HIV kaynaklı Nöroinflamasyondan bir Fare Modeli İki foton Mikroskop kullanarak Serebral Vasküler Mimarlık Niceleme

Summary

Bu makale, beyindeki vasküler mimarinin in vivo ve ex vivo iki foton mikroskobu kullanılarak ölçülebileceği bir yöntemi açıklamaktadır.

Abstract

İnsan İmmün Yetmezlik Virüsü 1 (HIV-1) enfeksiyonu sıklıkla HIV-1 İlişkili Nörobilişsel Bozukluklar (HAND) ile sonuçlanır ve merkezi sinir sistemi (CNS) içinde kronik bir nöroinflamatuar durum ile karakterizedir, esas olarak mikroglia ve beyinde yerleşik makrofajların viral aracılı aktivasyonu tarafından yönlendirildiği düşünülmektedir. HIV-1 enfeksiyonuna ayrıca serebrovasküler kan akışındaki (CBF) değişiklikler eşlik eder, bu da HIV ile ilişkili kronik nöroinflamasyonun CBF'de ve / veya serebral vasküler mimaride değişikliklere yol açma olasılığını artırır. Bu soruyu ele almak için, HIV'in neden olduğu nöroinflamasyon için bir fare modeli kullandık ve bu enflamatuar ortama uzun süre maruz kalmanın beyin damar sistemine zarar verip vermeyeceğini ve kılcal damar ağlarının seyrekleşmesine neden olup olmayacağını test ettik. Bu yazıda, nöroinflamatuar hastalığın bir fare modelinde (HIV-1 Tat transgenik fareler) kortikal kılcal yoğunluktaki değişiklikleri ölçmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu genelleştirilebilir yaklaşım, ince kafatası kortikal penceresinden kortikal kılcal damarların in vivo iki fotonlu görüntülemesinin yanı sıra fare beyni bölümlerindeki kortikal kılcal damarların ex vivo iki fotonlu görüntülemesini kullanır. Bu prosedürler, sırasıyla kılcal ağların görüntülerini ve z-yığın dosyalarını üretir ve bunlar daha sonra serebral vasküler mimarideki değişiklikleri değerlendirmek için kantitatif analize tabi tutulabilir.

Introduction

İnsan Bağışıklık Yetmezliği Virüsü 1 (HIV-1) virüs enfeksiyonunun akut fazında beyni işgal ve verimli onların aktivasyon yol mikroglia ve beyin ikamet makrofajlar hem bozar - ve her iki konak kaynaklı inflamatuar mediatörlerin ve çözünür HIV-1 serbest bırakma Böyle Tat ve ^(1,2 gözden) gp120 olarak virotoxins. Sonuç olarak, kronik nöroenflamatuar devlet HIV-1 İlişkili Nörokognitif Bozuklukları (EL) ^3-5 patogenezine katkıda düşünülmektedir MSS içinde kurulmuş olur.

HIV-1 Tat veya farelerin merkezi sinir sistemi içinde, interlökin (IL) -17A arasında kronik aşırı mikrovasküler seyrelmesi ^6,7 ile sonuçlandığı g....

Protocol

Hayvan Kaynakları Rochester Üniversitesi Komitesi Üniversitesi Bu yazıda yapılan tüm işlemleri onayladı.

1. Ön cerrahi hazırlanması (ve fare)

1. Gerekli tüm ekipman ile cerrahi alan hazırlayın. Önceden% 70 etanol kullanılarak işlem sırasında kullanılan tüm araçları sterilize edin. İsteğe bağlı olarak, bir cam boncuk sterilizatör kullanın veya araçları sterilize etmek otoklav.
2. Bir izofluran buharlaştırıcı bağlı bir izofluran indüksiyon odasında fare yerleştirin. 1 L / dakikalık bir hızda 4% izofluran seviyelerini ayarlayın.
   Not: astrosit-özgü glial fibriler protein (GFAP) promoteri (HIV Tat-Tg fareleri) ile tahrik ....

Results

İnce kafatası kortikal pencere kortikal kılcal damarların in vivo iki foton görüntüleme (Şekil 1) sağlar. Görüntüye uygun alan çok sayıda, farklı kılcal (Şekil 1A) gösterir. Aynı görüş alanında, herhangi bir arteryel hücre duvarı otofloresansı vardır ve ikinci harmonik üretimi ¹¹ (Şekil 1B) ile indüklenen örneğin kolajen floresan gibi diğer floresan sinyalleri, söz konusu olabilir.

Discussion

Burada tarif edilen yöntem, deneysel modeller / ayarları geniş bir beyin mikrovasküler yapılarını analiz etmek için uygulanabilir. Bu yöntemin başarılı olması için, üç kritik adım hakim olması gerekmektedir. İlk olarak, ince kafatası penceresi kafatası ya da altta yatan beyin zarar vermemelidir. Bu inceltme sırasında kafatası delinme ya da ısı kaynaklı damar kaçağa neden kolaydır. Floresan boya odak düzlemi içine sızabilir ve kılcal belirsiz gibi bu görüntüleme engelleyebilir. Kafatası sık ince kafatası hazırlanması sır.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Leica Mikroskop	Leica Inc.	MZ8
Yüksek Yoğunluklu Işık	Dolan-Jenner	180
Isıtma Yastığı	Stryker	TP3E
T/POMPA	Gaymar Sanayi A.Ş.	TP-500
TEC-4 İzofluran Buharlaştırıcı	Datex Ohmeda	447
Yapay Gözyaşı Jeli Butler	AHS	7312
Povidon-İyot çözeltisi	Aplicare	52380-1855-9
Ekstra İnce Bonn Makas	Güzel Bilim Araçları	14084-08
Dumot #5 Forseps	Güzel Bilim Araçları	11295-10
Dumont #5/45 Forseps	Güzel Bilim Araçları	11251-35
Ferrik Klorür Çözeltisi	Ricca Chemical Company	3120-16
Loctite 454 Prizma Anında Yapıştırıcı Jel	Henkel	45404
Dental Çimento	Çalma	51459
Microtoruqe II El Aleti Kiti	Pearson Dental	R14-0002
005 Mikro Matkap	İnce Bilim Araçları	19007-05
Norland Blade (Dental Microblade)	Salvin Dental	6900
Üretan	Sigma-Aldrich	U2500	Grup 2B Kanserojen
Örgülü	Sütür Ethicon	735G
Vannas Bahar Makas	Güzel Bilim Araçları	15000-03
Arteriyel Kateter	SAI İnfüzyon Teknolojileri	MAC-01	Kateterin ucu, çapını azaltmak için manuel olarak gerildi.
Kan Basıncı Moniter	Dünyası Hassas Aletler	SYS-BP1
Kan Basıncı Dönüştürücü ve Kablo Dünyası	Hassas Aletler	BLPR2
RAPIDLab Kan Gazı Analizörü ve nbsp;	Siemens	248
40 μ l Kılcal Boru	VWR	15401-413
Texas Red-dextran (70.000 MW, tuzlu su içinde çözülmüş 10 mg / kg)	Invitrogen	D-1830
Yetişkin Fare Beyin Dilimleyici	Matrisi Zivic Instruments	BSMAS001-1
Olympus Fluoview 1000 AOM-MPM Çoklu Foton Mikroskobu	Olypmus	FV-1000 MPE
MaiTai HP DeepSee Ti:Sa lazer	Spektrumları-Fizik
ImageJ Software	National Institutes of Health (NIH)		http://rsb.info.nih.gov/ij/download.html
Amira Software	Visage Imaging'den ulaşılabilir.