Ven interpozisyonu Model: baypas açıklığının Eğitim için uygun bir model

Summary

Bu video, sıçanlarda venöz interpozisyon cerrahisi sonrası miyointimal hiperplazi gelişimini incelemek için bir model göstermektedir.

Abstract

Bypass greftleme, koroner arter hastalığı için yerleşik bir tedavi yöntemidir. Greft açıklığı, safen ven greftlerinin Aşil topuğu olmaya devam eder. Greft açıklık kaybı sırasında patobiyolojik ve patofizyolojik süreçlerin daha iyi anlaşılması için baypas greft yetmezliği için araştırma modelleri gereklidir. Domuzlar veya koyunlar gibi büyük hayvan modelleri, insan anatomik yapılarına benzer, ancak özel tesisler ve ekipman gerektirir. Bu videoda, ven grefti açıklık kaybını araştırmak için bir sıçan ven interpozisyon modeli açıklanmaktadır. Sıçanlar ucuzdur ve kullanımı kolaydır. Fare modelleriyle karşılaştırıldığında, sıçanların uygun boyutu daha iyi çalışabilirliğe izin verir ve daha çeşitli analizler için yeterli miktarda materyalin elde edilmesini sağlar. Kısacası, bir donör sıçanın inferior epigastrik veni hasat edilir ve femoral arterin bir segmentini değiştirmek için kullanılır. Anastomoz tek dikişle yapılır ve fibrin yapıştırıcı ile kapatılır. Greft açıklığı dupleks sonografi kullanılarak non-invaziv olarak izlenebilir. Greft açıklık kaybının ana nedeni olan miyointimal hiperplazi zamanla ilerleyici olarak gelişir ve histolojik kesitlerden hesaplanabilir.

Introduction

Koroner arter hastalıkları ve bunların komplikasyonları dünyada önde gelen ölüm nedenleri arasındadır. Güncel tedavi stratejileri yeniden kurulması kan akımı üzerine ya daralmış damar genişletici veya bir bypass oluşturarak odaklanmak. damar otogrefti kullanarak koroner arter bypass cerrahisi (CABG) ilk kez 1968 yılında tanımlanmıştır ve yılda rafine edilmiştir. Dışında sol ön revaskülarizasyon inen koroner arter gelen, safen ven kanallar en sık ¹ kullanılmaktadır. Ancak, greft açıklık safen ven grefti (SVG) Aşil topuğu kalır. Cerrahiden bir yıl sonra, greft açıklık on yıl ^2,3 sonra% 61 düşüyor,% 85'dir. SVG açıklık kaybı patofizyolojik mekanizmaları ve nedenlerini açıklanması dolayısıyla önemli bir görevdir.

Bu video ven greft kaybı araştırmak için bir sıçan ven interpozisyonu modelini göstermektedir. Bu yöntemin genel amaçları altında yatan biyopatolojik keşfetmek için vardırve ve hastalığın ilerlemesi sırasında -physiological süreçler ilaç veya tedavi seçeneği testi için uygun bir model geliştirmektir. arteriyel sisteme yüzeysel epigastrik ven nakli, bu model yakından koroner bypass klinik ayarını taklit eder. Cerrahi travma, iskemi ve duvar basıncı patolojik damar değişikliklerinin önemli tetikler ve tarif edilen modelinde taklit edilir.

Farklı modeller ve türlerin ven greft açıklığı kaybı araştırmak için kullanılabilir. Bu domuzlar ^4, koyun ^5, köpeklerde ⁶ ve maymun ⁷ gibi büyük hayvan modelleri, insan damar ve anatomik yapıları benzer ve bu nedenle ⁸ test edilecek Bypass stent veya yeni cerrahi teknikler gibi kompleks terapötik stratejiler, sağlar. Ancak özel konut, ekipman ve personel gereklidir. Buna ek olarak, yüksek maliyetler ve ameliyat sırasında ek bir anestezist ihtiyacı onların geniş bir uygulama engel. Smsıçanlarda da dahil olmak üzere tüm hayvanlar, özel konut gerekmez, kullanımı kolay, ve yönetilebilir maliyetleri. Fare modellerinde ^9,10 ile karşılaştırıldığında, sıçan modelleri sonuca daha iyi çalışabilirlik avantajı ve bu nedenle daha az değişkenliğe sahip. Sıçanlar fizyolojik ve genetik fareler ^11,12 den insanlara daha benzer. Buna ek olarak, çoğu vahşi tip fareler sadece II hataları tip eğilimli fare modelleri yapmak sınırlı myointima ^13, gelişir. Böyle inferior vena kava olarak ana fare damarlar, histolojisi, sadece birkaç hücre tabakalarından oluşur ve erken değerlendirme zor ¹³ vermektedir. Bir başka dezavantaj, greft kurtarma sonra bir sonraki analiz için uygun bir doku küçük bir miktardır.

