Yöntem makalesi

Fare modeli değiştirilmiş manşet tekniği kullanarak pankreas nakli için

DOI:

10.3791/54998

⸱

16 Aralık 2017

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Center of Operative Medicine, Department of Visceral, Transplant and Thoracic Surgery, Medical University Innsbruck, 2Department of Anesthesiology and Critical Care Medicine, Medical University Innsbruck, 3Department of Cardiac Surgery, Medical University Innsbruck, 4Department of Plastic and Reconstructive Surgery, Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) Laboratory, Johns Hopkins University School of Medicine

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Karın solid organ nakli arasında pankreas Greftler şiddetli iskemi reperfüzyon greft yaralanma ilişkili hasar, sonunda erken greft kaybı için önde gelen geliştirmek yatkındır. Bu iletişim kuralı fare pankreas nakli bu erken, zararlı zararlardan analiz etmek için ideal bir dikiş manşet tekniği kullanarak bir modeli açıklar.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fare modelleri nakli araştırmada, kolay kullanım, iyi tanımlanmış genetik suşların çeşitli ve moleküler probları ve Kimyasalları vivo içinde yanı sıra gerçekleştirmek için en geniş kullanılabilirliği de dahil olmak üzere çeşitli avantajları var in vitro çalışmalar. Deneyimlerimiz çeşitli fare nakli modelleri ile bağlı olarak, biz heterotopik pankreas nakli manken farelerde şiddetli iskemi reperfüzyon hasarı ilişkili erken greft hasar yatan mekanizmaları analiz etmek amacıyla geliştirilmiştir. Aksine daha önce açıklanan teknikleri kullanarak dikiş teknikleri, burada biz bir dikiş manşet tekniği kullanarak yeni bir yordam açıklanmaktadır.

Son yıllarda, biz genel bir başarı oranı ile farelerde 300'den fazla pankreas nakillerine gerçekleştirdiyseniz > % 90 başarı oranı asla açıklanan önce fare pankreas nakli. Bu dikiş manşet tekniği greft revaskülarizasyon için omurgası iki önemli adımlardan oluşur: (I) alıcı gemi polietilen/Polyamid kol çekerek ve donör gemi üzerine yerleştirerek çevresel bir bağ ve (II) ile sabitleme alıcı gemi ve ikinci bir çevresel bağ ile sabitleme diplidir. Daha az trombojenik lezyonlar yüksek a_ılabilinirse oranları ile endotel tabakası sonuçlarında sonuç sürekliliğini ve son olarak, yüksek başarı oranları.

Bu modelde, Arteryel anastomoz diplidir ortak Karotid arter alıcı hayvan üzerinde donör greft abdominal aort çekerek elde edilir. Greft Venöz drenaj diplidir dış juguler ven üzerinde alıcının portal ven greft çekerek elde edilir. Bu el yazması ayrıntıları ve organ kurtarma ve araştırmacılar mikrocerrahi becerileri ile nakli başarıyla kendi laboratuvarlarında gerçekleştirmek izin verir organ implantasyon prosedürleri çok önemli adımları sağlar.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Eşzamanlı böbrek-pankreas nakli (SPK) geçerli standart tedavi diyabet ve son aşama böbrek hastalığı hastaları için temsil eder. Sabitleme veya diyabetik microangiopathy ve daha iyi bir yaşam kalitesi1' in bile regresyon ile ilgili uzun vadeli insülin bağımsızlık başarılı transplantasyon sonuçlanır. Ancak, böbrek ve karaciğer nakli, gibi diğer ortak katı organ nakillerine aksine pankreas Greftler iskemi reperfüzyon hasarı (IRI) daha yatkındır. % 35'e kadar bildirilen olaylar sadece greft, ama hatta hasta, hayatta kalma2,3tehlikeye.

Oksidatif stres, microcirculatory bozuklukları, artan ifade pro-inflamatuar sitokinlerin ve adezyon molekülleri kaynaklanan son olarak endotel harekete geçirmek ve kendi bütünlüğü kaybı tüm atfedilen bu allojeneik sigara greft yaralanma 4. defa, IRI tam moleküler mekanizmaları büyük ölçüde bilinmeyen ve organ organ değişebilir.

