Bioprinting cellularized dokuya özel Hidrojel Bioink kullanılarak dahil edilmesi

Summary

Birlikte işlevsel ve uygun bir 3-D doku yapıları in vitro tarama uygulamalarında kullanılmak üzere bioprinted edilebildiği bir doku taklit hidrojel bioink sağlayan bir protokol kümesi tarif eder.

Abstract

Biyobaskı, doku mühendisliği organ yapıları oluşturmak için çok yönlü bir biyofabrikasyon yaklaşımı olarak ortaya çıkmıştır. Bu yapılar, hastalarda implantasyon için organ replasmanları olarak ve ayrıca ilaç ve toksikoloji taraması için in vitro sistemlerde kullanılabilecek model "organoidler" olarak daha küçük bir boyutta oluşturulduğunda potansiyel kullanıma sahiptir.

Çok çeşitli biyo-baskı cihazlarının geliştirilmesine rağmen, biyo-baskı teknolojisinin uygulanması, hem biyo-baskı prosedürlerini hızlandıran hem de dokuya özgü ipuçları sağlayarak hücre canlılığını ve işlevini destekleyen malzemelerin mevcudiyeti ile sınırlı olabilir. Burada, dokuya özgü biyokimyasal sinyaller sağlayabilen ve in vivo dokuların mekanik özelliklerini taklit edebilen çoklu çapraz bağlayıcı, 2 aşamalı çapraz bağlama protokolünden oluşan çok yönlü bir hyaluronik asit (HA) ve jelatin bazlı hidrojel sistemini açıklıyoruz.

Biyokimyasal faktörler, güçlü büyüme faktörlerini içeren doku kaynaklı hücre dışı matriks materyallerinin dahil edilmesiyle sağlanır. Doku mekanik özellikleri, geniş bir aralıkta (100 Pa ila 20 kPa) ekstrüde edilebilir biyomürekkepler ve nihai yapı kesme sertliği değerleri elde etmek için değişen moleküler ağırlıklara, geometrilere (doğrusal veya çok kollu) ve fonksiyonel gruplara sahip PEG bazlı çapraz bağlayıcıların kontrollü kombinasyonlarıdır. Bu parametreler kullanılarak, yüksek hücre canlılığı ve ölçülebilir fonksiyonel albümin ve üre çıktısı ile in vitro karaciğer yapıları oluşturmak için karaciğere özgü bir biyomürekkepte birincil karaciğer sferoidlerini biyoyazdırmak için hidrojel biyomürekkepler kullanıldı. Bu metodoloji, çok çeşitli doku yapı tiplerinin biyofabrikasyonu için hidrojellerin gelecekteki özelleştirilmesi için uyarlanabilecek genel bir çerçeve sağlar.

Introduction

Son yıllarda, teknolojiler çeşitli bunları üretmek veya biofabricate isteyen fonksiyonel organ ve dokuların alternatif kaynaklar ihtiyacını giderir kullanılabilir hale gelmiştir. Bioprinting bu teknolojilerin en umut verici olarak ortaya çıkmıştır. Bioprinting 3 boyutlu desen uygulanabilir organı gibi veya doku benzeri yapılar oluşturmak veya kullanılabilir biyolojik parçaların robot ilave imalat biçimi olarak düşünülebilir. Çoğu durumda, ^1, bioprinting 3 (3 boyutlu kullanmaktadır -D) bu suretle yansıtan, hassas pozisyonlarda içine hücreleri ve biyomalzemeleri yatırmak için bir bilgisayar tarafından yönlendirilir baskı cihazı fizyolojik mimariler anatomik taklit. ² Bu cihazlar hücre agrega şeklini alabilir bir "bioink" yazdırmak, hidrojeller kapsüllü hücreleri veya yapışkan sıvılar veya hücre tohumlanır mikro taşıyıcılar, hem de hücresiz pla gibi mekanik yapı veya hareket sağlayan hücre içermeyen polimerlerceholders. ^3,4 bioprinting işleminden sonra, elde edilen yapı, işlev doku ya da organ yapılarına olgunlaşmış ve amaçlanan son uygulama için de kullanılabilir. ^5,6 Bugüne kadar, tam bir tam olarak işlevsel insan boyutunda organı baskılı edilmemiştir, ancak araştırma ve geliştirme bioprinting birincil uzun vadeli bir hedef olmaya devam etmektedir. ² Bununla birlikte, "organoid" doku yapıları şu anda patoloji modelleme, ilaç geliştirme ve toksikoloji tarama dahil olmak üzere uygulamaların, bir dizi yürütülmektedir küçük ölçekli.

