Bu video, sıçanlarda venöz interpozisyon cerrahisi sonrası miyointimal hiperplazi gelişimini incelemek için bir model göstermektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Ven interpozisyonu Model: baypas açıklığının Eğitim için uygun bir model
Bu makalede
Özet
Özet
Bypass greftleme, koroner arter hastalığı için yerleşik bir tedavi yöntemidir. Greft açıklığı, safen ven greftlerinin Aşil topuğu olmaya devam eder. Greft açıklık kaybı sırasında patobiyolojik ve patofizyolojik süreçlerin daha iyi anlaşılması için baypas greft yetmezliği için araştırma modelleri gereklidir. Domuzlar veya koyunlar gibi büyük hayvan modelleri, insan anatomik yapılarına benzer, ancak özel tesisler ve ekipman gerektirir. Bu videoda, ven grefti açıklık kaybını araştırmak için bir sıçan ven interpozisyon modeli açıklanmaktadır. Sıçanlar ucuzdur ve kullanımı kolaydır. Fare modelleriyle karşılaştırıldığında, sıçanların uygun boyutu daha iyi çalışabilirliğe izin verir ve daha çeşitli analizler için yeterli miktarda materyalin elde edilmesini sağlar. Kısacası, bir donör sıçanın inferior epigastrik veni hasat edilir ve femoral arterin bir segmentini değiştirmek için kullanılır. Anastomoz tek dikişle yapılır ve fibrin yapıştırıcı ile kapatılır. Greft açıklığı dupleks sonografi kullanılarak non-invaziv olarak izlenebilir. Greft açıklık kaybının ana nedeni olan miyointimal hiperplazi zamanla ilerleyici olarak gelişir ve histolojik kesitlerden hesaplanabilir.
Giriş
Koroner arter hastalıkları ve bunların komplikasyonları dünyada önde gelen ölüm nedenleri arasındadır. Güncel tedavi stratejileri yeniden kurulması kan akımı üzerine ya daralmış damar genişletici veya bir bypass oluşturarak odaklanmak. damar otogrefti kullanarak koroner arter bypass cerrahisi (CABG) ilk kez 1968 yılında tanımlanmıştır ve yılda rafine edilmiştir. Dışında sol ön revaskülarizasyon inen koroner arter gelen, safen ven kanallar en sık 1 kullanılmaktadır. Ancak, greft açıklık safen ven grefti (SVG) Aşil topuğu kalır. Cerrahiden bir yıl sonra, greft açıklık on yıl 2,3 sonra% 61 düşüyor,% 85'dir. SVG açıklık kaybı patofizyolojik mekanizmaları ve nedenlerini açıklanması dolayısıyla önemli bir görevdir.
Bu video ven greft kaybı araştırmak için bir sıçan ven interpozisyonu modelini göstermektedir. Bu yöntemin genel amaçları altında yatan biyopatolojik keşfetmek için vardırve ve hastalığın ilerlemesi sırasında -physiological süreçler ilaç veya tedavi seçeneği testi için uygun bir model geliştirmektir. arteriyel sisteme yüzeysel epigastrik ven nakli, bu model yakından koroner bypass klinik ayarını taklit eder. Cerrahi travma, iskemi ve duvar basıncı patolojik damar değişikliklerinin önemli tetikler ve tarif edilen modelinde taklit edilir.