Vitro modelleri kullanan büyük ilerlemeye rağmen hayvan modelleri geliştirilmesi moleküler mekanizmaları greft IRI ilişkili değişiklikler pankreas nakli takip ilgili bilgi derinleştirmek çok önemlidir. Pankreas nakli modelleri çeşitli kemirgenler5,6' geliştirilmiştir ancak tek fare7' bildirdi. Bu son derece düşük sağkalım oranı % 46, mikrocerrahi işlemdir talep Aşil topuğu. Ancak, moleküler analiz araçları geniş çeşitli kendilerine uygulanacak bu yana fare modelleri için organ nakli ile ilgili araştırma, en iyi modeli temsil eder. Farklı organ nakillerine8,9,10ile farelerde geniş mikrocerrahi deneyime dayalı, yeni, son derece tekrarlanabilir tekniği heterotopik, servikal pankreas için geliştirdiğimiz nakli ile farelerde > % 90 başarı oranı bir dikiş manşet tekniği kullanarak. Bu teknik ile anastomoses ile ilgili komplikasyonlar minimuma indirgenmiştir ve yüksek başarı oranı dikiş modeli11' e göre elde edilebilir. Şimdiye kadar sadece bir fare modeli ile benzer başarı oranları Liu ve ark12tarafından tanımlanmıştır. Ancak, bugüne kadar bu modeli kullanarak yayınlanan hiçbir çalışma vardır.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Alloimmune yanıt-e doğru önlemek için ve kesinlikle iskemi reperfüzyon greft yaralanma ile ilgili hasar incelemek için syngeneic bir verici-alıcı çift kullanılmalıdır. Bu iletişim kuralı ' erkek C57BL6 (H2b) 10-12-hafta-yaşlı fareler 26-28 g ağırlığında boyutu eşlemeli verici-alıcı çiftleri olarak kullanılmıştır. Bütün hayvanlar bir bariyer patojen ücretsiz tesiste yer alan ve insan bakım "sorumluları laboratuvar hayvan tıbbi araştırma ve"Kılavuzu için bakım ve kullanım of Laboratory Animals"Ulusal toplum tarafından formüle bakım" uygun olarak alınan Ulusal Bilimler Akademisi tarafından hazırlanan ve ulusal sağlık Enstitüleri tarafından (NIH yayın no. 86-23, 1985 revize) yayınlandı. Eğitim, bilim ve kültür Avusturya Bakanlığı bu makale (BMWF-66.011/0056-II/3b/2011) açıklanan deneyler onayladı.

1. pankreas tedarik

  1. Mayi (IP) enjeksiyonu xylazine (5 mg/kg vücut ağırlığı) ve 27'lik (G) iğne kullanarak ketamin (100 mg/kg vücut ağırlığı) donör hayvanla anestezi.
  2. Karın bölgesinde bir Elektrikli tıraş makinesi kullanarak saç tıraş ve Bant tellerinin ile sırtüstü pozisyonda ameliyat alanında fare düzeltmek.
  3. Klorheksidin bulanmış gauzes ile üç kez ameliyat alanı fırçalayın.
  4. Karın bir ensizyon makas kullanarak bir ikili subcostal uzantısı ile gerçekleştirin. Yavaşça iç organlar soldaki steril pamuklu çubuklarla exteriorize ve onları bir ıslatılmış gazlı bez sarın. Xyphoid cranially maksimal karın boşluğu için aşağıdaki adımları sağlarlar için sivrisinek kelepçe ile kaldırın.
  5. 19 G iğne kullanarak, bir steril, 400 µL 1:4 heparin-Sodyum Klorür çözüm için heparinisation inferior vena kava (IVC) içine enjekte. İğne kaldırdıktan sonra hayvan kan kaybı aort transecting tarafından ötenazi.
  6. Superior Mezenterik arter kökeni ve sağ renal arter arasında karın aortu hafifçe eğimli ipucu forseps kullanarak fibröz doku ayırarak incelemek. Aort zayıflatmak ve bir 8/0 ipek ip ile bağlayın.
  7. Postpyloric oniki parmak bağırsağı ve karaciğer hilus arasında çalışan hepatoduodenal bağ tanımlayın. Safra kanalını Kistik kanalının girişinde aşağıda distal bağ sonra böl ve yavaşça teşrih ve portal ven anastomoz alıcının içinde yerine getirmek için yeterli uzunluğa sahip için mümkün olduğunca klemple transect.
  8. Eğri ipucu forseps kullanarak, açık açık--dan önceki bağ başlayan karın aortu teşrih (bkz. Adım 1.6). Eğri ipucu forseps kullanarak periaortic doku zarar, bir 8/0 ipek ip ile bağlayın ve makasla transect.
    1. İki kutuplu forseps kullanarak, lomber şubeleri koagüle ve aort damar anastomoz için yeterli uzunluk sağlayabilmek makasla diyaframa, mümkün olduğunca transect. Sonunda, sol renal arter yukarıda zaten bağlı aort transect.
  9. Portal ven gelen açık bir atık olana pankreas ile 19 G şırıngayla 4 ° C histidin-triptofan-ketoglutarate perfüzyon çözüm antegrade moda abdominal aort yoluyla 5 mL sıvı. Ödem oluşumunu önlemek için düşük basınç uygulayın.
    Not: Adımları 1.5 1.9 kurtarılan greft sıcak iskemik bozulma tarafından herhangi bir önyargı önlemek için hızlı ve standart bir şekilde gerçekleştirin.
  10. İç organlar steril pamuklu çubukları kullanarak Periton boşluğuna değiştirin.
  11. Eğri ipucu forseps kullanarak, pankreas postpyloric oniki parmak bağırsağı ve hareketli ileri Treitz bağ erişene dek başlayarak kademeli ayırın. Bu adımlar için pankreas ve duodenal duvarı arasında avaskular bağ dokusu alanları tanımlayın.
    1. Açık açık pankreas ve duodenum arasında köprü damarları yalıtmak için eğri ipucu forseps kullanarak bu alanları incelemek. 8/0 ipek ip her izole damar yapısı etrafında geçmek ve bağla.
    2. Son olarak, vasküler yapı duodenal duvarına doğru makasla transect. Aynı şekilde bir 8/0 ipek sütür bıçaklanmasından, enine kolon ve mide pankreas ayırmak için kullanır.
      Not: Bu işlem sırasında choledocho-Pankreatik kanal bakmaksızın.
  12. Dalak mide cranially kaldırma ve makasla kesme tarafından mide ve kısa Gastrik dalları, çalıştıran gastrosplenic bağ tanımlayın. Kurtarılan greft bağlı dalak bırakın.
    Not: greft ısınıyor en aza indirmek için bir 10 mL şırınga buz üzerinde depolanan soğuk histidin-triptofan-ketoglutarate perfüzyon çözüm ile 19 G iğne ile kullanarak sürekli pankreas sulamak.
  13. Son olarak, dalak Forseps ile açgözlü tarafından donör siteden (şekil 1B) pankreas kaldırmak ve alıcının aktarın.
    1. Alternatif olarak, şiddetli iskemi reperfüzyon hasarı tetiklemek için greft steril, 4 ° C perfüzyon çözüm 16 h için alıcı hayvan yerleştirerek önce saklayın.

