Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Bir Sıçan Kan beyin bariyeri karşısında FITC yüklü ferritinin İn Vitro Geçirgenlik: Bir Model Nanoformulated Moleküllerin Teslim Eğitim için

7.5K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/54279

⸱

22 Ağustos 2016

 ,  ,  ,  ,  , 
1Dipartimento di Scienze Biomediche e Cliniche Luigi Sacco, Università di Milano, 2Dipartimento di Biotecnologie e Bioscienze, Università di Milano-Bicocca

Bu makalede

Özet

Sıçan beyni, mikrovasküler endotel hücreleri ve astrositlerin bir ko-kültürüne dayalı olarak in vitro bir kan-beyin bariyeri modeli oluşturmak için bir yöntem tanımlanmış ve doğrulanmıştır. Bu sistem, nanoformülasyonun floresan moleküllerin trans-bariyer geçirgenliği üzerindeki etkisini incelemek için geçerli bir araç olduğunu kanıtladı.

Özet

Perisitler ve astrositlerin uç ayakları tarafından desteklenen beyin mikrovasküler endotel hücreleri, büyük suda çözünür ilaçların kan-beyin bariyeri (BBB) yoluyla düşük geçirgenliğinden sorumludur ve etkili farmakolojik tedaviler için zorluklara neden olur. Son yıllarda, beyin hedeflemeyi teşvik etmek için farklı stratejiler, BBB genelinde ilaç dağıtımı için yenilikçi nanosistemler de dahil olmak üzere, bu bölgedeki ilaç dağıtımını ve aktivitesini iyileştirmeyi amaçlamıştır. Bu bağlamda, BBB'nin basitleştirilmiş bir hücresel modeline dayanan bir in vitro yaklaşım, nanoformülasyonların moleküllerin trans-BBB geçirgenliği üzerindeki etkisini araştırmak için yararlı bir araç sağlar. Bu çalışma, ticari olarak temin edilebilen primer sıçan beyni mikrovasküler endotel hücreleri ve astrositlerden oluşan çift katmanlı bir BBB'nin gelişimini açıklamaktadır. Transendotelyal elektrik direncinin ölçümüne ve yüksek moleküler ağırlıklı bir dekstranın görünür geçirgenliğine dayanan modelin doğrulanması için multiparametrik bir yaklaşım da açıklanmaktadır. Farklı nanoformülasyonların floresan moleküllerinin bariyer boyunca yer değiştirmesi üzerindeki etkisini incelemek için bu BBB modelinin kullanılması için kavram kanıtı olarak, ferritin nanopartiküllerine yüklenen floresein izotiyosiyanat (FITC) kullanımını açıklıyoruz. Ferritinlerin FITC'nin trans-BBB geçirgenliğini iyileştirme yeteneği, akı ölçümleri ve konfokal mikroskopi analizleri ile gösterilmiştir. Sonuçlar, bunun, BBB'de ilaçların verilmesi için nanosistemleri doğrulamak için yararlı bir sistem olduğunu göstermektedir.

Giriş

Farmakolojik tedavilere merkezi sinir sistemi direnci (merkezi sinir sistemi) hastalıkları (örn., Kanser, epilepsi, depresyon, şizofreni, HIV ile ilişkili nörolojik bir bozukluk) nedeniyle, kan-beyin bariyeri boyunca zorlu ilaç nüfuz dahil olmak üzere çeşitli farklı mekanizmalarla için (BBB) . BBB kanda dolaşan maddelerden beyin dokuları izole eder sınırıdır. Bu bariyer içinde, perisitler ve astrositler endfeet tarafından desteklenen beyin mikrovasküler endotelyal hücreler (BMECs) 'in bir tabakası, bir molekül ağırlığı daha yüksek 400 da 1 olan suda çözülebilen ilaçlara BBB yüksek seçicilik sorumludur. Başka bir ilaç ile ilişkili dirençli mekanizması CNS'ye madde girişini engellemek ve beyin 2 ekstrüzyonu kolaylaştırmak için işbirliği ilaç akış taşıyıcı (P-glikoprotein ve çoklu ilaç direnci proteini), bir BMECs ilgili varlığı ile bağlantılıdır.