Farklı modeller ve türlerin ven greft açıklığı kaybı araştırmak için kullanılabilir. Bu domuzlar 4, koyun 5, köpeklerde 6 ve maymun 7 gibi büyük hayvan modelleri, insan damar ve anatomik yapıları benzer ve bu nedenle 8 test edilecek Bypass stent veya yeni cerrahi teknikler gibi kompleks terapötik stratejiler, sağlar. Ancak özel konut, ekipman ve personel gereklidir. Buna ek olarak, yüksek maliyetler ve ameliyat sırasında ek bir anestezist ihtiyacı onların geniş bir uygulama engel. Smsıçanlarda da dahil olmak üzere tüm hayvanlar, özel konut gerekmez, kullanımı kolay, ve yönetilebilir maliyetleri. Fare modellerinde 9,10 ile karşılaştırıldığında, sıçan modelleri sonuca daha iyi çalışabilirlik avantajı ve bu nedenle daha az değişkenliğe sahip. Sıçanlar fizyolojik ve genetik fareler 11,12 den insanlara daha benzer. Buna ek olarak, çoğu vahşi tip fareler sadece II hataları tip eğilimli fare modelleri yapmak sınırlı myointima 13, gelişir. Böyle inferior vena kava olarak ana fare damarlar, histolojisi, sadece birkaç hücre tabakalarından oluşur ve erken değerlendirme zor 13 vermektedir. Bir başka dezavantaj, greft kurtarma sonra bir sonraki analiz için uygun bir doku küçük bir miktardır.
Bu video açıklanan model, gerçekleştirmek için, yeniden üretilebilir, ucuz ve kolay ve hızlı ve güvenilir bir tespit edilebilir. Bu viral vektörler gibi pahalı deneysel terapötik maddeleri değerlendirmek için uygundurekonomik bir şekilde gen terapisi için.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Hayvanlar Laboratuvar Hayvanları İlkeleri, Laboratuar Hayvan Kaynakları Enstitüsü tarafından hazırlanan ve Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından yayınlanan Kılavuzu'nda uygun insancıl bakıma aldı. Tüm hayvan protokolleri sorumlu yerel otorite ( "Amt für Gesundheit und Verbraucherschutz, Hansestadt (Sağlık ve Tüketiciyi Koruma Dairesi) Hamburg") tarafından onaylanmıştır.
1. Hayvan Bakımı
- Laboratuvar Hayvanları Enstitüsü 300-350 g ağırlığında Lewis sıçanları (LEW / Crl) sıçan ve ROSA / lusiferaz LEW transgenik fareler elde edin.
- havalandırmalı dolaplar geleneksel koşullar altında sıçan tutmak ve onlara standart sıçan yemi ve otoklava su ad libitum beslenirler.
- donör ve alıcı olarak sinjenik LEW / Crl sıçanlar olarak ROSA / lusiferaz LEW transgenik fareler kullanarak bir greft nakli gerçekleştirmek.
Donör Sıçan 2. Hazırlık
- Bir askere kullanıniyon odası izofluran (2.5-3%) ile bir sıçan uyuşturan için.
- Sırtında sıçan yerleştirin ve ağız ve burun kapsayan bir yüz maskesi ile anestezi korumak. arka ayakları sıkışmasını ve reflekslerin yokluğu doğrulayarak anestezi yeterli derinliğe kontrol edin. anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için gözlere bazı veteriner merhem sürün.
- arka bacakları yaymak ve bant kullanarak kendi konumunu düzeltmek.
- saç düzeltici ile inguinal saçlarını tıraş ve% 80 etanol ile takip povidon-iyot kullanarak tüm alanı dezenfekte edin. İki kez dezenfeksiyon işlemi tekrarlayın.
NOT: Cerrahi alan, gazlı bez ve cerrahi aletler sterilize edilmelidir. süreç boyunca steril bir alan korumak ve tek kullanımlık, steril cerrahi eldiven, maske ve kep giymek. - Mikroskop altında, linea Inguinalis boyunca dikey bir kesi yapmak. nazikçe cilt altı dokuları ayırmak için iki forseps kullanın ve ori yüzeysel epigastrik ven maruzFemoral ven cin. Dikkatle çevre dokulardan yüzeyel epigastrik ven izole.
- İki mikro kelepçeler kullanarak yüzeyel epigastrik ven kan akışını durdurun.
