Method Article

Hipoparatiroid Fare oluşturma iki Teknikleri: Paratiroidektomi GFP Rakorlar ve Difteri-Toksin-Aracılı Paratiroid Ablasyonu kullanma

DOI:

10.3791/55010

⸱

March 14th, 2017

 ,  ,  ,  , 
1Endocrine Unit, Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School, 2West China School of Stomatology, Sichuan University, 3Department of Oral Medicine, Infection and Immunity, Harvard School of Dental Medicine, 4State Key Laboratory of Oral Diseases, West China Hospital of Stomatology, Sichuan University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Edinilmiş hipoparatiroidizmi olan fareler, hipoparatiroidizm için yeni ilaç tedavilerini incelemek için yararlı olacaktır. Bu tür fareler oluşturmak için iki prosedür gösterilmiştir. GFP-PTX faresi, yeşil floresan paratiroid bezleri tarafından yönlendirilen cerrahi paratiroidektomi ile üretilir. İkinci, cerrahi olmayan bir yaklaşım, difteri toksin reseptörünün paratiroid spesifik ekspresyonuna dayanır.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hipoparatiroidizm (HP), hipokalsemi, hiperfosfatemi ve düşük kemik döngüsüne yol açan düşük PTH seviyeleri ile karakterize bir hastalıktır. Hastalığın en sık nedeni, tiroid ameliyatı sırasında paratiroid bezlerinin yanlışlıkla çıkarılmasıdır. HP için yeni tedavilere ihtiyaç vardır, ancak bunların test edilmesi, edinilen HP'nin güvenilir hayvan modellerini gerektirir.

Burada, edinilen HP'nin iki fare modelinin neslini gösteriyoruz. GFP-PTX modelinde, paratiroidlerde (PTHcre-mTmG) spesifik olarak eksprese edilen yeşil floresan proteinli (GFP) fareler, PTHcre + farelerin Rosa-mTmGfl / fl fareleri ile çaprazlanmasıyla oluşturuldu. Yeşil floresan paratiroid bezleri, floresan diseksiyon mikroskobu altında kolayca tanımlanır ve paratiroidektomi 20 dakikadan daha kısa sürede gerçekleştirilir. Floresan kılavuzluğunda cerrahiden sonra, fareler son derece hipokalsemiktir. Geleneksel tiro-paratiroidektominin aksine, bu hassas cerrahi yaklaşım tiroid bezlerini ve tiroid fonksiyonunu sağlam bırakır. Ameliyat gerektirmeyen ikinci model ise difteri-toksin yaklaşımına dayanmaktadır. Spesifik olarak paratiroidlerde difteri toksini (DT) reseptörünü eksprese eden PTHcre-iDTR fareleri, indüklenebilir DTR faresinin PTHcre faresi ile çaprazlanmasıyla üretildi. Paratiroid hücreleri böylece difteri toksinine (DT) duyarlı hale getirilir ve farelere sistemik olarak DT enjekte edilerek seçici olarak yok edilebilir. Elde edilen hipokalsemik fenotip stabildir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Insan fizyolojisi ve hastalık için bu küçük endokrin organ önemini anlamak 1880 1 insan ve Sandström tarafından diğer bazı türlerde paratiroid bezlerinin ilk sistematik açıklama beri sürekli artmıştır. Paratiroid bezleri paratiroid hormonu (PTH), kalsiyum metabolizması başlıca regülatörü salgılar. PTH aynı zamanda fosfat homeostasis ve kemik döngüsü 1, 2 için önemli bir hormondur. Boyun cerrahisi sırasında paratiroid Kaza çıkarılması veya hasar hipoparatiroidizm en sık nedeni, düşük kan kalsiyum, düşük PTH ve yüksek fosfor 1 ile karakterize bir hastalıktır.