Araştırmacılar bioprinting teknolojisini uygulayarak karşılaştığım en önemli engellerden biri çok az malzeme bioprinting açık amaç için geliştirilmiş olmasıdır. etkin bir bioprinting başarılı olabilmek için, bir biyomalzeme 4 temel gereksinimleri karşılaması gerekir. Biyo materyal birikimi sağlamak için 1), uygun mekanik özelliklere sahip olması gerekir (bir jel veya I gibi bir meme boyunca ekstrüzyonlaBir damlacık olarak nkjet) birikmeden sonra bir 3-D yapının bir bileşeni olarak şekli korumak için 2) yeteneği, 3) 2, önceki özelliklerinin kullanım kontrolü, ve 4), bir hücre için uygun ve destekleyici ortamda tüm yeteneği bioprinting prosedürünün aşamaları. ⁷ Tarihsel olarak, işi bioprinting yerine sıkça bioprinting ve sonraki baskı sonrası uygulamalar için gerekli özelliklere sahip bir biyo materyal tasarlama, onların uyumluluk için dikkate olmadan bioprinting cihazlarda mevcut geleneksel biyomalzemeleri istihdam etmeye çalıştı.

bioinks çeşitli kaplama ve üretim donanımı ile daha iyi son zamanlarda geliştirilmiştir. genellikle iki habercisi olarak yetersiz mekanik özellikleri, ya da eğer memeleri yapışmasına neden olabilir basılı veya sıkma işlemi sırasında kırılmış olma polimerize hidrojeller ile sıvı çözümler bulunması nedeniyle standart hidrojel sistemleri önemli sorunlar oluşturmaktadır. Ekibimiz, hem de tasarımlarıyla olarakRS, hidrojel substratlar içine hücre sferoid baskı, Mikro kapiller tüpler ^5,8 hücresi ve hidrojel filament ekstrüzyon dinamik çapraz bağlama özelliklerine sahip ^9-11 ekstrüde hiyalüronik asit (HA) -Altın nanopartikül hidrojeller de dahil olmak üzere, bu bioprinting sorunları çözmek için çeşitli hidrojel formülasyonlar, araştırdık , fotopolimerleşebilen kullanarak hidrojel sertlik ¹² zamansal kontrolü, ¹⁷ HA ve jelatin, ¹³ fibrinojen-trombin tabanlı çapraz bağlanmasını, ^14,15 iyonik değişim aljinat-kolajen jelleri, ¹⁶ metakrile ve son zamanlarda hızla polimerize ultraviyole ışık (UV) -initiated çapraz

Bu örnekler etkin bir bioprinted seçebilirsiniz üreten malzemelerin uygulanabilirliğini göstermek. Ancak, donanım ile entegre ek olarak, başarılı bir şekilde, sürekli ve işlevsel 3 boyutlu doku yapıları oluşturmak için, biyo materyaller hücre korumada yardımın biyokimyasal ve mekanik ipuçları içermelidircanlılığı ve işlevi. Bu ek faktörler, biyokimyasal ve mekanik profiller, bioprinted doku yapıları başarılı fonksiyonu üzerinde önemli bir etkiye sahip olabilir.

