c-FOS Protein Immünohistolojik Algılama: Belirli Fizyolojik Yanıtları ilgilendim Merkez Pathways bir Marker Olarak Faydalı Aracı<em&gt; İn Vivo</em&gt; ve<em&gt; Ex Vivo</em

Anne-Sophie Perrin-Terrin; Florine Jeton; Aurelien Pichon; Alain Frugière; Jean-Paul Richalet; Laurence Bodineau; Nicolas Voituron

doi:10.3791/53613

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

c-FOS Protein Immünohistolojik Algılama: Belirli Fizyolojik Yanıtları ilgilendim Merkez Pathways bir Marker Olarak Faydalı Aracı

34.2K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/53613

⸱

25 Nisan 2016

Anne-Sophie Perrin-Terrin¹^,² , Florine Jeton¹^,³ , Aurelien Pichon¹^,³^,⁴ , Alain Frugière² , Jean-Paul Richalet¹^,³ , Laurence Bodineau² , Nicolas Voituron¹^,³

¹Sorbonne Paris Cité, Laboratory “Hypoxia & Lung” EA2363, University Paris 13, ²UPMC Univ Paris 06, INSERM, UMR_S1158 Neurophysiologie Respiratoire Expérimentale et Clinique, Sorbonne Universités, ³Laboratory of Excellence GR-Ex, ⁴Laboratory MOVE (EA 6314), University of Poitiers

Bu makalede

Özet

Burada, in vivo ve ex vivo spesifik fizyolojik yanıtlarda yer alan nöronal popülasyonların tanımlanması için kullanılan klasik bir teknik olan c-FOS protein immünohistolojik tespitine dayalı bir protokol sunuyoruz.

Özet

Birçok çalışma, belirli fizyolojik düzenlemelere yer alan beyin bölgeleri belirlemek ve harita çalışırlar. Proto-onkogen, c-fos, ani erken gen çeşitli uyaranlara yanıt olarak nöronlar olarak ifade edilir. protein ürünü hali hazırda aktiviteleri değişiklikleri göstermek nöron gruplarını harita c-fos algılama kullanımına yol immünohistokimyasal teknikler ile saptanabilir. Bu yazıda, hipoksi veya Hiperkapniye solunum sistemi adaptasyonu dahil beyin sapı nöronal popülasyonlarının belirlenmesi üzerinde duruldu. Iki yaklaşım hayvanlarda in vivo nöral popülasyonlarının belirlenmesi amacı ile tarif edildi ve ex vivo deafferented beyin preparasyonlarda. İn vivo koşullarında, hayvanlar. Hiperkapnik ya da hipoksik gaz karışımlarının maruz ex vivo, deafferented preparasyonlar hipoksik ya hiperkapnik yapay serebrospinal akışkan madde ile süperfuz edildi. Her iki durumda da, ya kontrol in vivo hayvan ya da eX in vivo preparasyonlar normoksik ve normokapnik koşullar altında muhafaza edilmiştir. Bu iki yaklaşımın karşılaştırılması nöronal aktivasyon yani kökeni, belirlenmesini sağlayan periferal ve / veya merkezi. In vivo ve ex vivo, brainstems, toplanan sabit ve bölüme dilimlenmiş bulundu. kesitler hazırlandı kez, c-FOS proteini immünhistokimyasal tespiti hipoksik veya hiperkapnik uyarılarla aktive hücrelerin beyin sapı gruplarını belirlemek amacıyla yapılmıştır. Etiketli hücreler beyin sapı solunum yapılarda sayıldı. kontrol koşulu, hipoksi veya hiperkapni ile kıyaslandığında, böylece santral solunum sürücü adaptasyonu nöral yolların kurucu birkaç spesifik beyin sapı sitelerinde c-FOS işaretli hücrelerin sayısı arttı.

Giriş

C fos geni 1980 ^1,2 başında ilk kez belirlendi ve ürün gen aktivatör özellikleri ^3,4 sahip olan bir çekirdek protein olarak 1984 yılında tanımlanmıştır. Bu nöron uyarılması ile ilişkili uzun vadeli mekanizmalarına katılır. Gerçekten de, nöronal aktivite değişiklikler transkripsiyon faktörü, c-fos üretimini indükleyen erken gen c-fos ekspresyonunu indükler ikinci haberci sinyal iletim yol açar. Ikinci geç genlerinin ekspresyonunu başlatan ve böylece uyarıcı ⁴ birçok farklı türde sinir sisteminin adaptif karşılıklara katılmaktadır. Böylece, 1980 ^5,6 yılı sonundan itibaren, c-FOS protein tayini sıklı....