Bir akış oranı mikroreaktör MS Algılama Proteinlerin hızlı enzimatik işlenmesi

Summary

Bir elektrosprey iyonizasyon (ESI) kütle spektrometresine bağlı, şirket içi yerleşik akışlı triptik mikro reaktör ile proteolitik sindirim için hızlı bir protokol sunulmaktadır. Mikroreaktörün üretimi, deney düzeneği ve veri toplama süreci anlatılmaktadır.

Abstract

kütle spektrometrisi (MS) büyük çoğunluğu, protein analiz yöntemleri, tipik olarak tripsin ile, saptama için enzimatik sindirim aşamasından önce dahil tabanlı. Bu adım, kütle spektrometrisi enstrümantasyon etkili tarama aralığı içinde MW <3.000-4.000 Da genellikle, küçük molekül ağırlıklı peptid üretimi için gereklidir. Geleneksel protokoller 37 ºC'de O / N enzimatik sindirim içerir. Son gelişmeler, tipik olarak, örneğin, mikrodalga ya da yüksek immobilize enzim ya da bir kaç dakika için proteolitik sindirimi için gerekli zamanı azaltmak tamamlayıcı fiziksel işlemler (bir dizi bir mikroreaktör kullanılmasını içeren, farklı stratejiler, gelişmesine yol açmıştır baskı). Bu çalışmada, bir proteinin hızlı bir enzimatik sindirim elde etmek için herhangi bir laboratuvar uygulanabilir basit ve maliyet-etkin bir yaklaşımı açıklar. Protein (veya protein karışımı) C18-bağlanmış ters fazlı yüksek perf üzerine emdirilirbir kılcal sütununda önceden sıvı kromatografisi (HPLC), silis parçacıkları sergilemiş ve sulu tampon içinde tripsin kısa bir süre için parçacıklar üzerinde demlenir. on-line MS algılanmasını sağlamak için triptik peptidler MS iyon kaynağı, doğrudan artan bir organik içeriğe sahip olan bir çözücü sistemi ile elüt edilmiştir. Bu yaklaşım, yüksek fiyatlı immobilize enzim parçacıklarının kullanımını önler ve işlemi tamamlamak için herhangi bir yardım gerektirmez. Protein sindirimi ve tam bir örnek analizleri sırasıyla ~ 30 dakika az 3 ~ daha dk gerçekleştirilebilir ve yapılabilir.

Introduction

saflaştırılmış proteinlerin belirlenmesi ve tanımlanması, genellikle MS teknikleri kullanılarak elde edilir. Protein bir enzimle sindirilir ve peptitler, basit bir infüzyon deney düzeneği kullanılarak MS ile analiz edilir. Proteolitik sindirim çoğu MS analiz yararlı kütle aralığında düşüş küçük peptid fragmanlarını üretmek için gerekli olan ve kolayca amino asit sekansı bilgi üretmek için düşük enerji çarpışma kaynaklı ayrışma yoluyla parçalanmış olabilir. izole edilmiş proteinler veya basit bir protein karışımları için, MS tespiti önce peptitlerin kromatografik ayrılması için başka bir ihtiyaç vardır. 25-50 peptidlerinin bir karışım, kolayca MS iyonu kaynağı, doğrudan bir şırınga pompası ile örnek infüzyonu ile analiz edilebilir.

