Yöntem makalesi

Santrifüj Yerçekimi ile adipoz kaynaklı Kök Hücrelerin kondrojenik Farklılaşma İndüksiyon

DOI:

10.3791/54934

⸱

24 Şubat 2017

 ,  , 
1CiSTEM Laboratory, Convergent Research Consortium for Immunologic Disease, Division of Rheumatology, Seoul St. Mary’s Hospital, College of Medicine, The Catholic University of Korea

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mekanik stres, kök hücrelerin kondrojenik farklılaşmasını indükleyebilir ve bozulmuş kıkırdağın onarımı için potansiyel bir terapötik yaklaşım sağlar. Merkezkaç gravitesi (CG) kullanarak adipoz kaynaklı kök hücrelerin (ASC'ler) kondrojenik farklılaşmasını indüklemek için bir protokol sunuyoruz. SOX9'un CG kaynaklı yukarı regülasyonu, kondrojenik fenotiplerin gelişmesine neden olur.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bozulmuş kıkırdak doğal olarak iyileşemez. Şu anda, kıkırdak defektleri için en gelişmiş tedavi, sitokinler kullanılarak kök hücrelerden farklılaşan kondrositlerin transplantasyonudur. Ne yazık ki, sitokin kaynaklı kondrojenik farklılaşma maliyetli, zaman alıcıdır ve in vitro farklılaşma sırasında yüksek kontaminasyon riski ile ilişkilidir. Bununla birlikte, biyomekanik uyaranlar da kondrogenez için çok önemli düzenleyici faktörler olarak hizmet eder. Örneğin, mekanik stres, kök hücrelerin kondrojenik farklılaşmasını indükleyebilir ve bu da bozulmuş kıkırdağın onarımı için potansiyel bir terapötik yaklaşım olduğunu düşündürür. Bu çalışmada, santrifüjleme ile kolayca uygulanan mekanik bir stres olan santrifüj gravitenin (CG, 2.400 × g), adipoz kaynaklı kök hücrelerde (ASC'ler) cinsiyet belirleyici bölge Y (SRY)-kutu 9'un (SOX9) yukarı regülasyonunu indükleyerek kondrojenik fenotipleri eksprese etmelerine neden olduğunu gösterdik. Santrifüjlenmiş ASC'ler, agrekan (ACAN), kollajen tip 2 alfa 1 (COL2A1) ve kollajen tip 1 (COL1) gibi daha yüksek seviyelerde kondrojenik farklılaşma belirteçleri ifade etti, ancak daha düşük seviyelerde kollajen tip 10 (COL10), hipertrofik kondrositlerin bir belirteci. Ek olarak, santrifüjlenmiş ASC'lerde kondrogenez için bir ön koşul olan kondrojenik agrega oluşumu gözlenmiştir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

eklem kıkırdağında Kusur doğal iyileşmek yok. Sonuç olarak, hücre transplantasyonu bozulmuş kıkırdak tamiri için umut verici bir yaklaşım olarak önerilmiştir kaynaklanıyor. Bununla birlikte, bu yöntem, bir kök hücre, yeterli sayıda elde edilmesi ve kondrojenik farklılaşma geçmesi bu hücrelerin uyarılmasını gerektirir. Kemik iliği (BM), yaygın olarak, kök hücre kaynağı olarak kullanılmıştır, ancak BM hücre izolasyonu, iki önemli dezavantajı vardır: invaziv ve yetersiz verim. Çünkü satın kolaylığı nedeniyle, yağ dokusu, kök hücrelerin tercih edilen kaynağıdır. Daha önceki çalışmalar, adipoz dokusundan kök hücrelerin izole edilmesi ve TGF-ß1 1, 2 gibi sitokinler kullanılarak bu hücrelerde kondrojenik farklılaşmasını uyaran uygulanabilirliğini ortaya koymuştur. Bu yöntemler etkili ama pahalı.