2. alıcı hazırlık

  1. I.p. iğne xylazine (5 mg/kg vücut ağırlığı) ve 27 G iğne kullanarak ketamin (100 mg/kg vücut ağırlığı) alıcı hayvanla anestezi.
  2. Bir Elektrikli tıraş makinesi kullanarak hemen yan servikal bölgenin tıraş ve sırtüstü pozisyonda ameliyat alanında fareyi getirin. Bant tellerinin kullanarak fare düzeltmek. Solunum ödün önlemek için ön bacaklarda esneme önlemek.
  3. Operatif alan üç klorheksidin bulanmış gauzes kullanarak kez fırçalayın.
  4. Sağ paramedian, sağ alt çene açısı için hafifçe eğik cilt kesi Şah kesi üzerinden yapmak.
  5. Açık açık tanımlamak ve şu dış juguler ven lateral dallar seferber. Onları İki kutuplu Forseps ile koagüle ve onları makasla transect.
  6. Submandibular Tükürük bezi sağ LOB cranially Asansör, vasküler Transpediküler tanımlamak ve iki kutuplu forseps kullanarak dağlamak. LOB cauterized Transpediküler makasla transecting tarafından kaldırın.
  7. Benzetme adıma 2.5 harici juguler ven tüm medial dalları belirlemek, onları iki kutuplu Forseps ile dağlamak ve onları makasla transect.
Dış juguler ven eğri ipucu Forseps ile mümkün olduğunca cranially zayıflatmak ve bitişik harfler arasında yeterli boşluk bırakarak iki 8/0 ipek bağı olan ligate.
  • Düz makasla iki önceden yerleştirilmiş bitişik harfler arasında dış juguler ven transect.
  • Dış juguler ven polietilen kol (0,75 mm iç çap, 0.94 mm dış çapı) ile proksimal sonuna geçmek ve manşet tanıtıcısı bir Venöz microhemostat kelepçe ile düzeltin.
  • Gemi kütüğü ucunda kravat kaldırmak ve gemi üzerinde kol çıkar. Diplidir ven kol üzerinde bir dairesel 8/0 - ipek ip ile (şekil 1A) düzeltmek.
  • Uzağından ve klemple doğru boyun kas yüzeysel parçası dağlamak, makasla transect ve çıkarın.
  • Yavaşça ortak Karotid arter seferber, çatallanma zayıflatmak ve iki kez, karotid çatallanma kravat değil emin ligate. Gemi arasındaki bağları kesilmiş.
  • 2,9 adım, proksimal sonuna ortak Karotid arter Poliamid kelepçe (dış 0.6 mm çapı 0.57 mm iç çap) üzerinden geçmek ve bir Arteryel mikrovasküler kelepçe ile tamir benzer.
  • Vasküler güdük sonunda bağ kaldırın ve yavaşça gemi dilatators kullanarak Lümen genişletmek. Gemi üzerinde Arteryel kol çıkar ve bir 8/0 ipek ip (şekil 1A) ile düzeltebilirim.

