Canlı zayıflatılmış intradermal aşılama sonrasında Fare Deri ve akan lenf düğümü gelen Myeloid Hücre İzolasyonu Plasmodium Sporozoitler

Sıtma her yıl yarım milyondan fazla kişi öldü dünyanın en ölümcül bulaşıcı hastalıklardan biridir. Plasmodium hastalığın nedensel maddesi ile enfeksiyon, bir eritrositik öncesi (PE), faz başlar. Bu aşamada, bir dişi anopheline türü sivrisinek tarafından konak deriye enjekte sporozoitler kan yoluyla karaciğere ulaşır ve hastalığın belirtilerini kırmızı kan hücreleri enfekte ve neden parazit formları içine iç hepatositler ayırt.

Plasmodium PE aşamaları, anti-sıtma aşısı için ayrıcalıklı bir hedef temsil etmektedir. Nitekim, bu tür radyasyon zayıflatılmış sporozoitlerle (RAS) olarak bu aşamaların karşı zayıflatılmış aşılar, canlı, genetik tutuklandı parazitler (GAP) ya da kemoprofilaksi ve sporozoitler (CPS) kemirgen ve insan ana ^1-9 hem korumak için kapasitelerini ortaya koymuşlardır. kemirgen modelinde, çok aşılama çalışmaları intravenöz bağışıklık kullanılarak yürütülmektedirKoruyucu etkinlik açısından altın standart hangi. Ancak, cilt aşamasında tanımı ve koruması sağlamaya cilt ilişkili lenf düğümüne (DLN) önemi PE aşaması algı değişti ve enjeksiyon intradermal yolunun önemini vurgulamıştır. P. Intravital görüntüleme kemirgen derisine enjekte berghei sporozoitler aşı sadece ~% 25 kan yoluyla karaciğer ulaşır göstermiştir. ~ Geri kalan% 75, küçük bir oranda deri hücrelerinin ^12,13 içinde haftalarca canlı dönüştürmek ve kalabilir proksimal dLn (~% 15) ve cilt (~% 50) ^10,11 arasında dağıtır. Ayrıca, daha sonraki çalışmalarda, intradermal aşılamadan sonra etkin koruyucu bağışıklık kurulması özellikle parazit spesifik CD8 ⁺ T hücreleri, aktive deri dLn, yer alır ve sadece marjinal karaciğer veya dalak-dLNs ^14,15 bu tarif.

İkençalışmaların çoğu koruyucu bağışıklık yanıtının kurulmasında rol efektör hücrelerin karakterizasyonu üzerine yoğunlaşmıştır, çok daha az doğuştan gelen bağışıklık sistemi ile özellikle etkileşimleri, deri içine enjekte canlı zayıflatılmış parazitlerin akıbeti hakkında bilinmektedir. Özel olarak, CD8 ⁺ T hücreleri için, parazit antijen alımı, işleme ve sunumunda rol alan antijen sunan hücreler karakterizasyonu PE antijen alıcı deri ve dLn bölümlerinde hem oluşabilir bilerek kritik önem taşımaktadır. Önceki intravital görüntüleme çalışmaları sporozoitler ve dendritik hücreler arasındaki ilk etkileşimler dLn ^10,17 gözlenmiştir ise enfeksiyon sivrisinek ısırığı ¹⁶ Aşağıdaki deri, parlak floresan Lys-GFP pozitif hücrenin erken akışını tarif. Daha yakın zamanda, sivrisinekler tarafından deri aşılanmış sporozoitler deri hem de dendritik ve düzenleyici T hücrelerinin hareketliliği artırdığı bildirilmiştirfareler, antijen sunan hücre bir azalma sayısı dLn ¹⁸ gözlenmediğini gösterdi.

Belirlemek ve daha kesin olarak, lökosit alt kümelerini cilt alınmış ve RAS ¹⁹ dozlarının immünize intradermal enjeksiyonu takiben parazit ile etkileşim gibi da dLn gelen ölçmek için amaçlanmıştır. Bu bağlamda, her iki dokulardan miyeloid hücreler (CD45 ⁺ CD11 ⁺⁾ izole edilmiş ve sitometrisi = çoklu parametre akış ilgi subpopülasyonunun karakterize edilir. Leishmania majör deri enfeksiyonu ²⁰ erken evrede açıklanan immün yanıt ile tutarlı, enjeksiyon sporozoitlerden birincil konak yanıtı inflamatuar monositler (CD45 ⁺ CD11 b takip polimorfonükleer nötrofillerin (CD45 ⁺ CD11 b ⁺ Ly6G ⁺ Ly6C ^int) bir ardışık işe oluşur ⁺ Ly6G ^- differenti temelinde tanımlanan Ly6C ⁺⁾Ly6G ve Ly6C yüzey belirteçleri al ifadesi.