Son on yılda, Nanoteknolojik yaklaşımlar çok sayıda BBB 3-6 genelinde uyuşturucu teslim klinik ve biyolojik zorluğu aşmak için geliştirilmiştir. Bu bağlamda, ferritin nanosferler (FNN) tamamen yenilikçi ve gelecek vaat eden bir çözüm oluşturmaktadır. FNN 8 mil iç çapa sahip olan bir içi boş bir küre yapısında düzenlenmiş 24 kendinden montaj ferritin (FN) monomerler, 12 mil kürelerdir. Ferritin alt-birimleri, asidik pH değerinde demonte ve çeşitli organik moleküller kapsüllenecek sağlayan nötr pH getirerek şekil hafızalı bir şekilde kurulabilir. Bu nedenle, FNN çok fonksiyonlu bir ilaç verme sistemleri 7,8 geliştirilmesi için ilginç bir modeli temsil eder. Ayrıca, FNN bu hücrelerin 9 lüminal zarı üzerinde ifade edilen transferin reseptörü (TfR), 1, spesifik tanıma BMECs teşekkür ile etkileşime girebilir.

Şimdiye kadar, BBB in vitro modellerde farklı accueillante geliştirilmiştirr çeşitli ilaçlar, BBB doğru toksisite, ya da akış nakliyeci ile moleküllerin etkileşimi trans-BBB geçirgenliği aydınlatmak için. Gerçekten de, bu modelleri, in vivo çalışmalar ile devam etmeden önce, aktif moleküllerin hızlı taranması için yaklaşımlar, in vitro olarak geçerli kabul edilir. Bu modeller, hayvan (fare, fare, domuz ve dana) veya insan hücre çizgileri 10,11,12 elde BMECs ya da ko-kültür BMECs ve astrositler (nadiren perisitler) tek bir endotel tabaka oluşur. Transendotelyal elektrik direnç (TEER) ve belli bir molekül ağırlığına sahip izleyicilerin belirgin geçirgenlik (Papp) in vitro modelin kalitesini belirlemek için kullanılan iki önemli parametreler temsil etmektedir. Burada sıçan BMECs (RBMECs) bir ko-kültür dayalı bir BBB in vitro modelin istihdam, açıklamak ve sıçan kortikal astrositler (RCAs) floresein isothi encapsulating ferritin nanocages trans-BBB nüfuz incelemek içinocyanate (FITC).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. BBB Modeli Kurulması

Not: piyasada mevcut birincil RBMECs ve RCAS kullanmanızı öneririz BBB modeli oluşturmak için. Tüm adımlar, bir laminar akış başlığı içinde ele steril reaktifler ve tek kullanımlık ile gerçekleştirilmelidir.

