Burada, fare modelinde BCG ile intranazal ve subkutan bağışıklamanın neden olduğu koruyucu etkinliği ve akciğer immün yanıtını karşılaştırmak için izlenen metodolojiyi detaylandırıyoruz. Sonuçlarımız, pulmoner aşılamanın faydalarını göstermekte ve aşı kaynaklı korumada IL17 aracılı yanıtın rolünü önermektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Koruyucu etkinliği ve Pulmoner Bağışıklık Tepkisi Fare Subkutan ve Burun BCG İdaresi ardından
Bu makalede
Özet
Özet
İntradermal BCG aşılamasının küresel kapsamına rağmen, tüberküloz dünyadaki en yaygın bulaşıcı hastalıklardan biri olmaya devam etmektedir. Klinik öncesi veriler, akciğer tüberkülozu aşılarını, bulaşmadan sorumlu olan akciğer hastalığını önlemek için umut verici bir strateji olarak teşvik etmiştir. Bu çalışmada, fare modelinde intranazal BCG aşılamasının deri altı ile karşılaştırıldığında faydalarını göstermek için kullanılan metodolojiyi açıklıyoruz. Verilerimiz, intranazal BCG uygulamasını takiben daha fazla koruyucu etkinlik göstermiştir. Ek olarak, sonuçlarımız pulmoner aşılamanın akciğerlerde Th1 ve Th17 yanıtları dahil olmak üzere daha yüksek bir bağışıklık tepkisini tetiklediğini ve ayrıca solunum solunum yollarında immünoglobulin A (IgA) konsantrasyonunda bir artışı tetiklediğini göstermektedir. Verilerimiz, Mycobacterium tuberculosis tehdidi sonrası akciğerlerde koruyucu etkinlik ile IL17 üreten hücrelerin varlığı arasındaki ilişkiyi göstermektedir ve bu sitokinin pulmoner aşılamanın sağladığı koruyucu yanıtta bir rol oynadığını düşündürmektedir. Son olarak, fare modelinde solunum yolu aşılamasını incelemek için geliştirdiğimiz, BCG dışındaki diğer tüberküloz aşılarına da tahmin edilebilen, mukozal yanıtı veya intratrakeal veya aerosol gibi diğer pulmoner uygulama yollarını hedefleyen küresel iş akışını detaylandırıyoruz.
Giriş
Tüberküloz (TB) TB endişe verici küresel bir sağlık sorunudur 1 yapan dünyada HIV fazla ilişkili ölümüne yol önde gelen bulaşıcı hastalıklardan biri olan ve çoklu ilaç dirençli suşlar yükselen artış ile birlikte olduğunu. Yeni tanı araçları, daha etkili ve daha az toksik ilaçlar ve yeni, güvenli ve etkili bir TB aşıları özellikle gelişmekte olan ülkelerde, acil ihtiyaç vardır.
zayıflatılmış Basil Calmette-Guerin (BCG) şu anda dünya çapında 1970'lerden beri doğumda intradermal tatbik edilmiştir TB, karşı tek lisanslı aşı edilir. BCG çocuklarda hastalık (menenjit ve miliyer TB) şiddetli formları önlemede etkili kabul edilir, ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm fareler kontrol edilen koşullar altında tutulur ve hastalık belirtisi gözlendi. Deneysel çalışma Deney hayvanlarının korunması ve yetkili yerel etik kurul onayı ile Avrupa ve ulusal direktifleri ile anlaşma yapılmıştır.
BCG Danimarka ve Sayısallaştırılmış Gliserin Stoklar ve Mycobacterium tuberculosis H37Rv 1. hazırlanması
NOT: anlatılan tüm protokoller BSL3 koşulları altında gerçekleştirilmiştir.
- BCG Danimarka da H37Rv soylarının çözülme dondurulmuş gliserol stokları ve Tween-80% 0.05 (h / h) ve ADC (albümin, dekstroz, katalaz),% 10 (h / h) ile desteklenmiş 7H9 ort....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
deri altı ve burun içi: Bu çalışma, BCG iki uygulama yollarının karşılaştırmasını tarif eder. Subkutan rota dünya çapında BCG için geçerli klinik rota intradermal, karşılaştırılabilir. Aşının burun içinden yol M. enfeksiyonunun doğal yolunu taklit amaçlar amaç tüberküloz, akciğerlerde, doğrudan bu patojenin başlıca hedef organ immün tepkisini indüklemek için.