Farenin deri miyeloid hücrelerin izole edilmesi ve dLn enfekte sivrisinek tükürük bezlerinden ekstre RAS dozlarının immünize intradermal enjeksiyonu takiben burada bir protokol açıklar. Tekrarlanabilir intradermal enjeksiyonları ve doku işleme enfekte dokular içinde hücre popülasyonu infiltre fenotipik değişiklikleri ölçmek için kritik adımlar vardır. Aşağıda ayrıntılı bir yaklaşım güvenilir bir deney Plasmodium paraziti cildin ve dLn enflamatuar tepkiyi değerlendirmek için çeşitli deney sistemlerinde uzatılabilir içerir.

Tüm işlemler Pasteur Enstitüsü komitesi tarafından ve yerel Hayvan Deneyleri Etik Komitesi (Etik kurul IDF-Paris 1, Paris, Fransa; anlaşma numarası: 2012-0015) tarafından onaylanmış ve yürürlükteki kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

1. Malzemeler ve Reaktifler

1. Daha önce ²¹ açıklandığı gibi 3-5 gün ortaya çıkması ve arka sonrası enfekte olmuş fareler üzerinde beslemek dişi Anopheles stephensi sivrisinek (Sda500 suşu) kullanın.
2. Kullanım parazitler yapısal ısı şok proteini 70 (HSP70) promoteri kontrolü altında yeşil floresan proteini (GFP) geni, Plasmodium berghei ANKA klonu. Bu parazit yaşam döngüsü ²² boyunca parlak floresan verir.
3. Kullanım dişi C57BL / 6JRj fareleri (7 haftalık).
   NOT: açıklanan protokol kullanılan tüm reaktifler Malzemeleri / Ekipman güçlü T listelenmiştir.

1. Bulaşıcı kan yemekten sonra 18-25 gün arasında, toplamak ve daha önce ²¹ açıklandığı gibi buz üzerinde bir 15 ml tüp içine sivrisinekler soğuk uyutmak. Dikkatle tersini tüp Petri kabı üzerine aktarabilirsiniz. buz üzerinde böcekleri korumak ve γ- veya x-radyasyon 12 Krad dozuna sivrisinek maruz bırakmaktadır.
2. Işınlanmış sivrisinek tükürük bezlerinden gelen zayıflatılmış sporozoit yalıtmak daha önce ²¹ nitelendirdi. sporozoit serbest ezmek yavaşça buz üzerinde 1 x Dulbecco fosfat tamponlu tuz (DPBS) (15 ul) etrafında küçük bir hacme enfekte tükürük bezleri toplayın ve.
   Not: kendi güçlü bir ifade ile kanıtlandığı gibi kritik bir küçük bir hacim içinde oldukça konsantre bir parazit süspansiyonu enjeksiyonu, önceden seçilmiş de enfekte sivrisinek yüksek sayıda tükürük bezi yeterli sayıda hasat etmek gereklidirYeşil-floresan.
3. kümeleri ve sivrisinek artıkları yok etmek için düşük bir yapışma 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü için uyarlanmış bir 35 um hücre filtresi kapağı ile sporozoit süspansiyon filtre.
4. Daha önce ²¹ açıklandığı gibi izole sporozoitlerine toplam sayısını ve 83000 sporozoit / ul elde etmek için soğuk 1x DPBS ile parazit süspansiyonu konsantrasyonunu ayarlamak. Bir sonraki adımlar devam ederken buz üzerinde parazit saklayın.
5. Negatif kontrol olarak kullanılan ve adım 2.2 ve 2.3 açıklandığı gibi örnek işleme edilecek bulaşmamış sivrisineklerden tükürük bezlerinin eşdeğer sayıda toplamak. süspansiyon içinde tükürük bezi özleri içindeki konsantrasyonu elde etmek için, yukarıda belirtildiği gibi örnek seyreltilir.
   Not: Sporozoitler 2 saatlik bir süre için buz üzerinde saklanabilir. Ancak, ideal olarak da tükürük bezleri ezme sonra bir saat içinde enjekte edilir.

