Bu el yazması, deneysel kemik metastazları oluşturmak için kanser hücrelerini özellikle kemikler de dahil olmak üzere arka bacak dokularına iletmek için bir teknik olan intra-iliak arter (IIA) enjeksiyonunun ayrıntılı prosedürünü sağlar. Başlangıçta meme tümörü modelleri ile oluşturulmuş olsa da, bu protokol diğer kanser türlerine de kolayca genişletilebilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Mikroskopik Kemik Metastazı Verimli ve Seçici Modelleme için intra-iliak arter Enjeksiyon
Bu makalede
Özet
Özet
İntrailiak arter (IIA) enjeksiyonu, hayvanlarda çeşitli kanser hücrelerinin metastatik lezyonlarını tanıtmak için etkili bir yaklaşımdır. Yaygın olarak kullanılan intrakardiyak ve intra-tibial enjeksiyonlarla karşılaştırıldığında, IIA enjeksiyonu çeşitli avantajlar sağlar. İlk olarak, özellikle arka bacak kemiklerine büyük miktarda kanser hücresi verebilir, böylece mekansal-zamansal olarak senkronize erken evre kolonizasyon olayları sağlayabilir ve yayılmış tümör hücrelerinin sağlam bir şekilde ölçülmesine ve hızlı bir şekilde tespit edilmesine izin verebilir. İkincisi, kanser hücrelerini lokal dokulara zarar vermeden dolaşıma enjekte eder, böylece kemik kolonizasyon sürecini karıştıran enflamatuar ve yara iyileşme süreçlerinden kaçınır. Üçüncüsü, IIA enjeksiyonu kemik dışı organlarda çok az metastatik büyümeye neden olur, böylece hayvanların diğer hayati metastazlara yenik düşmesini önler ve indolent kemik lezyonlarının sürekli izlenmesine izin verir. Bu avantajlar, geçmişte büyük ölçüde zor olan tek kanser hücrelerinden çok hücreli mikrometastazlara ilerlemenin incelenmesi için özellikle yararlıdır. Biyolojik görüntüleme ve kemik histolojisinin en son yaklaşımları ile birleştirildiğinde, IIA enjeksiyonu kemik metastazları ile ilgili çeşitli araştırma amaçlarına uygulanabilir.
Giriş
Metastaz solid tümörlerin yol açtığı ölümlerin% 90'ından sorumludur. Kemik çeşitli kanser türleri, özellikle meme ve prostat kanserlerinin metastazları en sık etkilediği organdır. klinikte teşhis edildiğinde, kemik metastazları genellikle zaten sık sık nörolojik semptomlar eşlik kemikte osteolitik veya osteoblastik ya değişiklikler ile ileri aşamalarında girdiniz.
Önceki çalışmalar ağırlıklı olarak ancak şu anda osteolitik sürecinin başlangıcından önce kemiklerinde mikrometastazlar anlayışı sınırlı, açık osteolitik kemik metastazları 1-3 üzerinde duruldu. Bu durum, uygun deneysel model ve yaklaşımların eksikliği en azından ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm hayvan çalışmaları Baylor College of Medicine hayvan bakımı kurallarına uygun olarak yapıldı.
1. Hücre Hazırlanması
Not: değişik kanser hücresi çizgileri IIA enjeksiyon araştırma amaçlı bağlı olarak kullanılabilir. Meme kanseri hücre çizgileri kullandık MCF7, 4T1, 4T07, MDA-MB-361, MDA-MB-231, MDA-MB-436 ve araştırma prostat kanseri hücre dizisi C4-2. Biz genellikle bizim çalışma için GFP- ve ateşböceği lusiferaz etiketli kanser hücrelerini, hem kullanımı ve GFP-Lusiferaz etiketli MCF7 hücre hattından burada bazı verileri göstermektedir.
- % 5 CO2 içinde 37 ° C'de,% 10 FBS ve 0.1 mg....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şekil 1 anatomik konumu ve iliyak arter (kırmızı) ve ven (mavi) ilişkiyi göstermektedir.
