Yöntem makalesi

Mikroakışkan Akış Chambers Hemostaz ve Trombosit Transfüzyon Model Sulandırılarak Kan kullanma İn Vitro

DOI:

10.3791/53823

⸱

19 Mart 2016

 ,  ,  ,  , 
1Transfusion Research Center, Belgium Red Cross-Flanders, 2Blood Service, Belgium Red Cross-Flanders, 3Department of Public Health and Primary Care, Catholic University of Leuven, 4Faculty of Medicine and Health Sciences, University of Ghent

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Trombosit transfüzyonu ve hemostazı, kan bankacılığı trombositlerinin işlevini araştırmak için kan sulandırma ve mikroakışkan akış odaları kullanılarak modellendi. Veriler, trombosit depolama lezyonunun in vitro olarak hemostaz üzerindeki sonuçlarını göstermektedir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Transfüzyon için hazırlanan kan trombositleri, depolama sırasında yavaş yavaş hemostatik fonksiyonlarını kaybeder. Trombosit fonksiyonu, çeşitli (dolaylı) in vitro deneyler kullanılarak araştırılabilir, ancak bunların hiçbiri mikroakışkan akış odaları kadar kapsamlı değildir. Bu protokolde, trombosit transfüzyonunu simüle etmek için trombositopenik taze kanın depolanmış kan bankası trombositleri ile sulandırılması kullanılır. Daha sonra, sulandırılmış numune, açıkta kalan subendotelyal matriks proteinleri üzerindeki hemostazı taklit eden mikroakışkan akış odalarına perfüze edilir. Kan bağışı, taşınması, bileşen ayrımı, depolama ve patojen inaktivasyonunun etkileri eşleştirilmiş deneysel tasarımlarda ölçülebilir. Bu, kan bileşeni hazırlamadaki her manipülasyonun hemostaz üzerindeki etkisinin güvenilir bir şekilde karşılaştırılmasını sağlar. Sonuçlarımız, sıcaklık döngüsünün, kayma hızlarının, trombosit konsantrasyonunun ve saklama süresinin trombosit fonksiyonu üzerindeki etkisini göstermektedir. Sonuç olarak, bu protokol kan bankası trombositlerinin işlevini analiz eder ve bu sonuçta flebotomi, taşıma, bileşen hazırlama, depolama ve transfüzyon dahil olmak üzere işleme zincirinin optimizasyonuna yardımcı olur.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hemostaz kısıtlı zamanmekansal bağlamda 1 hücreleri, proteinler, iyonlar ve dokuların kombine ve düzenlenmiş aktivite gerektirir. Kontrolsüz etkinliği kan pıhtılaşması ile ilgili bozuklukların bir spektrum içinde kanama ve tromboz ve morbidite ve mortaliteye neden olabilir. Bir mikroakışkan akış odası deneyi in vitro hemostazisi taklit zorlu bir tekniktir. Bu yaklaşım, kan trombositlerin için öncü bir role sahip hemostaz katılan süreçlerin karmaşık etkileşimin soruşturma sağlar.

vasküler hasar ardından, trombositler, kan kaybını önlemek için maruz subendotelyal matris (gliko) proteinlere yapışır. Yapışma ardından, trom....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, insan numuneler üzerinde araştırmalar için kurumsal etik kuralları takip ve bilgilendirilmiş onam ilgili tüm vericilerden elde edildi. Burada tarif edilen deneyler için onay Antwerp Üniversitesi Hastanesi kurumsal inceleme kurulu elde edilmiştir.

Not: belirtilmediği sürece Sıcaklık göstergeleri, her zaman oda sıcaklığı vardır.

1. Hazırlık Akış Odası Kurulumu

  1. Hazırlama Lanes, Boru ve iğneler
    1. Vorteks kuvvetli bir şekilde kollajen süspansiyonu ve 50 ug / ml'lik bir nihai konsantrasyona kadar sağlayıcı tarafından sağlanan izotonik glikoz çözeltisinde 1/20 seyreltin.
      Not:....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Analiz içi varyasyon göstermek için, üç aynı yeniden tam kan numuneleri kollajen kaplı yüzeylerin (Şekil 1) üzerinde eşzamanlı olarak perfüze edildi. Bu% 8.7 bir farklılaşma katsayısı ile sonuçlanmıştır. Bu istatistik ile ilgili örnekler arasında kıyas izin kabul edilebilir içi tahlil ve laboratuvarda varyasyon göstermektedir.

