Yöntem makalesi

Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp. ve Pseudocapillaria tomentosa Zebra balığı sistemlerinde çevre tarama

12.9K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/55306

⸱

8 Aralık 2017

 ,  ,  , 
1Biological Research Facility, The Francis Crick Institute

Bu makalede

Özet

Bu iletişim kuralı karter temizleme bezi kullanımı ve Zebra balığı sistemleri, hangi nöbetçiler tek kullanım göre artan algılama patojen Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp. ve gibi algılamaya yol çamur analizini açıklar Pseudocapillaria tomentosa. P. tomentosa yumurta karantinada izlemek için bir sistem de önerilmiştir.

Özet

Sağlık izleme sistemleri geliştirilmiş ve Danio rerio Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp. ve Pseudocapillaria tomentosa gibi patojenler için potansiyel var çünkü Zebra balığı araştırma tesislerinde kullanılan hayvan refahı ve araştırma zarar. Mikrop tespit etmek için genellikle analiz post mortem balıklar. Nöbetçi'yi gözetim duyarlılığını artırmak için ve hayvanlar örnek sayısını azaltmak için önerilen bir yol kullanmaktır. Dolaşım sistemi ön filtrasyon sentinel havuzdan ayarı açıklanır. Teknik su kirliliği önlemek için ve balık nüfusu temsil etmek için yaş, cinsiyet ve suşların dikkatli bir seçim tarafından geliştirilmiştir. Hayvanların en az sayıda kullanmak için teknikleri çevre ekran da ayrıntılı olarak açıklanmıştır. Polimeraz zincir tepkimesi (PCR) yüzey karter temizleme bezi üzerinde önemli ölçüde bazı türlerin yaygın ve patojenik Mikobakteriyel Mycobacterium fortuitum, Mycobacterium haemophilumve gibi algılama geliştirmek için kullanılır Yol chelonae. Başka bir çevre yöntemi bir tankı veya P. tomentosa yumurta için bakmak için karter dibindeki çamuru işleme oluşur. Bu karantina uygulanan bir ucuz ve hızlı teknik bir üreme aygıtı alınan hayvanların tankı nerede sular altında. Son olarak, PCR çamur örneğe uygulanır ve A. hydrophila karter'ın alt ve yüzey algılanır. Genel olarak, bu belirli patojenlere uygulanan bu çevre tarama teknikleri ön filtrasyon nöbetçiler test için karşılaştırıldığında bir duyarlılık arttı açmıştır.

Giriş

Araştırma ve hayvan refahı1,2korumak için patojenler varlığı içinde hayvan İmkanları izlenir. Zebra balığı söz konusu olduğunda, durum3,4,5,6,7,8,9,10,11 izleme kez analiz hayvanlar post mortem histopatoloji, Bakteriyolojinin kültür veya moleküler yöntemler kullanır. Sadece koloni hayvanların test balık ve patojenler düşük yaygınlık algılamak için gerekli olacaktır ilgili giderleri sayısından dolayı önerilen yöntem değildir. Bu nedenle, tercih edilen yöntem kirletici daha yüksek bir yük hayvanların küçük bir grup ortaya konmasıdır. Bu balık ön filtrasyon gözcü makine adı verilir. Bu poz için ay süren ve an artmak içinde hayvan bakıcı'nın iş yükünü ve/veya amaca uygun yapılmış bazı mühendislik çözüm içerir. İçe aktarılan satır tarama nerede canlı tutulması için bereketli hayvanlardır ve bu leşleri üzerinde rutin deneyleri ile uyumlu değil karantina altında başka bir mücadeledir.

Biz burada su sisteminin çevre eleme tarafından belirli Zebra balığı patojenler (A. hydrophila, Mycobacterium spp. ve P. tomentosa) algılamak için bazı yöntemler açıklanmaktadır. Sağlık kontrolü için kullanılan balık sayısını azaltmak için ve en iyi ciro, maliyet ve algılama hassasiyeti için amaçtır. Tür yöntemler hayvanlar kullanımı için bir alternatif ve karantina tarama İthalat için bazı teknikler uygulanabilir. Örneğin, Mocho9 karter temizleme bezi yerine (Nöbetçi'yi de dahil olmak üzere) Zebra balığı PCR gerçekleştirerek daha fazla patojenik Mikobakteriyel tür tespit edebilmek ve bu daha az örnekleri ile elde edildi. Aynı çalışma o, P. tomentosa yumurta ile daha fazla hassasiyet flotasyon ve mikroskopi kullanarak tank çamur eleme tarafından tespit edildi balık PCR ve histopatoloji tarafından test yerine.