Dermal La içine sporozoitlerine 3. EnjeksiyonKulak Yer

1. ketamin intraperitoneal enjeksiyonu (50 mg / kg) / ksilazin (5 mg / kg) karışımı, hayvanların anestezisi. Fare bilinçsizlik durumda olması ve kornea kurumasını önlemek için gözleri oftalmik merhem uygulamak için 5-8 dakika bekleyin. iki arka ayakları üzerinde yumuşak bir ayak tutam yaparak anestezi derinliği değerlendirin.
   NOT: Anestezi dozu az 20 dakika sürer, bu nedenle sonraki adımlar hızla yapılmalıdır.
2. Daha önce bir stereomikroskopta (Şekil 1A) altına şeffaf bir bantla ventral tarafı sabitleme ile fare kulak kulak kepçesi stabilize. Yavaşça damarların zarar görmesini önlemek için kulak basın.
3. Yeniden süspanse parazitlerin ¹⁰ 0.6 ul 10 ul şırınga / 35 ölçü eğimli iğne yükleyin.
4. Ile dikkatlice epidermis altında, kulak (Şekil 1A) dorsal tarafında iğne sokarak 4 enjeksiyon siteleri (site başına 0.15 ul) sporozoit süspansiyon sununkonik kadar herhangi bir kan damarları önlemek için özen. Birkaç saniye çıkarmadan önce, enjekte geri akmasını önlemek için iğne dermis kalmasına izin. Bir prosedür (Şekil 1B ve 1C) sonunda her enjeksiyon noktasında karakteristik papül dikkate alınmalıdır.
5. Enjeksiyondan sonra, dikkatlice kasetten kulak çıkarın.
6. adım 3.2-3.4 izleyerek parazitlerin aynı dozda karşı kulak enjekte edilir.
7. yalnız enjeksiyon ve dermis sivrisinek materyalin birikimi ile oluşan iltihabi yanıtı değerlendirmek amacıyla 1x DPBS 0.6 ul veya enfekte olmayan sivrisineklerden 1x DPBS + tükürük bezi ekstraktı 0.6 ul ya 2 ek fareler enjekte edilir.
8. kafes içine geri koymadan önce anestezi fare kurtarma izleyin.
   Not: Cilt uygun sporozoit yerleştirme floresan mikroskobu (Şekil 2A ve 2B ile izlenebilirPrevisously ²³ tarif edildiği gibi), fare hazırlanmaktadır.

4. Deri ve boşaltılması lenf nodu diseksiyonu

1. standart ortam (SM) hazırlanması şu şekilde: Dulbecco'nun Modifiye Edilmiş Eagle Ortamı (DMEM) + 25 mM 4- (2-hidroksietil) 400 U ile takviye edilmiş 1-piperazinetansülfonik asit (HEPES) / ml kolajenaz ve 50 ug / ml deoksiribonükleaz (Dnase) .
2. dLn örnekleri için oyuk başına + 70 um hücre filtresi 4.5 mi SM (plaka) ve deri örnekleri için oyuk başına 4.5 mi SM (Levha B) buz üzerinde iki adet 6 gözlü düz dipli doku kültürü plakaları hazırlayın.
3. sporozoit inokülasyondan sonra arzu edilen bir zaman noktasında, derin intraperitonal ketamin enjekte (125 mg / kg) / ksilazin (12.5 mg / kg) karışımı ile önceden servikal dislokasyon ile fare anestezi. Fare klinik ölüm belirtileri gösteren emin olun ve hemen diseksiyonu başlar.
   Not: miyeloid hücre alımı kinetiği inj sonra farklı zamanlarda incelenebilirection (yani 2 saat, 4 saat ve daha önce tarif edildiği gibi ¹⁴ 24 saat).
4. bulaşma olasılığını azaltmak için aşılanmış kulak ve% 70 etanol ile ilgili boyun bölgesini dezenfekte.
5. Steril makas ve forseps kullanarak, aseptik çevreleyen yağ toplama olmadan proksimal aurikular dLn teşrih. jugulo-carotidian sulkusta bir ilk kesi gerçekleştirmek ve işletme alanında tüyleri. çevre dokuya kıyasla grimsi görünür dLn açığa 2 forseps ile kesi gerin.
6. onun çıkarılmasını kolaylaştırmak için forseps ile dLn üstünde dikkatle bağ dokuları çimdik. Lenfoid doku (Şekil 3A ve 3B) altında bir forseps yerleştirerek dLn çıkarın. iyi içeren 4,5 ml SM + 70 mikron hücre süzgeç (Levha A) dLn yerleştirin.
7. Steril keskin bir makas ve forseps (Şekil 4A) kullanarak tüm inoküle kulak hasat. Separkısma ve iki forseps (- 4E Şekil 4B) ile biten kesim dışında boşluk ile kulağın dorsal ve ventral yönlerini yedik. Her iki dokular tamamen ortamda batırılır emin iyi içeren 4.5 ml SM (Levha B) içine yerleştirin.
   Not: Deney güvenilirliğini artırmak ve ilgi hücre sayısını arttırmak için, havuz 2 numune başına aynı fare kulağı ya da 2 dLNs enjekte edildi.
8. Kulakları ve 1x DPBS veya tükürük bezi özleri ya ile aşılanmış farelerin dLNs paralel olarak hasat ve süreç. Negatif ve tek boyama tazminat kontrolleri için naif bir fare hasat 2 ek kulak ve lenf nodu örnekleri ekleyin.