sitokinler için daha düşük bir ekonomik alternatif olarak, mekanik strese kullanılabilirkondrojenik farklılaşmasını indükler. Mekanik yükleme eklem kıkırdağı 3 sağlığını korumada önemli bir rol oynar, ve çeşitli hücrelerde kondrojenik fenotipleri neden olabilir. Örneğin, hidrostatik basınç MAP kinaz / JNK yolunun 4 üzerinden sinovya kaynaklı progenitör hücrelerde kondrojenik fenotipleri neden olur ve mekanik sıkıştırma kondrositik genleri 5 regülasyonunda insan mezenkimal kök hücrelerin (MKH) 'de kondrojenezi neden olur. Buna ek olarak, kayma gerilmesi insan MSC 6 kondrogenezis ilgili ekstrasellüler matriks (ECM) ifadesi katkıda bulunur. Santrifüj ağırlığı (CG), santrifüj ile üretilen bir kolaylıkla uygulanabilen ve kontrollü mekanik stres, hücre 7 farklı gen ifadesini endükleyebilen. Örneğin, akciğer epitelyal karsinom hücrelerinde, interlökin (IL) -1b sentezlenmesi santrifüj 8 ile üst-düzenlenmektedir. Therefore, deneysel olarak uyanlabilir mekanik stres, CG kök hücrelerdeki kondrositik, gen ekspresyonunu başlatmak için kullanılabilir. Ancak, CG kök hücrelerin kondrojenik farklılaşmasını teşvik edip belirsizliğini koruyor.

Bu çalışmada, CG kondrositik genlerin tanımlanması sonuçlanan insan TSK olarak, SOX9 uyarılması, kondrojenez bir ana regülatör neden olduğu bulunmuştur. Buna ek olarak, TGF-ß1 olanlar ile kondrojenez CG etkileri, büyüme faktörü en çok kök hücrelerin in vitro kondrojenezi indüklemek için kullanılan göre.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma protokolü NIH kurallarına göre Kore Katolik Üniversitesi (KC16EAME0162) kurumsal inceleme kurulu tarafından onaylanmış ve gerçekleştirilmiştir. Bütün dokular yazılı bilgilendirilmiş rıza ile elde edilmiştir.

1. Santrifüj Yerçekimi Yükleme ve Pelet Kültür

  1. Hücre kültürü ve hasat
    1. Kültür TSK (P2-P3; Malzemelerin listesine bakınız), 37 ° C'de% 10 fetal sığır serumu (FBS) ve% 1 penisilin / streptomisin (P / S) ile desteklenmiş Dulbecco Modifiye Eagle Ortamı düşük glikoz (DMEM-LG) 'de % 5 CO2 içeren nemlendirilmiş bir kuluçka makinesi içinde.
    2. Hücreler% 80 kaynaşmaya eriştikten sonra, orta atmak ve 1 x fosfat tamponlu tuz 5 mL (PBS) hücreleri yıkamak.
    3. PBS içeren 1 mM EDTA 1 ml ilave edilir ve% 5 CO2 içeren nemli bir inkübatör içinde 37 ° C'de 2 dakika süreyle inkübe edin.
    4. hücreleri transferi, hafifçe kültürü plakası dokunun taze ortam 4 ml15 ml konik tüp, santrifüj, oda sıcaklığında 2 dakika boyunca (RT) 250 x g'de hücreleri.
  2. Santrifüj yerçekimi yükleme
    1. Santrifüj (aşama 1.1.4) sonra pelet bozmadan süpernatant kaldırmak ve% 10 FBS bulunan DMEM-LG 10 mL pelletini. Bir hemasitometre kullanarak hücreleri saymak.
    2. CG yükleme için, 15 dakika için 2400 x g 'de, yeni bir 15 mL konik tüp ve santrifüj 2.5 x 10 5 hücre transfer edin.
  3. pelet kültürü
    1. Hemen Santrifüjlemeden sonra, süpernatan aspire ve belirlenen kondrojenik farklılaştırma ortamının 500 ul ekle (CDM, yüksek glukozlu DMEM,% 1 FBS,% 1 ITS + karışımlar, 100 nM deksametason, 1x MEM gerekli olmayan amino asit çözeltisi, 50 ug ile takviye / ml L-prolin, ve% 1 penisilin / streptomisin). Her bir değiştirilen ortam içinde taze hazırlanmış L-askorbik asit 2-fosfat 50 ug / ml. Bir pozitif kontrol olarak, kondrojenik differentiati sebepekleyerek santrifujlenmemiş hücrelerde ilgili CDM 10 ng / ml TGF-ß1 ihtiva etmektedir.
    2. Bir ayakta durma konumunda peletleri içeren gevşek kapatılmış tüp yerleştirilir ve% 5 CO2 içeren nemli bir inkübatör içinde 37 ° C'de inkübe edin.
    3. 3 hafta boyunca her gün orta değiştirin.
  4. Micromass kültürü
    1. Hemen santrifüj (aşama 1.2.2, 15 dakika boyunca 2400 x g) sonra, süpernatan aspire ve CDM 10 mcL pelletini.
    2. bir mikro oluşturmak üzere bir 24-çukurlu plaka iyi merkezinde yeniden süspansiyon haline getirilmiş hücreler yerleştirin.
    3. 2 saat sonra, dikkatli bir şekilde mikrokütle bozmamak için plakanın duvara de, pipetleme CDM 1 ml. Bir pozitif kontrol olarak, 10 ng / ml TGF-ß1 ihtiva CDM eklenerek santrifujlenmemiş hücreleri ile bir Micromass kültürü yerine getirir.
    4. % 5 CO2 içeren nemli bir inkübatör içinde 37 ° C 'de mikrokütle inkübe edin.
    5. orta EV değiştirme3 hafta boyunca gün ery.

