Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Bir ve İki Boyutlu Kültürlerde Elektrik ve Manyetik Alanlar Kullanan Nöronların Harici Uyarımı

12.9K görüntülenme

DOI:

10.3791/54357

7 Mayıs 2017

Bu makalede

Özet

Nöronal kültürler tek nöronlar üzerindeki etkisi veya nöronların nüfusu yoluyla ortaya çıkan beyin stimülasyonu teknikleri incelemek için iyi bir modeldir. Banyo elektrotlar doğrudan üretilen ya da zaman içinde değişen bir manyetik alan tarafından indüklenen bir elektrik alanı ile desenli nöronal kültürler uyarılması için farklı yöntemler burada sunulmuştur.

Özet

zar potansiyeli, belirli bir eşik değerini aştığında bir nöron, bir eylem potansiyelini ateşleyeceği şeklindeki. beyin tipik aktivitesi, bu da sinaps kimyasal girdi bir sonucu olarak ortaya çıkar. Ancak, nöronlar da dayatılan elektrik alanı ile uyarılabilir. Özellikle, son klinik uygulamalar dışarıdan bir elektrik alanı oluşturarak nöronları aktif hale getirin. Bu nöron dış alana yanıt verir ve hangi işlemin potansiyelini nasıl neden araştırmak için ilgi odağı olmaktadır. Neyse ki, bir dış elektrik alanı hassas ve kontrollü bir uygulama, kesilmiş ayrılır ve kültür içinde yetiştirilir, embriyonik nöronal hücreler için mümkündür. Bu son derece tekrarlanabilir sisteminde bu soruların soruşturma sağlar.

Bu yazıda nöronal kültürler üzerinde dış elektrik alanın kontrollü uygulama için kullanılan bazı teknikler gözden geçirilmiştir. Ağlar ya tek boyutlu, yani linea de desenli olabilirr biçimleri ya da substrat bütün düzlemde büyümesine izin verilir ve bu şekilde iki boyutlu. Ayrıca, tahrik sıvısı (banyo elektrotlar) 'de ya da manyetik impuls uzaktan yaratılması kullanarak elektrik alanı uyararak daldırılmış elektrodlar aracılığıyla elektrik alanının doğrudan uygulanması ile oluşturulabilir.

Giriş

nöronlar ve dış elektrik alan arasındaki etkileşimin temel etkileri yanı sıra pratik olanları vardır. Bu, dışarıdan uygulanan bir elektrik alanı dokuyu harekete ki Volta zamanlardan beri bilinmekle birlikte, nöronlarda bir Sonuçta elde edilen eylem potansiyeli üretimi için sorumlu olan mekanizmalar sadece son 3, 4, 2, 1 çözülemeyen başlıyor. Bu elektrik alanı 2, 5 yanıt nöron membran potansiyelinin depolarizasyonu, membran özelliklerinin ve iyon kanallarının rolü ve hatta bölgeyi ne....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Etik Beyanı: Hayvan işlemeyi kapsayan Prosedürler Weizmann Bilim Enstitüsü Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) ve uygun İsrail hukuk kurallarına uygun olarak yapıldı. Weizmann Enstitüsü Laboratuarı Uluslar arası Hayvan Bakım Değerlendirme ve Akreditasyon Derneği (AAALAC) tarafından akredite edilmiştir. Weizmann Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi hipokampal nöronlar ile yürütülen bu çalışmayı onayladı.

(2D) iki boyutlu ve tek boyutlu (1D) Hipokampal Kültürler hazırlanması 1.

  1. 2B kültürleri için lamelleri hazırlanması.
    1. 0.9 ml minimum temel ortam (MEM) + 3G, 0.05 ml cenin buzağı serumu (FCS), 0.05 ml....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Sunulan protokol nöronal kültürlerin kolay uygulamalar için elektron verir. Biz uyarılması için geliştirilmiş çeşitli yöntemler ile kombine edildiğinde, sağlıklı ve hastalıklı nöronlar 27 özelliklerini karşılaştırmak için bir fonksiyonu olarak kültürleri canlandırmak için en uygun yollar bulmak, böyle Chronaxie ve Rheobase 5 gibi bazı içsel nöron özelliklerin ölçümlerini yapar sağlar yapıları ve daha yeni yaklaşımlar. Bazı örnekler sonraki .......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