kütle spektrometresi analizi yapmak ve kısa zaman çerçevesi içinde bir proteinin dizisini teyit edebilir. modern veri elde etme yöntemleri ile, bu işlem, ağ yapılabilirbirkaç dakika, hatta saniye ithin. Kısa bir süre ölçeğinde tüm süreci tamamlamada sınırlayıcı faktör proteolitik sindirim adımdır. Tipik haliyle, bu işlem birkaç saat süreyle gerçekleştirilir (veya O / N), çözelti içinde, 37 ° C 'de, alt-tabaka kullanılarak: (50-100) enzim oranı: 1 arasındadır. Tarif edilmiştir mikroakışkan reaktörler veya ticari olarak temin edilebilen kartuş formunda, dakika ya da saniye hareketsizleştirilmiş enzim mikroreaktörlerde enzimatik sindirim süresini azaltmak için. ^1-6 Tipik olarak enzim kovalent, kovalent olmayan bir fiziksel / adsorpsiyon, kompleks immobilize edilir oluşumu ya da kapsülleme, enzimatik işlemin ^3,6 geliştirilmiş verimlilik ile elde edilmiş olmaktadır geniş yüzey-hacim ve enzim için alt-tabaka-oranları. immobilize reaktör diğer avantajları, MS analizinde enzimden otolitik ve parazit azalır enzim stabilitesi ve tekrar kullanılabilirliği geliştirilmiş bulunmaktadır. yaklaşımlar, cam ile ya da polimerik mikrofabrike cihaz çeşitli tarif edilmiştirantikor-antijen etkileşimleri, manyetik boncuklar üzerinde hareketsizleştirilmiş enzimleri kullanılarak, ^{7,8 9} titanyum-alümina sol-jel ¹⁰ ve nanozeolites, ¹¹ içinde kapsüllenmiş ya da Ni-NTA veya His-Tag kompleks oluşumu yoluyla çekilen altın nano partiküler ağlarında yakalanmış. ⁶ Alternatif immobilize enzimler ile açık boru şeklindeki kılcal damarlar, hem de geliştirilmiştir. ¹² Dahası, gelişmiş proteolitik bölünme 30-120 reaksiyon sürelerini azaltmak için kontrollü mikrodalga ışıması ¹³ veya basınç destekli veya basınç çevrim teknolojisi (PCT) kullanılarak ortaya konmuştur min. ¹⁴

İmmobilize enzim reaktörlerin birden avantajlarına rağmen, ticari kartuş maliyetleri yüksek olduğu, rutin kullanım için mikroakışkan cihazların kullanılabilirliği sınırlıdır ve ek araçları için ihtiyaç mikrodalga veya PCT teknolojileri sonuçlarının kullanılması. Bu çalışmanın amacı, circumve bir yöntem geliştirmektiBu dezavantajların NTS ve kolayca dakika içinde MS analizi için hazırlık proteinlerin enzimatik bölünme gerçekleştirmek için basit ve etkili bir yaklaşımla araştırmacılar güçlendirmek için, her laboratuarda uygulanabilir. yaklaşım kılcal ya da mikroakışkan cihaz önceden yüklenmiş olan hidrofobik, C18 partiküllerin kullanımına dayanır ve fazla enzimin infüzyonu sırasında enzimatik sindirme ile ve ardından bu parçacıklar üzerindeki ilgili protein (ler) adsorpsiyonu dolgulu yatak ve yakalanan protein (ler). Bu yaklaşımda, alt-tabaka kovalent olmayan etkileşimlerle hareketsizleştirilen edilir ve enzim hareketsiz hale getirilmiş proteine ​​fazla demlenir. proteolitik sindirim verimliliği, enzimatik işlem, daha az ve parçacıkların yüzeyinden uzaklıkları ve yayılma süreleri için protein açığa büyük bir tanecik yüzey alanı artmıştır kütle transferi, enzim etkinliğine etki eden herhangi bir kovalent bağlanması, yeteneği artar hızla değerlendirme,Farklı enzimler, disposability ve çoğullama e kombinasyonları süreci mikroakışkan biçimde yürütülür ise. Bu yaklaşım, standart proteinler ve ESI-MS tespiti önce proteolitik sindirimi için tripsin en yaygın olarak kullanılan enzim karışımı kullanımı ile gösterilmiştir. Bu çalışmada tespiti için kullanılan kütle spektrometresi doğrusal bir tuzak dört kutuplu (LTQ) enstrüman oldu.

Protocol

Kılcal mikroreaktör hazırlanması 1.