    • 3. implantasyon

    1. Yer içine kafa ile bir tanıtıcı olarak dalak kullanarak alıcının boyun bölgesi greft yanal, dalak da dahil olmak üzere kuyruk ve gemi kütükleri ventro caudally yönelik. Dokuları düzgün pozisyonu kullanım pamuk yapışıyor.
    2. Pankreas nakli portal ven alıcı hayvanın dış juguler daha önce diplidir, hangi ven üzerinde yavaşça çekin ve uygun manşet sabit (bkz. Adım 2.10). Bir dairesel 8/0 ipek ip ile düzeltebilirim.
    3. Abdominal aort greft stump diplidir ortak Karotid arter alıcı hayvan çek. Bir çevresel 8/0 ipek ip ile (şekil 1 c) düzeltebilirim.
    4. Dalak damarları dalak hilusu yakın belirlemek ve onları eğri ipucu Forseps ile zayıflatmak. 8/0 ipek bitişik harfler ile kravat ve dalak kaldırmak için dalak damarları transect. Son olarak, bağları kısaltın.
    5. Forseps uygulanması bir kelepçe kullanarak, Venöz veresiye kelepçe önce kaldırın. Arteryel kelepçe kaldır.
      Not: nakli başarılıysa, pankreas nakli hemen bir homojen pembemsi renk ve görünür arteriyel nabız (şekil 1 d) gösterilen reperfused.
    6. Greft normothermic serum fizyolojik solüsyonu ile nemlendirin.
    7. Düz forseps kullanarak Venöz manşet kolu kaldır.
    8. Bir koşu ile cerrahi yara kapatın 6/0 dikiş.

    4. ameliyat sonrası bakım (bitiş noktası)

    1. Aşağıdaki yordamı uygulamak ilâ 0,5 mL normal salin subkutan (SC) intraoperatif sıvı kaybı 19 G iğne kullanarak değiştirme için.
    2. Alıcı hayvan bir Isıtma yastığı anestezi tam kurtarma kadar tutun.
    3. Sonra uyanık, alıcı hayvan konut tesisi için nerede olabilir gıda dönmek ve ad libitumsu.
    4. Ameliyat sonrası ağrı önlemek için şu işlemi (1) Buprenorphin (0.1 mg/kg c.a.) sonra her 12 h ilk 5 gün ve (2) carprofen 4 mg/kg c.a. için her 12 h yönetmek SC ilk hafta için.
    5. Uygun besin alımını tahmin etmek için her gün ağırlığı (g) alıcı her hayvan izlemek. Bir kilo kaybı fazla 10-15 kilo için ameliyat günü, ilgisizlik, felç edici, çok bükülmüş bir geri yanı sıra cerrahi yan enfeksiyonlar karşılaştırıldığında % bitiş noktalarını temsil eder.
      1. Bu durumda, hem de klinik bitiş noktası, ulaştıktan sonra terminal isoflurane inhalasyon kullanarak hayvan kurban.

    Sonuçlar

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    Son on yılda 300'den fazla pankreas nakillerine farelerde yapılan. Protokolü kurulduktan sonra genel bir yaşama vardı > % 90. Ameliyat sonrası kanama greft tromboz ile sonraki ölümcül nekrotik greft pankreatit ardından başarısızlığın ana neden oldu. Her iki durumda da, bitiş noktaları içinde 24 h ulaştı ve hayvan kurban edildi. Herhangi bir nörolojik bozukluklar, belirtiler disfaji ve cerrahi yan enfeksiyonları bu dizi gibi değildi.

    Transplante greft endokrin işlevi araştırmak ve bu nedenle model açıklık doğrulamak için hiperglisemi alıcı farelerde ön arıtma intraperitoneally uygulanan streptozotocin (312,5 mg/kg vücut ağırlığı) tek bir doz ile indüklenen 4 Ameliyattan önce gün. Fareler kan şekeri düzeyleri olsaydı Hiperglisemik kabul > 300 mg/dL. Şekil 2A kan şekeri düzeyleri farklı grupların gösterir. Greftler 16 h uzun süre soğuk iskemi zamanının olmadan alma fareler normogylcemia ekimi izleyen 24 saat içinde ulaştı ve bu metabolik durum tüm gözlem süre içinde saklanır. Buna ek olarak, Sigara nakledilen hayvanlar Hiperglisemik kaldı. İskemi reperfüzyon greft yaralanma ilişkili hasar endokrin fonksiyonları üzerine etkisi ile ilgilenen olduğumuzdan bu yana, biz 16 h uzun süredir devam eden soğuk iskemi zaman (CIT) ve 45 dk sıcak iskemi zaman (WIT) nerede greft sinin üçüncü bir grup eklendi. Bu greft alma fare normoglycemia ulaşmadı ve bu model13' te öldürücü olduğu gösterilmiştir şiddetli pankreatit gelişimi nedeniyle 48 saat sonra kurban edilmesi gerekiyordu.