2. Ters Transkriptaz-Polimeraz Zincir Reaksiyonu (RT-PCR) kondrojenik Farklılaşma İşaretlerinin transkripsiyonel upregülasyonun Algılama için

  1. 14. günde, 1 x PBS içinde bunları yeni bir 1.5 ml tüp küremsi pelet aktarmak ve yıkama için bir pipet kullanın.
  2. Guanidinyum tiosianat-fenol-kloroform ekstraksiyon yöntemi 9 kullanarak pelet toplam RNA ekstrakte edin.
  3. üreticinin protokolüne uygun olarak, ters transkriptaz kullanılarak toplam RNA 2 ug cDNA sentez (1 saat boyunca 42 ° C'de inkübe ve daha sonra 5 dakika süreyle 70 ° C 'de enzimi inaktive).
  4. Kondrojenik farklılaşma markörünü 10 için özel primerler ile PCR gerçekleştirin.

3. Boyama kondrojenik Farklılaşma Marker proteinlerin aşırı ekspresyonu Algılama için

  1. Parafin gömme hücre topakları
    1. 21. günde,sfero pelet hasat ve 1x PBS ile onları yıkamak için bir pipet kullanın.
    2. 24 saat süreyle% 4 paraformaldehid içinde daldırma ile küremsi pelet sabitleyin.
      Dikkat: Paraformaldehyde son derece toksiktir. Gözlere, cilde veya mukoza ile temasından kaçının. maruziyeti en aza indirmek ve hazırlanması sırasında solunması. Uygun kişisel koruyucu ekipman kullanın.
    3. fiksatif atın ve deiyonize su (DW) ile hücre pelletleri durulayın.
    4. kasete gazlı bir katmanı yerleştirin ve bir pipet kullanarak sabit pelet aktarın. gazlı katlanarak pelet Kapak ve kaset kapağını kapatın.
    5. pelet dehydrate.
      1. Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca% 70 etanol (EtOH) 'de pelet bırakın.
      2. Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca% 80 EtOH içinde peletler bırakın.
      3. Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca% 95 EtOH içinde peletler bırakın.
      4. Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca% 100 EtOH içinde peletler bırakın. İki kez tekrarlayın.
      5. Oda sıcaklığında 15 dakika boyunca% 100 ksilen pelet bırakın. Tekrarlama twice.
    6. bir kalıba 56 ° C'de parafin sabit hücre pelletleri yerleştirme; pelet uzmanlaşmış otomatik doku işleme sistemlerini kullanarak parafin içine gömülü olabilir.
    7. bir döner mikrotom kullanılarak parafine gömülü hücre topağından 5 um kalınlığında kesitler halinde kesilmiştir.
    8. % 50 EtOH bölümleri yüzer ve sonra bir slayt kullanarak bir 50 ° C su banyosunda aktarabilirsiniz.
    9. Slaytlarınıza yüzen bölümleri yerleştirin.
  2. Safranin O ve Alcian blue boyama
    1. Parafin bölümleri rehidrate.
      1. 15 dakika ksilen slaytlar daldırın. İki kez tekrarlayın.
      2. 5 dakika boyunca% 100 EtOH içinde slaytlar bırakın. İki kez tekrarlayın.
      3. 5 dakika boyunca% 90 EtOH slaytlar daldırın.
      4. 5 dakika boyunca% 80 EtOH slaytlar daldırın.
      5. 5 dakika boyunca% 70 EtOH slaytlar bırakın ve daha sonra 1 x PBS içinde yıkayın.
