,2125 100 mg / kg ketamin; 10 mg / kg ksilazin 0.17
18 250 20 0.225 100 mg / kg ketamin; 10 mg / kg ksilazin 0.18
19 250 20 0,2375 100 mg / kg ketamin; 10 mg / kg ksilazin 0.19
20 250 20 0.25 100 mg / kg ketamin; 10 mg / kg ksilazin 0,2
21 250 20 0,2625 100 mg / kg ketamin; 10 mg / kg ksilazin 0.21
22 250 20 0.275 100 mg / kg ketamin; 10 mg / kg ksilazin 0.22
23 250 20 0,2875 100 mg / kg ketamin; 10 mg / kg ksilazin 0.23
24 250 20 0.3 100 mg / kg ketamin; 10 mg / kg ksilazin 0.24
25 250 20 0.3125 100 mg / kg ketamin; 10 mg / kg ksilazin 0.25
26 250 20 0.325 100 mg / kg ketamin; 10 mg / kg ksilazin 0.26
27 250 20 0,3375 100 mg / kg ketamin; 10 mg / kg ksilazin 0.27
28 250 20 0.35 100 mg / kg ketamin; 10 mg / kg ksilazin 0.28
29 250 20 0,3625 100 mg / kg ketamin; 10 mg / kg ksilazin 0.29
30 250 20 0.375 100 mg / kg ketamin; 10 mg / kg ksilazin 0.3

Tablo 1: XyIKet Doz Şeması.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

KNV lezyonlarının Niceleme CNV gemileri etiket immünoflüoresans boyama kullanarak düz monte choroids analizi yoluyla yapılabilir. Doku hazırlık iki en sık kullanılan yöntemler hemen endotel hücre işaretleyici ile hayvan kurban, ya da ölüm sonrası immün boyama önce perfüzyon yoluyla yapılan FITC-dekstran etiketleme vardır. Bu yöntemlerin ikisi de detaylı 13,14,21 daha önce tarif edilmiştir, sırasıyla her biri 1 ve 2 örneklerini göstermektedir. Konfokal mikrosk...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Başarılı lazer indüksiyon sonrası lazer teslimat ve sonuçtaki KNV lezyon gelişimini etkileyen birden fazla faktör vardır. Bu faktörler kontrollü ve en güvenilir sonuçlar elde etmek için standardize edilmelidir. Bu faktörlerin en uygun fare seçimi (genotipi, yaş, cinsiyet ve), anestezik seçimi, ve lazer ayarları vardır.

Kullanılan özel fare modeli KNV gelişme seyri üzerinde önemli bir etkiye sahip olabilir. En yaygın olarak kullanılan genotip C57BL / 6 faredir. Hayvanlar elde edildiği bir sat...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, rekabet eden hiçbir mali çıkarları olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, son makalenin hazırlanması ve düzenlenmesi konusundaki yardımları için Jonathan Chou, MD'ye ve OCT verileri için Wenzhong Liu'ya teşekkür eder. Ayrıca Macula Society Research Grant'ten (AAF) gelen desteği, Research to Prevent Blindness, Inc., New York, NY, ABD'den Northwestern Üniversitesi'ne sınırsız bir hibeden destek ve NIH-EY019951'dan gelen desteği de kabul etmek isteriz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
532 nm (yeşil) argon oftalmik lazerIRIDEXGLxherhangi bir oftalmik 532 nm (yeşil) argon lazer kullanılabilir
yarık lambaCarl Zeiss30SL-Mlazer ile uyumlu olduğu sürece herhangi bir yarık lamba kullanılabilir
tribromoetanolSigmaT48402-25Ganestezik yapmak için kullanılır
tert-amil alkolSigma152463-1L
amber cam şişeler + septaWheatonWH-223696tribromoetanol depolama
mendili mendillerVWR82003-820çeşitli 
% 1 TropicamideFalcon İlaçRXD2974251pupiller dilatasyon
%0.5 Tetrakain hidroklorürAlcon  0065-0741-12topikal anestezi
suni gözyaşlarıAlcon  58768-788-25hidrasyon
ısı terapisi pompası (hayvan ısınması için)korumak için kullanılanKent ScientificHTP-1500
Kent ScientificTPZ-0510EAhayvan vücut ısısını korur
30 G insülin iğneleriBD328418IP anestezi enjeksiyon
ölçeğiAmerikan Tartı ÖlçeğiAWS-1KG-BLKfare tartımı
kapak kayması (25 mm x 25 mm)Fare retinasını görselleştirmek için korneayı düzleştirenVWR48366089
Kurum anestezisinden elde edilenksilazin
anestezisinden elde edilenkurumdan eldeketamin
Hacimsel rekonstrüksiyon için kullanılanVolocityPerkinElmer
ImageJGörüntü analizi için kullanılanUlusal Sağlık
Hayvan vücudu sıcaklığı ısınma pedini Kurum edilen Enstitüleri

