Burada, Yunus sperm toplama, dondurma ve sığır yumurta kullanarak kapaklı tüp bebek performansı için başarılı bir şekilde kullanılmıştır protokolleri mevcut.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Şişe burunlu yunus (Tursiops truncatus) sperm: koleksiyon, dondurma ve kapaklı In Vitro fertilizasyon
Bu makalede
Özet
Özet
Cryopreserved yunus sperm kullanımı su parkları arasında genetik malzeme alışverişini kolaylaştırır ve sperm hücreleri laboratuarlar anlayışımız Deniz memelileri üreme daha ileri çalışmalar için hale getirmektedir. Kapaklı tüp bebek, yerine homolog tüp bebek, sperm doğurganlık potansiyel test etmek için bir araç sağlayabilir; çalışma gamet fizyolojisi ve erken embriyo gelişimi için; ve elde etmek zordur değerli yunus yumurta kullanmaktan kaçının. Burada, başarılı bir şekilde toplamak ve yunus sperm elde cryopreserve için kullanılmış olan protokolleri mevcut. Sperm toplama eğitimli yunuslar üzerinde el ile stimülasyon tarafından gerçekleştirilir. Dondurma TRIS yumurta sarısı dayalı extender gliserol ile kullanılarak yapılır. Buna ek olarak, biz bir protokolü kapaklı tüp bebek yunus sperm hücreleri ve sığır yumurta kullanarak açıklar ve PCR kullanarak elde edilen embriyo hibrid doğası doğrular mevcut. Kapaklı döllenme fertilizasyon tarih soruları yanıtlayan ve çalışma gamet fizyolojisi ve erken embriyo gelişimi için bir araç olarak kullanılabilir. Buna ek olarak, kapaklı tüp bebek başarı daha fazla muayene olan kapasitesi, gübreleme yunus sperm test etmek için bu teknik potansiyelini gösterir.
Giriş
Yardımlı üreme teknikleri kötü vahşi hayvanlar, Deniz memelileri de dahil olmak üzere geliştirilir. Hassas yöntemler sperm Gübreden başarı değerlendirmek için eksikliği yunus gibi türlerin üreme teknolojileri yavaş gelişmesine katkıda bulunur. Yakın zamana kadar şişe burunlu yunus (Tursiops truncatus) temel seminal parametreler bildirilen1,2vardı değildi. Ancak, hareketliliği ve Morfoloji, gibi değişkenler her ne kadar yaygın olarak kullanılan, üreme verimliliği hakkında sınırlı bilgi verir. En iyi sperm kalitesini Gübreden potansiyeli değerlendirme göstergesidir.
Son zaman....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
etik beyanı: deneysel yordamları gözden geçirilmiş ve kurumsal hayvan bakım ve Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria (INİA) kullanım Komitesi tarafından onaylanmış. Üreme çalışma için ve Deniz memelileri bakımı için hayvan refah Yasası için toplum tarafından kabul edilen Kılavuzu uygun bakım ve kullanım laboratuvar hayvanları, Bütün deneyler yapıldı.
1. Yunus Sperm toplama ve dondurma
- hazırlık
- FERT yapmak orta (heparin-hypotaurine-özgür ve). 25 mM bikarbonat, sodyum laktat 22 mM, 1 mM sodyum pyruvate, 6-mg/mL yağ asidi içermeyen BSA ve 10 mg/mL heparin (pH 7,4) ile FERT-T....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Tüm sonuçlar, tablo ve şekiller burada sunulan (1 ve 2) izni3ile çoğaltılamaz.
Yunus sperm dondurma ve çözme sonra yüksek hareketlilik var
Dondurulmuş çözdürülen yunus cinsel ilißki oranlarda (% ± SD), 84,5 ± 5.3 Toplam hareketli ve 69.1 ± 5.1 Progresif hareketli sperm hücreleri gösterdi. Motilite açısından, bu yüksek kaliteli cryopreserved sperm t.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Birçok farklı memeli türü için dondurulmuş çözdürülen sperm kullanılarak çeşitli yararları vardır. Bu değerli genetik materyal, dünya çapında dağıtımı için potansiyel, düşük kirlenme riski ve erkek gamet yıllardır korumak yeteneği aktarma yeteneği içerir. Bu tür ek II, taşıma ve hayvanların farklı su parkları arasında değişimi sınırlayan DEĞİNİR altında korunduğu için cryopreserved sperm kullanımı şişe burunlu yunus için esastır. Yunuslar taşıma, lojistik sorunlar ve tehlikeli riskler oluşturur bir etkinliktir. Ancak, on.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
onun iş ekonomi ve rekabet (AGL2015-70140-R ö. Rizos için), AGL2015-66145R A. Gutierrez-Adan ve J. F. Pérez-Gutiérrez ve Seneca Murcia Vakfı (Grant 20040/mikrop/16 F. García-Vázquez için) İspanyolca Bakanlığı tarafından finanse edildi
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| FERT-TALP orta | Merck | ||
| TCM-199 | Sigma | M-4530 | |
| Hoechst 33342 | Sigma | B-2261 | |
| 4 kuyulu bulaşıklar | Nunc | 176740 | |
| Yoğunluk gradyanı BoviPure | Nidacon International | BP-100 | |
| Yıkama solüsyonu Boviwash | Nidacon International | BW-100 | |
| Magnezyum klorür | Promega | A35 1H | |
| Steril su | Mili Q sintesis A10 Millipore | A35 1H | |
| Tampon Tris Borat EDTA Sigma | T4415 | ||
| MB agaroz | Biotools | 20.012 | |
| 5X GoTaq esnek tampon | Mili Q sintesis A10 Millipore | M 890 A | |
| MB agaroz | Biotools | 20.012 | |
| Taq polimeraz | Promega | ||
| SafeView | NBS Biologicals Ltd. | M 890 A | |
| Makler sayma odası | Sefi Medical | ||
| Thoma odası | Hecht-Asistan | ||
| pHmetre MicropH 2000 | Crison Aletleri | ||
| Ozmometre Gelişmiş mikro ozmometre 3300 | Norwood | ||
| Bilgisayar destekli sperm analiz sistemi | Projeksiyonlar y Serveis R+D | ||
| Stereomikroskop MZ 95 | Leica | ||
| Epifloresan optik Eclipse Te300 | Nikon | ||
| Konfokal asistan 4.02 yazılımı | Bio-Rad | 3D analiz yazılımı | |
| Konfokal lazer tarama mikroskobu | Bio-Rad | ||
| Micropippetes (P2. P20, P200, P1000) | Gilson | ||
| Mikrosantrifüj tüpleri | VWR | ||
| UV aydınlatıcı | Bio-Rad | ||
| PCR Termal döngüleyici Primus 96 Plus | MWG AG Biotech |
Kaynaklar
- Montano, G. A., et al. Evaluation of motility, membrane status and DNA integrity of frozen-thawed bottlenose dolphin (Tursiops truncatus) spermatozoa after sex-sorting and recryopreservation. Reproduction. 143 (6), 799-813 (2012).
- Sánchez-calabuig, M. J., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