Bu video açıklanan model, gerçekleştirmek için, yeniden üretilebilir, ucuz ve kolay ve hızlı ve güvenilir bir tespit edilebilir. Bu viral vektörler gibi pahalı deneysel terapötik maddeleri değerlendirmek için uygundurekonomik bir şekilde gen terapisi için.

Protocol

Hayvanlar Laboratuvar Hayvanları İlkeleri, Laboratuar Hayvan Kaynakları Enstitüsü tarafından hazırlanan ve Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından yayınlanan Kılavuzu'nda uygun insancıl bakıma aldı. Tüm hayvan protokolleri sorumlu yerel otorite ( "Amt für Gesundheit und Verbraucherschutz, Hansestadt (Sağlık ve Tüketiciyi Koruma Dairesi) Hamburg") tarafından onaylanmıştır.

1. Hayvan Bakımı

1. Laboratuvar Hayvanları Enstitüsü 300-350 g ağırlığında Lewis sıçanları (LEW / Crl) sıçan ve ROSA / lusiferaz LEW transgenik fareler elde edin.
2. havalandırmalı dolaplar geleneksel koşullar altında sıçan tutmak ve onlara standart sıçan yemi ve otoklava su ad libitum beslenirler.
3. donör ve alıcı olarak sinjenik LEW / Crl sıçanlar olarak ROSA / lusiferaz LEW transgenik fareler kullanarak bir greft nakli gerçekleştirmek.

Donör Sıçan 2. Hazırlık

1. Bir askere kullanıniyon odası izofluran (2.5-3%) ile bir sıçan uyuşturan için.
2. Sırtında sıçan yerleştirin ve ağız ve burun kapsayan bir yüz maskesi ile anestezi korumak. arka ayakları sıkışmasını ve reflekslerin yokluğu doğrulayarak anestezi yeterli derinliğe kontrol edin. anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için gözlere bazı veteriner merhem sürün.
3. arka bacakları yaymak ve bant kullanarak kendi konumunu düzeltmek.
4. saç düzeltici ile inguinal saçlarını tıraş ve% 80 etanol ile takip povidon-iyot kullanarak tüm alanı dezenfekte edin. İki kez dezenfeksiyon işlemi tekrarlayın.
   NOT: Cerrahi alan, gazlı bez ve cerrahi aletler sterilize edilmelidir. süreç boyunca steril bir alan korumak ve tek kullanımlık, steril cerrahi eldiven, maske ve kep giymek.
5. Mikroskop altında, linea Inguinalis boyunca dikey bir kesi yapmak. nazikçe cilt altı dokuları ayırmak için iki forseps kullanın ve ori yüzeysel epigastrik ven maruzFemoral ven cin. Dikkatle çevre dokulardan yüzeyel epigastrik ven izole.
6. İki mikro kelepçeler kullanarak yüzeyel epigastrik ven kan akışını durdurun.
7. dikkatlice forseps ile izole ven kaldırma ve microscissors damar yoluyla keserek damar yaklaşık 0.5 ila 1 cm segmenti hasat. kan kaybını önlemek için damar güdük mikro kelepçeler bırakın. steril gazlı bez üzerine ven kaldırıldı parça yerleştirin. Dikkatle toplandı damarın bir ucunda içinde 30 G iğne yerleştirin ve heparin ile kap (50 birim / ml) yıkayın.
   NOT: Dikkatli damar tutun ve kaldırma, kesme ve yıkama sırasında zarar görmemesi. heparin uygun miktarda greft temizlemek için emin olun.
8. Alıcı sıçan içine nakli, bir gemi spazmı önlemek için kadar buz üzerinde% 1 lidokain damar segmentini tutun.
9. % 5 izofluran anestezi artırarak donör sıçan Euthanize. 2-3 dk, op sonralinea alba boyunca karın tr, diyafram üzerinden kesilmiş ve kan dolaşımını durdurmak için kalbi kaldırın.