  1. Hücre kültürü
    1. poli-L-lisin, 100 ug / ml (1 saat oda sıcaklığında) veya fibronektin 50 ug / ml (37 ° C de 1 saat) ile kaplayın hücre kültürü şişeleri sırasıyla RCAS veya RBMECs yapışmasını teşvik etmek. Daha sonra,% 5 fetal sığır serumu,% 1 endotel hücre büyüme takviyesi ve% 1 penisilin / streptomisin (SECM) ile desteklenmiş 1 x 10 6 RCA'ların ve endotel hücre ortamında 5 x 10 5 RBMECs, çözülme. 10 mi SECM bir T75 şişesi içinde 20 mL SECM ve RBMECs bir T175 şişesi içinde tohum RCAs.
      Not: çözülme ve RCA'ların ve RBMECs tohumlama geçitleri kültüründe, hücre yoğunluğu ve zaman açısından ayarlanması gerekir BBB modeli ile test edilecek olan deneysel koşullar sayısına göre yöntem. başlangıç ​​tarafından1 x 10 6 RCA'ların 1 flakon ve 5 x 10 5 RBMECs 1 flakon ile ing, 20 BBB taşıyan ekler kadar elde etmek mümkündür.
    2. RCA'ların için yaklaşık% 80 konflüense kadar 37 ° C'de ve% 5, yaklaşık 6 gün boyunca nemli bir atmosferde CO2 hücreleri korumak ve RBMECs için% 90 üzerinde birleşir. 5 dakika (T75 balonlarına 1 mi tripsin ve T175 şişelerinden 2 mi): Tripsin-EDTA çözeltisi (250 tripsin 1) kullanarak hücreleri ayırın. SECM tripsin aktivitesi durdurun (2: 1), 5 dakika boyunca 750 x g'de santrifüj hücre süspansiyonları, 60 mi SECM pelet tekrar süspansiyon.
    3. ekler üzerine ekim önce başka bir 3 gün SECM 3 T175 şişeler ve kültürün içine RBMECs Böl. bir Bürker odasında bir optik mikroskop altında tripan mavisi ile 1: 1 seyreltilmiş, bir hücre süspansiyonu gözlemleyerek, RCAS yaşam sayısı.
  2. Eklemeler üzerine Hücre Yayımlama
    1. 6 çoklu-çukurlu transpar polietilen tereftalatın bir tarafına işlenir (PET) membran100 ug / ml poli-L-lisin ve fibronektin 50 ug / ml diğer tarafta, KBB uçlar RCA'ların ve BMECs bağlanmasına izin vermek. PET membranı ile temasını engellemek için cımbız ile ekler anlaştım.
      1. Üst bölme içine fibronektin çözeltisi (en az 500 ul), bir 6 yuvalı plaka içine giren yerleştirin ve ekleyin. 37 ° C'de inkübasyondan 1 saat sonra, fibronektin çözüm kaldırmak çok kuyucuklu plaka kapalı uçlar bir sürede ve steril bir destek olarak kullanılır 150 cm2 Petri kabı alt ters koydu zaten ekler kaplı.
      2. Yavaşça (Şekil 1A 'de gösterildiği gibi, RCAs tohumlama olarak anılacaktır) parçanın alt tarafına poli-L-lisin, 800 ul, ve oda sıcaklığında 1 saat süre ile ekler üzerinde çözüm tutmak.
      3. solüsyonu aspire ve ek 15-30 dakika boyunca oda sıcaklığında kurumaya bırakın. uçlar artık hücre tohumlama hazır değil, aynı zamanda birden fazla çoklu plaka saklanabilirBBB yapı ile devam etmeden önce, 4 ° C 'de gün.
        Not: FD40 akı ölçümü ile BBB kuruluş doğrulamak için kontrol olarak kullanılmak üzere, hücreler serbest en az 3 kaplı insertler tutmak için unutmayın.
    2. Tohum RCAs uç (Şekil 1A) baş aşağı üzerine hücre süspansiyonu 800 ul bırakarak poli-L-lizin kaplı insertler alt tarafına (35.000 / cm2). zara hücrelerin etkin bağlanmasına olanak sağlamak üzere, oda sıcaklığında 4 saat için ekler RCA süspansiyon bırakın.
    3. Geri kalan solüsyon aspire SECM 2 ml içeren kuyu içine ekler yerleştirin ve her 2 günde bir SECM değişen nemli bir atmosferde 37 ° C'de ve% 5 CO2 seviyesinde, çok oyuklu plaka muhafaza.
    4. 3 gün sonra, ne zaman RCAs ucun alt yüzeyi kaplanmış olan, aşağıdaki adımları ucun üst tarafına tohum RBMECs:
      1. T175 şişelerinden RBMECs ayırın ve saymaktoplam canlı hücreler, adım 1.1.2 ve 1.1.3 bildirildiği gibi.
      2. Astrositler, sadece 3 uçlar bırakarak SECM (1.000 ul) (Şekil 1B) ekin üst yüzeyi üzerine Tohum RBMECs (60,000 / cm2), TEER arka planı olarak kullanılır. standart kültür koşullarında çok oyuklu plaka koyun. her 2 günde bir, iç ve alt bölmede ise SECM değişen en az 3 gün süre ile kültüre sistemi korumak.

