Çoklu Floresan Inter-kromozomal Kararlı sapmaları Algılama<em&gt; In Situ</em&gt; Hibridizasyon (mFISH) ve ışınlanmış Farelerde Spektral Karyotipik (SKY)

Rupak Pathak; Igor Koturbash; Martin Hauer-Jensen

doi:10.3791/55162

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Çoklu Floresan Inter-kromozomal Kararlı sapmaları Algılama

9.5K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/55162

⸱

11 Ocak 2017

Rupak Pathak¹ , Igor Koturbash² , Martin Hauer-Jensen¹^,³

¹Division of Radiation Health, Department of Pharmaceutical Sciences, College of Pharmacy, University of Arkansas for Medical Sciences, ²Department of Environmental Health, Fay W. Boozman School of Public Health, University of Arkansas for Medical Sciences, ³Surgical Service, Central Arkansas Veterans Healthcare System

Bu makalede

Özet

Mevcut protokol, toplam vücut ışınlamasına maruz kaldıktan sonra farelerin kemik iliği hücrelerindeki kromozomal stabil anormallikleri tanımlamada çoklu floresan in situ hibridizasyon (mFISH) ve spektral karyotiplemenin (SKY) yararlılığını açıklamaktadır.

Özet

İyonlaştırıcı radyasyon (IR) çok sayıda kararlı ve kararsız kromozomal sapmalara neden olur. Kromozom morfolojisinin önemli ölçüde tehlikeye girdiği kararsız sapmalar, geleneksel kromozom boyama teknikleriyle kolayca tanımlanabilir. Bununla birlikte, kromozom morfolojisinde önemli bir değişiklik olmaksızın genetik materyallerin değişimini veya translokasyonunu içeren kararlı sapmaların tespiti, floresan etiketli DNA problarının yerinde hibridizasyonuna dayanan karmaşık kromozom boyama teknikleri gerektirir, bu da popüler olarak floresan in situ floresan olarak bilinen bir kromozom boyama tekniği hibridizasyon (FISH). FISH probları, tüm kromozom/lar için spesifik olabilir veya kromozom/lar üzerindeki hassas alt bölge olabilir. Yöntem sadece kararlı sapmaların görselleştirilmesine izin vermekle kalmaz, aynı zamanda belirli bir sapma oluşumunda yer alan kromozomun/bozuklukların veya spesifik DNA dizisinin/dizilerinin saptanmasına da izin verebilir. Sitogenetikte çeşitli kromozom boyama teknikleri mevcuttur; burada, toplam vücut ışınlamasına maruz kaldıktan sonra farelerin kemik iliği hücrelerinde oluşan kromozomal stabil anormallikleri tanımlamak için çoklu floresan in situ hibridizasyon (mFISH) ve spektral karyotipleme (SKY) olmak üzere oldukça hassas iki yöntem tartışılmaktadır. Her iki teknik de floresan etiketli DNA problarına dayansa da, floresan sinyallerin tespit yöntemi ve görüntü elde etme süreci farklıdır. Bu iki teknik, radyasyon biyolojisi, kanser sitogenetiği, retrospektif radyasyon biyodozimetrisi, klinik sitogenetik, evrimsel sitogenetik ve karşılaştırmalı sitogenetik gibi çeşitli araştırma alanlarında kullanılmıştır.

Giriş

Radyasyona bağlı kromozomal arası kararlı sapmaları tanımlamanın en güvenilir iki yöntemi, iki veya daha fazla kromozomun aynı anda boyanmasına izin veren çoklu floresan in situ hibridizasyon (mFISH) ve genomdaki her homolog kromozom çiftine farklı bir renk veren spektral karyotiplemedir (SKY). Kararsız sapmaların aksine, kararlı sapmalar doğası gereği kalıcıdır ve ışınlanmış popülasyonlarda¹ birkaç nesil boyunca yayılabilir ve radyasyonun neden olduğu sitogenetik lezyonların² kritik moleküler "imzaları" olarak kabul edilir. Çeşitli gruplar tarafından yapılan çalışmalar, stabil anormalliklerin kanser de dahil olmak üzere bir dizi hastalı....