Method Article

Bir Kullanarak Altın Nanopartiküller Verimli Radyoaktif bir Optimize Protokolü 125 I-etiketli Azid Protez Grubu

DOI:

10.3791/54759

⸱

October 10th, 2016

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Advanced Radiation Technology Institute, Korea Atomic Energy Research Institute, 2Department of Radiation Biotechnology and Applied Radioisotope Science, University of Science and Technology

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

125-etiketli azid sentezi ve bir bakır içermeyen tıklama reaksiyonu kullanılarak dibenzocyclooctyne (DBCO) -grubu ile konjüge edilmiş 13-mil ölçekli altın nanopartiküllerinin radyo-etiketlenmesi için ayrıntılı bir işlem tarif edilmektedir.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, 125I etiketli bir azid protez grubunun radyosentezi için ayrıntılı bir protokol ve bunun bakır içermeyen bir tıklama reaksiyonu kullanılarak DBCO grubu işlevselleştirilmiş altın nanopartiküllerinin verimli radyo-etiketlenmesine uygulanması için ayrıntılı bir protokol gösteriyoruz. Stannisillenmiş öncünün (2) radyoiyodinasyonu, oda sıcaklığında 15 dakika boyunca oksidan olarak [125I]NaI ve kloramin T kullanılarak gerçekleştirildi. Ham ürünün HPLC saflaştırılmasından sonra, saflaştırılmış 125I-etiketli azit (1), yüksek radyokimyasal verim (% 75 ± 10, n = 8) ve mükemmel radyokimyasal saflık (% >99) ile elde edilmiştir. Radyoaktif işaretli 13 nm boyutlu altın nanopartiküllerin sentezi için, DBCO ile işlevselleştirilmiş altın nanopartiküller (3), tiyollenmiş bir polietilen glikol polimeri kullanılarak hazırlandı. 1 ile 3 arasında bakır içermeyen bir tıklama reaksiyonu, 125I etiketli altın nanopartiküllere (4), radyo-ince tabaka kromatografisi (radyo-TLC) ile belirlendiği gibi% 95'ten fazla radyokimyasal verim verdi. Bu sonuçlar, suş destekli bakır içermeyen bir tıklama reaksiyonu kullanan mevcut radyoetiketleme yönteminin, DBCO grubu içeren nanomalzemelerin verimli ve uygun radyo-etiketlemesi için yararlı olacağını açıkça göstermektedir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Azidler ve siklooktinler arasındaki gerinim destekli bakırsız tıklama reaksiyonu, çok çeşitli biyomoleküllerin, nanomalzemelerin ve canlı deneklerin1-7 verimli biyoortogonal etiketlemesine kapsamlı bir şekilde uygulanmıştır. Bu konjugasyon reaksiyonunun mükemmel bölge özgüllüğü ve hızlı reaksiyon hızı nedeniyle, radyoaktif işaretli izleyicilerin sentezlenmesi için de kullanılmıştır. Peptitleri ve antikorları hedef alan çeşitli kanserlerin in vitro etiketlenmesinin yanı sıratümörlerin 8-13 in vivo önceden hedeflenmiş görüntülenmesi için birkaç 18F etiketli azid veya DBCO protez grubu hazırlanmıştır. Bu örneklere ek ola....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dikkat: Radyoaktif iyot oksitlenmiş biçimi oldukça uçucu ve yeterli kurşun kalkanlar ve kurşun şişeleri ile ele alınması gerekir. Tüm radyokimyasal adımlar iyi havalandırılan bir kömür filtreli davlumbaz yürütülen ve deneysel prosedürler radyoaktivite tespit cihazları ile izlenmesi gereken yapılmalıdır.

125I-işaretli azid Sentezi için Kimyasallar ve ters fazlı kartuş hazırlanması 1.

  1. Çözelti içinde reaktiflerin hazırlanması
    1. 150 ul içinde azid ön (2) mutlak etanol (Şekil 1), 1 mg eritin.
      Not: azid ön için ayrıntılı bir sentez işlemi (2) Daha önceki çalışmad....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Stannylated ön (2) ve radyoiyodinasyon Reaksiyon radyo-etiketli ürünü temin etmek üzere 15 dakika için oda sıcaklığında [125I] Nal, asetik asit ve kloramin T 150 MBq kullanılarak gerçekleştirildi (1). Ham karışımın, hazırlamalı HPLC ile saflaştırma işleminden sonra, istenen ürün, radyokimyasal verim 75 ± 10% (n = 8) ile elde edilmiştir. Analitik HPLC 125I-işaretli ürünün radyokimyasal saflığı% 99'dan fazla (Şekil 2).......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Genel olarak, saflaştınlmış 125I-işaretli azid (1) gözlenen radyokimyasal verim 75 ± 10% (n = 8). Radyoaktif radyoaktivite 50-150 MBq ile gerçekleştirildi ve radyokimyasal sonuçlar oldukça tutarlıdır. [125I] Nal (t 1/2 = 59.4 D) radyoiyodinasyon reaksiyonda kullanıldı fazla bir ay radyoaktif bozunma uygulandı, 1 radyokimyasal verim olduğu gözlenmiştir ise biraz (53-65%) azalmıştır. Nedenle, [125I] Nal da üretildiği anda hemen kullanıl.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Kore Cumhuriyeti hükümeti tarafından finanse edilen Kore Ulusal Araştırma Vakfı (Hibe no. 2012M2B2B1055245 ve 2012M2A2A6011335) ve Kore Atom Enerjisi Araştırma Enstitüsü RI-Biyomik Merkezi tarafından sağlanan hibelerle desteklenmiştir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Kloramin T trihidratSigma402869
[125< / sup>I] NaI, aq. NaOHPerkin-ElmerNEZ033A010MC
Sodyum metabisülfit SigmaS9000
Formik asitSigma251364
Sep-Pak tC18 plus kartuşSularWAT036800
Dimetil sülfoksit SigmaD2650
AsetonSigma650501
EtanolSigma459844
Altın (III) klorür trihidratSigma520918
Tween 20 SigmaP1379
DBCO PEG SH (MW 5,000)NANOCSPG2-DBTH-5k
TLC silika jel 60 F254Merck
Analitik HPLCAgilent1290 InfinityModel numarası
Hazırlayıcı HPLCAgilent1260 InfinityModel numarası
Analitik C18 ters fazlı kolonAgilentZorbax Eclipse XDB-C18
Hazırlayıcı C18 ters fazlı kolonAgilentPrepHT XDB-C18
Radyo TLC tarayıcıBioscanAR-2000Model numarası
Radyoizotop doz kalibratörüCapintec, IncCRC -25R doz kalibratörüModel numarası

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Jewett, J. C., Bertozzi, C. R. Cu-free Click Cycloaddition Reactions in Chemical Biology. Chem. Soc. Rev. 39, 1272-1279 (2010).
  2. Debets, M. F., et al. Bioconjugation with Strained Alkenes and Alkyne. Acc. Chem. Res. 44, 805-815 (2011).
  3. Sletten, E. M., Bertozzi, ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Radiolabeling Gold NanoparticlesCopper Free Click ReactionIodine 125 Azide Prosthetic GroupRadioiodination ProtocolHPLC PurificationRadio TLC AnalysisDBCO Functionalized NanoparticlesStrain Promoted Azide Alkyne CycloadditionRadiochemical Yield MeasurementSolid Phase Extraction

Related Articles