1. 100 um iç çap (ID) 360 um dış çap (OD) 7-8 cm uzunluğunda kılcal ve cam kılcal bıçağıyla 3-5 cm 20 um çapa x 90 mm OD kılcal X ekseni; herhangi çıkıntılı çapaklar olmadan, hem kılcal ucu temiz, düz bir kesim var mikroskop altında doğrulayın.
2. ~ 6 mm uzunluğunda, 100 um iç çap x 360 mm OD borunun bir ucuna 20 mikron iç çapa x 90 mm OD kılcal yerleştirin; ihtiyaç halinde, mikroskop altında bu işlemi dikkate alınmalıdır.
3. Q-ucu sonu ile 90 mikron OD / 100 mikron ID kılcal damarların birleştiği etrafında tutkal E6000 küçük bir damlacık uygulayın ve oda sıcaklığında tutkal kür O / N izin verin.
4. ~ 10-15 mm bir uzunluğa eklenir 20 um çapa x 90 mm OD kılcal kesme; Bu elektrosprey iyonizasyon yayıcı olacaktır.
5. Önceden kesilmiş 1/32 "OD PEEK, 1/16" OD PEEK ve 1/16 "OD PTFE küvetuzunluğunda 4-5 cm parçalar halinde ing; Bu bir sızıntı ücretsiz bağlantı sağlamak için kılcal birlikleri kullanılan kollu olacak.
6. Bir PEEK birliğe 100 mikron ID x 360 mm OD kılcal ucunu bağlayın; Bir sızıntı ücretsiz bağlantı sağlamak için bir 1/32 "PEEK kol kullanabilirsiniz.
7. Ekle / birliğin karşısında sonunda içine 5 cm uzunluğunda 1/16 "PTFE tüp ~ bir parça sıkın.
8. önceden temizlenmiş / 2 ml bir cam şişe kurutuldu C18 (5 um) bir parçacık ~ 4 mg ağırlığında; , 0.5 ml izopropanol ilave şişeyi kapatın ve ultrasonikatör banyosunda bulamaç dağıtmak.
9. , 250 ul şırınga yaklaşık 200 ul bulamaç ile çekilme PEEK birliği 1/16 "PTFE tüp şırınga iğne takın ve yavaş yavaş 100 mikron ID x 360 mikron OD kılcal içine bulamaç dağıtmak; olarak mikroskop altında gözlemlemek kılcal elde edilir 2-3 mm'lik ambalaj uzunluğu kadar parçacıklar ile doldurur, bu mikroreaktör olacaktır (Şekil 1), 20 μ.m kimliği kılcal bir Keystone etkisi ile mikroreaktör partikülleri tutar. ¹⁵
10. _H2O / _CH3CN 50:50 h / h 50 ul çözeltisi ~ ile mikroreaktör yıkayın ve daha sonra _H2O / _CH3CN 98 50 ul çözeltisi ~ ile: 2 h / h.

Örnek Çözümleri 2. Hazırlık

Not: Organik çözücü ve asitler ve çözelti hazırlama kullanımı içeren İşlemler davlumbaz ifa edilecek olan vardır. gözlük, eldiven ve koruyucu giysiler giyin.

1. _CH3 OH ile yıkayın ve bir kaç küçük cam şişeler (4 mi) ve polipropilen tüpleri (15 mi) kuru.
2. _H2O / _CH3CN içindeki bir çözeltisine, 10 ml hazırlama (98: 2 h / h), 15 ml polipropilen bir tüp içinde 200 ul _CH3CN ile 9.8 mL _H2O karıştırarak; sonikasyon ile karıştırın.
3. Oluşan bir çözeltiye 10 ml hazırlamak _H2O / _CH3CN (50:50 h / h), 15 ml polipropilen bir tüp içinde 5 ml _H2 karıştırılarak _</ sub> O ile 5 ml _CH3CN; sonikasyon ile karıştırın.
4. _H2O / _CH3CN, 4 ml 4 ul TFA (% 10) eklenmesi ile asitleştirilmiş sulu bir çözeltisi (TFA% 0.01 h / h) 4 ml hazırlanması: Bir 4 ml bir cam şişe içinde (98 2 h / h); sonikasyon ile karıştırın.
5. 4 ml _H2O / _CH3CN (50:50 h / h) 'de 4 ml bir cam şişeye 4 ul TFA (% 10) eklenmesi ile asitleştirilmiş, organik çözelti (TFA% 0.01 h / h) 4 ml hazırlamak; sonikasyon ile karıştırın.
6. 16 mg _{NH4 HCO3} tartılır 4 ml bir cam şişe içinde, bir analitik mikro-dengesi ile; (: 2 h / h 98) çözeltisi ve sonikasyon ile dispers, ₂ O / _CH3CN H 4 ml Bu sulu tampon içinde _{NH4 HCO3} (pH ~ 7.8), 50 mM çözeltisi ile sonuçlanır.
7. Standart proteinin 5 mg ağırlığında (örneğin, büyükbaş hayvan serum albümin, hemoglobin α / β, sitokrom c, karbonik anhidraz, α-2-HS-glikoprotein, vs.), bir 4 ml cam tüp içinde bir analitik mikro-dengesi ile; 4 mi DI wate eklemer ve sonikasyon ile dağıtmak; Bu, tipik olarak yüksek bir uM düzeyinde konsantrasyonu çözelti ile sonuçlanır.
8. _{NH4 HCO3} (50 mM), sulu tampon, uygun hacimde yüksek uM düzeyinde konsantrasyonu çözeltisi ile seyreltilmesi ile 1 ml protein çözeltisi (1-2 uM) hazırlama; sonikasyon ile karıştırın.
9. (50 mm) _{NH4 HCO3} 170 ul sulu tampon 20 ug dizileme dereceli tripsin eritilerek tripsin çözeltisi (5 uM) hazırlama; sonikasyon ile dağılır.