2. BBB Doğrulama

  1. TEER Ölçümü
    1. Eş-kültür 3. günde, uygun bir bölme içine BBB taşıyan insertler sokulmasıyla TEER kontrol (yani, bir kap ve haznesi ve kapak hem voltaj algılama ve akım elektrotları, bir çift içeren yerde) 4 dolu SECM ml. Bir epitel doku volt / ohmmetre bağlayın.
    2. Birlikte hücre BBB-sistemleri TEER ölçümleri ile, RCAS inci taşıyan 3 ekler TEER değerleri kaydetmekEn BBBs ile elde edilen değerlerden düşülür. Ω x cm 2 gibi sonuçları ifade etmek için insert (4.2 cm 2) yüzeyi tarafından ortaya çıkan TEER değerleri çarpın.
    3. Ko-kültür 3. gününden itibaren, her gün teer ölçün. Not: TEER artıran bir başlangıç ​​döneminden sonra, kayıtlı değerlerinin (genellikle 5. ve ko-kültür 7. gününde arasında) en az iki gün üst üste istikrarlı kalmalıdır. Bu noktada BBB doğrulama (Bölüm 2.2) ve / veya trans-BBB deneyler için ikinci aşama için hazır hale gelir.
      Not: Bölüm 2.1'de açıklanan prosedür aşağıdaki geçirgenlik deneyleri (bölüm 3) ayrılmış, aynı BBB-sistemler üzerinde yapılabilir. steril koşullar altında çalışırlar.
  2. Trans-BBB Flux FITC-dekstran 40 (FD40)
    1. 3 boş ekler arasında karşılaştırıldığında BBB modellerinin alt haznesine üst dan FD40 akı ölçünAşağıdaki adımlara göre (bölüm 1.2.1 nota bakınız):
      1. 1 mg ekleme / ml FD40 BBBs üst bölmesine (SECM içinde seyreltilmiş) ve N-, em 1, 2 ve 3 saat sonra alt bölme 200 ul SECM çekme ve λ ex (spektroflorimetre ile 488 nm fluoresans şiddetini ölçmek 515 nm) 5 yarık.
      2. Aynı analitik parametreleri kullanarak bakire orta 500 ul ölçme fluorescenceby SECM arka plan için değerler elde. Tüm FD40 floresans değerlerinden SECM arka floresan çıkarın.
      3. Bilinen konsantrasyonda (yani. 0.312, 0.625, 1.25, 2.5 ug / ml) SECM 500 ul içinde çözülmüş flüoresan tracer üretilen bir kalibrasyon eğrisi ile, gözlenen floresans değerlerinden karşılaştırılması ile nüfuz FD40 miktarını belirler.
      4. Göre ortalama akı değerlerden belirgin geçirgenlik katsayısı (P uygulaması) hesaplayın:
        P app = J / AC , bir nüfuz alanı (cm2) ve Cı üst bölmeye (mol / cm3) molekülün konsantrasyonudur.
        Not: Uygun TEER değerlere ulaşmıştır Üç veya daha fazla BBB-sistemleri, münhasıran bu doğrulama prosedürüne tahsis edilmeli ve aşağıdaki geçirgenlik deneyleri (bölüm 3) için kullanılan edilmemelidir. Sterilite zorunlu değildir.

3. trans-BBB FITC yüklü ferritinin nüfuz (FNN)

Not: farklı floresan moleküller kapsüllenmesi için nanocages (FNN) Escherichia coli içinde üretilen ve monte insan ferritin bir rekombinant varyantı (FN), Prof. Prosperi bölgesinin NanoBioLab (University of Milan-Bicocca, İtalya) elde edilebilir. FNN, FITC ile yüklenir, daha önce tanımlanmış olan protokole 13 ve hem de Fn ve yüklenmiş moleküllerin konsantrasyonları uygun doğru determin areEd.