Şekil 2 diseksiyon mikroskobu altında iliak damarlar ve sinirlerin göreli konumunu göstermektedir. Şekil 2A gösterildiği gibi, damarlar ve sinirlerin periton duvarına altında doğru ve cilt kesi yapılır ve periton itti sonra ortaya çıkabilmektedir. iliyak ven solda ve artere göre daha büyük.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Sadece iliyak arter kanser hücrelerinin enjeksiyon hedef olmasına rağmen, biz çevre dokulara hem iliak ven ve arter ayrılmasını tavsiye ve bir paket olarak birlikte bunları kaldırmak için. damar ve arter yoğun birbirleriyle temas için bu ve venöz damar duvarı ince ve kırmak için kolaydır. kanser hücreleri sadece artere enjekte edilir, ancak bu nedenle, başarılı bir enjeksiyon için, bu zaman ve birlikte iki gemi tutmak için çaba kaydeder. Şekil 2'de gösterildiği gibi bir 4-0 ipek dikiş bu işlemi yard.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
Zhang laboratuvarında yapılan araştırma X. H.-F. tarafından desteklenmiştir. Z.'nin NCI CA151293, CA183878, Meme Kanseri Araştırma Vakfı, ABD Savunma Bakanlığı DAMD W81XWH-13-1-0195, CA149196-04 Pilot Ödülü, McNair Tıp Enstitüsü ve HW'nin ABD Savunma Bakanlığı DAMD W81XWH-13-1-0296.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Malzemeler< / güçlü > | |||
| DMEM | HyClone | SH30022.01 | |
| FBS | Gibco | 16000 | |
| Kalem / Strep Amfeterisin B | Lonza Biowhittaker | 17-745E | |
| PBS | Lonza Biowhittaker | 17-516F | |
| Tripsin / EDTA çözeltisi | HyClone | SH30042.01 | |
| 45 μ M hücre süzgeci | VWR Uluslararası Laboratuvarı | 195-2545 | |
| MediGel CPF, carprofen | BCM'de | Ağrı yönetimi için | |
| Buprenorfin | BCM'de | Ağrı yönetimi için | |
| Estradiol peleti | Amerika'nın Yenilikçi Araştırması | SE-121 | |
| Ketamin ve ksilazin | BCM'de | ||
| Veteriner merhemi | BCM'de | Göz kuruluğunu önleyin | |
| Tıraş Makinesi | Oster | 78005-050 | İçin kürklü fareler |
| İzopropil etanol | ACROS | 67-63-0 | |
| Betadine cerrahi önlük | bıçaklarında veteriner bakımından kontrollü ürün | ||
| Ted Pella, Inc | 549-3CS-10 | Çoklu | |
| No. 3 tutamak | Ted Pella, Inc | 541-31 | Otoklavlanması gerekiyor |
| Steril cerrahi örtü | Sai İnfüzyon Teknolojisi | PSS-SD1 | |
| Düz forseps | Roboz Cerrahi Alet | RS-5132 | Otoklavlanması gerekiyor |
| Düz ince forseps | Güzel Bilim Araçları | 11253-20 | Otoklavlanması gerekiyor |
| Kenarlı ince forseps | Güzel Bilim Araçları | 11253-25 | Otoklavlanması gerekiyor |
| 4-0 Vicryl ipek sütür | Johnson & Johnson Health Care | J214H | |
| 31 G insülin şırıngaları | BD | 328418 | Çoklu |
| Q-uçlu pamuklu çubuklar (Steril) | VWR Uluslararası Laboratuvar | 89031-272 | |
| Cilt tutkalı | Henry Schein Hayvan Sağlığı | 31477 | Ameliyat yeri cilt kapatma için |
| Kulak Küpesi Aplikatörü | Güzel Bilim Araçları | 24220-00 | |
| Kulak küpeleri | Güzel Bilim Araçları | 24220-50 | |
| D-lusiferin | Altın Biyoteknoloji | ŞANS | Işıktan kaçının ve buza koyun |
| 28 G insülin şırıngaları | BD | 329410 | Orbital enjeksiyon için |
| Paraformadehit | Alfa Aesar | 30525-89-4 | Doku fiksasyonu için |
| EDTA | OmniPur | 4050 | Kemik dokusu dekalifikasyonu için |
| < güçlü > Adı< / güçlü > | < güçlü > Şirket< / güçlü > | < güçlü > Katalog Numarası< / güçlü > | < güçlü > Yorumlar< güçlü > |
| < güçlü > Ekipmanları < / güçlü > | |||
| Diseksiyon mikroskobu | Leica Leica | S6E stereo | |
| IVIS Lumina II görüntüleme sistemi | Gelişmiş Moleküler Vizyon | ||
| İsim< / strong> | Company< / strong> | Katalog Numarası< / strong> | Comments< / strong> |
| Antikorlar< / strong> | |||
| Anti-GFP antikorları (JL-8) | Clontech | 632381 | |
| Anti-ALP antikorları | Abcam | ab108337 | |
| Anti-Osterix antikorlar | Abcam | ab22552 |
Kaynaklar
- Kang, Y., et al. A multigenic program mediating breast cancer metastasis to bone. Cancer cell. 3 (6), 537-549 (2003).
- Lu, X., et al. VCAM-1 promotes osteolytic expansion of indolent bone micrometa....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