- dikkatlice forseps ile izole ven kaldırma ve microscissors damar yoluyla keserek damar yaklaşık 0.5 ila 1 cm segmenti hasat. kan kaybını önlemek için damar güdük mikro kelepçeler bırakın. steril gazlı bez üzerine ven kaldırıldı parça yerleştirin. Dikkatle toplandı damarın bir ucunda içinde 30 G iğne yerleştirin ve heparin ile kap (50 birim / ml) yıkayın.
NOT: Dikkatli damar tutun ve kaldırma, kesme ve yıkama sırasında zarar görmemesi. heparin uygun miktarda greft temizlemek için emin olun. - Alıcı sıçan içine nakli, bir gemi spazmı önlemek için kadar buz üzerinde% 1 lidokain damar segmentini tutun.
- % 5 izofluran anestezi artırarak donör sıçan Euthanize. 2-3 dk, op sonralinea alba boyunca karın tr, diyafram üzerinden kesilmiş ve kan dolaşımını durdurmak için kalbi kaldırın.
Alıcı Sıçan 3. hazırlanması
- Uyutmak ve donör sıçan aynı şekilde alıcı sıçan düzeltin.
- saç düzeltici ile bacakların medial tarafını Tıraş ve povidon-iyot ve% 80 etanol kullanılarak üç kez dezenfekte edin.
- anestezi derinliği izlemek ve arka ayakları kısma zaman refleksleri bulunmadığını teyit ederek yeterli olduğundan emin olun.
- kasık kat diz medyan femur kesi gerçekleştirin. Mikroskop altında, çevresinden femoral arter ayırmak için 2 forseps kullanabilir.
- kan akışını durdurmak için mikro kelepçeleri kullanın. Distal kelepçe ile takip ilk proksimal kelepçe, yerleştirin.
- microscissors kenetlenmiş femoral arter kısa bir kesimi kesip atın. bir boşluk yaratarak microscissors kalan arter güdük kısaltılmasıven grefti daha büyük 1-2 mm. 30 G iğne kullanılarak heparin ile arteriyel güdük yıkayın.
NOT: adventisya hafifçe damar güdük ötesinde çıkıntı halinde, geminin ucuna hafifçe çekin ve bir parça çıkarmak için forseps kullanabilir. - arteriyel kütükleri arasındaki adım 2.8 hasat ven yerleştirin ve boşluğa uygun sığacak şekilde uzunluğunu ayarlayın. ven yönüne dikkat edin.
- ilk 10-0 prolen sütür kullanılarak proksimal anastomoz gerçekleştirin. (Şekil 1D) gösterilen sırayla tek dikiş yürütün. ventral tarafta üç sütür eklemeden önce her yan tarafında bir dikiş ile başlayın. Daha sonra, anastomoz tamamlamak için teknenin sırt tarafında üç dikiş yerleştirin.
- Adım 3.8 açıklanan proksimal anastomoz için aynı tekniği kullanarak greft distal damarları bağlayın. Yine, her yan tarafında bir sütür ile başlamak ve daha sonra ventral sid üç sütür koyunE ve dorsal tarafı.
- fibrin yapıştırıcı bileşen 1 ve 2 ile yük iki adet 1 mL'lik şırınga dikkatlice forseps ile greft kaldırın ve bileşen 2, ardından greft altında fibrin yapıştırıcı bileşeninin 1 yaklaşık 100 ul bırakın.
NOT:: 1 oranında parçalar 1 ve 2, bir 1 uygulanır emin olun. - geri pozisyonda greft yerleştirin ve greft üzerine bileşenleri 1 ve 2'nin ek bir 100 ul bırakın. tutkal greft ve anastomoz yetmezliği ve damar grefti aşırı distansiyonu önlemek amacıyla anastomoz kapsar emin olun.
- Dikkatle proksimal ardından uzak kelepçe açmak.
- Nakledilen damar ve greft distal arter gözle görülür bir darbe kontrol ederek başarılı bir ameliyat onaylayın.