Her iki hücre ve doğal hücre-dışı matrisi (ECM) gibi büyüme faktörleri ve diğer hücrelere diğer sitokinler gibi sinyal molekülleri geniş yelpazeli sorumludur. Bu sinyallerin birleşimi dokudan dokuya değişir, ancak, hücre ve doku davranışını düzenleyen son derece kuvvetli ve etkili olabilir. ^18, araştırılmış olan farklı organlardan doku spesifik ECM bileşenleri kullanan ve bir hidrojel olarak veya bir hidrojel bir parçası olarak uygulanması başarısı. ^19-21, belirli bir doku decellularizing o ince öğütme ve eriterek oluşan bu yaklaşım, bir dokudan dokuya özel biyokimyasal sinyallerin üretilmesi için 3-D hidrojel yapılarında dahil edilebilir kullanılabilir. ²²

Buna ek olarak,yaygın vücuttaki dokular katılıkları geniş bir yelpazede işgal olduğu belgelenmiştir. Bu nedenle ^23, ayarlamak için yeteneği gibi elastik modülü E 'veya kesme elastik modülü G' olarak biyomateryaller, mekanik özellikleri, doku mühendisliğinde yararlı bir araçtır . Yukarıda tarif edildiği gibi, bioink mekanik özellikler üzerinde kontrol hedef organ Çeşidi ile aynı olduğu daha sonra elastik modül seviyesi elde edilebildiği de daha sonraki bir noktada, ikincil çapraz bağlama ile manipüle yumuşak bir jel kullanılarak ekstrüzyon bazlı biofabrication sağlar. Örneğin, biyomalzemeler çalışması için bu organoids yeteneği artan teoride ^24,25, yerli karaciğer gibi ²³ 5-10 kPa sertliğine uyum veya yerel kalp dokusu gibi 10-15 kPa sertliği maç için özelleştirilmiş olabilir kendi ana doku meslektaşları benzer bir şekilde. hücre fenotipinde çevresel sertlik etkisi Exp olmuşturÖzellikle kök hücreleri ile ilgili olarak, son yıllarda lored. Engler ve ark., Doku elastikiyeti substrat olduğunu eşleşen soylar karşı mezenkimal kök hücreleri (MSC) sürüş destekli bu alt tabaka esnekliğini göstermiştir. ²⁵ Bu kavram daha kas içine farklılaşma, kalp fonksiyonu, karaciğer fenotip, hematopoetik kök hücre çoğalması için araştırılmaktadır ve kök hücre tedavi potansiyelinin bakım. ^24,26-29 ayarlamak için güçlü olmak farklı elastik modülünün bir hidrojel doku yapıları biofabricate için kullanılacak biyomalzeme önemli bir özelliğidir. ³⁰

Burada ekstrüzyon bioprinted edilebilir bir hidrojel sistemi formüle etmek bizim laboratuvarda kullanılan çok yönlü bir yaklaşımı temsil eder ve belirli bir doku tipi biyokimyasal profil içeren ve 2) doku Çeşidi elastik modülü taklit) 1 özelleştirilmiş bir protokol tarif . Bu gereksinimleri ele alarak, biz p hedefliyoruzin vivo fizikokimyasal ve biyolojik özelliklerini özetlemek bir malzeme rovide dokusudur. ^31. Burada tarif edilen modüler hidrojel bileşik sistem ekstrüde bioinks üretmek üzere bir çok çapraz bağlama yaklaşım yararlanır ve stabilize etmek için ikinci bir çapraz bağlanma sağlar ve sertliğini artırır son ürünlerin doku tiplerinin aralığında uyum sağlamak. Biyokimyasal özelleştirme doku spesifik ECM bileşenleri kullanarak karşılanmaktadır. bir göstergesi olarak, fonksiyonel karaciğer organoid yapıları bioprint bu hidrojel sisteminin bir karaciğere özgü çeşitli kullanır. açıklanan protokol, özel bir 3-D bioprinting cihazı kullanır. Genel olarak, bu protokol çoğu ekstrüzyon tabanlı yazıcılara adapte edilebilir, özel baskı parametreleri cihazın her türü için önemli ölçüde değişir ve kullanıcı tarafından test gerektirir.

