İnsan sklera dokusu esas olarak kollajendir; bu nedenle immünohistokimya için kolay kullanılamaz. Skleral dokunun konfokal mikroskobu için immünohistokimya yapma hedefine ulaşmak için bir laminasyon tekniği kullanıldı.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
İnsan sklera Konfokal Mikroskobu gerçekleştirmek için bir Laminasyon Tekniği
Bu makalede
Özet
Özet
sklera kapakları ve göz koruyan yoğun bağ dokusu olduğunu. Özellikle yoğun kolajen demetleri (tip I, III, IV, V, VI ve VII) oluşur. Nedeniyle otofloresansı, opaklık, ve kalınlık için, konfokal mikroskopi için uygun bulunmamıştır. Antijen alımı için doku ön ısıtma, özellikle, immünhistokimya için parafine gömüldü formalin ile fikse sklerasına kullanan teknik zorlukları vardır Burada sunulan birine alternatif bir yaklaşım. sklera hücreleri ve damarlar hem de göreceli olarak zayıf olduğu için, daha büyük doku örneklerinin kullanılması bakan hücreleri önlemek ve gemi ve diğer anatomik sitelere ilişkin kendi yerleşimini anlamada yardımcı olmak için araştırılmıştır. konfokal mikroskop altında daha büyük bir doku örneklerinin analizi için izin vermek için, bir laminasyon tekniği sklera ince tabakaları oluşturmak için gerçekleştirilmiştir. CD31 kan damarları ve lenfatik damar endotel hyalu sonuçlarının analizini takibenronan reseptör 1 (LYVE1) Bilimsel inceleme için onay elde edildiği için pozitif hücrelerin, bu yöntemin avantajları ve sınırlılıkları tartışılmıştır.
Giriş
sklera yoğun bağ dokusu yapılmış göz kapakları, sert dış tabakasıdır. Göz içi yapıları korumak için ve göz içi basıncı korumaya yardımcı olur. Böylece, sklera net görüş için gereklidir. Bu lenf damarlarının 1,2 yoksun ve böylece o ve lenfatik serbest gözün iç 3-7 arasında bir dış lenfatik serbest sınırını oluşturur. Aynı zamanda bu sayede tendonların anatomik benzerlik paylaşarak, göz dışı kaslarının için bağlanma siteleri sağlar. Sklera esas tip I kollajenin yoğun demetleri oluşur ve kolajen tip III, IV, V, VI, VIII, 8,9 ve elastin 10,11 daha az sayıda sahip olduğu için, bu doku immünohistokimya için ku....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
insan dokularının kullanılması gözden geçirilmiş ve bir kurumsal inceleme kurulu veya eşdeğeri tarafından onaylanmalıdır. Burada anlatılan çalışma yerel etik komitesi tarafından onaylanmış ve bilimsel inceleme için onay aldı. Bu çalışma Helsinki Bildirgesi göre yapıldı. İnsan skleral örnekleri Göz Hastalıkları Anabilim Dalı Göz Bankası, Köln Üniversitesi, Almanya'da (maksimum postmortem süresi 24 saat) küre vericilerden gözlerinden elde edilmiştir.
1. Deneysel hazırlanması
- % 96 etanol hazırlayın ve farklı tüplerde tamponlu tuz (PBS) fosfat. PBS,% 2 sığır serum albümini (BSA) ihtiva eden Tavsiye edilen seyreltme birincil antikorların hazırlanmas....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Burada gerçekleştirilen temsili denemelerde, bu özel laminasyon tekniği kullanılarak elde edilen gösterilebilir faydaları vardır. İlk deneme üç temsilci resim (Şekil 3) episkleral damar pleksusun farklı ağını göstermektedir. gemiler CD31 pozitiftir.
İkinci deneme episkleraya ve CD31 pozitif kan damarları olan ilişkilerine özellikle LYVE1 + hücrelerde, bağışıklık hücrelerini gösterir. Burada Z-Yığın teknoloji d.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
İnsan sklera Laminasyon Bu doku üzerinde eş odaklı mikroskopi gerçekleştirmek için kullanılan bir yöntemdir. Bu süreçte kritik bir adım doku yapıştırılması için etanol kullanımı yerine formalin olduğunu. sabitleme için etanol yerine formalin kullanırken bizim deneyim, daha iyi sonuçlar elde edilmektedir. Blunt neşter prosedürü ağırlaştırmak ve kaçınılmalıdır. Benzer şekilde, sklera kuruması o prosedürü komplike ve görüntülerin kalitesini azaltır, kaçınılmalıdır.
İmmünohistokimyasal boyama il.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar herhangi bir mali açıklama beyan etmemektedir. Bu makalenin içeriği tamamen yazarların sorumluluğundadır.
Teşekkürler
Alman Araştırma Vakfı (FOR2240 "Gözün İnflamatuar Hastalıklarında (Lenf) Anjiyogenez ve Hücresel Bağışıklık" ile CC ve LMH'ye; HE 6743/2-1 ve HE 7643/3-1'den LMH'ye; CU47/6-1'den CC'ye), Alman Kanser Yardımı (LMH ve CC'ye), Köln Üniversitesi GEROK programı (SLS ve LMH'ye) ve AB COST BM1302 "Kornea Rejenerasyonuna Güçlerin Birleştirilmesi" (CC'ye).
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| % 96 etanol | Merck Chemicals, Darmstadt, Almanya | P075.4 | |
| binoküler stereo mikroskop ve nbsp; | Motic, Hongkong, Çin | n.a | |
| 26 G iğneler | Terumo, Leuven, Belçika | 303800 | |
| 15.5 mm trepan | Geuder, Heidelberg, Almanya | n.a | |
| no.10 nbsp; | Tüy, pfm medikal, Osaka, Japonya | 2E+08 | |
| oftalmik neşter mikro tüy | Feather, pfm medical, Osaka, Japonya | no. 7657BR | |
| CD 31 antikoru (monoklonal fare anti insan) | Dako, ABD | IR610 | |
| LYVE1 antikoru (Poliklonal tavşan anti insan) | Zytomed, Almanya | RBK014-05 | |
| keçi anti fare FITC antikoru | Sigma Aldrich, Steinheim, Almanya | F0257 | |
| keçi anti tavşan Cy3 antikoru | Dianova, Almanya | 111-165-003 | |
| Keçi Serumu normal | Dako, Glostrup, Danimarka | X090710-8 | |
| DAPI | Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Almanya | 6335.1 | |
| mikroskop slaytlar | Engelbrecht, Edermü nde, Almanya | WC7695002 | |
| Lamelleri 24 mm x 24 mm | Th. Gayer, Lohmar, Almanya | 7695026 | |
| DAKO floresan montaj ortamı | DAKO, ABD | S3023 | |
| LSM Meta 510 konfokal mikroskopi | Carl Zeiss AG, Jena, Almanya | n.a |
Kaynaklar
- Schlereth, S. L., et al. Enrichment of lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor 1 (LYVE1)-positive macrophages around blood vessels in the normal human sclera. Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (2), 865-872 (2014).
- Schlereth, S. L., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