Sentinel programları3,4,5,6,7,8,9,10 çeşitli özellikleri Tablo 1 özetler Zebra balığı özellikleri bir takım tarafından kullanılan. Bu ilk koloni balık tank dağıtılan kez ön filtrasyon nöbetçiler su almak ise sonrası filtrasyon nöbetçiler su herhangi bir koloni balık aynı şekilde alırsınız. Örneğin, ön filtrasyon nöbetçiler dolaşım sisteminde sürekli karter su alarak ayarlanabilir. Bir odada birçok bağımsız sistemler olduğunda bu bir seçenek olmayabilir. Bu durumda, ön filtrasyon nöbetçiler bir tank tüm oda ekran için kullanılabilir. Statik bir havuzdan dolaşım sistemi, nöbetçiler vardır ve onların su düzenli olarak, sadece ön filtrasyon su Yani, karter su odadaki tüm sistemlerden kullanarak değiştirilir. Bu teknik aşağıda çevre tarama etkinliğini ile karşılaştırma için bir temel olarak tanımlanmaktadır. Önerilen kurulum su kalitesi sorunları pH veya azot kirliliği azalma gibi kontrol etmek için tasarlanmıştır.

Bakteri tespit biyofilm gibi su yüzeyi karter duvarında bulunan veya bir tank dibinde çamur hipotez bakteriyel çevre tarama kavramını esas alır. Atık (su, dışkı, besleme ve diğer organik maddeler) topladığı karter bir ideal örnekleme noktasını recirculating yetiştiricilik sisteminde tüm tankları ön filtrasyon görünüyor. Karter yüzeyi genellikle kolayca ulaşılabilir, ev temizliği hızlı ve Çapraz bulaşma (üzerinden örneğin eldiven) örneğinin önlemek için aseptik gerçekleştirilebilir. Kavramı yaygın patojen Mycobacterium spp. Zebra balığı sistemleri9,12tanımlamak için kullanılır. Aşağıda açıklanan tekniği ve ayrıca A. hydrophila algılama Zebra balığı karter yüzey temizleme bezi ve çamur bildiriliyor.

Çevre tarama parazit yumurtaları için algılamayı Murray vd tarafından dayanmaktadır 13 ve flotasyon tekniği kullanılan rutin Parazitoloji ve mikroskobik parazit yumurtaları dışkı14taranması için. Mocho9 alternatif örnekleme işlemi için önerilen ve teknik diğer tür-in balık biyotop algılamak için kullanılan gösterdi. Virüslü D. rerio geçmek P. tomentosa onların dışkı ile yumurta ve çamur içinde belgili tanımlık tank dibinde parazit yumurtaları kalır. Onlar, orada onların yoğunluğu sudan daha büyük olması nedeniyle toplanan olabilir. Yumurta yoğunluğu çevre örnek çok işlemek için kullanılır. Santrifüjü ile ilk bir flotasyon ağır madde su ve ışık enkaz ayırır. İkinci Santrifüjü doymuş şeker çözeltisi ( P. tomentosa yumurta yoğunluk büyük bir yoğunluk ile) tüp yüzeyde ortaya parazit yumurtaları için izin vermek için kullanır.

Biyofilm bakteri ve P. tomentosa --dan belgili tanımlık tank dip tarama sonra ilk Santrifüjü elde edilen çamur örnek tortu üzerinde tüm bu patojenler için PCR gerçekleştirerek birleştirilebilir. Bu örnekleme zaman en iyi duruma getirir. Yöntem aşağıda açıklanmıştır. Ayrıca bir karantina bağlamda bu teknikleri kullanmayı öneriyorum. Canlı tutulması gereken alınan yetişkin Zebra balığı ekran için bir üreme aygıtı karantina deposuna eklenir. Bir hafta sonra dışkı ve diğer atık maddeler üreme aygıtı içinde toplanan ve mikroskopi veya PCR tarafından tarandı. Aşağıda açıklanan tekniği ve P. tomentosa yumurta mikroskobu bu bağlamda tarafından tespit edildi.

Protokol

1. ön filtrasyon maruz kalma bir dolaşım sisteminden Sentinels

  1. Dolaşım sistemi temiz 8 L havuzdan ayarlayın. Karterleri gelen suyla doldur. 2 seramik boncuklar ekleyebilir veya küpleri biyo-medya ekrana (şekil 1) sistemlerden sünger. 1-2 D.rerio/l (Yani, 12 balık) ekleyin. Tesis, örneğin AB vahşi türü balık baskın genetik arka plan kullanın
    1. En az 6 balık aşağıdaki gibi seçin: en az bir kadın ve bir 6 ay aşağıda yaş, bir kadın ve bir erkek arasında 6 ve 18 ay ve bir kadın ve bir erkek yukarıda 18 ay-in yaş.
  2. Günde bir yem. Diyetler (örneğin, Kuru diyet, tuzlu su karides) nöbetçiler Zebra balığı tesiste kullanılan tüm diyetler maruz kalır emin olmak için değişir. Pazartesi, Çarşamba ve Cuma, Yani, su 4 ay boyunca haftada üç kez değiştirin.
    1. Su değişiklik yapmak için geçici bir tanka nöbetçiler ve biyo-medya aktarın. Tamamen sentinel tankı boş ve temiz. Karter su sadece ile sentinel tank dolum. Nöbetçiler ve biyo-medya geri koy.
  3. Nöbetçiler karter su 4 aydır ortaya çıkarmak. 2-Fenoksietanol (3 mL/L) aşırı doz çözümünü daldırma gibi onaylı bir yöntem tarafından Balık ötenazi.
  4. Ölüm onaylamak için sonra opercula hareketinin bırakma için 10 dk bekle.
    1. Kadavra Forseps ile kapmak ve tanımlanan bir kap içinde-80 ° C'de tamamen dondur. Bu PCR12,15için kullanılacaktır.
    2. Alternatif olarak, tailat Kaudal peduncle kesmek, karın duvarının nick ve % 4 formalin içinde ayarla.
      Dikkat: eldiven kullanın ve histopatoloji için kabine duman. Örnek konteyner etiketleyin.