Protocol

1. Hidrojel Bioink Formülasyonlar ve Hazırlama İşlemi

1. , Dokuya özel bir biyokimyasal profiller temin önce karaciğer için tarif edildiği gibi doku spesifik ECM çözümler sindirimi hazırlanması için. ²⁰
   Not: Genel olarak, bu ECM özeti kullanıldığında son hidrojel bioink hacminin% 40 ihtiva edecektir. ECM özeti çözeltisi birkaç yüz mililitre hazırlanabilir bölünmüştür ve ileride kullanılmak üzere -80 ° C'de dondurulabilir.
2. bir foto-başlatıcı, 2-hidroksi-4 'çözülür, formülasyonun hidrojel için -% 0.1 (2-hidroksietoksi) -2-methylpropiophenone, su içinde ağ / hac.
   Not: 50-100 mi aralığında hacimleri önceden hazırlanabilir ve birkaç ay boyunca 4 ° C'de ışıktan korunmuş olarak saklanmıştır.
3. Hidrojel bioinks oluşturmak için, ilk olarak suda foto-başlatıcı çözeltisi içinde hiyalüronik asit (HA) hidrojel kitleri baz malzemesi bileşenleri çözülür.
   1. Su arıtımı ayrı HA tiolatlanmış ve tiolatlanmış jelatin çözülürhotoinitiator çözeltisi (aşama 1.2) hac çözeltiler / ağ% 2 olmak için.
   2. % 8 ağırlık / hacim solüsyonu yapmak üzere, suda foto-başlatıcı çözeltisi (aşama 1.2) polietilen glikol diakrilat (PEGDA), hidrojel kitlerinde çapraz bağlayıcı, eritin.
   3. % 8 ağırlık / hacim solüsyonu yapmak üzere, suda foto-başlatıcı çözeltisi (aşama 1.2) polietilen glikol (PEG), 8-kollu alkin (10 kDa MW) içinde çözülür.
4. ek özelleştirme mümkün olmasına rağmen, genel olarak, aşağıdaki şema kullanılarak hidrojeller oluştururlar.
   1. genel olmayan doku olarak% 2 HA tiolatlanmış 4 parça, 4 parça% 2 tiolatlanmış jelatin, 1 kısım çapraz bağlayıcı 1, 1 kısım çapraz bağlayıcı 2 8 parça doku, ECM çözümü ve 2 parça hepatosit kültür ortamı (HKM) (ya da 10 parça su birleştirin e özgü hidrojel).
      Not: Ek modifiye edilmemiş HA ya da jelatin daha düzgün bioink ekstrüzyonunu yapmak için ilave edilebilir. Bu, aşağıda açıklanmaktadır.
5. Kullanmadan önce karıştırmak için 10 saniye (10 üzerinden hız 10) yüksek üzerinde ortaya çıkan karışımın Vortex.
6. Hidrojel bioink kullanımı
   1. ekstrüzyon veya bioprinting testi için, bir şırınga ya da yazıcı kartuşu içine karışımı aktarın ve 37 ° C sıcaklıkta 30 dakika boyunca (aşama 1 çapraz bağlama) için kendiliğinden çapraz bağ sağlar.
   2. Reolojik ölçümler için, 35 mm Petri kabı içine karışımı aktarın ve 30 dakika boyunca çapraz sağlar.
      Not: Karışım hemen tiol akrilat bağı oluşumu yoluyla çapraz bağlanması için başlar ve viskozite artmaya başlar. Karışım transferi sırasında bir pipet veya şırınga tıkanmasını önlemek için 10 dakika içinde bir şırınga, baskı kartuşu, ya da hedef konuma transfer edilmelidir.
   3. İkinci çapraz bağlama (Aşama 2) arzu edildiği zaman, bir tiol-alkin polimerizasyon reaksiyonunu başlatmak için evre ultraviyole ışığı (365 nm, 18 W / ^cm2) ile 1-çapraz bağlanmış jeller ışın tedavisi.
      Not: Işınlama süresi malzemenin yüzey alanına bağlıdır. Genel olarak, malzemenin bir santimetre karelik, ancak 1- gerektirirBu UV gücü UV maruz kalma 2 sn.