Daha iyi çalışmaya, güvenilir ve kolay erişilebilir fare modelleri gereklidir hipoparatiroidizm ve test yeni tedaviler, satın aldı. genetik araçları bir çok çeşit, çünkü Fare yaygın araştırmalarında kullanılanin vivo gelişmiş mekanik çalışmalar izin bu türlerde ullanılabilir. Cerrahi paratiroidektomi (PTX) sıçanlarda, 2, 3, 4, 5, ve daha büyük memelilerde 6, 7, 8 kullanılabilir Ancak, bu teknik, çünkü bezlerin küçük boyutu ve değişken bir anatomik dağılımı farelerde çok zor 9. Bu nedenle, Thyro paratiroidektomi (TPTX), tipik olarak, tiroid, paratiroid bezleri birlikte 10 kaldırılır olduğu fare, gerçekleştirilir. Ancak, düşük tiroid hormon düzeyleri bu modeli komplike deneylerde potansiyel karıştırıcı vardır. Buna ek olarak, kalsitonin, kemirgenlerde Kalsiyum homeostazında önemli bir hormon üreten tiroid bezi olan Cı-hücrelerinin, aynı zamanda th çıkarılması üzerine kayıpyroids 11.

Hipoparatiroidizm çeşitli genetik fare modelleri PTH nul faresi 12 GCM2 boş fare 13 ve kalsiyuma duyarlı reseptörü (CaSR) 14, 15, bir aktive mutasyonu ile NUF fare dahil olduğu, bulunmaktadır. Ancak, bu genetik bozukluklar zaten embriyonik gelişim sırasında mevcut ve paratiroid fonksiyonu, bu nedenle zaten embriyogenez sırasında bozulur. Bu, iskelet gibi organların gelişimini etkileyebilir. Bu sonraki yaşamında hastalığı kazanmak cerrahi sonrası hipoparatiroidi hasta ile tezat. Ayrıca, bu fare modelleri, bazı başka kullanımını 12, 13, 14 karmaşık hale erken öldürücülüğü ve azaltılmış doğurganlık, sergiler.

Biz iki yeni fare m geliştirdiedinilen hipoparatiroidi için MODELLERİ. tiroid bezi çıkarmadan paratiroid bezleri kolayca cerrahi olarak çıkarılması için belirlenen sağlar, özellikle paratiroid GFP ifade genetiği fareler kullanma. Bu fare ROSA mTmG fare ile 5.5 kb PTH promoterinin 16 kontrolü altında Cre rekombinazı ifade PTH Cre fare kapısı ile oluşturulmuştur. Elde edilen PTHcre; mTmG farenin paratiroid hücrelerde spesifik olarak, yeşil floresan proteini ifade eder. İkinci bir fare modeli, aynı PTH Cre, paratiroid spesifik olarak difteri toksini reseptörünün eksprese edilmesine yol açan, uyarılabilir DTR fare DUR kaseti çıkarmak için bu kez kullanır. DT sistemik uygulaması hayvanlar ameliyat olmadan hipoparatiroid render, paratiroid hücreleri yok eder.

Bu çalışmada sunulan iki fare modelleri üç aylık gözlem peri üzerinde istikrarlı bir hipokalsemik fenotip gösterene. Prosedürler gerçekleştirmek kolay, fenotip tekrarlanabilir ve hipoparatiroid fareler yüksek hayatta kalma oranı 17 sergilerler.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma Massachusetts General Hastanesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. başlamadan önce bu hayvan çalışması için uygun kurumsal onayını. Bazı teknikler yerel IACUC gereklerine göre ayarlanması gerekebilir.