Alıcı Sıçan 3. hazırlanması

1. Uyutmak ve donör sıçan aynı şekilde alıcı sıçan düzeltin.
2. saç düzeltici ile bacakların medial tarafını Tıraş ve povidon-iyot ve% 80 etanol kullanılarak üç kez dezenfekte edin.
3. anestezi derinliği izlemek ve arka ayakları kısma zaman refleksleri bulunmadığını teyit ederek yeterli olduğundan emin olun.
4. kasık kat diz medyan femur kesi gerçekleştirin. Mikroskop altında, çevresinden femoral arter ayırmak için 2 forseps kullanabilir.
5. kan akışını durdurmak için mikro kelepçeleri kullanın. Distal kelepçe ile takip ilk proksimal kelepçe, yerleştirin.
6. microscissors kenetlenmiş femoral arter kısa bir kesimi kesip atın. bir boşluk yaratarak microscissors kalan arter güdük kısaltılmasıven grefti daha büyük 1-2 mm. 30 G iğne kullanılarak heparin ile arteriyel güdük yıkayın.
   NOT: adventisya hafifçe damar güdük ötesinde çıkıntı halinde, geminin ucuna hafifçe çekin ve bir parça çıkarmak için forseps kullanabilir.
7. arteriyel kütükleri arasındaki adım 2.8 hasat ven yerleştirin ve boşluğa uygun sığacak şekilde uzunluğunu ayarlayın. ven yönüne dikkat edin.
8. ilk 10-0 prolen sütür kullanılarak proksimal anastomoz gerçekleştirin. (Şekil 1D) gösterilen sırayla tek dikiş yürütün. ventral tarafta üç sütür eklemeden önce her yan tarafında bir dikiş ile başlayın. Daha sonra, anastomoz tamamlamak için teknenin sırt tarafında üç dikiş yerleştirin.
9. Adım 3.8 açıklanan proksimal anastomoz için aynı tekniği kullanarak greft distal damarları bağlayın. Yine, her yan tarafında bir sütür ile başlamak ve daha sonra ventral sid üç sütür koyunE ve dorsal tarafı.
10. fibrin yapıştırıcı bileşen 1 ve 2 ile yük iki adet 1 mL'lik şırınga dikkatlice forseps ile greft kaldırın ve bileşen 2, ardından greft altında fibrin yapıştırıcı bileşeninin 1 yaklaşık 100 ul bırakın.
    NOT:: 1 oranında parçalar 1 ve 2, bir 1 uygulanır emin olun.
11. geri pozisyonda greft yerleştirin ve greft üzerine bileşenleri 1 ve 2'nin ek bir 100 ul bırakın. tutkal greft ve anastomoz yetmezliği ve damar grefti aşırı distansiyonu önlemek amacıyla anastomoz kapsar emin olun.
12. Dikkatle proksimal ardından uzak kelepçe açmak.
13. Nakledilen damar ve greft distal arter gözle görülür bir darbe kontrol ederek başarılı bir ameliyat onaylayın.
14. cilt kapatma engellemektedir aşırı tutkal, çıkarın. tedavi tutkal kaldırın ve microscissors aşırı çıkarmak için forseps kullanın. 5-0 prolen sütür ile cilt katmanları kapatın.
15. 4-5 m enjekteg / kg Carprofen subkutan sıçan uyanmak izin vermeden önce. sternal yatma korumak için yeterli bilinci yerine kadar sahipsiz hayvan bırakmayın. tamamen iyileşti kadar tek bir kafeste hayvan tutun.
16. Aşağıdaki 3 gün boyunca ağrı kesici ilaç olarak içme suyu (100 ml başına 50 mg metamizol) Metamizol ekleyin ve günlük hayvan izleyin.

4. Dubleks Sonografi

NOT: duxplex sonografi sıçanlarda ¹⁴ non-invaziv kan akışını görselleştirmek için.

1. indüksiyon odasında (izofluran% 2) bir sıçan Anesteziyoloji. Sırtında sıçan yerleştirin ve burnu kaplayan bir yüz maskesi ile anestezi korumak.
2. uyluk çevresi saç kaldırmak için saç makasları ve epilasyon kremi kullanın.
3. uyluk ultrason jeli uygulayın. hiçbir hava kabarcığı olmadığından emin olun. MS 400 transdüser kullanılarak dubleks sonografi görüntü elde (merkez frekansı: 30 M/ Sn 230-400 kare hızı ile Hz).

5. histopatolojisi

NOT: Hasat morfometrik analiz ¹⁵ Masson trikrom boyama ile gemi leke ve.

1. gece boyunca% 4 paraformaldehid içinde hasat kap saptamak etanol artan konsantrasyonlarda kurutmak. parafin örnek embed ve bir mikrotom kullanılarak 5 mikron kalınlığında dilimler halinde kesin.
   NOT: Paraformaldehyde toksik ve özel dikkatle ele alınmalıdır.
2. trikrom boyama solüsyonu ile onları boyamadan önce slaytlar Deparaffinize. Lekeli slaytlar dehydrate ksilen ile bunları temizleyin ve orta montaj takar. slaytlar kurutulduktan sonra, bir mikroskop ile örnekleri görmek.

6. Biyoparlaklık Görüntüleme (BLI)

NOT: Ameliyat sonrası greft biyolüminesens sinyali ¹ ölçerek in vivo zamanla takip edildi6.