Burada tarif ticari akış odasının giriş ölçüm gözüne dik olan ve bu da o noktada lam.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mikroakışkan akış odası deneyleri kan akan trombosit fonksiyonlarını araştırmak için mükemmel bir araçtır ve deneysel bağlamlarda farklı in vitro hemostaz değerlendirmek için kullanılır. Fakir laboratuvarlar arası standardizasyonun 9 rağmen bizim laboratuvar içinde deneysel varyasyon kabul edilebilir olduğunu göstermektedir. Bu güvenilir, belirli bir çalışma içinde (eşli) örnekleri karşılaştırmak için izin verir. Bu kan bankası koşullarında 11 trombosit depolama zararlı sonucudur trombosit.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların teşekkür hakkı yok.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
EDTA  ile BD vakum tüpü;Becton, Dickinson ve Şirketi368856
Heparinli BD vakum tüpüBecton, Dickinson ve Şirketi368480
Sodyum Sitrat ile BD vakum tüpüBecton, Dickinson ve Şirketi366575
Hirudin Kan tüpüRoche6675751 001
BD elektrikli süpürge EclipseBecton, Dickinson ve Şirketi368650Önceden takılmış tutuculu kan alma iğnesi
Pipet uçları 100-1.000Greiner bio-one740290
Pipet uçları 2-200Greiner bio-one739280
Pipet uçları 1-10EppendorfA08928
Tüp 5 mlSimport11691380
Konik tüp 15 mlGreiner bio-one1888271
Konik tüp 50 mlGreiner bio-one227261
10 ml ŞırıngaBD309604
Hassas mendillerKimtech5511
Vena8 Fluoro+ BiochipsCellix188V8CF-400-100-02P10Figure S1 A'da 'Biochip' olarak adlandırılmıştırVena8
Boru CellixTUBING-TYGON-B1IC-B1OC-ROLL 100FFigure S1 B'de 'Tek kullanımlık boru' olarak
İğneleriCellixSS-P-B1IC-B1OC-PACK200 Şekil S1 olarak adlandırılmıştır B 'Pin' olarak adlandırılmıştırBiyoçiplerin
tek giriş kabloları için konektörlerCellixCONNECTORS-B1IC-PACK100
Multiflow8 connectCellixMF8-CONNECT-BIC3-N-THROMBOSISFigure S1 B'de 'Yeniden kullanılabilir boru' ve 'Splitter' olarak
adlandırılmıştır Nemlendirilmiş kutuCellixHUMID-BOX
Yazılımı mikroakışkan pompaCellixN/AVenaflux Testi
Horm KollajenTakeda/Nycomed1130630Doğal at tendonu kollajeni (tip I)
Kollajeni seyreltmek için izotonik glikoz çözeltisi takviye edilir
Ev hazırlığında HEPES tamponlu salin (HBS)hazırlığında10 mM 4- (2-hidroksietil) -1-piperazineetansülfonik asit (HEPES) tamponlu salin (% 0.9 (a / h) NaCl, pH 7.4)
hazırlığındabloke edici tamponev hazırlığında'de %1.0 (a/h) sığır serum albümini ve% 0.1 (a / h) glikoz
Moleküler problarC1430
Çamaşır suyu 10% evde evde hazırlık
0.1 M NaOHevde hazırlıkhazırlık
Denatüre alkolFiersT0011.5
Mirus Evo NanopumpCellix188-MIRUS-PUMP-EVOMultiflow8 ile. Figure S1 A'da 'Pompa' ve 'Manifold' olarak adlandırılan
MikroskopZeissAxio Observer Z1colibri-LED ve yüksek çözünürlüklü CCD kamera
Yazılım mikroskobuZeissN/AZEN 2012
Hematoloji analizörüSysmexN/A
SantrifüjEppendorf521-0095
Trombosit inkübatörüHelmerPF-48i
İnkübasyon su banyosuGFL1013
Pipet MarkasıA03429
Tüp RuloRatekBTR5-12V
Steril yerleştirme cihazıTerumo BCTTSCD
Boru MühürleyenTerumo BCTAC-155
VorteksVWR58816-121
adlandırılmıştırVena8 ev Ev HBS Calcein evde , ile donatılmıştır; Masa Üstü

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Broos, K., Feys, H. B., De Meyer, S. F., Vanhoorelbeke, K., Deckmyn, H. Platelets at work in primary hemostasis. Blood Rev. 25, 155-167 (2011).
  2. Stalker, T. J., et al. Hierarchical organization in the hemostatic response and its relationship to the platelet-signaling netwo....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Microfluidic Flow ChambersPlatelet TransfusionHemostasis ModelingReconstituted BloodCollagen BindingThrombus Growth KineticsShear Rate AnalysisBlood Component PreparationPlatelet Concentrate QualityFlow Chamber Experiment

İlgili makaleler