2. Yazıcı Uyumluluk Testi

1. Standart şırınga ve küçük iğne uçları (20-30 gauge) kullanılarak basit ekstrüzyon testleri ile laboratuvar tezgah üzerinde bioprinting cihazlar, deney ekstrüzyon özellikleri ile entegrasyon test öncesinde.
   1. az veya hiç darbe ile hidrojel sorunsuz haddelenmiş filamentler elde etmek için standart bir şırınga ile bioink itin. çizgiler veya basit desen ekstrüzyon başarısını belirlemek için yeterlidir.
2. bioprinter entegrasyonu için yazıcı kartuşları içine pipetleme hazırlıklarını bioink yük ve bioink 30 dk kartuş içinde kendiliğinden aşama 1 çapraz bağlanmasının geçmesi için izin verir.
   Not: bioink hacmi uygulamaya bağlıdır ve kullanıcı tarafından belirlenmelidir. Yazıcı kartuşları benzer ya da bioprinter cihazla uyumlu şırınga olabilir.
3. ekstrüzyon uyumluluğu değerlendirmekbioink kullanarak basit bir desen yazdırarak bioprinting için. Örneğin, paralel çizgilerin oluşan 7 x 7 mm desenini yazdırmak. Baskı (örneğin, 20 kPa pnömatik basınç) uygulanır ise yaklaşık 300 mm / dakika bir hızda XY düzleminde yazıcı kafası hareket eder.
   Çeşitli büyüklüklerde kafası meme çapları kullanılabilir, ancak 400-500 mikron çapında delikleri olan konik püskürtme 250-350 um aralığında sferoidler baskı için uygun olunur.
   1. ekstrüde malzemeler pütürlü veya düzensiz ise, 2.4 adım bakın veya evre 1 çapraz malzemeyi yumuşatmak için PEGDA miktarını azaltır. Düzgün hazırlanmış bioink formülasyonlar istenilen desen veya mimarileri hassas birikimi sağlayan sorunsuz a'ya.
      Cihazın her türü için önemli ölçüde bu tür özel baskı parametreleri gibi ³² tarif kullanım bioprinting prosedürleri, özellikle baskı oluşturmak doku için evde tasarlanmış özel bir 3-D bioprinting cihazı değişir ve testin gerektirir. NotKullanıcı tarafından örn.
4. Ekstrüzyon özelliklerini geliştirmek bioinks değiştirilmemiş HA ve jelatin ek (1.5 mg / ml ve 30 mg / ml) ile.