    Bu model iskemi reperfüzyon hasarı ilişkili erken greft hasar araştıran amaçlı çeşitli projeler için yararlıdır. Daha fazla soruşturma, diğerleri arasında confocal intravital floresan mikroskopi microcirculatory dengesizliğini 2s nakli sonrasında gerçekleştirilen miktar için dahil. Greft yüzdeki karşıtlığını 0.3 mL % 0,4 floresein isothiocyanate etiketli dextran (MW 150 000) penis damar içine enjekte edilerek geliştirilmiş oldu. Şekil 2B normal kılcal d saf fare pankreas ve uzun süreli CIT (şekil 2C) maruz bırakılmamalıdır transplante bir pankreas nakli görüntüler. Buna ek olarak, şekil 2B pankreas nakli için uzun süreli Cit maruz kalmaları sonucu olarak mikro dökümünü gösterir

    figure-results-1
    Resim 1 : İntraoperatif resimler. (A)intraoperatif görünümü alıcı gemilerin anastomoz için hazırlanmış. Dış juguler ven (1) edilmiş Venöz polietilen kol üzerinde diplidir ve bir dairesel 8/0 ipek ip ile sabit. Benzetme, ortak Karotid arter (2) edilmiş diplidir ve daha küçük atardamar poliamid kol üzerinde sabit. 1 mm. bar (B) pankreas nakli ex situçap. Portal ven (1) ve (2) gerekli için vasküler anastomoz abdominal aort güdük. Dalak (3) ile birlikte pankreas alınır ve bir kolu kullanılır. Dalak greft reperfüzyon önce kaldırılır. 1 cm. bar anastomoses (C) intraoperatif görünümünü ölçeklendirin. Portal ven (1) diplidir dış juguler ven kol çekti (2) ve bir dairesel 8/0 ipek kravat ile sabit. Benzer şekilde, abdominal aort (3) aort güdük diplidir ortak Karotid arter (4) kol üzerinde çekilir. Ölçek 1 mm. (D) intraoperatif görünümünü 5 dk reperfüzyon takip perfused pankreas nakli bar: Arteryel kelepçe tarafından takip ven, çıkarıldıktan sonra başarıyla transplante pankreas nakli homojen bir pembemsi renk görüntüler. Dalak reperfüzyon önce kaldırıldı (1: ve birleştirilmiş dalak gemi). Ölçek 1 cm. bar Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

    figure-results-2
    Resim 2 : Endokrin işlevi pankreas nakli ve confocal vivo Floresans mikroskobu. Şekil 2A gösterir çizgi grafik kan glikoz düzeyleri CIT olmadan transplante farelerin (n = 10, PTX CIT, mavi çizgili w/o), Sigara nakledilen fareler (n = 11, yok PTX, kırmızı çizgi) ve fareler için uzun süreli CIT maruz Greftler alma (PTX + 16 h CIT, n = 10, yeşil çizgi). Tüm alıcılar daha önce 312,5 mg/kg c.a. streptozotocin IP ile Hiperglisemik render Greft CIT olmadan tüm alıcıların tüm gözlem süresi (50 gün) olduğu gibi endokrin işleviyle hayatta mümkün iken, fareler sigara nakledilen tüm gözlem döneminde Hiperglisemik kaldı. 16 h CIT maruz Greftler alma fare hiperglisemi kurtarmak değil ve 48 saat sonra % 10-15'den fazla kilo kaybı nedeniyle nakli ameliyatı kurban edilmesi gerekiyordu. Tüm gözlem dönemi yaşayan fareler bir son glycemia ölçüm takip 50 gün kurban edildi. Transplante Greftler mikro confocal intravital Floresans mikroskobu 2 h nakli takip tarafından değerlendirildi. Saf pankreas denetimleri görev yaptı. Şekil 2B normal kılcal d saf pankreasta gösterir. Düzenli bir kapiller ağ da transplante Greftler uzun süreli CIT (şekil 2C) tabi değil görülmektedir. Buna ek olarak, mikro bir dökümünü transplante Greftler uzun süreli CIT (şekil 2B) maruz görülmektedir. Ölçek çubuğu 100 µm. veri grafiği'ndeki ± standart sapma ifade. PTX: pankreas nakli; CIT: soğuk iskemi Zamanı; w/o: olmadan Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