  1. FITC Trans-BBB Akı ve FITC FNN
    1. Göre inkübasyon 7 ve 24 saat sonra serbest boya ile karşılaştırıldığında, - (CO-kültür 7. gün, genellikle 5 inci) doğrulanmış BBB modelleri alt bölmeye yukardakine FITC FNN akının ölçülmesi aşağıdaki adımlar:
      1. FITC FNN (50 ug / ml FNN, 1.1 uM FITC) için ya da her bir formülasyon için en az 6 BBB sistemleri üst bölme içine serbest FITC eşit miktarda, alt bölmeden SECM çözeltisi 2 mi geri ekle 7 saat sonra ve 24 saat sonra, diğer 3 uçlar alt bölmeden en az 3 ekler.
      2. Spektrofluorimetresi ile toplanan numunelerin 500 ul fluoresans şiddetini ölçmek (λ ex 488 nm, λ em 515 nm, 5 yarık).
      3. aynı analitik parametreleri kullanarak ortam 500 ul ölçülerek SECM arka floresan elde edilir. SECM arka plan floresan çıkarmaTüm FITC ya da FITC-FNN floresans değerlerinden.
      4. 500 ul SECM içinde çözülmüş serbest veya nanoformulated boyanın bilinen konsantrasyonlarda (yani. 6.87, 13.75, 27.5, 55 nM) ile üretilen iki farklı kalibrasyon eğrileri elde edilen floresan değerleri karşılaştırarak nüfuz eden FITC veya FITC FNN konsantrasyonunu belirleyin.
  2. RBMECs FITC-FNN Lokalizasyon
    1. BBB sistemleri üst bölmeden SECM kaldırma PBS ile uçlar yıkayın ve 10 için üst bölmeye 500 ul paraformaldehid (fosfat tamponlu salin-PBS içinde% 4) ilave edilerek her bir deney grubu için en az iki ekin üzerine RBMECs tamir oda sıcaklığında min.
    2. artık paraformaldehid çıkarmak için PBS uçlar üç kez yıkayın.
      Not: Bu noktadan itibaren, kısırlık gerekli değildir.
    3. PET membran uygun parçalar kesin ve aşağıdaki adımları göre hücrelerin immündekorasyon ile devam edin:
      1. permeabi10 dakika boyunca PBS içinde% 0.1 Triton X-100 ile lize RBMECs. PBS içinde% 2 sığır serum albümini (BSA),% 2 keçi serumu ihtiva eden bir çözelti ile oda sıcaklığında 1 saat için bloke aşamasını gerçekleştirir. Oda sıcaklığında 2 saat süre ile, 1:20 seyreltide bir anti-Von Willebrand Faktörü (vWF) ile inkübe edin.
      2. PBS ile üç kez yıkandıktan sonra,% 2 BSA için oda sıcaklığında 2 saat boyunca hücrelerin maruz, 1 uygun bir ikincil antikor ihtiva eden% 2 keçi serumu çözeltisi: sırayla 300 seyreltme anti-VWR ve DAPI ortaya çıkarmak için 1: çekirdek tespiti için 1500 dilüsyon.
    4. Bir antifade montaj çözümü (insert fragmanı başına bir damla) kullanarak mikroskop lamı üzerine ekleme parçaları monte sonra bir kapak kayma ile örnek kapatın. 40X büyütme, 1.5 zoom ve 1024 x 1024 piksel çözünürlükte bir immersiyon yağı lens kullanarak konfokal mikroskobu ile analiz edin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