3. Deneysel Kurulum

Not: LTQ-MS sistemi, çeşitli örnek giriş yaklaşımlara kütle spektrometresi arabirim sağlayan bir ev yapımı XYZ kademeli içeren değiştirilmiş bir ESI kaynağı ile donatılmıştır.

1. PEEK sendikası kılcal mikroreaktör ayırın ve PEEK Tee bağlanın.
2. PEEK Tee yan kolunda bir ~ 2 cm uzunluğunda Pt tel takın; Bir temin edilmesi için bir 1/32 "PEEK kol kullanabilirsinizkaçak ücretsiz bağlantı ve Pt tel yalıtım.
3. PEEK Tee karşı ucuna (~ 0.5 m uzunluğunda) Örnek transferi kılcal kanallardan 50 mikron çapa x 360 um OD geç; Bir sızıntı ücretsiz bağlantı sağlamak için bir 1/32 "PEEK kol kullanabilirsiniz.
4. XYZ-sahnede PEEK Tee Güvenli ve uzak kütle spektrometresi giriş kılcal ESI yayıcı ~ 2 mm yerleştirin.
5. kütle spektrometresi ESI güç kaynağı kaynağına Pt tel bağlayın.
6. Paslanmaz çelik birliğe örnek transferi kılcal ucunu bağlayın; Bir sızıntı ücretsiz bağlantı sağlamak için 1/16 "PEEK kol kullanabilirsiniz.
7. Paslanmaz çelik birliği karşı ucuna 4-5 cm uzunluğunda 1/16 "PTFE tüp bağlayın ve PTFE tüp 250 ul şırınga iğneyi; örneğin (pompa açmak ve istenilen değerde akış hızını ayarlamak, 2 ul / dakika).
8. MS Enstrüman bir kontrol yazılım paketi içine girdi tandem MS veri toplama parametrelerianalizi yapmak için hazır kurulum için bir yöntem dosyası olarak kaydetmek d; LTQ-MS sistemi için, aşağıdaki veri bağımlı analiz parametreleri kullanabilirsiniz: dışlama kitle genişliği ile 180 saniye süreyle etkin dinamik dışlama 1,5 m / z ±; bir MS bir zoom ardından tarama ve MS ilk 5 en yoğun zirveleri üzerinde ² tarama, 5 m / z ± tarama genişliği Büyütmek; çarpışma kaynaklı ayrışma izolasyon genişliği 3 m / z, normalize çarpışma enerjisi% 35, aktivasyon Q 0.25 ve aktivasyon zamanında 30 milisaniye olarak belirlenmiştir (CID) parametreleri.