- cilt kapatma engellemektedir aşırı tutkal, çıkarın. tedavi tutkal kaldırın ve microscissors aşırı çıkarmak için forseps kullanın. 5-0 prolen sütür ile cilt katmanları kapatın.
- 4-5 m enjekteg / kg Carprofen subkutan sıçan uyanmak izin vermeden önce. sternal yatma korumak için yeterli bilinci yerine kadar sahipsiz hayvan bırakmayın. tamamen iyileşti kadar tek bir kafeste hayvan tutun.
- Aşağıdaki 3 gün boyunca ağrı kesici ilaç olarak içme suyu (100 ml başına 50 mg metamizol) Metamizol ekleyin ve günlük hayvan izleyin.
4. Dubleks Sonografi
NOT: duxplex sonografi sıçanlarda 14 non-invaziv kan akışını görselleştirmek için.
- indüksiyon odasında (izofluran% 2) bir sıçan Anesteziyoloji. Sırtında sıçan yerleştirin ve burnu kaplayan bir yüz maskesi ile anestezi korumak.
- uyluk çevresi saç kaldırmak için saç makasları ve epilasyon kremi kullanın.
- uyluk ultrason jeli uygulayın. hiçbir hava kabarcığı olmadığından emin olun. MS 400 transdüser kullanılarak dubleks sonografi görüntü elde (merkez frekansı: 30 M/ Sn 230-400 kare hızı ile Hz).
5. histopatolojisi
NOT: Hasat morfometrik analiz 15 Masson trikrom boyama ile gemi leke ve.
- gece boyunca% 4 paraformaldehid içinde hasat kap saptamak etanol artan konsantrasyonlarda kurutmak. parafin örnek embed ve bir mikrotom kullanılarak 5 mikron kalınlığında dilimler halinde kesin.
NOT: Paraformaldehyde toksik ve özel dikkatle ele alınmalıdır. - trikrom boyama solüsyonu ile onları boyamadan önce slaytlar Deparaffinize. Lekeli slaytlar dehydrate ksilen ile bunları temizleyin ve orta montaj takar. slaytlar kurutulduktan sonra, bir mikroskop ile örnekleri görmek.
6. Biyoparlaklık Görüntüleme (BLI)
NOT: Ameliyat sonrası greft biyolüminesens sinyali 1 ölçerek in vivo zamanla takip edildi6.
- PBS 22 ml D-luciferase potasyum tuzu, 1 g çözülür ve intraperitoneal olarak sıçan (375 mg / kg vücut ağırlığı) enjekte. luciferin hayvan dönmesi için 15 dakika bekleyin.
- gerçek zamanlı biyolüminesens miktar sistemi içine sıçan yerleştirin ve biyoparlaklık sinyali erişin.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
sıçan ven interpozisyonu modeli myointima hiperplazi ve ven greft yetmezliği gelişimini incelemek için uygundur. Hayvanlar ameliyat sonrası iyi kurtarmak ve mükemmel fiziksel durumu sonrası operasyon göstermektedir. Şekil 1 anahtar cerrahi adımları gösterir. Linea Inguinalis boyunca cilt kesisi sonra, epigastrik yüzeysel ven ve femoral arter (Şekil 1A) tespit edilir. Bu erken greft yetmezliği ve açıklık kaybına yol açabilir olarak greft Hasat, greft (Şekil 1B) zarar ver...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu video ven greft kaybı araştırmak ve altta yatan patolojik süreçlerin araştırılması ve yeni ilaçlar ya da tedavi seçeneklerinin test etmek için izin veren bir fare ven interpozisyonu modelini göstermektedir.