    2. % 1 Safranin O solüsyonu ve% 3 Alcian mavi için birlikte rehidrate bölümleri Leke30 dk.
    3. boyama çözüm atın ve DW ile bölümleri durulayın.
    4. 1 dakika boyunca Hematoksilen / Eosin çözeltisi (counterstain) ile bölümleri Leke.
    5. boyama çözüm atın ve DW ile bölümleri durulayın.
    6. herhangi bir artık suyun çıkarılmasından sonra bir lamel üzerine monte ortamının bir drop yerleştirin. Dikkatle montaj orta içeren lamel slayt (aşağı hücre tarafı) yerleştirin.
    7. slaytlar oda sıcaklığında 2-3 saat süreyle kurumaya bırakın.
    8. Parlak alan mikroskobu (otomatik dik bir mikroskop, 50X ve 200X) kullanarak görüntüleri yakalayabilir.
  3. immünofloresan tahlil
    1. Bölüm 3.2.1'de tarif edildiği gibi bölümleri rehidrate.
    2. sodyum sitrat tampon maddesi içinde slaytlar (10 mM sodyum sitrat,% 0.05 Tween 20, pH 6.0) daldırın ve bir mikrodalga kullanılarak 10 dakika için bir alt-kaynama sıcaklığında onları korumak.
    3. Oda sıcaklığında 20 dakika için slaytlar soğutun ve daha sonra, musluk suyu ile yıkanır.
    4. % 3 slaytlar inkübeH 2, daha sonra O 15 dakika boyunca (1 x PBS içinde) 2 ve 15 dakika 11 musluk suyu ile yıkayın.
    5. 1 saat boyunca tampon (PBS içinde% 10 normal keçi serumu) ile slaytlar bloke.
    6. engelleme çözeltisi aspire ve slaytlar üzerine% 5 normal keçi serumu ile seyreltilmiş birincil antikor uygulayın.
    7. 4 ° C'de bir gece slaytlar inkübe edin.
    8. 5 dakika her biri için 1x PBS slaytlar üç kez yıkayın.
    9. karanlıkta, oda sıcaklığında 1 saat boyunca% 5 normal keçi serumu ile seyreltildi florokrom-konjuge sekonder antikor slaytlar inkübe edin.
    10. karanlıkta 5 dakika her biri için 1x PBS slaytlar üç kez yıkayın.
    11. 10 dakika için DAPI (1 ug / mL) ile slaytlar inkübe, ve daha sonra 5 dakika her biri için 1 x PBS içinde onları iki kez yıkayın.
    12. herhangi bir artık suyun çıkarılmasından sonra bir lamel üzerine monte ortamının bir drop yerleştirin. Dikkatle montaj ortamda slayt (aşağı hücre tarafı) yerleştirin.
    13. slaytlar 2-3 kurumasını bekleyinOda sıcaklığında, karanlıkta, H.
    14. Floresan mikroskobu kullanarak slaytlar gözünüzde canlandırın (: 594 nm, DAPI: Rhod 340 nm; 60X ve 200X büyütme) 12.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Santrifüj gravite adipoz elde edilen kök hücreleri kondrojenik farklılaşma markerlerinin aşırı ekspresyonunu indükler.

kondrojenik değişimi etkilemek için uygun olan, santrifüj yerçekimi kuvveti derecesini belirlemek için, TSK 15 dakika için farklı CG derece (0, 300, 600, 1200 ve 2400 x g) ile uyarıldı. stimülasyon sonrasında TSK kültür plakaları üzerine yeniden ekildi ve 24 saat süre ile kültüre edildi. Şekil 1A'da