1. PBS 22 ml D-luciferase potasyum tuzu, 1 g çözülür ve intraperitoneal olarak sıçan (375 mg / kg vücut ağırlığı) enjekte. luciferin hayvan dönmesi için 15 dakika bekleyin.
2. gerçek zamanlı biyolüminesens miktar sistemi içine sıçan yerleştirin ve biyoparlaklık sinyali erişin.

Results

sıçan ven interpozisyonu modeli myointima hiperplazi ve ven greft yetmezliği gelişimini incelemek için uygundur. Hayvanlar ameliyat sonrası iyi kurtarmak ve mükemmel fiziksel durumu sonrası operasyon göstermektedir. Şekil 1 anahtar cerrahi adımları gösterir. Linea Inguinalis boyunca cilt kesisi sonra, epigastrik yüzeysel ven ve femoral arter (Şekil 1A) tespit edilir. Bu erken greft yetmezliği ve açıklık kaybına yol açabilir olarak greft Hasat, greft (Şekil 1B) zarar ver...

Discussion

Bu video ven greft kaybı araştırmak ve altta yatan patolojik süreçlerin araştırılması ve yeni ilaçlar ya da tedavi seçeneklerinin test etmek için izin veren bir fare ven interpozisyonu modelini göstermektedir.

Anestezi cerrahi prosedürler çok önemli bir yönüdür. Bu özellikle uzun süreli operasyonlar sırasında, güvenli ve kolay bir yöntem olduğu için sürekli inhalasyon anestezi sistemi tavsiye edilir. Bu işlem en fazla 1 saat sürer eğitim safhasında büyük önem olabilir.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Sıçan LEW/Crl	Charles	Nehri Stok numarası 004
Sıçan LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor- 1 luc)11Jmsk	Laboratuvar hayvanları Enstitüsü, Kyoto Üniversitesi, Japonya	NBPR sıçan numarası 0299	http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/
PFA %4	Elektron Mikroskobu Bilimleri	#157135S	%20
saç kesme makinesi	WAHL	8786-451A ARCO SE
Forene	AbbVie	PZN 10182054 Art.Nr.: B506	İzofluran
mikrocerrahi kelepçe	Güzel Bilim Araçları	18055-04	Mikro Serin - 4 mm
kelepçe aplikatörü	Güzel Bilim Araçları	18056-14
epilasyon kremi	Rufin kozmetik	27618
Povidon-İyot	Betadine Purdue İlaç	NDC:67618-152
10-0 Ethilon sütür	Ethicon	2814G
5-0 prolen sütür	Ethicon	EH7229H
Rimadyl	Pfizer	400684.00.00	Carprofen
Novaminsulfon	Ratiopharm	PZN 03530402	Metamizol
Heparin	Rotexmedica	PZN: 3862340	25.000 IE / ml
Ksilokain%	1AstraZeneca	PZN: 1137907	Lidokain
EVICEL	J& J Med.Ethicon Biosur	PZN 7349697 Sanat. Nr.:EVK01DE	fibrin yapıştırıcı
NaCl %0.9	B.Braun	PZN 06063042 Mad. Nr.: 3570160
Vevo 770 yüksek çözünürlüklü in vivo mikro görüntüleme sistemi	VisualSonics		dubleks sonografi
Ecogel 100 ultrason jeli	Eco-med	30GB
D-Luciferin Ateşböceği, potasyum tuzu	Biosynth	L-8220
PBS pH 7.4	Gibco	10010023
Xenogen Ivis 200	Perkin Elmer		biyolüminesans görüntüleme
Weigerts demir hematoksilen Kiti	Merck	1.15973.0002	Trikrom boyama
Rezorsin-Fuchsine Weigert	Waldeck	2.00E-30	Trikrom boyama
Asit Fuchsin	Sigma-Aldrich	F8129-25G	Trikrom boyama
Ponceau S çözeltisi	Serva Elektroforez	33427	Trikrom boyama
Azofloksin	Waldeck	1B-103	Trikrom boyama
Molibdatofosforik asit hidrat	Merck	1.00532.0100	Trikrom boyama
Turuncu G	Waldeck	1B-221	Trikrom boyama
Açık Yeşil SF	Waldeck	1B-211	Trikrom boyama
Vitro-Clud	Langenbrinck	04-0001
Buzul Asetik Asit	Sigma-Aldrich	537020
%37 HCl	Sigma-Aldrich	H1758
Ksilen	Th. Geyer	3410
Parafin	Leica biyosistemleri	REF 39602004
Etanol mutlak	Th. Geyer	2246
Etanol %96	Th. Geyer	2295
Etanol %70	Th. Geyer	2270
Sürgülü Raf	Ted Pella	21057
Boyama kabı	Ted Pella	21075
Bepanthen Göz ve Burun merhemi	Bayer	1578675	Göz merhemi