    Tartışma

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    IRI ilişkili greft hasar solid organ nakli için doğasında vardır ve bu mikro bir karışıklık ile karakterizedir. Birkaç metabolit birikimi iskemik faz ve inflamatuar cascades ağırlıklı olarak Reaktif oksijen ve azot türleri, doku hasarı sırasında greft reperfüzyon4sonuçlarında aracılı başlatma sırasında. Bu cascade sadece kısa vadeli, ama aynı zamanda uzun vadeli başarı tehlikeye ve bu nedenle, hastaların hayatta kalma14önemli ölçüde etkiler. Bugüne kadar kombine böbrek pankreas nakli tercih terapi türünden acı son sahne böbrek hastalığı15ile 1 diyabet hastaları için temsil eder. Çeşitli çalışmalarda başarılı kombine böbrek pankreas nakli does değil yalnızca geri yükleme ve diyabetik alıcılar, böbrek nakli işlevinde korumak ama aynı zamanda stabilize bile nöropati gibi ikincil komplikasyonlara tersine çevirir göstermiştir veya yanı sıra mikro - ve macroangiopathy16,17,18.

    Hayvan araştırma azaltma, değiştirme ve iyileştirme (3 R's) sürekli çabalara rağmen üreme IRI gibi karmaşık patofizyolojik süreçlerin vitro ayarlarında sadece mümkün değildir. Bu nedenle, hayvan modelleri hala translasyonel araştırma19,20için ideal bir araçtır olarak kabul edilir. Burada açıklanan gibi fare modellerinde fare ya da diğer hayvan göre birçok avantajı modelleri. Bunlar genetik olarak iyi tanımlanmış doğuştan fare suşları (örneğin transgenik ve knock-out suşları) büyük bir miktarı, moleküler analiz araçları, bir bolluk gibi bir kolay ve ucuz21işleme kullanılabilirliğini içerir. Açıklanan modeli önemli bir avantajı olmayan dikiş kol teknikte yatıyor. Burada sunulan teknik, başarı oranları kullanarak > % 90 ulaşılabilir, kıyasla daha önce açıklanan modelleri22önemli ölçüde daha iyi olduğu. Bu sigara dikiş tekniği kullanarak, biz önemli ölçüde azaltılmış hipovolemik şok, tromboz ve anastomoses12stenoz gibi ortak komplikasyonlar. Bu yöntemin daha fazla avantajı alıcı hızlı ameliyat sonrası iyileşme ile ilişkili greft ekstra karın konumunu içerir. Ayrıca, servikal konumu mükemmel greft exterioration olmadan herhangi bir gerginlik22tarafından canlı görüntüleme gibi vivo içinde analizleri için uygun yapar.

    Bu modelin en büyük dezavantajı klinik gerçeklik benzemez Pankreatik kanal tıkanıklığı var. Bu modelde, ekzokrin drenaj choledocho pankreas Kanal bağlama tarafından yönetilir. Uzun vadede, bu sonuçlar bir işaretli fibrozis ve Atrofi bezinin pankreatit22gerek önde gelen olmadan. Biz erken gözlenen ekzokrin doku bu bozulma nedeniyle gün 30 nakli sonra biz bu modeli uzun vadeli gözlem için uygun değildir inanıyoruz. Buna ek olarak, zarar görmemiş endokrin işlev gylcemic denetimler alıcının greft13,23,24işlevinin günlük değerlendirme için kolay bir araç yapar.

    Bu özellikleri bu erken greft yaralanma uzun koruma dönemleri ile veya farklı koruma çözümleri ve teknikleri ile ilgili analiz etmek için ideal bir model yapar. Bu model ile en iyi başarı elde etmek için bazı önemli adımları dikkate alınmalıdır. Pankreas kendisi manipülasyon için çok duyarlıdır. Bu nedenle, nazik işleme organ kurtarma ve implantasyon sırasında pamuk çubukları kullanarak mekanik travma en aza indirir. Kaçınılmaz olarak şiddetli greft hasara neden olur bu yana doğrudan bezi Forseps ile açgözlü, kaçınılmalıdır. Aynı nedenle, dalak ile birlikte pankreas kurtarılır ve bir kolu kullanılır. Bu da klinik pratikte kurulur. Başka bir tuzak 4 ° C histidin-triptofan-ketoglutarate perfüzyon çözüm kullanarak perfüzyon aort güdük yoluyla elde edilir soğuk perfüzyon içerir. Bu vesileyle, aşırı bir bezi şişmesi yavaşça greft Ventriküler tarafından önlenebilir. Kalan perfüzyon çözüm greft nemlendirme için sıcaklık organ kurtarma sırasında düşük tutmak amacıyla kullanılmalıdır.