Şekil 1 takip iş akışını açıklar........
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Tüberküloza karşı mevcut aşı olan BCG, tarihte en yaygın uygulanan aşı olmasına rağmen, tüberküloz dünya çapında bulaşıcı hastalıklardan kaynaklanan ölüm ve morbiditenin önde gelen nedenlerinden biri olmaya devam etmektedir. Bu paradoks, bu aşının sorumlu bulaşma şekli olan akciğer tüberkülozuna karşı korunmaması ile açıklanmaktadır. Hastalığın pulmoner formlarına karşı etkili yeni aşılama yaklaşımlarına, küresel olarak hastalık bulaşması üzerinde en büyük etkiye sahip olacakları için acilen ihtiyaç vardır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma, "İspanya Ekonomi ve Rekabet Edebilirlik Bakanlığı" [hibe numarası BIO2014-5258P], "Avrupa Komisyonu" tarafından H2020 programları [hibe numaraları TBVAC2020 643381] tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Middlebrook 7H9 et suyu | BD | 271310 | |
| Middlebrook ADC Zenginleştirme | BD | 211887 | |
| Tween 80 | Scharlau | TW00800250 | |
| 3 mm çaplı Cam | Boncuklar Scharlau | 038-138003 | |
| Middlebrook 7H10 Agar | BD | 262710 | |
| 1 ml şırınga 26GA 0,45 x 10 mm | BD | 301358 | |
| GentleMACS ayrıştırıcı | Miltenyi Biotec | 130-093-235 | |
| C tüpler | Miltenyi Biotec | 130-093-237 | |
| M tüpler | Miltenyi Biotec | 130-093-236 | |
| Kollajenaz D | Roche | 11088882001 | |
| DNaseI | Applichem | A3778,0100 | |
| Falcon 70 &mikro; m Hücre Süzgeci | Corning | 352350 | |
| RPMI 1640 | Sigma | R0883 | |
| Kırmızı Kan Hücresi Parçalama Tamponu | Sigma | R7757 | |
| GlutaMAX Takviyesi | Gibco | 35050-061 | 100x konsantre |
| Penisilin-Streptomisin Çözeltisi | Sigma | P4333 | 100x konsantre |
| Fetal Buzağı Serumu | Biyolojik Endüstriler | 04-001-1A | |
| 2-Merkaptoetanol | Sigma | M3148-25ML | |
| Asa 2.0 El Tipi Otomatik Hücre Sayacı | Millipore | PHCC20040 | |
| Scepter Hücre Sayacı Sensörleri, 40 & m | Millipore | PHCC40050 | |
| Mycobacterium Tuberculosis - Tüberkülin PPD | Statens Serum Institut (SSI) | 2390 | |
| Fare IFN-&gama; ELISA geliştirme kiti | Mabtech | 3321-1H | |
| Mouse IL17A ELISA geliştirme kiti | Mabtech | 3521-1H | |
| Brefeldin A | Sigma | B7651 | |
| FITC Sıçan Anti-Fare CD4 | BD | 553047 | |
| BD Cytofix / Cytoperm Kiti | BD | 555028 | |
| APC-Cy7 Sıçan Anti-fare IL-17A | BD | 560821 | |
| APC Fare Anti-fare IFNg | BD | 554413 | |
| LAKRYMAL ZEYTİN LUER KİLİT 0.60 x 30 mm. 23G x 1 1/4 inç | UNIMED | 27.134 | için trakea kanülü olarak kullanılır |
| MAXISORP | NUNC | 430341 | |
| Albümin, sığır serumundan | Sigma | A4503 | |
| Keçi Anti-Fare IgA (&alfa;-zincire özgü)&eksi; Peroksidaz antikoru | Sigma | A4789 | |
| 3,3&asal;,5,5′-Tetrametilbenzidin (TMB) | Sigma | T0440 | |
| MyTaq DNA Polimeraz | Bioline | BIO-21107 | Kit, Tampon 5x İçerir |
Kaynaklar
- Zumla, A., et al. The WHO 2014 global tuberculosis report--further to go. Lancet Glob Health. 3 (1), e10-e12 (2015).
- Mangtani, P., et al. Protection by BCG vaccine against tuberculosis: a systematic review of randomized controlled tria....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