1. GFP-PTX Fareler

  1. Daha fazla çiftleşme için eski 10 hafta - 8 at PTHcre + fare ve Rosa-mTmG fareler edinin.
  2. C57BL / 6 geçmişi olan fareler elde 6 kuşaktır, C57BL / 6 fareleri (FVB arka 129 karışık) PTHcre + fareler geri-melez.
  3. Kendilenmiş PTHcre + fareler PTHcre + / + fareler 17 elde edildi.
    NOT: genotipleme gerçekleştirmek kuyruk ucundan DNA ayıklamak ve PCR için kullanın. aşağıdaki gibi PCR primerleri olan heterozigot ve PTHcre Transgen homozigotluğu kontrol etmek için: ileri primer A, CCTGTCAAGGATGTGGAAGA, astar A ters ', TCAGATCACACCACACAGCA, forward astar B, CAGTTGTCTTTAGTTTACTCAGCATCAG, astar B ', GATAATCGCGAACATCTTCAGGTT 17 ters.
  4. Rosa-mTmG fareler 18 Çapraz PTHcre + / + fareler 16. zaman 4 haftalık mTmG yavrular; PTHcre vazgeçirmek.
  5. 0.6 mg / g vücut ağırlığı tribromoethanol ip enjeksiyonu (Avertin) ile mTmG fareler, ya da, ketamin / ksilazin gibi başka maddeler; 10 haftalık PTHcre - 8 anestezisi. onaylanmış bir protokole göre ameliyat sonrası 48 saat boyunca bir analjezik olarak buprenorfin, 0.1 mg / kg sc, 12 saatte kullanın. ayak tutam çekilme refleksi ya da başka yollarla anestezi uygun derinliğini sağlamak. yatar pozisyonda hayvan yerleştirin.
  6. Uzatın ve tek kenar bıçakları kullanarak cilt tıraş ventral boyun bölgesini hazırlamak. Bir povidon iyot antiseptik ped ile traş cildi dezenfekte edin.
  7. cerrahi bölgenin kirlenmesini azaltmak ve otoklava mikrofon kullanmak için steril cerrahi örtüler ile hayvan Kapakcerrahi işlem için rosurgical aletleri.
  8. cerrahi bisturi ile cilt 2 cm insizyonu kesin. fasya teşrih ve kavisli tırtıklı forseps ile künt diseksiyon ile yan tükürük bezleri itin.
  9. halojen ışık ve 4 kullanarak diseksiyon mikroskobu altında - 5X büyütme, kesme ve keskin forseps ipuçlarını kullanarak paratrakeal kasları ayrı ve trakea maruz kalmaktadır.
  10. Bir sonraki trakea bulunan sağ ve sol lob ile tiroid bezi tanımlayın.
  11. Floresan ışık ışık kaynağı açın ve iki yeşil-floresan paratiroidleri görselleştirmek.
    NOT: Genellikle, iki paratiroid bezleri veya tiroit bezi yüzeyine yakın bulunan, fakat bazen, onlar daha uzakta yer almaktadır.
  12. Dikkatle cerrahi forseps ve makas kullanılarak yeşil paratiroidleri kaldırın. hemostaz için steril gazlı bez kullanın ve dikkatli bir şekilde tüm yeşil doku çıkarıldığından emin olmak için trakea boyunca kontrol edin.
  13. 6-0 polyglactin 910 sütür kullanılarak kesintiye dikişle paratrakeal kasları kapatın. 6-0 polyglactin 910 sütür kullanılarak Halsted sütür ile cilt kesisi kapatın.
  14. İsteğe bağlı: Sıvı değiştirilmesi için farelere 10 uL / ​​g vücut ağırlığı steril normal% 0,9 sodyum klorid çözeltisi enjekte edilir.
  15. vücut ısısı geri kazanımı için sıcak bir inkübatör (37 ° C) ayrı bir kafes cerrahi sonrası hayvanların yerleştirin. Fareler uyanık ve yatar pozisyonda bir kez kafes kattaki bazı jelatin gıda pelet yemi ve su koyun.
  16. 2 saatlik bir ameliyat sonrası gözlem döneminden sonra, hayvan tesis için fareyi dönmek ve cerrahi sonrası bakım için yerel gereksinimleri takip.
  17. 3 gün Paratiroidektomi sonra, 10 uL kuyruk kan elde etmek ve bu tür kan gazı sistemi Ca ++ / pH analizörü gibi bir analizör kullanarak ++ Ca iyonize kan ölçün. Kandaki başarılı paratiroidektomi sonuçları Ca ++ eşit veya sahte çalışan con -2SD daha düşük iyonizekumanda fareleri (n = 30 Deneylerimizde 1.20 mmol / L).