Lenf düğümleri 5. Hücre İzolasyonu

1. Hafif ajitasyon altında 15 dakika boyunca 37 ° C ila +% 5 _CO2 lenf düğümleri (plaka) inkübe edin. kolajenaz ve DNaz acti nötralize etmek için oyuk başına 10 mM son etilendiamintetraasetik asit (EDTA) ilavevities. buz üzerinde sonraki adımları gerçekleştirin.
2. 5 ml şırınga pistonu üst ucunu kullanarak lenf düğümleri ayırmak. kalan tüm kadar süzgeç karşı dairesel hareketlerle basın beyaz bağ dokusu olduğunu.
3. 500 ul 1x DPBS +% 2 fetal sığır serumu (FBS) + 2mM EDTA ile iki defa hücre süzgecinden durulayın. 15 ml'lik bir tüp içinde oyuk tüm hacmi aktarın.
4. +% 2 FBS + 2 mM EDTA, 500 ul 1 x DPBS ile de iki kez yıkayın ve 15 ml tüp içine ses transferi. buz üzerinde tüpler tutun.

Kulak Cilt 6. Hücre İzolasyonu

1. Hafif ajitasyon altında, 1 saat boyunca 37 ° C'de 5% _CO2 kulak bildiri (levha B) inkübe edin.
   Not: inkübasyon 20 dakika sonra, doku sindirimi kolaylaştırmak ve kalan 40 dakika boyunca kuluçka makinesi içinde tekrar örnek koymak için küçük parçalar halinde makas kulak bildiriler kesti. Tek hücre inkübasyon süresi sonunda ortam içinde görülmektedir.
2. 10 mM finalini ekle oyuk başına EDTA kolajenaz ve DNaz eylemlere karşı. buz üzerinde sonraki adımları gerçekleştirin.
3. Yeni kuyu bir 1ml pipet kullanarak 70 mikron hücre süzgeç içeren kulak doku parçaları ve orta tüm hacmi aktarın. daha kolay kulak doku parçaları toplamak için ucunun sonundan itibaren 2 ila 3 mm kesin.
4. 5 ml şırınga pistonu üst ucunu kullanarak kulak doku parçaları ayırmak. kalan tüm kadar süzgeç karşı dairesel hareketlerle basın beyaz bağ dokusu olduğunu.
5. 500 ul 1x DPBS +% 2 FBS + 2 mM EDTA ile iki kez hücre gericileri durulayın.
6. 70 mikron hücre süzgecinden 50 ml'lik tüp içine de tüm hacmi aktarın.
7. de 500 ul 1x DPBS +% 2 FBS + 2 mM EDTA yıkayın ve 50 ml'lik bir tüp içine ses transferi. buz üzerinde tüp tutun.
   Not: farklı adımlar cilt toplam hücrelerin izole edilmesi ve dLn dokular Şekil 5'te özetlenmiştir.