4. mikroakışkan Kur

1. Cam ya da polimerik substratlardan mikroakışkan cihazı hazırlanması; bir girişine bağlı ^16-18 cihazının yerleştirimini Şekil 2A'da verilmiştir bir mikroreaktör oluşan (1) (0.13 mm genişlik x 2 mm uzunluk x 50 mm derinlik) (2 ), çıkışı (3) ve bir yan bağlantı noktası (4); Akışkan manipülasyonları için birbirine kanal ~ vardır110 mikron genişliğinde ve ~ 50 mikron derin; Çok kanallı yapı (5), oluşan ~ 1.5-2 mm derinlik x 10 mm genişlik x yerleştirilmiş 100 mikron uzunluğunda mikrokanallar 25 mikron dışında, mikroreaktör parçacıkları tutmak için bir filtre görevi görür.
2. Veya sıvı teslim (Şekil 2B) için parçaları barındıran bir polimerik tavır oluşturulması yoluyla giriş delikleri için özel konnektörleri yapıştırma çip sıvı-teslim bağlantılarını etkinleştirin. ¹⁶
3. Aşama 1.8 de tarif edildiği gibi C 18 partikülleri (5 um) bir bulamaç hazırlamak; çip yan bağlantı noktasına bağlı 1/16 "PTFE boru kullanarak bir şırınga ile mikroreaktör bulamaç sağlamak (4) 90 ° C sıcaklıktaki bir fırın içerisinde epoksi yapıştırıcı ve 1 saat için tedavi ile birlikte partikül yüklemeden sonra ağız yalıtım ^16.
4. kür O / N E6000 yapıştırıcı ile mühürlenir, izin, çıkış limanında bir kılcal (20 mikron ID x 90 mm OD x 10 mm uzunluk) yerleştirin; Bu (ESI yayıcı olur 6).
5. 50 mikron ID x 360 mikron OD bağlayın (~ 0.5 m uzunluğunda) yonga giriş portuna örnek transferi kılcal (2); 3.6-3.7 tarif edildiği gibi, bir 250 ul şırınga ve şırınga pompasına kılcal karşıt ucunu.
6. Giriş portuna hemen önce numune transfer hattı üzerinde, bir hafif PEEK bağlantı parçası yerleştirin (2) ve T-şekilli yan koluna bir Pt tel takmak, 3.2 de tarif edildiği gibi; Bu ESI elektrot olacaktır.
7. kütle spektrometresi giriş kılcal ~ 2 mm uzakta konumlandırılmış ESI yayıcı ile XYZ sahnede mikroakışkan cihaz Güvenli; 3.8 de tarif edildiği gibi analiz için MS hazırlar.

5. Numune Yükleme, MS Analizi için proteolitik sindirim ve Elüsyon

Tüm solüsyon / Örnek aktarım basamağı, bir şırınga pompası yardımıyla gerçekleştirilir ve ölü volum telafi etmek için, tamamlamak için bir kaç dakika daha izin vermelidir: Notve mikroreaktör transfer hatları ile ilişkili es; Gerekli zaman ilgili akış oranları bağlıdır.

1. Mikroreaktör durulayın ve ₂ O / _CH3CN H sulu bir _NH4 çözeltisi _HCO3 (50 mM) infüzyonu ile analiz için hazırlayın: 5 dakika için 2 ul (98 2 h / h) / dk; 250 ul şırınga kullanın.
2. 2 ul örnek çözeltisi infüzyonu ile mikroreaktör protein örneği (1 uM) yük / dakika, 5 dakika boyunca; 250 ul şırınga kullanın.
3. 1-3 dakika / 2 ul dakika mikroreaktör üzerinde adsorbe protein üzerinde tripsin solüsyonu (5 mcM) demlenmeye.
4. TFA asitleştirilmiş sulu bir çözelti ile mikroreaktör durulayarak proteolitik sindirim süreci söndürün (% 0.01 hacim / hacim) _H2O / _CH3CN (98: 2 h / h) 2 ul / dakika, 5 dakika boyunca, 250 ul şırınga kullanın.
5. (Protein TFA bir asitleştirilmiş organik bir çözüm beslerken tarafından mikroreaktör gelen sindirmek akıtılarak% 0.01 başlath / h) _H2O / _CH3CN (50:50 h / h), 300 NL / dakika.
6. MS veri toplama süreci ve ESI voltajı (~ 2.000 V) açın; Adım 3.8 sağlanan veri toplama parametreleri kullanılarak MS veri elde; Triptik peptidlerin elüsyonu izleyin.

6. Veri İşleme

1. Ham MS veri formatı ile uyumlu bir arama motoru ile tandem MS verileri işlemek.
   1. bir organizmanın belirli minimal gereksiz protein veritabanı kullanılarak LTQ-MS ham dosyaları işlemek; , Arama motoru ham veri yüklemek, sırasıyla 2 ve 1 Da ebeveyn ve fragmanı iyon kütle toleransları ayarlayın ve en fazla iki arama çatışmaları cevapsız ile sadece tam triptik parçaları kullanmak; posttranslasyonel modifikasyonlar için izin vermez; sırasıyla% 1 ve% 3, yüksek ve orta-güven yanlış keşif oranları (FDR) ayarlamak ve posttranslasyonel modifikasyonlar için izin vermez.
2. sadece yüksek güven seçmek için verileri filtrelemekpeptid veritabanındaki proteinlere maçları; Protein ve peptid düzeyi sonuçlarını değerlendirmek.