    İle ilgili olarak alıcı hazırlık hem dış juguler ven, hem de ortak Karotid arter dikkatli bir diseksiyon başarılı revascularisation için temel ayarlar. Özellikle, tam maruz kalma Bütün dereleri, hem de çevresindeki yağ dokusu kaldırarak damarın içinde dış sıkıştırma ve stenoz kalan yağ dokusu tarafından önlemek için gereklidir. Uygun kol çapı seçimi çok önemlidir. 25-28 g arasında tartma fareler için paylaşılan deneyim dayalı bir iç çapı 0.57 mm 0,75 Venöz kol için 0.8 mm arasında ve Arteryel kol için uygundur. Kesin, temiz kelepçeleri kenarlarını kesme gemi güdük yırtılma önlemek için zorunludur. Kaplar, özellikle arter dilatasyonu en iyi gemisi dilatators ile iyi ipuçları kullanılarak elde edilir. Pratik bir kural olarak, gemi iki kez manşet Lümen için genişletmek gerekir. Gemi üzerinde everting ve kol üzerinde sabitleme işlemi sırasında bu çok önemli bu adımı kolaylaştırır gibi vasküler kelepçeler bir cilt kapağı altında yerleştirerek sabitleme öneririz.

    Zaten belirtildiği gibi dikiş manşet-teknik vasküler anastomoz için kolay bir yöntemi temsil eder ve 5 dk içinde gerçekleştirilebilir. Ancak, alıcının boyun bölgesinde greft doğru konumlandırma olduğunu doğru revaskülarizasyon için son derece önemlidir. Bu vesile ile en son doğru konumlandırma-boyun bölgesinde greft güvenli, düz ve gerginlik-Alerjik anastomoz arter ve ven izni vermesi için beklenebilir gerekiyor. Bu çıkış obstrüksiyonu kırışma nedeniyle neden olabilir beri kaçınılması gereken uzun olan gemileri var. Aynı nedenle, Venöz anastomoz manşet tutamaç reperfüzyon takip da kaldırılmalıdır. Pankreas nakli üzerinden yerelleştirilmiş kanamalar durumlarda, başarılı hemostaz yavaşça pamuk çubukları kullanarak 5 min için kanama yan sıkıştırarak elde edilebilir. Bu tür bir komplikasyon yönetmek için yalnızca başarılı bir yol bu.Koterizasyon, düz-se bile çok seçici, greft kaybı nekrotizan pankreatit nedeniyle hemen hemen her durumda sonuçlandı.

    Özet olarak, teknik olarak mümkün ve microsurgically ve mükemmel başarı oranları olduğu bir dikiş manşet tekniği kullanarak farelerde pankreas nakli için bir yöntem geliştirdik. Progredient fibrozis pankreas kanal tıkanıklığı nedeniyle göz önüne alındığında, bu model en iyi erken greft hasar üzerinde odaklanan araştırma konuları için uygundur. Bu el yazması araştırmacılar güvenli bir şekilde bu modeli kendi laboratuarlarında kurmak izin vermek için tasarlanmıştır.

    Açıklamalar

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.

    Teşekkürler

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    Bu eser Tıp Üniversitesi Innsbruck hibe #2008-1-596 ve #UNI-0404/1956, "Tiroler Wissenschaftsfonds (TWF)" (https://www.tirol.gv.at/en/) ve grant #2013-042018, "MUI-Start Förderungsprogramm" tarafından desteklendi.

    Malzemeler

    Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
    AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
    Adventitia MakasS & TS-00102Düz Dumont
    # 7 ForsepsFST  11271- 30Eğimli Uç 0.17 x 0.1 mm
    Yaşargil Klips Mini Kalıcı 7mmAesculapFE720K
    Mikro damarklipsi S & TB1 00396 V
    Gemi dilatatörüS & TD-5a.2, 00125
    Klips uygulayıcıS & VenözmanşetT CAF-4 00072
    Klips uygulayıcıAesculapFE572K & nbsp;arteriyel manşet için
    Polietilen tüpPortex LtdVenöz manşet için iç çap 0.75 mm
    Polimid boruVention Medical  141-0051İç çap 0,8 mm (Portex Ltd'den polietilen tüp için alternatif)
    Polimid boruVention Medical141-0033Arteriail manşet için iç çap 0,57 mm
    Bipolar forsepsMicromed140-100-015
    8/0 ipek ligatürlerCatgut GmbH, Merkuramed17209008
    Custodiol HTK çözümüDr. Franz Kö hler Chemie59997
    Ketamin GraeubaniMedica GmbH32554
    Xylasol GraeubaniMedica GmbH50855
    için