1. 4 ° C'de 450 x g'de 5 dakika boyunca deri ve dLn örnekleri santrifüj ve supernatant atın. Yavaşça 300 ul 1x DPBS +% 2 FBS + 2 mM EDTA ile pelletini.
2. Bir hemasitometre kullanarak deri ve dLn izole hücrelerin toplam sayısını saymak için, her numune, küçük bir hacim toplayın. % 0.04 hücre yaşayabilirliğini belirlemek için tripan mavisi ekleyin.

Sigara 8. Bloklama antijene özgü bağlanma

1. işaretsiz CD16 / CD32 Fc Block antikorunun 10 ug / ml ilave edilir. (Daha uzun gidebilir), 4 ° C'de 20 dakika inkübe edilir.
2. Soğuk 1x DPBS +% 2 FBS + 2 mM EDTA 2 ml ilave edilir. 4 ° C'de 450 x g'de 5 dakika boyunca numune santrifüj ve supernatant atın. Yavaşça +% 2 FBS + 2 mM EDTA, 300 ul 1 x DPBS pelletini ve buz üzerinde örneklerin korumak.

9. Boyama Deri ve Lenf Nodu Myeloid Hücreleri

1. Daha önce bloke ski inküben ve dLn canlı / ölü izleyicinin (örneğin 4 ', 6-diamidino-2-fenilindol ve DAPI), anti-CD45 ve anti-CD11 b özgü antikorlarla hücreleri izole edilmiştir.
   NOTLAR: ilgi miyeloid hücre alt-popülasyonunu, özellikle az olanları zenginleştirmek için, CD45 ⁺ hücreleri ve lenfositler, sırasıyla deriden saflaştırılabilir veya manyetik boncuk kolaylaştırıcı hücre sıralama ile dLn tükenmiş. DLn izole hücrelerin çoğu bu yana CD45 ^+, anti-CD45 kullanılması zorunlu değildir bulunmaktadır. Diğer belirteçleri pozitif veya negatif-yolluk strateji ile ilgi miyeloid hücre alt popülasyonlarını belirlemek için dahil edilebilir. Bu protokol, dLn olarak silah miyeloid hücrelerin CD8α ⁺ hücreler hariç tutarak zenginleştirildi (tüm T hücresi bölümü, hem anti-CD3 spesifik antikor kullanılarak hedeflenebilir).
2. Karanlıkta 4 ° C'da 30 dakika kuluçkalayın. 4 ° C'de 450 x g'de 500 ul 1x DPBS +% 2 FBS + 2 mM EDTA, santrifüj numune 5 dakika ekleyin ve supe atınrnatant. iki kez yıkama adımı yineleyin.
3. 300 ul 1x DPBS +% 2 FBS + 2 mM EDTA ile örnekleri yeniden süspanse edin. 35 mikron hücre süzgecinden FACS tüp içinde tüm hacim aktarın. 100 ul 1x DPBS +% 2 FBS + 2 mM EDTA ile durulayın.
4. bir akış sitometresinin lekeli hücrelerin çalıştırın. Kapı tek hücreleri canlı (DAPI ^- FSC-W) ölü hücreleri ve ikilileri dışlamak için. DLN (Şekil 6B) için CD11b ⁺ olaylar ^- Deri (Şekil 6A) ve (CD45 ⁺⁾ CD8α için arsa CD45 ⁺ CD11b ⁺ olaylar.

Biz son zamanlarda P. immünizasyon dozlarda o iğne şırınga enjeksiyonu gösterdi fare derisi, deri ve dLn 19 iltihaplı monositler ve ardından polimorfonükleer nötrofillerin ardışık işe indükler bölgesindeki berghei sporozoitler. Protokol Yukarıdaki bölümde başarılı kulak dermisteki sporozoitler çok sayıda çoklu enjeksiyonlardan sonra, her iki doku canlı miyeloid hücreleri izole etmek için kullanılan prosedürü detayları tarif edildiği gibi (Şekil 1 ve 2). Sitometrisi çok parametre akış hücresel infiltrasyon analizi için, Şekil 5'te özetlendiği gibi, ilk 24 saat içinde, dLn (Şekil 3) ve cilt enjeksiyon bölgesinde (Şekil 4) izole edildi ve işlenmiştir. Genel olarak, bu teknik bir ortalama 10 4 CD45 + CD11b + ve 2.10 4 CD11b + canlı tek hücreleri izole etmek için bize izinsırasıyla, deri ve dLn için. olmayan enkaz tek hücre kabul canlılığı cilt için% 40-70 ve dLn için% 70-90 arasında değişmektedir. Şekil 6'da gösterildiği gibi, deri miyeloid hücrelerin frekansı (CD45 + CD11 b +) ve dLn (CD8α - CD11b +) kuvvetli olmayan enfekte edilmiş fareler ile karşılaştırıldığında, TAS ile intradermal enjeksiyonu takiben arttırır.