Results

Proteolitik sindirim işleminin temsili bir sonuç, yukarıda tarif edilen mikroreaktörlerde (Şekil 1 ya da 2), Tablo 1 'de verilmektedir sahip bir protein karışımı, eşzamanlı olarak gerçekleştirilir. Tablo belirli bir protein tespit benzersiz peptid dizilerini ihtiva eder, çapraz korelasyon skoru (Xcorr) (yani, ilgili tandem kütle spektrumunda deneysel-to-teorik maçın kalitesini karakterize bir skor), cevapsız bölünmeler sayısını, peptid şarj duru...

Discussion

Bu çalışmada tarif mikroreaktör sağlayan kolay uygulanması en az 30 dakika, MS analizi ve tanılanması için proteinlerin enzimatik sindirim yapmak için deney düzeneği. Geleneksel yaklaşımlara kıyasla bu sistemin farklı avantajları, basitlik, hız, düşük reaktif tüketimi ve düşük maliyetleri içerir. Özel olarak, pahalı bir hareketsiz tripsin boncuk ve kartuş için bir ihtiyaç vardır. Kılcal mikroreaktör hazırlanması basit (Şekil 1A), ve genel olarak, bir kromatografi laboratuvarda bulunan standart kaynaklar...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
İyon tuzağı ESI-MS	Termo Elektron	LTQ LTQ	kütle spektrometresi, tandem MS verilerini elde etmek için kullanılır
XYZ aşaması	Newport	Birden fazla parça	Ev yapımı XYZ aşaması, ticari LTQ nano-ESI kaynağını çeşitli numune dağıtım sistemlerinden girdi alacak şekilde uyarlamak için kullanılır
Stereo mikroskop	Edmund optik	G81-278	Mikroskop, mikroreaktör paketleme sürecini gözlemlemek için kullanılır
Analitik terazi/Metler	VWR	46600-204	Terazi, protein numunelerini tartmak için kullanılır
Ultrasonik banyo/Branson	VWR	33995-540	Sonik banyo, numuneleri karıştırmak/homojenleştirmek ve C18 parçacık bulamacını dağıtmak için kullanılır
Şırınga pompası 22	Harvard Aparatı	552222	Mikropompa, numuneyi ve enzimi paketlenmiş kılcal mikroreaktör
Milli-Q ultra saf su sistemi	EMD Millipore	ZD5311595	MilliQ su sistemi, arıtılmış DI suyu hazırlamak için kullanılır
Pipetleyici/Eppendorf (1.000  &mikro; l)	VWR	53513-410	Pipetatör, küçük hacimli numune çözeltilerini ölçmek için kullanılır
Pipettor / Eppendorf (100  &mikro; l)	VWR	53513-406	Pipetatör, küçük hacimli numune çözeltilerini ölçmek için kullanılır
Pipettor/Eppendorf (10  &mikro; l)	VWR	53513-402	Pipetatör, küçük hacimli numune çözeltilerini ölçmek için kullanılır
Erimiş silika kılcal (100 & mikro; m Kimlik x 360 ve mikro; m OD)	Polymicro Technologies	TSP100375	Bu kılcal, mikroreaktör
Erimiş silika kılcalının (20  &mikro; m Kimlik x 100 ve mikro; m OD)	Polymicro Technologies	TSP020090	Bu kılcal, ESI emitörünün imalatı için kullanılır
Erimiş silika kılcal (50 < &mikro; m Kimlik x 360 ve mikro; m OD)	Polymicro Technologies	TSP050375	Bu kılcal, numuneleri ve eluentleri şırınga pompasından kılcal mikroreaktöre aktarmak için kullanılır
Cam kılcal balta	Supelco	23740-U	Bu, erimiş silika kılcal damarları istenen uzunlukta kesmek için bir araçtır
Tutkal	Eklektik Ürünler	E6000 Craft	Bu yapıştırıcı, ESI yayıcıyı kılcal mikro reaktöre veya mikroakışkan çipe sabitlemek için kullanılır
Epoksi yapıştırıcı	Epo-Tek	353NDT	Bu yapıştırıcı, C18 parçacıklarının yüklendiği mikroakışkan giriş deliğini kapatmak için kullanılır