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

hücrelerin stemness durumu SOX9 CG indüklenen aşırı ekspresyonu için çok önemlidir. Bizim çalışmamızda, SOX9 sentezleme ancak sonraki geçiti TSK, erken geçit TSK (2-3) 'de CG neden olabilir. Yetiştirilmesi sırasında, TSK 3 pasajlar 16 kadar, CD34 + hücreleri içermektedir, bildirilmiştir. TSK hücreleri CG düşük bir yanıt elde geçişli olarak CD34 ifadesini kaybetmek eğilimindedir.

merkezkaç yerçekimi kuvveti ile, hidrostatik basınç CG uyarılması sırasında hücreler ü...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmayla ilgili herhangi bir çıkar çatışmamız olmadığını beyan ederiz.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu araştırma, Kore Cumhuriyeti Sağlık ve Refah Bakanlığı (hibe numarası: HI14C2116) ve Kore Katolik Üniversitesi Seul St. Mary's Hastanesi Araştırma Fonu tarafından finanse edilen Kore Sağlık Endüstrisi Geliştirme Enstitüsü (KHIDI) aracılığıyla Kore Sağlık Teknolojisi Ar-Ge Projesi'nin bir hibesi ile desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

kondrojenik Farklılaşma Ortamı Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Plasticware
100 mm ÇanakTPP93100
60 mm ÇanakTPP93060
50 mL Kornikal TüpSPL50050
15 mL Kornikal TüpSPL50015
10 mL Tek Kullanımlık PipetFalcon7551
5 mL Tek Kullanımlık PipetFalcon7543
ASC Kültür Ortamı Malzemeleri
DPBSYaşam Teknolojileri14190-144
DMEM Düşük GlikozYaşam Teknolojileri11885-084büyüme baz ortamı
Penisilin StreptomisinSigma AldrichP4333%1
Fetal Sığır SerumuYaşam Teknolojileri16000-044%10
PBS/1 mM EDTAYaşam Teknolojileri12604-039<
DMEM Yüksek glikozYaşam Teknolojileri11995kondrojenik farklılaşma temel ortamı
MEM Esansiyel Olmayan Amino Asit Çözeltisi (100x)Yaşam Teknolojileri11140-050
DeksametazonSigma AldrichD2915 100nM
Penisilin StreptomisinYaşam TeknolojileriP4333%1
Fetal Sığır SerumuYaşam Teknolojileri16000-044%1
Askorbat-2-fosfatSigma AldrichA896050 &# 956; g/mL
L-prolinSigma AldrichP560750 & # 956; g/mL
ITSBD%1
İnsan TGF & beta; 1Peprotech100-2110 ng/mL
Materials
18 mm Kapak CamıSuperiorHSU-0111580
%4 ParaformaldyhydeTech & YenilikBPP-9004
Tween 20BIOSESANGT1027
Sığır Serumu Albümin VektörLaboratuvarıSP-5050
Anti-Kollajen II antikoruabcam ve nbsp;ab347121:100
Keçi anti-Tavşan IgG (H + L) İkincil Antikor, Alexa Fluor 594 eşlenikMoleküler ProbA-110371:200
DAPIMoleküler ProbD1306
Uzun süreli altın antifade reaktifiInvitrogenP36934
Sürgülü Cam, KaplamalıHyun Il Lab-MateHMA-S9914
TrizolInvitrogen15596-018
KloroformSigma Aldrich366919
İzoprilalkolMilipore109634
EtanolDuksan64-17-5
RevertAid First Strand cDNA Sentez kitiThermo ScientficK1622
i-Taq DNA PolimeraziNtRON BIOTECH25021
UltraPure 10x TBE Tampon YaşamTeknolojileri15581-044
yükleme yıldızıDyne BioA750
AgaroseSigma-Aldrich9012-36-6
1 kb (+) DNA merdiven işaretleyicisiEnzimomikDM003
İnsan yağ kaynaklı kök hücreler (ASC'ler)Katolik MASTER Hücreleri
td colspan="4"> 354352

