Yöntem makalesi

B Grubu bir murin modelinde Streptococcus Vajinal Kolonizasyon

DOI:

10.3791/54708

⸱

16 Kasım 2016

 , 
1Department of Pediatrics, Division of Host-Microbe Systems & Therapeutics, University of California San Diego School of Medicine, 2Department of Biology and Center for Microbial Sciences, San Diego State University

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokolün amacı bir murin modelinde insan Grup B Streptococcus (GBS), vajinal kolonizasyonu taklit etmektir. Bu yöntem konak bağışıklık yanıtlarını ve GBS vajinal sebat katkıda bakteriyel faktörleri araştırmak için, yanı sıra tedavi stratejileri test etmek için kullanılabilir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yetişkin% 30 - Streptococcus agalactiae (Grup B Streptococcus, GBS), insan mide-bağırsak sistemi ve 10 vajinal kanalın bir Gram-pozitif asemptomatik colonizer olup. Bağışıklık tehlikeye bireyler de dahil olmak üzere yenidoğanlar, hamile kadınlar ve yaşlılar, GBS sepsis, artrit, pnömoni, ve menenjite neden olan istilacı patojene geçebilir. GBS yenidoğanlarda lider bakteriyel patojen olduğu için, mevcut profilaksi GBS vajinal kolonizasyon ve GBS-pozitif annelerin sonraki peripartum antibiyotik tedavisi için geç gebelik taraması oluşur. Ağır GBS vajinal yük yenidoğan hastalık ve kolonizasyon her ikisi için de risk faktörüdür. Ne yazık ki, çok az ev sahibi ve teşvik veya vajinal kolonizasyon GBS izin bakteriyel faktörler hakkında bilinmektedir. Bu protokol, bakteriyel uzunlu belirlemek için tek bir β-estradiyol, tedavi öncesi ve günlük olarak örnekleme yöntemiyle sürekli GBS vajinal kolonizasyonu kurulması için bir yöntem açıklanırd. Ayrıca ayrıntılar yöntemleri ek tedaviler veya ilgi reaktifler yönetmek ve vajinal lavaj sıvısı ve üreme yolu dokuları toplamak için. Bu fare modeli gebelik sırasında annenin vajinal kolonizasyonu kontrol etmek ve savunmasız bebeğe bulaşmasını önlemek için potansiyel terapötik hedeflere götürecek vajinal ortamında GBS-host etkileşimi, anlaşılması daha fazla olacaktır. Aynı zamanda kadın vajinal kanalın genel bakteriyel-konak etkileşimleri anlayışımızı artırmak ilgi olacaktır.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Streptococcus agalactiae Grup B Streptococcus (GBS), sıklıkla bağırsak ve sağlıklı yetişkin genitoüriner izole bir kapsüllenmiş, Gram pozitif bir bakteridir. 1970'li yıllarda, GBS yılda yenidoğan hastalık 7.000 durumlarda 1 ile bulaşıcı neonatal mortalitenin önde gelen ajan olarak ortaya çıkmıştır. Erken başlangıçlı GBS hastalığı (EOD) pnömoni veya solunum sıkıntısı doğar, ilk saatlerde veya yaşam günlerinde ortaya çıkar ve genellikle geç başlangıçlı hastalık (LOD) ise, sepsis içine geliştirir birkaç ay sonra gelişir ve sıklıkla bakteriyemi, ile ortaya 2 menenjit ilerler. 2002 yılı itibariyle, Hastalık Kontrol ve Önleme Mer....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm hayvan çalışmaları, San Diego Eyalet Üniversitesi Lab Hayvan Bakım Dairesi tarafından onaylanmış ve kabul edilmiş veteriner standartlar altında gerçekleştirilmiştir. Dişi fareler, yaş 8-16 hafta, bu yöntemin geliştirilmesi için kullanılmıştır.

β-estradiyol hazırlanması 1. ve periton içi enjeksiyon

  1. Uygun kişisel koruyucu ekipman (KKE) giyerek kağıt tartmak üzerinde β-estradiol (0.5 mg / fare) dışarı ölçün. DİKKAT: β-estradiyol deri ve mukoza yüzeylerinden absorbe edilebilir.
  2. Tüm topaklar kaldırıldı ve β-östradiol ince bir toz kadar 15 ml konik tüp ve vorteks β-östradiol aktarın. 10 ml'lik bir şırınga içine susam ya....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu modelin geliştirilmesi sırasında, birden gözlemler GBS vajinal kolonizasyon süresini etkileyen faktörler konusunda yapılmıştır. Aşılama etkiler GBS bakteriyel kalıcılık de nasıl östrus evresini belirlemek için, fareler vajinal lavaj sıvısının yoluyla aşılama günü sahnelenmiştir. Şekil 1 ile belirlendiği gibi, fare östrus döngüsü dört aşamadan göstermektedir ıslak montaj vajinal lavaj sıvısı, iyi kurulmuş bir yöntem 29. Fareler bu ilk aşamasına göre gruplara.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ev sahibi kapsamında ana ve diğer mikropların iki GBS etkileşimlerinin anlaşılması ilerletilir, bir hayvan modeli gereklidir. Bu çalışma farelerde GBS vajinal kolonizasyonu kuran teknik yönlerini açıklar. Bu protokol, bakterilerin aşılanması veya aşının kalınlaşmasına vajinal ön yıkama ya da katkı maddeleri kolonizasyon etkinleştirme çubukla örnekleri, immün gidericiler toplamak için anestezi kullanılmadan farelerin>% 90 kolonizasyon elde edilir. Ayrıca, bu model GBS sebat uzunluğu ve bakteriyel yükü hem de mütevazı .......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

San Diego Eyalet Üniversitesi'ndeki vivaryum yöneticisine ve personeline hayvancılık konusundaki destekleri için teşekkür ederiz. Bu çalışma sırasında K.A.P. bir ARCS bursu ve Inamori Vakfı'ndan bir burs ile desteklendi. K.S.D., Ulusal Sağlık Enstitüleri'nden NS051247 bir R01 hibesi ile desteklenmektedir.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Susam yağı Sigma AldrichS3547-250ML
β-Estradiol Sigma AldrichE8875-1GDİKKAT: Uygun KKD kullanın. β-estradiol cilt ve mukozal yüzeylerden emilebilir.
200 μ l Jel Yükleme Pipet Uçları ABD Bilimsel1252-0610
Üretro-genital, steril, kalsiyum aljinat swablarPüriten25-801 A 50
CHROMagar StrepBDRG UluslararasıSB282
Todd Hewitt Et SuyuHardy Teşhis7161C
18 G, 1.5 inç iğnelerBD305199
26 G, 0.5 inç iğnelerBD305111
10 ml şırıngaBD309604
1 ml şırıngaBD309659
0.45 μ m PVDF şırınga filtreleriWhatman6900-2504
Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Tuz Çözeltisi 1xCorning21-031-CV

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Verani, J. R., McGee, L., Schrag, S. J. Prevention of perinatal group B streptococcal disease--revised guidelines from CDC. MMWR. Recomm. Rep. 59 (RR-10), 1-36 (2010).
  2. Maisey, H. C., Doran, K. S., Nizet, V. Recent advances in understan....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Beta Estradiol TedavisiGBS nok lasyonuVajinal LavajDoku HomojenizasyonuCFU Kantifikasyonustrus D ng s zlemereme Kanal Diseksiyonu

İlgili makaleler