Ters faz C18 parçacıkları (5  &mikro; m)	Agilent Technologies	Zorbax 300SB-C18	Bunlar, proteinlerin adsorbe edildiği C18 parçacıklarıdır; parçacıklar bir 4  mm x 20 cm C18 LC sütunu Agilent
Şırınga/camdan (250 & mikro; l)	Hamilton	81130-1725RN	Cam şırıngalar, C18 parçacık bulamacını kılcal mikroreaktöre yüklemek ve numuneyi ve eluentleri mikroreaktöre iletmek için kullanılır
Dahili indirgeme PEEK Birliği (1/16 "ila 1/32")	Valco	ZRU1.5FPK	Bu birleşim 250 & mikro'yu bağlamak için kullanılır; l 5 & mikroyu yüklemek için mikroreaktöre şırınga; m parçacık bulamacı
Paslanmaz çelik rakor (1/16 ")	Valco	ZU1XC	Paslanmaz çelik rakor, cam şırınga iğnesini infüzyon kılcal
Mikro hacimli PEEK Tee konektörüne (1/32")	Valco	MT.5XCPK	Peek tee, numune transfer kılcalını kılcal mikro reaktöre bağlamak için kullanılır; yan kolunda, Pt telinin takılmasını sağlar
Tee konektörü (hafif)	Valco	C-NTXFPK	aracılığıyla mikroakışkan çipe ESI voltajı uygulamak için kullanılır.VWR
		66260-126	Pt teli, ESI üretimi için elektrik bağlantısı sağlar ve kütle spektrometresi ESI güç kaynağı
PTFE borusuna (1/16") bağlanır. OD)	Valco	TTF115-10FT	Teflon boru, şırınga iğnesi ile paslanmaz çelik rakor arasında hava geçirmez bir bağlantı sağlamak için kullanılır
PEEK boru (0.015" Kimlik x 1/16 inç OD)	Upchurch Scientific	1565	Peek boru, paslanmaz çelik rakor ile 50  arasında hava geçirmez bir bağlantı sağlamak için bir manşon olarak kullanılır; &mikro; m ID transfer kılcal
PEEK hortumu (0.015" Kimlik x 1/32" OD)	Valco	TPK.515-25	Peek boru, erimiş silika kılcal damarlar ile Peek Tee Temiz kesim polimer boru kesici Valco JR-797 arasında sızıntısız bir bağlantı sağlamak için bir manşon olarak kullanılır
			kesici, 1/16" ve 1/32' önceden kesmek için kullanılır ~ 4-5 cm uzunluğunda parçalar halinde sızdırmaz bağlantılar için manşon olarak kullanılan peek polimer boru
Amber flakon (2 ml)	Agilent	HP-5183-2069	Şişeler, numune çözeltilerini ve C18 parçacık bulamacını hazırlamak için kullanılır;
Amber flakon (4 ml)	VWR	66011-948	Şişeler numune çözeltileri hazırlamak için kullanılır
Polipropilen tüp (15  ml)	Fisher	12-565-286D	Şişeler tampon çözeltileri hazırlamak için kullanılır
Silindir (100 ml)	VWR	24710-463	Silindir, çözücü hacimlerini ölçmek için kullanılır
Silindir (10 ml)	VWR	24710-441	Silindir, çözücü hacimlerini ölçmek için kullanılır
Pipet uçları (1.000 & mikro; l)	VWR	83007-386	Pipet uçları, küçük hacimli numune çözeltilerini ölçmek için kullanılır
Pipet uçları (100 ve mikro; l)	VWR	53503-781	Pipet uçları, küçük hacimli numune çözeltilerini ölçmek için kullanılır
Pipet uçları (10 & mikro; l)	VWR	53511-681	Pipet uçları, küçük hacimli numune çözeltilerini ölçmek için kullanılır
: Cam yüzeyler,	Nanofilm	B270, beyaz taç, 3" x 3"	Bunlar, mikroçip üretimi için cam yüzeylerdir
Erkek somun bağlantısı (1/16")	Upchurch	P203X	Bu bağlantı parçası, transfer kılcal damarlarını mikroakışkan çipe bağlamak için kullanılır
Nanoport montajı	Upchurch	N-122H	Bu bağlantı parçası, transfer kılcal damarlarını mikroakışkan çipe bağlamak için kullanılır
Protein standartları	Sigma	Multiple #
Asetonitril, HPLC sınıfı	Fisher	A955
Metanol, HPLC sınıfı	Fisher	A452
İzopropanol, HPLC sınıfı	Sigma	650447
Trifloroasetik asit	Sigma	302031
Amonyum bikarbonat	Aldrich	A6141
Tripsin, sıralama sınıfı	Promega	V5111