Anestezi cerrahi prosedürler çok önemli bir yönüdür. Bu özellikle uzun süreli operasyonlar sırasında, güvenli ve kolay bir yöntem olduğu için sürekli inhalasyon anestezi sistemi tavsiye edilir. Bu işlem en fazla 1 saat sürer eğitim safhasında büyük önem olabilir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
Yazarlar onun teknik yardım için Christiane Pahrmann teşekkür ederiz. Bu çalışma, Deutsche Stiftung für Herzforschung tarafından finanse edildi (F / 28/14). DW Kalp ve Akciğer Transplantasyonu Uluslararası Derneği ödülü ile desteklenmiştir. TD Else-Kröner-Fresenius-Stiftung (2012_EKES.04) den Else Kröner Mükemmellik maaş aldı. SS Deutsche Forschungsgemeinschaft araştırma hibe almıştır (DFG; DE2133 / 2-1, TD ve SCHR992 / 3- 1, SCHR992 / 4-1, SS).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Sıçan LEW/Crl | Charles | Nehri Stok numarası 004 | |
| Sıçan LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor- 1 luc)11Jmsk | Laboratuvar hayvanları Enstitüsü, Kyoto Üniversitesi, Japonya | NBPR sıçan numarası 0299 | http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/ |
| PFA %4 | Elektron Mikroskobu Bilimleri | #157135S | %20 |
| saç kesme makinesi | WAHL | 8786-451A ARCO SE | |
| Forene | AbbVie | PZN 10182054 Art.Nr.: B506 | İzofluran |
| mikrocerrahi kelepçe | Güzel Bilim Araçları | 18055-04 | Mikro Serin - 4 mm |
| kelepçe aplikatörü | Güzel Bilim Araçları | 18056-14 | |
| epilasyon kremi | Rufin kozmetik | 27618 | |
| Povidon-İyot | Betadine Purdue İlaç | NDC:67618-152 | |
| 10-0 Ethilon sütür | Ethicon | 2814G | |
| 5-0 prolen sütür | Ethicon | EH7229H | |
| Rimadyl | Pfizer | 400684.00.00 | Carprofen |
| Novaminsulfon | Ratiopharm | PZN 03530402 | Metamizol |
| Heparin | Rotexmedica | PZN: 3862340 | 25.000 IE / ml |
| Ksilokain% | 1AstraZeneca | PZN: 1137907 | Lidokain |
| EVICEL | J& J Med.Ethicon Biosur | PZN 7349697 Sanat. Nr.:EVK01DE | fibrin yapıştırıcı |
| NaCl %0.9 | B.Braun | PZN 06063042 Mad. Nr.: 3570160 | |
| Vevo 770 yüksek çözünürlüklü in vivo mikro görüntüleme sistemi | VisualSonics | dubleks sonografi | |
| Ecogel 100 ultrason jeli | Eco-med | 30GB | |
| D-Luciferin Ateşböceği, potasyum tuzu | Biosynth | L-8220 | |
| PBS pH 7.4 | Gibco | 10010023 | |
| Xenogen Ivis 200 | Perkin Elmer | biyolüminesans görüntüleme | |
| Weigerts demir hematoksilen Kiti | Merck | 1.15973.0002 | Trikrom boyama |
| Rezorsin-Fuchsine Weigert | Waldeck | 2.00E-30 | Trikrom boyama |
| Asit Fuchsin | Sigma-Aldrich | F8129-25G | Trikrom boyama |
| Ponceau S çözeltisi | Serva Elektroforez | 33427 | Trikrom boyama |
| Azofloksin | Waldeck | 1B-103 | Trikrom boyama |
| Molibdatofosforik asit hidrat | Merck | 1.00532.0100 | Trikrom boyama |
| Turuncu G | Waldeck | 1B-221 | Trikrom boyama |
| Açık Yeşil SF | Waldeck | 1B-211 | Trikrom boyama |
| Vitro-Clud | Langenbrinck | 04-0001 | |
| Buzul Asetik Asit | Sigma-Aldrich | 537020 | |
| %37 HCl | Sigma-Aldrich | H1758 | |
| Ksilen | Th. Geyer | 3410 | |
| Parafin | Leica biyosistemleri | REF 39602004 | |
| Etanol mutlak | Th. Geyer | 2246 | |
| Etanol %96 | Th. Geyer | 2295 | |
| Etanol %70 | Th. Geyer | 2270 | |
| Sürgülü Raf | Ted Pella | 21057 | |
| Boyama kabı | Ted Pella | 21075 | |
| Bepanthen Göz ve Burun merhemi | Bayer | 1578675 | Göz merhemi |
Kaynaklar
- Sabik, J. F., 3rd, Understanding saphenous vein graft patency. Circulation. 124, 273-275 (2011).