2. PTH CRE-iDTR Fareler

  1. Çiftleşme eski 10 hafta - 8 de PTHcre + ve DTR fl / fl fareler edinin.
  2. C57BL / 6 geçmişi olan fareler elde 6 kuşaktır, C57BL / 6 fareleri (FVB arka 129 karışık) PTHcre fareler geri-melez.
  3. PTHcre + (C57BL / 6 background) fareler PTHcre + / + fareler 17 elde etmek için aynı soydan çiftleştirmek.
    NOT: fareler kuyruk uçları DNA ayıklanır ve PCR için kullanılan, genotipleme gerçekleştirmek için. Genotiplendirme Astarlar: ileri primer A, CCTGTCAAGGATGTGGAAGA, 'ileri primer B, CAGTTGTCTTTAGTTTACTCAGCATCAG, primer B ters TCAGATCACACCACACAGCA' GATAATCGCGAACATCTTCAGGTT 17 primer A ters.
  4. DTR ile PTHcre + / + fareler 16 Mate fl / fl PTHcre-iDTR fareler elde etmek için fareler 19.
  5. diphtheri seyreltilmesi ile DT çözüm hazırlayın0.5 ug / mL bir konsantrasyona steril tuzlu su ile bir toksin toz. -80 ° C'de steril filtre ve depolamak alikot.
  6. Enjeksiyon deney için 10 haftalık PTHcre-iDTR fareler - 8 seçin. oda sıcaklığına kadar eritilir DT kısım, intraperitonal 5 ug / kg (10 uL / ​​g), bir hayvanın vücut ağırlığı DT uygulayın. Maksimal etkinlik ve en toksisite için, DT Yönetimi 3 günlük aralıklarla 17 2 enjeksiyon toplam tekrarlanır.
  7. 3 gün ikinci enjeksiyondan sonra, her PTHcre-iDTR / PTHcre-iDTR-mTmG fareden 10 uL kuyruk kan alıp kan Ca ++ Kan Gazı Sistemi Ca ++ / pH analizörü kullanarak ölçün.
    NOT: kan fareler Ca araç-enjekte edilmiş kontrol farelerinin (n = 22) ortalamasının altında 2SS eşit hipoparatiroid fare gibi ++ daha düşük 1.18 mg / L, iyonize tanımlar.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Paratiroid Bezleri Konumu

Floresan diseksiyon mikroskobu altında görüldüğü gibi Öncelikle, biz 54 PTHcre-mTmG farelerin paratiroid bezlerinin dağılımını kaydedildi. % 74 (40/54), farenin% 26 (14/54), farenin bir ilave üçüncü paratiroid bezi (Şekil 1B, D, F) olan iki yeşil paratiroid bezleri (Şekil 1A, C, E), vardı. Tek bir bez veya üçten fazla bezleri ile Resim fare gözlenmiştir. Genellikle, paratiroid bezleri, tiroid bezi (% 58, 71/122 üst sınırına yakın bulunduğu Şekil 1A (1,2), B (1,2), C (2), D (1,2), e (2), A (3)). % 27 (33/122) bezlerin tiroid bezinin alt sınırına yakın bulunduğu (Şekil 1C (1), D (3), F (1)), ve% 13 (16/122) uzak t bulunduğuTiroid bezi (Şekil 1B (3), D (1), E (2)). Bulgularımız ile tutarlı ve paratiroid bezlerinin 20 yerleri değişen önceki bulguları uzatmak.

GFP-PTX Fareler

cilt insizyonu kapatma anestezi tüm cerrahi fare başına yaklaşık 20 dakika sürdü. 3 aylık gözlem dönemi boyunca ameliyat sonrası farelerin hayatta kalma oranı% 96.3 (53/55) idi. % 92.4 (49/53) GFP-PTX fareler 2 SD sahte çalışan kontrol fareleri veya daha düşük ortalama altındaydı iyonize kalsiyum düzeyleri sergiledi. GFP-PTX farelerde (hipokalsemi, düşük PTH ve serum fosfat) olarak hipoparatiroid fenotip 3 ay tüm gözlem süresi boyunca stabil idi. Önemlisi, tiroid fonksiyon 42 ± 24 vs = 3 ay cerrahi (TSH sonra yapay olarak ameliyat edilmiş hayvanlardan farklı değildi 30 ± 15 mU / L, p = 0.171; T4 = 30,0 ± 0,6 vs 3,1 ± 0,9 mg / dL, p = 0.707 (Şekil 2).

