Farelerde kas reinnervasyonunu ve dolayısıyla nöromüsküler kavşakların rejenerasyonunu güvenilir bir şekilde incelemek için bir sinir yaralanması yöntemi geliştirdik. Bu teknik, ortak fibular sinirin basit ve yüksek oranda tekrarlanabilir bir ameliyatla yaralanmasını içerir. Kas reinnervasyonu daha sonra ekstansör digitorum longus kasının tam olarak monte edilmesiyle değerlendirilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Fibula Sinir Yaralanması Yöntem: Güvenilir Testi tanımak ve Test O Tamir Nöromüsküler Junctions Faktörleri
Bu makalede
Özet
Özet
nöromüsküler bileşke (NMJ) yaşlanma, yaralanma ve hastalık sonucu zararlı yapısal ve fonksiyonel değişikliklere uğrar. Nedenle, bakım ve onarım NMJs katılan hücresel ve moleküler değişiklikleri anlamak için şarttır. Bu amaçla, güvenilir ve sürekli olarak farelerde NMJs rejenere incelemek için bir yöntem geliştirdik. o diz yakın gastroknemius kası tendonun lateral başının üzerinden geçerken Bu sinir yaralanması yöntemi yaygın fibula siniri ezme içerir. 70 günlük dişi fareler kullanarak, motor aksonlar 7 gün sonrası ezmek içinde önceki postsinaptik hedefleri reinnervate başlar göstermektedir. Bunlar tamamen 12 gün önceki sinaptik alanları yeniden işgal. Bu yaralanma yöntemin güvenilirliğini belirlemek için, bireysel 70 günlük dişi fareler arasında reinnervation oranları karşılaştırıldı. Biz tekrar innerve olmuş postsinaptik sitelerin sayısı 7, 9 fareler arasında benzer olduğunu buldu ve 12 gün sonrası crush. olmadığını belirlemek içinBu yaralanma deneyi, kas moleküler değişiklikleri karşılaştırmak için kullanılabilir biz kas nikotinik reseptör (y-AChR) ve kas özel kinaz (MuSK) gama alt-biriminin seviyeleri araştırılmıştır. gama-AChR alt birim ve MuSK yüksek aşağıdaki denervasyon regüle ve NMJs reinnervation aşağıdaki normal seviyelere geri oluştururlar. Biz bu genlerin ve kasların innervasyonu durumu transkript seviyeleri arasında yakın bir ilişki bulundu. Biz bu yöntem NMJ ve diğer sinaps tamir katılan hücresel ve moleküler değişiklikler anlayışımız hızlandırmak inanıyoruz.
Giriş
Genç yetişkin ve sağlıklı hayvanlarda, nöromüsküler kavşak (NMJ), bir α-motor aksonun sinir ucu olan presinaps ile nikotinik asetilkolin reseptörlerinin (AChR'ler) seçici olarak toplandığı ekstrafusal kas lifinin özelleşmiş bölgesi olan postsinaps arasında oldukça kararlı bir bağlantıdır1. Pre- ve post-sinaptik aparatların neredeyse mükemmel bir şekilde atanması, uygun nörotransmisyon, α-motor nöronların ve kas liflerinin hayatta kalması ve motor fonksiyon için gereklidir. Ne yazık ki, NMJ'nin işlevi yaşlanma, amyotrofik lateral skleroz (ALS) gibi hastalıklar, otoimmün hastalıklar ve kasların ve periferik sinirlerinyaralanması 2-5'ten olumsuz e....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm deneyler Virginia Tech Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmış NIH kurallar ve hayvan protokol çerçevesinde yürütülmüştür.
Cerrahi 1. hazırlanması Hayvanlar
- steril 1 ml insülin şırınga ile ketamin (90 mg / kg) ve deri altı enjeksiyon yoluyla inguinal ksilazin (10 mg / kg) karışımı ile fareler anestezi. Taşıyıcı çözeltisi% 0.9 tuzlu su, 17.4 mg / ml ketamin ve 2.6 mg / ml ksilazin içeren bir karışım içerir. yürürlüğe girmesi için ilaç beklerken kafeslerde geri hayvanları yerleştirin.