- Goldman, S., et al. Long-term patency of saphenous vein and left internal mammary artery grafts after coronary artery bypass surgery: results from a Department of Veterans Affairs Cooperative Study. J Am Coll Cardiol. 44, 2149-2156 (2004).
- Fitzgibbon, G. M., et al. Coronary bypass graft fate and patient outcome: angiographic follow-up of 5,065 grafts related to survival and reoperation in 1,388 patients during 25 years. J Am Coll Cardiol. 28, 616-626 (1996).
- O'Brien, J. E., et al. Wound healing around and within saphenous vein bypass grafts. J Thorac Cardiovasc Surg. 114, 38-45 (1997).
- El-Kurdi, M. S., et al. Ovine femoral artery bypass grafting using saphenous vein: a new model. J Surg Res. 193, 458-469 (2015).
- Yuda, A., et al. Angiotensin II receptor antagonist, L-158,809, prevents intimal hyperplasia in dog grafted veins. Life Sci. 68, 41-48 (2000).
- McCann, R. L., Hagen, P. O., Fuchs, J. C. Aspirin and dipyridamole decrease intimal hyperplasia in experimental vein grafts. Ann Surg. 191, 238-243 (1980).
- Thomas, A. C. Animal models for studying vein graft failure and therapeutic interventions. Curr Opin Pharmacol. 12, 121-126 (2012).
- Hu, Y., Xu, Q. New mouse model of vein bypass graft atherosclerosis. Heart Lung Circ. 11, 182-188 (2002).
- Salzberg, S. P., et al. Increased neointimal formation after surgical vein grafting in a murine model of type 2 diabetes. Circulation. 114, I302-I307 (2006).
- Abbott, A. Laboratory animals: the Renaissance rat. Nature. 428, 464-466 (2004).
- Lindblad-Toh, K. Genome sequencing: three's company. Nature. 428, 475-476 (2004).
- Yu, P., Nguyen, B. T., Tao, M., Campagna, C., Ozaki, C. K. Rationale and practical techniques for mouse models of early vein graft adaptations. Journal of vascular surgery. 52, 444-452 (2010).
- Olver, D. T., Lacefield, J. C., Shoemaker, K. J. Evidence of bidirectional flow in the sciatic vasa nervorum. Microvascular research. 94, 103-105 (2014).
- Stubbendorff, M., et al. Inducing myointimal hyperplasia versus atherosclerosis in mice: an introduction of two valid models. Journal of visualized experiments : JoVE. , (2014).
- Conradi, L., et al. Immunobiology of fibrin-based engineered heart tissue. Stem cells translational medicine. 4, 625-631 (2015).
- Dashwood, M. R., Tsui, J. C. 'No-touch' saphenous vein harvesting improves graft performance in patients undergoing coronary artery bypass surgery: A journey from bedside to bench. Vascular Pharmacology. 58, 240-250 (2013).
- Bekler, H. I., Rosenwasser, M. P., Akilina, Y., Bulut, G. The use of an absorbable collagen cover (NeuraWrap) improves patency of interpositional vein grafts. Acta orthopaedica et traumatologica turcica. 44, 157-161 (2010).
- Geurts, A. M., et al. Knockout rats via embryo microinjection of zinc-finger nucleases. Science. 325, 433(2009).
- Moreno, C., et al. Creation and characterization of a renin knockout rat. Hypertension. 57, 614-619 (2011).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