Şekil 1: Ben Fare Kulak içine sporozoitlerine Enjeksiyon ntradermal. Bir anestezi fare kulak kepçesi içinde sporozoitlerine intradermal enjeksiyon gösteren (A) Görüntü. Kulağın ventral yüzü açık bant önceden bir mikroskop altında yerleştirilir ile stabilize edilir. İğne dikkatle konik yukarı gelecek şekilde, epidermis altında, kulak sırt tarafında eklenir. (B - C) Parazit süspansiyonu 0.1-0.2 ul (C) deri altına enjeksiyonundan sonra kulak kepçesi dorsal tarafına önceden (B) ve gösteren resimler. Karakteristik papül (siyah ok) ameliyat sonunda enjeksiyon yerinde gözlemlenebilir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

. Şekil 2: Fare kulak dermisinde Sporozoitler biriken Görüntüleme sıçan derisine 15 dakika enjeksiyon sonrası (Ölçek çubuğu = 60 um olarak (kesikli çizgiler ile belirtilmiştir) enjeksiyon bölgesinde geçiş RAS gösteren (A) floresan mikroskobu; 10X büyütme). sporozoitler yolu floresan sinyalinin maksimum yoğunluğu projeksiyonu ile temsil edilmektedir. Yeşil- ve kırmızı floresanslığı yenidenspectively başında ve iktisap 10 saniye sonra deride parazit konumunu gösterir. (B) RAS (yeşil) Yükseköğretim büyütme deri enjekte (mikron Ölçek bar = 20; 25X büyütme). Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 3:. Gösteri amaçlı Evans mavisi intradermal enjeksiyonu takiben proksimal aurikular dLn diseksiyonu gösteren lenf nodu İşleme (A) Resmi boşaltılması. fare servikal dislokasyon sonra, boyun,% 70 etanol ile dezenfekte edilir. İlk kesi keskin bir makas ile şah-karotid alanda yapılır ve cilt işletim alanından kaldırılır. Kesi gr görünen DLn açığa 2 forseps ile gerilirAyish çevredeki doku ile karşılaştırıldığında. bağ dokular daha sonra dikkatli bir şekilde dLn üstüne forseps ile bastırılır ve progresif olarak ayrılır. Son olarak, DLN lenf dokusu altında bir forseps koyarak ekstre edilir. PBS bir damla çıkarılan dLn gösteren (B) Resim. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 4:. Kulak derisi işleme ardışık adımlarım gösteren Resimlerde inoküle kulak işleme. (A), fare servikal dislokasyon sonra, kulak,% 70 etanol ile dezenfekte edilir ve steril keskin bir makas ve forseps kullanılarak ayrılmıştır. (B - D) kulağın dorsal ve ventral yönleri hafifçe tutup s ayrılırkesme dışında ilerleme hızı iki forseps ile sona erer. (E) kulak öncesinde enzimatik tedavi dorsal ve ventral yönlerini gösteren resim. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 5:.. Protokol Özeti cilt ve dLn dokulardan toplam hücreleri izole etmek için önemli adımlar şematik bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 6: Kulak Deri ve Proksimal dLn İzole Myeloid Hücre Nüfus gösteren Temsilcisi FACS araziler.yolluk strateji cilt (A) ve DLN (B) miyeloid bölmesini analiz etmek. CD45 + CD11b + ve CD8α - CD11b + hücreler sırasıyla cilt ve dLn için toplam canlı tekli olaylar kapı bulundu. Her durum için, 5 x 10 5 toplam olaylar (2 kulaklar ve 2 dLn numune başına toplanmış) elde edildi. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.