ekler üzerinde bbb modeli, hücre yapışmasında ve büyüme kurulması sırasında PET membran saydam yapısı bir ışık mikroskobu sayesinde kullanılarak izlenebilir. 35.000 hücre / cm2, oda sıcaklığında (Şekil 2A) inkübasyon 4 saat sonra parçanın alt tarafına etkin bir şekilde eklemek yoğunluğunda tohumlanır RCAs ve bir mil şeklinde bir yapıya alma 3 gün zar yüzeyini kaplamak için büyümeye (Şekil 2B). 60.000 hücre / cm2 'lik bir yoğunlu...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Burada tarif edilen in vitro yöntem, nanopartiküller ile nanoformulation girdiğinde flüoresan moleküllerinin trans-BBB teslim incelemek için yararlı bir geçerli bir yaklaşım sunmaktadır. Burada BBB genelinde kargo moleküllerin translokasyon incelemek için iyi bir aday temsil FNN kullanın. Özellikle BMECs lüminal zarı üzerinde ifade edilen ve burada bir reseptör aracılı içselleştirme yolu kullanan nano partıkuler alımını aracılık eder TfR1 reseptör tarafından tanınır çünkü FNN ilaç / maddeleri trans-BBB teslimat...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

Yazarlar, araştırma fonu için Assessorato alla Sanità, Regione Lombardia ve Sacco Hastanesi'ne (NanoMeDia Projesi) teşekkür eder.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Sıçan Beyin Mikrovasküler Endotel Hücreleri InnoprotP10308, Sprague Dawley sıçan beyin dokusundan izole edildi, birinci geçişte dondurularak saklandı ve donmuş
Kortikal Astrositler verildi;InnoprotP10202, 2 günlük sıçan beyin dokusundan izole edildi, birinci geçişte donduruldu ve donmuş olarak teslim edildi.
Endotel Hücre Ortamı kitiInnoprotP60104ECM (500 ml) ve fetal bovin serumu (25 ml), endotel hücre büyüme takviyesi (5 ml) ve penisilin / streptomisin (5 ml). 37 ° C'de sıcak; Kullanmadan önce C su banyosu yapın ve
Fenol Kırmızısı EuroClone içermeyen Tripsin-EDTA'danECM0920D37 ° C'de Sıcak; Kullanmadan önce C su banyosu
Floresein izotiyosiyanat-dekstran 40.000SigmaFD40Sışıktan korur
paraformaldehit Kimyasal davlumbazdaSigma158127
Dulbecco'nun fosfat tamponu salin, Ca ve MgEuroCloneiçermez ECB4004L
Triton  X-100SigmaT8787
sığır serum albümini SigmaA7906
keçi serumu EuroCloneECS0200D
fare monoklonal anti-Von Willebrand FaktörDakoM0616
AlexaFluor 546-fare IgG'lerine karşı konjuge antikorThermoFischer ScientificA-11003ışıktan korur
DAPI (4 ', 6-diamidino-2-fenilindol) ThermoFischer ScientificD1306ışıktan korur
ProLong Altın Antifade MountantThermoFischer ScientificP36934
Poli-L-lizin HidrobromürSigmaP1274aynı çözelti birkaç kez kullanılabilir
sığır plazmasından fibronektin SigmaF1141aynı çözelti birkaç kez kullanılabilir
Polietilen tereftalat (PET) eklerFalconF3090Şeffaf Polietilen tereftalat (PET) membranlar; yüzey alanı: 4,2 cm2; gözenek boyutu 0.4 &mikro; m / yüzey alanı
T75 Primo TC şişesiEuroCloneET7076
T175 Primo TC şişesiEuroCloneET7181
EVOM2 Epitel Dokusu Volt / Ohmmetre ve nbsp;    Dünya Hassas Aletler AlmanyaEVOM2
Endohm- 24SNAP kupasıDünya Hassas Aletler AlmanyaENDOHM-24SNAP
Kameralı ışık/floresan mikroskobuLeica MicrosystemsDM IL LED Fluo/ ICC50 W Kamera Modülü  Kameralı canlı hücreler için ters mikroskop 
Konfokal MikroskopLeica MicrosystemsTCS SPE
SpektroflorimetreJascoFP-8000
koruyun seyreltme,