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bressler, N. M., Bressler, S. B., Fine, S. L. Age related macular degeneration. Surv Ophthalmol. 32, 375-413 (1988).
  2. Congdon, N., et al. Causes and Prevalence of Visual Impairment Among Adults in the United States. Arch Ophthalmol. 122, 477-485 (2004).
  3. Jager, R. D., Mieler, W. F., Miller, J. W. Age-Related Macular Degeneration. NEJM. 358, 2606-2617 (2008).
  4. Poor, S. H., et al. Reliability of the Mouse Model of Choroidal Neovascularization Induced by Laser Photocoagulation. IOVS. 55, 6525-6534 (2014).
  5. Ryan, S. J. The development of an experimental model of subretinal neovascularization in disciform macular degeneration. Trans Am Ophthalmol Soc. 77, 707-745 (1979).
  6. Miller, H., Miller, B., Ishibashi, T., Ryan, S. J. Pathogenesis of laser induced choroidal subretinal neovascularization. IOVS. 31, 899-908 (1990).
  7. Pennesi, M. E., Neuringer, M., Courtney, R. J. Animal models of age related macular degeneration. Molr Aspects Mede. 33, 487-509 (2012).
  8. Grossniklaus, H. E., Kang, S. J., Berglin, L. Animal Models of Choroidal and Retinal Neovascularization. Prog Retin Eye Res. 29, 500-519 (2010).
  9. Zeiss, C. J. REVIEW PAPER: Animals as Models of Age Related Macular Degeneration An Imperfect Measure of the Truth. Vet Pathol Online. 47, 396-413 (2010).
  10. Tobe, T., et al. Targeted Disruption of the FGF2 Gene Does Not Prevent Choroidal Neovascularization in a Murine Model. Am J Pathol. 153, 1641-1646 (1998).
  11. He, L., Marneros, A. G. Macrophages Are Essential for the Early Wound Healing Response and the Formation of a Fibrovascular Scar. Am J Pathol. 182, 2407-2417 (2013).
  12. Hoerster, R., et al. In vivo and ex vivo characterization of laser induced choroidal neovascularization variability in mice. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 250, 1579-1586 (2012).
  13. Jawad, S., et al. The Role of Macrophage Class A Scavenger Receptors in a Laser Induced Murine Choroidal Neovascularization Model. IOVS. 54, 5959-5970 (2013).
  14. Lambert, V., et al. Laser induced choroidal neovascularization model to study age related macular degeneration in mice. Nat Protocols. 8, 2197-2211 (2013).
  15. Sakurai, E., Anand, A., Ambati, B. K., van Rooijen, N., Ambati, J. Macrophage Depletion Inhibits Experimental Choroidal Neovascularization. IOVS. 44, 3578-3585 (2003).
  16. Espinosa Heidmann, D. G., et al. Macrophage Depletion Diminishes Lesion Size and Severity in Experimental Choroidal Neovascularization. IOVS. 44, 3586-3592 (2003).
  17. Giani, A., et al. In Vivo Evaluation of Laser Induced Choroidal Neovascularization Using Spectral Domain Optical Coherence Tomography. IOVS. 52, 3880-3887 (2011).
  18. Kwak, N., Okamoto, N., Wood, J. M., Campochiaro, P. A. VEGF Is Major Stimulator in Model of Choroidal Neovascularization. IOVS. 41, 3158-3164 (2000).
  19. Reich, S. J., et al. Small interfering RNA (siRNA) targeting VEGF effectively inhibits ocular neovascularization in a mouse model. Molr Vis. 9, 210-216 (2003).
  20. Baffi, J., Byrnes, G., Chan, C. C., Csaky, K. G. Choroidal Neovascularization in the Rat Induced by Adenovirus Mediated Expression of Vascular Endothelial Growth Factor. IOVS. 41, 3582-3589 (2000).
  21. Claybon, A., Bishop, A. J. R. Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium. JoVE. , 2563(2011).
  22. Espinosa-Heidmann, D. G., et al. Age as an Independent Risk Factor for Severity of Experimental Choroidal Neovascularization. IOVS. 43, 1567-1573 (2002).
  23. Zhu, Y., et al. Improvement and Optimization of Standards for a Preclinical Animal Test Model of Laser Induced Choroidal Neovascularization. PLoS ONE. 9, e94743(2014).
  24. Weinstock, M., Stewart, H. C. Occurrence in rodents of reversible drug induced opacities of the lens. British J Ophthalmol. 45, 408-414 (1961).
  25. Ridder III, W. H., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R. Causes of Cataract Development in Anesthetized Mice. Exp Eye Res. 75, 365-370 (2002).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Fare AMD ModeliRetinal Pigment EpiteliBruch Membran YaralanmasKonfokal Mikroskopi AnaliziOptik Koherens TomografisiFloresan Dekstran aretlemesiEndotelyal H cre Mark r BoyamasFlat Mount Koroid KantifikasyonuBiomikroskop Lazer Prosed r

İlgili makaleler