Primer Karaciğer Yapıları ile Bioprinting tarafından 3. Doğrulama

1. Hücresel bileşen ³³ olarak açılan yöntemleri asarak 3-D birincil hücre karaciğer parçacıklarının hazırlayın
   Not: Bioprinting da hidrojel bioinks içinde süspansiyon haline tek tek hücreler ile parçacıklarının olmadan gerçekleştirilir, ancak bunun yerine edilebilir. Sferoidler hücre-hücre etkileşimleri hızlandırmak ve işlevselliği oluşturmak için burada istihdam edilmektedir. Kullanılan sferoitlerin ve hücre sayısı, belirli uygulamaya bağlıdır ve kullanıcı tarafından belirlenmelidir. Bu adımlar, steril malzemeleri kullanarak, steril koşullar altında yapılmalıdır.
   1. hepatosit bazal ortamı (HBM) ve steril filtreleme HCM ek bileşen kiti çözülmüş içeriği ekleyerek HCM hazırlayın.
      1. ek bileşenleri un çözülmesıvı til.
      2. gentamisin sülfat / amfoterisin B, 0.5 mi;, hidrokortizon 21-hemisüksinat, 0.5 mi, insülin, 0.5 mi, 10 mi, büyükbaş hayvan serum albümini [yağlı asit serbest]; 0.5 mi ek parçaları (askorbik asit ekleme insan rekombinan epidermal büyüme faktörü , 0.5 mi, 500 mi HBM'ye), 0.5 ml aktarılması.
      3. Bir şişe üstü filtre ünitesi veya bir şırınga ucu filtre kullanarak bir 0.45 mikron ya da 0.22 mikron filtre ile steril filtre.
   2. Her hücre tipi üreticinin talimatlarına göre çözüldükten sonra bir hemasitometre sayarak birincil insan hepatositlerin, Kupffer hücreleri ve stellat hücrelerin hücre yoğunluğu belirlemek.
   3. konik bir tüp içinde 37 ° C'ye kadar ısıtıldı edilmiştir HCM ortam hücre sayısına göre bir 80:10:10 oranında primer insan hepatositleri, Kupffer hücreleri ve stellat hücreleri birleştirir.
      Not: kullanılan ortam hacmi genel hücre sayısı uygulamaya özel bağlıdır ve th belirlenmelidire kullanıcı.
   4. 20 ° C'de 520 x g'de 5 dakika boyunca bir hücre süspansiyonu santrifüj.
   5. Hücre pelet geride bırakarak, süpernatant aspire.
   6. 40 ul ortam 1.000 hücreleri ihtiva eden bir hücre süspansiyonu elde etmek için HCM medya hücre pelletini. sferoidler sayısı üretilen toplam hacim bağlıdır.
   7. 96 göz formatındaki Asılı damla plakalar hücre süspansiyonu aktarın. Çok hücreli küreler oluşturan 3 gün boyunca% 5 _CO2 içinde, hcm Her bir oyuğa, yaklaşık 1.000 hücre toplam ekleyin ve 37 ° C 'de muhafaza.
   8. Bir pipet kullanarak asılı damla plaka karaciğer parçacıklarının toplayın. steril bir 15 ml konik tüp aktarın.
2. karaciğere özgü hidrojel bioink olarak Bioprint karaciğer sferoidler
   1. çapraz bağlantı sağlayıcı olarak% 8 PEGDA ve% 8 8-kollu PEG alkin kullanılarak, Kademe 1 de tarif edildiği gibi, karaciğer ECM içeren hidrojel bioink bir formülasyonunun hazırlayın. resu onun yeteneği için bu arada kullanınyerli karaciğer dokusuna kayma elastik modülü yakın bir hidrojel sonuçtaki.
   2. sferoidler onlar Adım 3.1.7 yerleştirildi olan konik tüpün dibine dinlendiriniz. Bu sfero büyüklüğü ve yoğunluğuna göre, ancak genellikle 1-2 dakika içinde gerçekleşir değişir. dikkatle aspire veya pipet ile tüm ortamları çıkarın.
   3. küremsiler içeren konik tüp taze hazırlanmış hidrojel bioink çözeltisi istenilen hacmi aktarın. Genel olarak, uygun bir hacmi,% 10 basılacak 3-B yapısı hacminden% 25 daha fazladır. Dikkatle hidrojel bioink çözeltide parçacıklarının tekrar süspansiyon aşağı yukarı pipet ve. Bir pipet veya serolojik pipet kullanarak bir bioprinter kartuşa aktarın.
   4. bioprinter kartuş içinde, çözelti, 30 dakika boyunca, ilk çapraz bağlama aşaması (tiyol-akrilat reaksiyonu) girmesine neden olurlar.
      Not: sfero boyutuna bağlı olarak, kartuş yavaş yavaş döndürüldüğünde gerekebilir ya da içerisinde karıştırılabilir gerekebilirsteril bir spatula kademe 1 çapraz bağlanma sırasında bioink boyunca dağılmış sferoidler tutmak. Bu süspansiyon hücreleri yerine parçacıklarının hazırlanan bioinks için bir gereklilik azdır.
      Not: Sahne 1 çapraz bağlama sonrasında, kullanıcıların birkaç saatlik bir çalışma penceresi var. Ancak, hücre canlılığını geliştirmek için hızlı bir şekilde bioprinting işlemini gerçekleştirmek tavsiye edilir.
   5. evre 1 çapraz bağlama ardından, primer karaciğer parçacıklarının (veya diğer hücreleri) içeren istenen hidrojel yapıları oluşturmak için bir bioprinting aygıtı kullanın.
      Not: Bu teknoloji yapılarının çeşitli biofabricating için bir sistem sunmaktadır. yapıları baskılı edildiği gibi toplam hacmi, hücreler ya da küresel cisimler, basılı yapı geometri sayısı ve alt tabaka gibi parametreler kullanıcı hedeflerine büyük ölçüde bağlıdır.
   6. arzu edilen konfigürasyona içine tevdiattan sonra, CO stabilize ikincil bir çapraz bağlama mekanizmasını başlatmak için 2-4 saniye UV ışığı tatbikistenen seviyeye nstructs ve artan sertlik.
      Not: PEG-alkin konsantrasyonu ve bu nedenle genel olarak nihai çapraz bağlama yoğunluğu, esas olarak Nihai yapının sertliğini kontrol eder.
   7. çok katmanlı yapılar oluşturmak üzere adım 3.2.4 ve 3.2.5 tekrarlayın.

