Method Article

Sorunlu Tesisi, Oomiçet ve fungal Örnekleri için Elektron Mikroskobu (SEM) Protokoller tarayarak

DOI:

10.3791/55031

⸱

February 3rd, 2017

 ,  ,  ,  , 
1Biodiversity and Conservation Department, Real Jardín Botánico, CSIC, 2Research Support Unit, Real Jardín Botánico, CSIC, 3Mycology Department, Real Jardín Botánico, CSIC, 4Division of Glycoscience, AlbaNova University Center, Royal Institute of Technology (KTH)

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Taramalı elektron mikroskobu gözlemi için biyolojik örneklerin işlenmesindeki sorunlar arasında hücre çökmesi, ıslak mikro ortamlardan alınan örneklerin işlenmesi ve hücre tahribatı yer alır. Çiçek meristemleri, oomycete kistleri ve mantarlar (Agaricales) gibi zorlu numunelerin hazırlanması için uygun düşük maliyetli ve nispeten hızlı protokoller burada derlenmiş ve detaylandırılmıştır.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

taramalı elektron mikroskobu (SEM) ile gözlemler için biyolojik numunelerin işlem en sık karşılaşılan sorunlardır hücre çökme ıslak mikroçevrelerde ve hücre tahrip örnekler işlemden geçirilmesini içerir. SEM altında fotoğraf çekimi için örnek tedavisinde başlıca zorluklardan bazıları üstesinden burada açıklanmıştır narin örnekleri işlemek için, belirli protokoller genç çiçek dokuları, oomiset kistler ve örnek olarak mantar sporları (Agaricales) kullanma.

FAA ile tespit Çiçek meristemler (Formalin-Alkol-Asetik) ve Kritik Nokta Kurutma (CPD) ile işlenmiş hücresel duvarlar ya da bozuk organları çöktü göstermezse vermedi. Bu sonuçlar çiçek gelişiminin yeniden inşası için büyük önem taşımaktadır. Böyle glutaraldehit sabit oomiset kistleri gibi ıslak mikroçevrelerde, alınan örneklerin benzer bir CPD-temelli tedavi, su farklı türde tanısal özelliklerini diferansiyel büyümesini (örneğin, kist dikenleri) test etmek en uygunudurbstrates. mantar sporları bağlı hemşire hücrelerinin imha rehidrasyon, dehidratasyon ve CPD tedavisi, bu hücrelerin daha fonksiyonel çalışmalar için önemli bir adım sonra kaçınıldı.

Burada ayrıntılı protokoller düşük maliyetli ve büyüme süreçlerini yeniden ve tanı özelliklerini incelemek için iyi kalitede görüntüler elde edilmesi için hızlı alternatifleri temsil etmektedir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biyolojide, taramalı elektron mikroskobu kullanımı (SEM) yapısal evrimi, karşılaştırmalı morfoloji, organ gelişimi ve nüfus veya türlerin 1 karakterizasyonu çalışmalarına uzatıldı. Mikroskobik yapılar olan iki boyutlu görüntüsü, böyle bir mikromorffolojisinin ve sistematiği olarak alanlar 20. yüzyılın ikinci yarısından itibaren SEM tekniği avans yararlandı. Örneğin, 1970'lerde püskürtmeli kaplama yönteminin tanıtımı olarak iletken olmayan dokularda 2, 3 görüntüleme yükseltmiş gibi sürgün uçları ve çiçekler gibi hassas malzemelerin olası gözlemler yapılmıştır. SEM yüksek vaku....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NOT: Bu protokol, tüm (4-6) ortak prosedürler açıklayan belirli organizmaların (bölümler 1-3), ve üç üç adamış altı ana bölümden içerir. Yıldız (*) denemecileri modifiye adımları göstermektedir.

1. Gelişmekte Olan Araştırmalar ve Tam kurulan Bitki Yapıları

  1. Toplama ve sabitleme
    1. bitki materyali bir çeker ocak erişimi olmayan bir yerde toplanması halinde, tanıtmak ve santrifüj tüplerine% 70 etanol içinde malzemeyi batırmayın. İdeal olarak, etanol aşırı su kaybını önlemek için FAA 48 saat (1.1.1-1.1.3 adımlar) sonra malzemeyi daldırın. Bir duman dolap bitki materyali erişilebilir ise, bu adımı görmezden ve....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çiçek Gelişim ve Geliştirme Fiksasyon ve Tam kurulan Bitki Yapıları