1D desen çeşitli uygulamalar için kullanılabilir önemli bir araçtır. Örneğin, nöronal kültürler 29 mantık kapıları oluşturmak ve daha yakın zamanda sıçan hipokampal nöronlarının 5 Chronaxie ve Rheobase ölçmek ve kıyasla Down sendromlu hipokampal nöronlar ateşleme aktivitesinin sinyal yayılma hızının yavaşlatılması için 1D model oluşturmanın kullandık vahşi tip (WT) hipokampal nöronlar 27. 1D desen için önerilen protokol sağlamdır ve arzu edilen herh.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.

Teşekkürler

Yazarlar çok yararlı tartışmalar için Ofer Feinerman Fred Wolf, Menahem Segal, Andreas Neef ve Eitan Reuveny teşekkür ederim. Yazarlar teknolojinin erken sürümlerini geliştirmek için Ilan Breskin ve Jordi Soriano teşekkür ederim. Yazarlar teorik kavramlarla yardım Tsvi Tlusty ve Jean-Pierre Eckmann teşekkür ederim. Bu araştırma Minerva Vakfı, Bilim ve Teknoloji, İsrail, Bakanlığı tarafından ve İsrail Bilim Vakfı hibe 1320-1309 ve Bi-Ulusal Bilim Vakfı hibe 2008331 tarafından desteklenmiştir.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
APVSigma-AldrichA8054Ağ bağlantısını kesin. Bölüm 2.4.2'de belirtilen
B27 suppGibco17504-044Kaplama ortamı. Bölüm 1.1.1'de belirtildiği gibi
bicucullineSigma-Aldrich14343Ağ bağlantısını kesin. Bölüm 2.4.2'de belirtilmiştir
Boraks (sodyum tetraborat dekahidrat)Sigma-AldrichS9640Borat tamponu. Bölüm 1.1.2'de belirtilen
Borik asitFrutarom LTD5550710Borat tamponu. Bölüm 1.1.2'de belirtilen
CaCl2 , 1 MFluka 21098Hücre dışı kayıt çözümü. Bölüm 1.5.2'de belirtildiği gibi
CNQXSigma-AldrichC239Ağ bağlantısını kesin. Bölüm 2.4.2
COMSOLCOMSOL IncMultiphysics 3.5Sayısal simülasyonda belirtilmiştir. Bölüm 3.5.2
D-(+)-Glikoz, 1 MSigma-Aldrich65146Kaplama ortamı, Hücre dışı kayıt çözeltisinde belirtilmiştir. Bölüm 1.1.1 ve 1.5.2
D-PBSSigma-AldrichD8537hücre kültürlerinde belirtilmiştir. Bölüm 1.2.4 ve 1.2.6'da belirtilmiştir
FCS (FBS)Gibco12657-029Kaplama ortamı. Bölüm 1.1.1
FibronektinSigma-AldrichF1141Biyo Kaplama'da belirtilmiştir. Bölüm 1.2.6'da belirtilmiştir
Fluo4AMYaşam teknolojileriF14201Spontan veya uyarılmış aktivitenin görüntülenmesi. Bölüm 1.5.1, 1.5.3 ve 1.5.5'te belirtilmiştir
FUDRSigma-AldrichF0503Değişen ortam. Bölüm 1.4.1'de belirtilmiştir
GentamisinSigma-AldrichG1272Kaplama ortamı, Değişen ortam, Son ortam. Bölüm 1.1.1'de belirtilmiştir
GlutaMAX 100xGibco35050-038Kaplama ortamı, Değiştirme ortamı, Son ortam. Bölüm 1.1.1
Hepes, 1 MSigma-AldrichH0887Hücre dışı kayıt çözümünde belirtilmiştir. Bölüm 1.5.2
HI HSBI04-124-1A'daKaplama ortamı, Değişen ortam, Son ortam. Bölüm 1.1.1, 1.4.1 ve 1.4.2
KCl'de belirtilmiştir,  3 MMerck1049361000Hücre dışı kayıt çözümü. Bölüm 1.5.2'de belirtilen
Laminin Sigma-AldrichL2020Biyo Kaplama. Bölüm 1.2.6
MEM x 1Gibco21090-022'deKaplama ortamı, Değişen ortam, Son ortam. Bölüm 1.4.1'de belirtilen      1.4.2