Kaynaklar

  1. Banks, W. A. Characteristics of compounds that cross the blood-brain barrier. BMC Neurol. 9 (1), 3(2009).
  2. Löscher, W., Potschka, H. Drug resistance in brain disease and the role of efflux transporters. Nat Rev Neurosci. 6, 591-602 (2005).
  3. Xu, G., Mahajan, S., Roy, I., Yong, K. -T. Theranostic quantum dots for crossing blood-brain barrier in vitro and providing therapy of HIV-associated encephalopathy. Front Pharmacol. 15 (4), 140(2013).
  4. Masserini, M. Nanoparticles for Brain Drug Delivery. ISRN Biochem. , (2013).
  5. Sagar, V., Pilakka-Kanthikeel, S., Pottathil, R., Saxena, S. K., Nair, M. Towards nanomedicines for neuroAIDS. Rev. Med. Virol. 24 (2), 103-124 (2014).
  6. Kreuter, J. Drug delivery to the central nervous system by polymeric nanoparticles: What do we know. Adv. Drug Deliver. Rev. 71, 2-14 (2014).
  7. Arosio, P., Ingrassia, R., Cavadini, P. Ferritins: a family of molecules for iron storage, antioxidation and more. Biochim. Biophys. Acta. 1790 (7), 589-599 (2009).
  8. Jääskeläinen, A., Soukka, T., Lamminmäki, U., Korpimäki, T., Virta, M. Development of a denaturation/renaturation-based production process for ferritin nanoparticles. Biotechnol. Bioeng. 102 (4), 1012-1024 (2009).
  9. Jefferies, W. A., Brandon, M. R., Hunt, S. V., Williams, A. F., Gatter, K. C., Mason, D. Y. Transferrin receptor on endothelium of brain capillaries. Nature. 312, 162-163 (1984).
  10. Deli, M. A., Abraham, C. S., Kataoka, Y., Niwa, M. Permeability studies on in vitro blood-brain barrier models: physiology, pathology, and pharmacology. Cell. Mol. Neurobiol. 25 (1), 59-127 (2005).
  11. Wilhelm, I., Fazakas, C., Krizbai, I. A. In vitro models of the blood-brain barrier. Acta Neurobiol. Exp. (Wars). 71, 113-128 (2011).
  12. Wilhelm, I., Krizbai, I. A. In vitro models of the blood-brain barrier for the study of drug delivery to the brain. Mol Pharm. 11 (7), 1949-1963 (2014).
  13. Bellini, M., et al. Protein nanocages for self-triggered nuclear delivery of DNA-targeted chemotherapeutics in Cancer Cells. J. Control. Release. 196, 184-196 (2014).
  14. Fiandra, L., et al. Nanoformulation of antiretroviral drugs enhances their penetration across the blood brain barrier in mice. Nanomedicine. 11 (6), 1387-1397 (2015).
  15. Molino, Y., Jabès, F., Lacassagne, E., Gaudin, N., Khrestchatisky, M. Setting-up an in vitro model of rat blood-brain barrier (BBB): a focus on BBB impermeability and receptor-mediated transport. J. Vis. Exp. , e51278(2014).
  16. Perrière, N., et al. A functional in vitro model of rat blood-brain barrier for molecular analysis of efflux transporters. Brain Res. 1150, 1-13 (2007).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Ferritin NanoparçacıklarıFITC GeçirgenliğiTransendotelyal Elektriksel DirençKonfokal MikroskopiHücre Ko-kültürüNanoformülasyon İletimiAstrosit Endotel Ko-kültürüSpektroflorometrik AnalizPoli L Lizin Kaplama
Bir Sıçan Kan beyin bariyeri karşısında FITC yüklü ferritinin İn Vitro Geçirgenlik: Bir Model Nanoformulated Moleküllerin Teslim Eğitim için
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.