PTH-CRE-iDTR Fareler

DT PTH-Cre-iDTR farelere geliştirilen hipoparatiroidizm (düşük kan iyonize kalsiyum, yüksek kan fosfor ve uygunsuz düşük-normal PTH düzeyleri) enjekte edilir. Daha önce ölçülebilir, dolaşımdaki PTH ve bu farelerin 17, bu nedenle biraz daha yumuşak fenotipi açıklayan birkaç PTH pozitif hücreler difteri toksini ile ablasyon kaçış bildirmiştir.

GFP-PTX Fareler ve PTH-CRE-iDTR Farelerde hipoparatiroidizm

Önemli kan Ca indirimleri ++ ve serum PTH düzeyleri sham operasyonu farelerde bulunan seviyelerde (Ca ++ = 1.05 ± 0.40 vs ile karşılaştırıldığında, 3 gün ameliyat sonrası GFP-PTX farelerde gözlendi (Şekil 3A, izniyle (referans 17. yeniden basıldı)). 3 gün arayla, maksimal hipoparatiroid fenotip vermek için DT en az miktarda kullanmak için optimize edilmiş dozda ve rejimi de 5 ug / kg DT 2 enjeksiyondan sonra, DT PTH-CRE-iDTR fareler ile karşılaştırıldığında önemli hipokalsemi ve düşük PTH gösterdi enjekte 90 günlük gözlem süresi boyunca devam araç kontrol fareleri, (Ca ++ = 1.10 ± 0.07 mmol / L genel 1.26 ± 0.05 mmol / L, p <0.05 '= 218 ± 156 pg / ml vs 572 ± 164 pg PTH / ml, p <0.05) (Şekil 3B, (referans # 17 izniyle)).

figure-results-1
Şekil 1: (A, C, E) ya da üç (B, D, F), yeşil paratiroid bezleri vardı. En paratiroid bezleri üst sınırının yakınında bulunan (A (1,2), B (1,2), C (2), D (1,2), D (2), A (3) ya da yakınındaki alt sınırı tiroid bezinin (C (1), D (3), F (1)). nadir durumlarda, bazı ektopik bulunduğu (B (3), E (1), F (2)). için tıklayınız Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek.

figure-results-2
Şekil 2: TSH ve GFP-PTX Fare T4 seviyesi. 3 ay GFP PTX sonra serum TSH ve T4 measurem elde edildi hastalar. GFP-PTX fareler TSH konsantrasyonları (42 ± 24 mU / L) (A) ve T4 konsantrasyonları gösterdi (3.0 ± 0.6 ug / dl) kontrol farelerine (TSH = 30 ± 15 mU / L, p farklı değildi (B) = 0.171, n = 11, T4 = 3.1 ± 0.9, p = 0.707, n = 11). Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

figure-results-3
Şekil 3: GFP-PTX Farelerde Kan Ca ++ ve PTH Düzeyleri ve DT PTH-CRE-iDTR Fare Enjekte. (Yeniden basılmış - (*** p <0.001, n = 8 6) Hem GFP PTX fareleri (A) ve DT PTH-iDTR cre stabil hipokalsemi sergilenen fareleri (B) enjekte edilmiş ve 3 aylık bir gözlem dönemi boyunca, PTH seviyeleri, indirgenmiş referans # 17) izni ile.es / ftp_upload / 55010 / 55010fig3large.jpg "target =" _ blank "> bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz paratiroid bezleri seçici GFP ifade ile transgenik fareler kullanılarak GFP güdümlü Paratiroidektomi tekniğini göstermektedir. PTHcre ise; mTmG fareler, çift floresan (Cre-ifade hücreleri ve non-Cre kırmızı domates yeşil GFP hücreleri ifade edilmiştir) açıkça belirlemek ve tam olarak tiroid çıkarmadan tüm paratiroid bezleri kaldırmak sağladı. floresan kırmızı olmayan paratiroid dokusunun belirlenmesi yeteneği için çift floresan mTmG farelerin kullanımını tercih ederken, bizim prosedür aynı zamanda domates kırmızısı (B6.Cg-Ct (ROSA) 26Sortm14 (as tek floresan hayvanları kullanarak iyi çalışması gerekir CAG-tdTomato) Hze / J) fare. prosedür gerçekleştirmek için nispeten kolaydır fare başına yaklaşık 20 dakika gerektirir ve şiddetli ve uzun süreli hipoparatiroid fenotipe yol açar.