MgCl2, 1 MSigma-AldrichM1028Hücre dışı kayıt solüsyonu. Bölüm 1.5.2'de bahsedilmiştir
NaCl, 4 MBio-Lab19030591Hücre dışı kayıt çözümü. Bölüm 1.5.2
OctadecanethiolSigma-Aldrich01858Cr-Au kaplı lamellerin (1D kültürler) temizlenmesinde belirtilmiştir. Bölüm 1.2.3'te bahsedilen
Pluracare, F108, NF, Prill, BASF Şirketi 50475278Biyo-reddetme kaplaması, Biyo kaplama. Bölüm 1.2.4 ve 1.2.6'da belirtilen
Poli-L-lizin% 0.01 çözeltisi Sigma-Aldrich  P47075Hücre bölünmesini teşvik eder. Bölüm 1.1.4
Sükroz, 1 MSigma-AldrichS1888Hücre dışı kayıt çözümünde belirtilmiştir. Bölüm 1.5.2'de belirtilen
Tiyol Sigma-Aldrich1858Biyo-Reddetme Kaplaması. Bölüm 1.2.3
URIDINESigma-AldrichU3750Değişen ortamda belirtilmiştir. Bölüm 1.4.1'de bahsedilen
, Püskürtme makinesiAJA International, IncATC Orion-5Series camı ince metal tabakaları ile kaplama. Bölüm 1.2.2'de bahsedilen
kalem çizici Hewlett Packard HP 7475AKaplanmış lamel üzerine desen aşındırması. Bölüm 1.2.5'te belirtilenler
Elektrotlar, teller A-M Sistemleri, Carlsborg WA767000Nöronal kültürlerin elektrik stimülasyonu. Bölüm 2.1, 2.2, 2.3 ve 2.4.5'te belirtilmiştir
Sinyal üreteciBKPrecision4079Elektrik sinyalinin şekillendirilmesi. Bölüm 2.3'te bahsedilen,
AmplifikatörEv YapımıGerilim sinyal üretecinden elektrotlara giden sinyalin amplifikasyonu. Bölüm 2.3'te belirtilen
Güç kaynağıMatrisi MPS-3005 LK-3 ve nbsp;Püskürtme makinesine güç kaynağı. Bölüm 1.2.2.3'te belirtilmiştir
Transkraniyal manyetik stimülasyonMagstim, Spring Gardens, UKHızlı 2Nöronal kültürün manyetik stimülasyonu. Bölüm 3.1, 3.3 ve 3.4'te bahsedilmiştir
EpoksiCognisVersamid 140Ev yapımı bobinlerin dökümü. Bölüm 3.4'te belirtilen
epoksikabukEPON 815 Ev yapımı bobinlerin dökümü. Bölüm 3.4'te bahsedilen,
0.005'' kalınlığında platin teller; A-M Sistemleri,   Carlsborg WA  767000Nöronal kültürlerin elektrik stimülasyonu. Bölüm 2.1'de bahsedilen,
dairesel manyetik bobinEv yapımıNöronal kültürün manyetik stimülasyonu. Bölüm 3.3
WaveXpress SW. K Hassasiyet Dalga formu düzenleme yazılımı. Bölüm 2.1.32'de bahsedilmiştir
Xion Ultra 897AndorDuyarlı EMCCD kamera. Bölüm 2.4.4'te bahsedilmiştir
, belirtilmiştir belirtilmiştir ,, , , B&'da bahsedilmiştir

Kaynaklar

  1. Nagarajan, S. S., Durand, D. M., Warman, E. N. Effects of induced electric fields on finite neuronal structures: a simulation study. IEEE Trans Biomed Eng. 40 (11), 1175-1188 (1993).
  2. Nowak, L. G., Bullier, J. Axons but not cell bodies, are activated by electrical stimulation in cortical gray matter. II. Evidence from selective inactivation of cell bodies and axon init....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Nöronal KültürlerElektriksel StimülasyonManyetik StimülasyonTek Boyutlu KültürlerDesenli Nöronal AğlarHarici Elektrik AlanıElektrot KonfigürasyonuManyetik Puls ÜretimiŞiddet-Süre Eğrisi