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Awad, H. A., Halvorsen, Y. D., Gimble, J. M., Guilak, F. Effects of transforming growth factor beta1 and dexamethasone on the growth and chondrogenic differentiation of adipose-derived stromal cells. Tissue Eng. 9 (6), 1301-1312 (2003).
  2. Erickson, G. R., et al. Chondrogenic potential of adipose tissue-derived stromal cells in vitro and in vivo. Biochem Biophys Res Commun. 290 (2), 763-769 (2002).
  3. Sah, R. L., et al. Biosynthetic response of cartilage explants to dynamic compression. J Orthop Res. 7 (5), 619-636 (1989).
  4. Sakao, K., et al. Induction of chondrogenic phenotype in synovium-derived progenitor cells by intermittent hydrostatic pressure. Osteoarthritis Cartilage. 16 (7), 805-814 (2008).
  5. Li, Z., Yao, S. J., Alini, M., Stoddart, M. J. Chondrogenesis of human bone marrow mesenchymal stem cells in fibrin-polyurethane composites is modulated by frequency and amplitude of dynamic compression and shear stress. Tissue Eng Part A. 16 (2), 575-584 (2010).
  6. Alves da Silva, M. L., et al. Chondrogenic differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells in chitosan-based scaffolds using a flow-perfusion bioreactor. J Tissue Eng Regen Med. 5 (9), 722-732 (2011).
  7. Maeda, S., et al. Changes in microstructure and gene expression of articular chondrocytes cultured in a tube under mechanical stress. Osteoarthritis Cartilage. 13 (2), 154-161 (2005).
  8. Yang, J., Hooper, W. C., Phillips, D. J., Tondella, M. L., Talkington, D. F. Centrifugation of human lung epithelial carcinoma a549 cells up-regulates interleukin-1beta gene expression. Clin Diagn Lab Immunol. 9 (5), 1142-1143 (2002).
  9. Rio, D. C., Ares, M., Hannon, G. J., Nilsen, T. W. Purification of RNA using TRIzol (TRI reagent). Cold Spring Harb Protoc. (6), (2010).
  10. Lorenz, T. C. Polymerase chain reaction: basic protocol plus troubleshooting and optimization strategies. J Vis Exp. (63), e3998(2012).
  11. Jang, Y., et al. UVB induces HIF-1alpha-dependent TSLP expression via the JNK and ERK pathways. J Invest Dermatol. 133 (11), 2601-2608 (2013).
  12. Wu, Y. L., et al. Immunodetection of human telomerase reverse-transcriptase (hTERT) re-appraised: nucleolin and telomerase cross paths. J Cell Sci. 119, Pt 13 2797-2806 (2006).
  13. Bobick, B. E., Chen, F. H., Le, A. M., Tuan, R. S. Regulation of the chondrogenic phenotype in culture. Birth Defects Res C Embryo Today. 87 (4), 351-371 (2009).
  14. Akiyama, H., Chaboissier, M. C., Martin, J. F., Schedl, A., de Crombrugghe, B. The transcription factor Sox9 has essential roles in successive steps of the chondrocyte differentiation pathway and is required for expression of Sox5 and Sox6. Genes Dev. 16 (21), 2813-2828 (2002).
  15. Lefebvre, V., Huang, W., Harley, V. R., Goodfellow, P. N., de Crombrugghe, B. SOX9 is a potent activator of the chondrocyte-specific enhancer of the pro alpha1(II) collagen gene. Mol Cell Biol. 17 (4), 2336-2346 (1997).
  16. Jang, Y., et al. Characterization of adipose tissue-derived stromal vascular fraction for clinical application to cartilage regeneration. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 51 (2), 142-150 (2015).
  17. Chen, J., et al. Simultaneous regeneration of articular cartilage and subchondral bone in vivo using MSCs induced by a spatially controlled gene delivery system in bilayered integrated scaffolds. Biomaterials. 32 (21), 4793-4805 (2011).
  18. Janzen, V., et al. Stem-cell ageing modified by the cyclin-dependent kinase inhibitor p16INK4a. Nature. 443 (7110), 421-426 (2006).
  19. Muraglia, A., Cancedda, R., Quarto, R. Clonal mesenchymal progenitors from human bone marrow differentiate in vitro according to a hierarchical model. J Cell Sci. 113, Pt 7 1161-1166 (2000).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

SOX9 EkspresyonuTip 2 KolajenAgrekan EkspresyonuMikrok tle K lt rParafin G mmeSafranin O BoyamaAlcian Blue Boyama

İlgili makaleler