Results

Yukarıda açıklanan prosedürler doğru takip edildiğinde, hidrojeller hedef doku tipine özgü bir biyokimyasal profil içermelidir, ²⁰ bioprinting ve nihai elastik modülü, ³⁴ üzerinde kontrol yüksek derecede izin ve doku yapılarında yaşayabilir işlevsel hücreleri destekler.

hidrojel Özelleştirme
En iyi taklit ana karaciğer, hidrojel bioink karaciğer ECM çözümleri ve bir büyüme faktöründe...

Discussion

İnsanlarda ya da in vitro tarama uygulamaları için nihai kullanım için, 3-D doku yapıları biofabricate çalışırken dikkate kritik çeşitli bileşenler vardır. biofabrication cihazın kendisi son yapı ulaşmak için genel metodolojiyi belirler iken uygun hücresel bileşenleri kullanılarak, uç potansiyel işlevselliği belirler. o ikili rolleri hizmet olarak üçüncü bileşen, biyomalzeme, eşit derecede önemlidir. Özellikle, biyo materyal bileşeni biofabrication donanım (yani, bioprinters) ve aynı zamanda potansiyel...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Hyaluronik asit	Sigma	53747
Jelatin	Sigma	G6144
2-Hidroksi-4 & prime; - (2-hidroksietoksi) -2-metilpropiyofenon	Sigma	410896
Hyaluronik asit ve jelatin hidrojel kiti (HyStem-HP)	ESI-BIO	GS315	Kit, Heprasil (tiyollenmiş ve heparinize hyaluronik asit), Gelin-S (tiyollü jelatin) ve Extralink (PEGDA)
PEG 8 kollu alkin, 10  kDa	Creative PEGWorks	PSB-887
Birincil insan hepatositleri	Üçgen Araştırma Laboratuvarları	HUCPM6
Birincil insan karaciğer yıldız hücreleri	ScienCell	5300
Birincil insan Kupffer hücreleri	Yaşam Teknolojileri	HUKCCS
Hepatosit Bazal Medya (HBM)	Lonza	CC-3199
Hepatosit Ortamı Ek Kit	Lonza	CC-3198	HCM SingleQuot Kitleri (askorbik asit, 0.5  Ml; sığır serum albümini [yağ asidi içermez], 10  Ml; gentamisin sülfat / amfoterisin B, 0.5  Ml; hidrokortizon 21-hemisüksinat, 0.5  Ml; insülin, 0.5  Ml; insan rekombinant epidermal büyüme faktörü, 0.5  Ml; aktarma, 0.5  ml)
Triton X-100	Sigma	T9284	Diğer üreticiler tamam.
Amonyum hidroksit	Fischer Scientific	A669	Diğer üreticiler tamam.
Taze domuz kadavra dokusu	n/a	n/a
Liyofilizatör	herhangi bir	n/a
Dondurucu değirmeni	herhangi bir	n/a
Biyoyazıcı	n/a	n/a Burada	açıklanan biyoyazıcı özel olarak şirket içinde üretilmiştir. Genel olarak, hidrojel malzemelerin bilgisayar kontrollü ekstrüzyon bazlı baskısını desteklemeleri koşuluyla diğer cihazlar yeterlidir.
Asılı damla hücre kültürü plakası	InSphero	CS-06-001	InSphero GravityPlus 3D Kültür Platformu