Buna ek olarak, GFP pozitif paratiroid bezlerinin bir başka avantajı, anormal paratiroid bezlerinin saptanması kolaylığıdır. Çalışmalarımız göstermektedirhali hazırda, yeşil floresan eden fare modelinde tespit edilir B6 sıçanlarında (Şekil 1), yaklaşık dörtte paratiroid mislocalization. Thyro-Paratiroidektomi aksine, bizim teknik tiroid hormon replasmanı ve kalsitonin üreten tiroid C-hücre çıkarılması bilinmeyen etkisi müteakip ihtiyacı olan tiroid kaldırılmasını önler. Floresan etiketli paratiroid bezleri paratiroid bezlerinin izolasyonunu gerektiren diğer araştırmalar için kullanılabilir. Bu modele göre sınırlama cerrahi gereksinimler arasında. Temel mikrocerrahi beceri ve floresan ışık kaynağı olan bir diseksiyon mikroskobu gereklidir.

Ameliyat ihtiyacını ortadan kaldırır hipoparatiroid fareler üretmek için ikinci bir teknik gösterilmiştir. Difteri PTHcre-iDTR fareler daha hafif bir hipoparatiroidizm fenotip sergileyen, ama sadece fare içine intraperitoneal DT enjekte gerektiren toksin-tedavi. kritik bir parçası for doz optimizasyon bu model oldu üreten ve doz rejiminde. DT yüksek dozlarda toksisite yol açtı, ancak düşük dozlarda yaklaşımın etkinliğini azaltmıştır. Bu tatbik 5 ug / kg, 2 enjeksiyon doz rejiminin 3 gün arayla, NO / minimum mortalite ile, güvenilir ve kararlı bir hipokalsemi neden olduğu tespit edilmiştir.

Sonuçta, bu iki yaklaşım edinilen hipoparatiroidi için yararlı fare modelleri sağladığını umuyoruz. Yeni bir uzun etkili PTH kullanarak, hipoparatiroidi 17 için yeni ilaçların etkinliğini belirlemede bu modellerin her ikisi de ilk kez kullanıldığını bildirdi.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NIH tarafından desteklenen bu çalışma Ağız Hastalıkları Açık Fonlama SKLOD2015OF01 (RB) ve R01-DK100584 ve Çin Devlet Anahtar Laboratuvarı verir. Biz yardım için Wenping Zhao, Tadatoshi Sato ve Kelly Lauter teşekkür ederiz.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
ROSAmT/mG farelerJackson Laboratuvarı7676
PTH-Cre fareleriJackson Laboratuvarı5989
iDTRmiceJackson Laboratuvarı7900
6-0 poliglaktin 910 iğne ile sütürEthicon, IncJ510G
Güvenlik Tek Kenarlı Tıraş Bıçağı AmerikanGüvenlik Tıraş Bıçağı Şirketi66-0089
Tek Kullanımlık NeşterTüy Emniyet Tıraş Bıçağı Co, Ltd72042-11
Povidon-İyot Hazırlık PedleriDynarex Corporation1108
Kat gazlı bezBusse. IncBHD707
%0.9 Sodyum Klorür ÇözeltisiHOSPIRA Worldwide, Inc07983-09
1 mL 29 G İnsülin ŞırıngasıBECTON DICKINSON329622
Cerrahi İnsizyon Örtüleri3M6640EZ
Dumstar Biyoloji forsepsRoboz Cerrahi Alet Co., IncRS-4984
Mikro Diseksiyon YaylıMakas Roboz Cerrahi Alet Co, IncRS-5605
İğne TutucuMILTEX., IncV98-42
2,2,2-TribrometanolSigma-AldrichT48402
2-Metil-2-ButanolSigma-Aldrich1524632,2,2-Tribrometanol
Difteri ToksinTozu Sigma-AldrichD0564'üçözün-80 &# 176'da stok çözeltisi olarak 1 mg / mL'de% 0.9 sodyum klorür çözeltisi içinde çözün; C
Multicap Kan Alma Kılcal tüplerSiemens Healthcare Diagnostics Ltd855578RapidLab 348 Ca<>2+/pH analizörü kullanarak iCasup2+ analizinde kan toplamak için
RapidLab 348 Ca2+/pH analizörüSiemens HealthcareiCa2+ analizi için