Not: yükleme dozu prosedür süresince yeterli anestezi sağlamıyorsa, yükleme dozunun% 25 ek enjekte edilebilir. ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Ortak fibula sinir, aynı zamanda, peroneal sinir olarak adlandırılan bacak (Şekil 1A) ön yönüne fibula başının etrafında sallanır popliteal fossada yukarıdaki siyatik sinirin, doğar. yüzeysel ve derin fibula sinir içine dalları birbirine ayak ve ayak dorsifleksör tedarik (anterior tibialis, extensor digitorum longus ve brevis ve ekstansör halluces longus kasları) ve ayağın everters (peroneus kaslar) Orada olmuyor. Bu sinir de ayak ve bacağın alt yarısının lateral sırtına.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu yazıda sunulan yöntem nöromüsküler kavşaklar (NMJ) tamir katılan mekanizmaları tanımlamak için benzersiz fırsatlar sunar. o diz yakın gastroknemius tendonu üzerinden geçerken Bu yöntem yaygın fibula siniri ezme içerir. Bir forseps ile sinir sıkışmasının sadece 5 saniye sonra, tam bir dejenerasyonu yaralanması 4 gün sonra belirtilen olduğunu göstermektedir. genç yetişkin farelerde, alfa-motor aksonlar 12 gün yaralanmamış farelere olanlardan ayırt edilemez presinaptik sitelerin Reformasyon sonuçlanan, post-yaralanma 7 .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
Yazarlar, deneylerle ilgili entelektüel katkıları ve el yazması hakkındaki yorumları için Valdez laboratuvarı üyelerine teşekkür eder.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Ketamin | VetOne | 501072 | |
| Xylazine | Lloyd Inc. | 003437 | |
| Buprenorfin | Zoopharm | 1Z-73000-150910 | |
| Nair | Nair | ||
| Kim-wipes | Kimtech | 34155 | |
| Elektrikli Tıraş Bıçağı | Braintree Scientific | CLP-64800 | |
| %80 EtOH/H20 | |||
| %10 Proviodine | |||
| 1 ml İnsülin Şırınga Yaylı | |||
| Makas | Vannas | 91500-09 | |
| No. 15 neşter | Braintree Scientific | SSS 15 | |
| #5 Forseps | Dumont 11252-00 | ||
| 6-0 ters kesme iğnesi üzerinde ipek sütür | Sütür Ekspresi | 752B | |
| Kemirgen Isıtma Yastığı | Braintree Scientific | AP-R-18.5 | |
| Alexa 555 konjuge alfa-BTX | Moleküler Problar | B35451 | |
| Vectashield | Vektör Laboratuvarları | H-1000 | |
| Olympus Stereo Zoom Mikroskobu | Olympus | 562037192 | |
| Zeiss 700 Konfokal Mikroskop | Zeiss | ||
| Değişken akışlı peristaltik perfüzyon pompası | Fisher Scientific | 13-876-3 | |
| Aurum Toplam RNA Mini Kiti | Bio-Rad | 7326820 | |
| Bio-Rad iScript RT Supermix | Bio-Rad | 1708840 | |
| SsoFast Evagreen Supermix | Bio-Rad | 1725200 | |
| Bio-Rad CFX96 | Bio-Rad | 1855196 | |
| Puralube Vet merhem | Puralube | 1621 | |
| Sinaptotagmin-2 antikor | Antikorları-Çevrimiçi | ABIN401605 | |
| Nörofilament antikor | Antikorları-Çevrimiçi | ABIN2475842 |
Kaynaklar
- Sanes, J. R., Lichtman, J. W. Induction, assembly, maturation and maintenance of a postsynaptic apparatus. Nat. Rev. Neurosci. 2 (11), 791-805 (2001).
- Moloney, E. B., de Winter, F., Verhaagen, J.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