Burada anlatılan FAA-CPD protokolü kullanarak, genç ve olgun bitki dokuları optimal sabit ve SEM görüntüleme için susuz vardır. Tomurcuklarının topografya ve şekli küçülen hücre (Şekil 1b, 1d, 4a-f) tarafından deforme olmaz çünkü bu tür çiçek gelişme olarak Süreçler yeniden inşa edilebilir. Karmaşık şekilli yapılar başarılı başka bir ulaşılamaz .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Standart SEM protokollere göre, burada sunulan prosedürler nispeten hızlı takip edilmesi kolay ve düşük maliyetli metodolojileri içerir. Numunelerin miktarı ve işleme kolaylığı bağlı olarak, kaliteli görüntüler elde etmek için dört-beş gün sürer. CPD ve SEM çalışması için yeterli güvenlik önlemleri de dahil olmak üzere, prosedürler ele kolaydır. Özellikle dikkat (1.1.3 ve protokolün 2.1.5 adımları 1.1.1 bakınız) formalin ve glutaraldehid ile alınmalıdır. Örnekleri zarar veya önceki adımları bozmadan gerekirse, süreç uzu.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu proje hibe sözleşmesi No. Bu yayın sadece yazarın görüşlerini yansıtmaktadır 634429. kapsamında Avrupa Birliği Ufku 2020 araştırma ve yenilik programı fon aldı ve Avrupa Komisyonu bilgilerin herhangi bir şekilde kullanımından sorumlu tutulamaz burada yer alan. Biz de gerçek Jardín Botánico, CSIC tarafından yapılan mali katkı kabul. SR Saprolegnia onun araştırma desteği için Avrupa Birliği [ITN-SAPRO-238550] minnettardır. Biz de nazik için Francisco Calonge teşekkür numuneleri (Şekil 5) işlemek için Phellorinia Herculanea görüntüleri ve B. Pueyo sağlamak istiyoruz. Tüm görüntüler Madrid Real Jardín Botánico-CSIC SEM hizmeti tarafından alınmıştır. ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

242

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Asetik asit Belirlibir tedarikçiCilt tahrişi, göz tahrişi
alüminyum saplamalarTed Pella, Inc.16221www.tedpella.com
Santrifüj tüpleriBelirli bir tedarikçi
Kritik Nokta KurutucuPolaron Quatum TechnologiesCPD7501
D-(+)-GlikozMerck1.083.421.000
Çift taraflı sellobantBelirli bir tedarikçi
Etanol mutlakBelirli bir tedarikçiyokYanıcı
Avrupa bakteriyolojik agarConda1800.00www.condalab.com
Filtre kağıdıBelirli bir tedarikçi
ForsepsBelirli bir tedarikçi
Formalin 4%Belirli bir tedarikçiZararlı, akut toksisite, cilt hassasiyeti, kanserojenlik. Yanıcı
Cam kapak kaymalarıBelirli bir tedarikçi
Cam hermetik kap Belirli bir tedarikçi
Gluteraldehit% 25 DC 253857.1611  (L)Dismadel Sl3336www.dismadel.com Mikolojik
peptonConda1922.00www.condalab.com
iğnelerBelirli bir tedarikçi
Petri kaplarıBelirli bir tedarikçi
Plastik kaplarBelirli bir tedarikçi
Kritik nokta kurutucu için kapaklı  numune tutucu Ted Pella, Inc.4591www.tedpella.com
neşterlerBelirli bir tedarikçi
Taramalı Elektron Mikroskobu
Yazılımı
Numune tutucularBelirli bir tedarikçi
Püskürtme kaplayıcıBalzersSCD 004
StereomikroskopBelirli bir tedarikçi
Transmisyon Elektron Mikroskobu (TEM) ızgaralarıElektron Mikroskobu BilimleriG200 (Kare Mesh)
www.emsdiassum.com CımbızBelirli bir tedarikçiyok
yok yokyokyokyok yok yokyokyokyokyokyok SEM için Hitachi S3000N Çözüm A: NaHPOÇözüm B: NaHPO<>sub4yokyok

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Endress, P. K., Baas, P., Gregory, M. Systematic plant morphology and anatomy: 50 years of progress. Taxon. 49 (3), 401-434 (2000).
  2. Falk, R. H., Gifford, E. M., Cutter, E. G. Scanning electron microscopy of developing plant organs. Science. 168 (3938), 1471-1474 (1970).
  3. Damblon, F. Sputte....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Scanning Electron MicroscopyCritical Point DryerFAA FixativeEthanol SeriesSample PreparationOomycete CystsFungal SporesFloral MeristemsGlutaraldehyde FixationGold Coating

Related Articles