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Brandi, M. L., Brown, E. M. Hypoparathyroidism. , Springer. (2015).
  2. van Abel, M. Coordinated control of renal Ca(2+) transport proteins by parathyroid hormone. Kidney Int. 68, 1708-1721 (2005).
  3. Sebastian, E. M., Suva, L. J., Friedman, P. A. Differential effects of intermittent PTH(1-34) and PTH(7-34) on bone microarchitecture and aortic calcification in experimental renal failure. Bone. 43, 1022-1030 (2008).
  4. Rodriguez-Ortiz, M. E. Calcium deficiency reduces circulating levels of FGF23. J Am Soc Nephrol. 23, 1190-1197 (2012).
  5. Liao, H. W. Relationship between Fibroblast Growth Factor 23 and Biochemical and Bone Histomorphometric Alterations in a Chronic Kidney Disease Rat Model Undergoing Parathyroidectomy. PloS one. 10, e0133278(2015).
  6. Fox, J., Care, A. D. Effect of low calcium and low phosphorus diets on the intestinal absorption of water in intact and parathyroidectomized pigs. Calcif Tissue Int. 31, 253-255 (1980).
  7. Finco, D. R., Brown, S. A., Ferguson, D. C., Crowell, W. A. Selective parathyroidectomy of the dog. Can J Vet Res. 57, 288-292 (1993).
  8. Can, I. Parathyroid allotransplantation in rabbits without cultivation. Int J Clin Exp Med. 7, 280-284 (2014).
  9. Dunn, T. B. Melanoblasts in the stroma of the parathyroid glands of strain C58 mice. j Natl Cancer Inst. 10, 725-733 (1949).
  10. CRIVER. , Available from: http://www.criver.com/products-services/basic-research/rodent-surgery/soft-tissue-procedures (2010).
  11. Sakai, A. Osteoclast development in immobilized bone is suppressed by parathyroidectomy in mice. J Bone Miner Metab. 23, 8-14 (2005).
  12. Miao, D. Skeletal abnormalities in Pth-null mice are influenced by dietary calcium. Endocrinology. 145, 2046-2053 (2004).
  13. Gunther, T. Genetic ablation of parathyroid glands reveals another source of parathyroid hormone. Nature. 406, 199-203 (2000).
  14. Hough, T. A. Activating calcium-sensing receptor mutation in the mouse is associated with cataracts and ectopic calcification. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 13566-13571 (2004).
  15. Hannan, F. M. The Calcilytic Agent NPS 2143 Rectifies Hypocalcemia in a Mouse Model With an Activating Calcium-Sensing Receptor (CaSR) Mutation: Relevance to Autosomal Dominant Hypocalcemia Type 1 (ADH1). Endocrinology. 156, 3114-3121 (2015).
  16. Libutti, S. K. Parathyroid gland-specific deletion of the mouse Men1 gene results in parathyroid neoplasia and hypercalcemic hyperparathyroidism. Cancer Res. 63, 8022-8028 (2003).
  17. Bi, R. Diphtheria Toxin- and GFP-Based Mouse Models of Acquired Hypoparathyroidism and Treatment with a Long-Acting Parathyroid Hormone Analog. J Bone Miner Res. , (2015).
  18. Muzumdar, M. D., Tasic, B., Miyamichi, K., Li, L., Luo, L. A global double-fluorescent Cre reporter mouse. Genesis. 45, 593-605 (2007).
  19. Buch, T. A Cre-inducible diphtheria toxin receptor mediates cell lineage ablation after toxin administration. Nat Methods. 2, 419-426 (2005).
  20. Dunn, T. B. Melanoblasts in the stroma of the parathyroid glands of strain C58 mice. J Natl Cancer Inst. 10, 725-733 (1949).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Hypoparathyroid Mouse ModelsParathyroidectomy SurgeryGFP Guided SurgeryDiphtheria Toxin AblationPTHcre MiceFluorescence DissectionIonized Calcium AnalysisThyroid Function IntactStable Hypocalcemia PhenotypeParathyroid Gland Removal

Related Articles