    Kaynaklar

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
    1. Gruessner, A. C. 2011 update on pancreas transplantation: comprehensive trend analysis of 25,000 cases followed up over the course of twenty-four years at the International Pancreas Transplant Registry (IPTR). Rev Diabet Stud. 8 (1), 6-16 (2011).
    2. Troppmann, C. Complications after pancreas transplantation. Curr Opin Organ Transplant. 15 (1), 112-118 (2010).
    3. Fernández-Cruz, L., et al. Native and graft pancreatitis following combined pancreas-renal transplantation. Br J Surg. 80 (11), 1429-1432 (1993).
    4. Eltzschig, H. K., Eckle, T. Ischemia and reperfusion-from mechanism to translation. Nat Med. 17 (11), 1391-1401 (2011).
    5. Konigsrainer, A., Habringer, C., Krausler, R., Margreiter, R. A technique of pancreas transplantation in the rat securing pancreatic juice for monitoring. Transpl. Int. 3 (3), 181-182 (1990).
    6. Lee, S., Tung, K., Koopmans, H., Chandler, J., Orloff, M. Pancreaticoduodenal transplantation in the rat. Transplantation. 13 (4), 421-425 (1972).
    7. Tori, M., Ito, T., Matsuda, H., Shirakura, R., Nozawa, M. Model of mouse pancreaticoduodenal transplantation. Microsurgery. 19 (2), 61-65 (1999).
    8. Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. J Vis Exp. (92), e50753(2014).
    9. Brandacher, G., et al. Tetrahydrobiopterin compounds prolong allograft survival independently of their effect on nitric oxide synthase activity. Transplantation. 81 (4), 583-589 (2006).
    10. Zou, Y., Brandacher, G., Margreiter, R., Steurer, W. Cervical heterotopic arterialized liver transplantation in the mouse. J Surg Res. 93 (1), 97-100 (2000).
    11. Zhou, Y., Gu, X., Xiang, J., Qian, S., Chen, Z. A comparative study on suture versus cuff anastomosis in mouse cervical cardiac transplant. Exp Clin Transplant. 8 (3), 245-249 (2010).
    12. Liu, X. Y., Xue, L., Zheng, X., Yan, S., Zheng, S. S. Pancreas transplantation in the mouse. Hepatobiliary Pancreat Dis Int. 9 (3), 254-258 (2010).
    13. Maglione, M., et al. Donor pretreatment with tetrahydrobiopterin saves pancreatic isografts from ischemia reperfusion injury in a mouse model. Am J Transplant. 10 (10), 2231-2240 (2010).
    14. Drognitz, O., Obermaier, R., von Dobschuetz, E., Pisarski, P., Neeff, H. Pancreas transplantation and ischemia-reperfusion injury: current considerations. Pancreas. 38 (2), 226-227 (2009).
    15. White, S., Shaw, J., Sutherland, D. Pancreas transplantation. Lancet. 373 (9677), 1808-1817 (2009).
    16. Morath, C., et al. Simultaneous pancreas-kidney transplantation in type 1 diabetes. Clin Transplant. 23 (Suppl 21), 115-120 (2009).
    17. Perseghin, G., et al. Cross-sectional assessment of the effect of kidney and kidney-pancreas transplantation on resting left ventricular energy metabolism in type 1 diabetic-uremic patients: a phosphorous-31 magnetic resonance spectroscopy study. J Am Coll Cardiol. 46 (6), 1085-1092 (2005).
    18. Secchi, A., Caldara, R., La Rocca, E., Fiorina, P., Di Carlo, V. Cardiovascular disease and neoplasms after pancreas transplantation. Lancet. 352 (9121), 65(1998).
    19. Kirk, A. D. Crossing the bridge: large animal models in translational transplantation research. Immunol Rev. 196, 176-196 (2003).
    20. de Jong, M., Maina, T. Of mice and humans: are they the same?--Implications in cancer translational research. J Nucl Med. 51 (4), 501-504 (2010).
    21. Niimi, M. The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3000 operations by one surgeon. J Heart Lung Transplant. 20 (10), 1123-1128 (2001).
    22. Maglione, M., et al. A novel technique for heterotopic vascularized pancreas transplantation in mice to assess ischemia reperfusion injury and graft pancreatitis. Surgery. 141 (5), 682-689 (2007).
    23. Cardini, B., et al. Crucial role for neuronal nitric oxide synthase in early microcirculatory derangement and recipient survival following murine pancreas transplantation. PLoS One. 9 (11), e112570(2014).
    24. Maglione, M., et al. Prevention of lethal murine pancreas ischemia reperfusion injury is specific for tetrahydrobiopterin. Transpl Int. 25 (10), 1084-1095 (2012).

    Yeniden basım ve izinler

    Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

    İzin iste

    Etiketler

    Fare Pankreas TransplantasyonuVask ler AnastomozOrgan Geri Kazan mOrgan mplantasyonuskemi Reperf zyon HasarGreft HasarMikrocerrahi BecerileriEndokrin FonksiyonSo uk skemi S resi

    İlgili makaleler