2. sump temizleme bezi

  1. Steril bir kuru bez ile plastik bir şaft kullanın. Eldiven giymek. Pamuklu çubuk (su yüzeyine karter duvara) yüzeye bulun ve yüzeye kolay erişimini engelleme herhangi bir öğeyi kaldır. Düşük akış bir karter yüzeyle seçin.
  2. Dış ambalaj kaldırarak çubukla unsheathe ve steril pamuk uç hava bulaşmasına neden. Pamuklu çubuk, Çapraz bulaşma denenmemiş yüzeylerin dokunmak bakım alarak kaçının.
    1. Karter duvar üzerinde 5-10 cm su ve biyofilm karter su yüzey düzeyde absorbe temizle.
    2. Pamuklu çubuk geri kılıf veya ucu steril santrifüj tüpüne bölünürler. Örnek etiket ve PCR test etmek için göndermek veya-80 ° C'de dondurmak

3. P. tomentosa yumurta bir Tank dibinde tespiti

  1. Mikroskopi göre çamur analiz
    1. Bir karter veya Nöbetçi'yi de dahil olmak üzere balık tutan herhangi bir tank dibinde çamur Aspire için 60 mL şırınga9 kullanın. Örnek 15 mL tüpler içine bölün. Vida üst kısımları tüpler kapatın ve tüplere etiket.
    2. Doymuş şeker çözeltisi hazırlamak (özgül ağırlık 1,27 =) 227 g 177 mL sıcak su, toz şeker ile manyetik karıştırıcı14karıştırma tarafından.
    3. 175-250 x g salıncak kova ile bir santrifüj 10 min için de 15 mL tüpler santrifüj kapasitesi. Tüpler dikkatle boşaltmak ve tortu onların tüp içinde tutun.
    4. Doymuş şeker çözeltisi ile yarım tüpleri doldurun. Onların vida üst tüplerini kapatın ve tortu çözüm ile iyice karıştırın.
    5. Tüpler santrifüj salıncak kova koyun ve onları üst doymuş şeker çözeltisi ile doldurun. Bir cam yavaşça üstünde tepe-in her tüp ve doymuş şeker çözeltisi ile ayarlayın.
    6. 10 dk. bazı cam düşmek ve bu nedenle Santrifüjü sırasında orada kırmak Not için 175-250 x g, santrifüj her 60 mL örnek için 4 tüpler vardır. Cam asansör ve bir cam slayt üzerinde ayarlayın. Slaydı bir kalem veya işaret kalemi ile etiketleyin.
      1. Çok fazla cam kırılmaları gerçekleşmesi durumunda, çoğu ile doymuş şeker çözeltisi, 10 dk 175-250 x g, santrifüj tüpü doldurmak, doymuş şeker çözeltisi ile üst için doldurun, sonra hafifçe cam ayarla. 30 dk bekle.
    7. P. tomentosa yumurta ile mikroskop13 (Şekil 2 ve Video 1) arayın. Büyütme 400 X6kutuplu fiş tanımlayın.
      Not: 57-78 µm uzun ve 27-39 µm çapı16,17yumurta boyutudur. Bu bir pozitif slayt olumlu bildirilmesi 60 mL örnek için yeterli olduğunu unutmayın.
  2. Karantina P. tomentosa yumurta hayvanlarda ithal tarama
    1. Erkek ve dişi D. rerio içinde a tank ayarlayın. Tank için normalde hasat ve olurken yumurta korumak ama burada dışkı (şekil 3) toplamak için kullanmak için kullanılan bir aygıt ekleyin.
      Not: Örneğin, bir 1 L üreme deposu dolu (dış tank ve iç tank ile rendelenmiş alt) tamamen balık üreme aygıtı içine ve dışına taşımak ücretsiz erişim sağlayan bir 13 L tank sular altında.
    2. Bir hafta sonra üreme aygıtı kaldırmak ve üreme aygıtı toplanan çamur adım 3.1 "çamur göre analizi mikroskobu." açıklandığı gibi hasat

4. PCR çamur tortu üzerinde

  1. Bir tank veya 60 mL şırınga9 ile karter dibindeki çamuru Aspire edin ve örnek bir 60 mL tüp aktarın. Vida üst ile tüp kapatın ve tüp etiket. Şırınga atmayın.
  2. 60 mL tüp sallamak ve 15 mL 15 mL tüp aktarın. Vida üst ile tüp kapatın ve tüp etiket.
  3. 175-250 x g salıncak kova ile bir santrifüj 10 min için de 15 mL tüp santrifüj kapasitesi. Tüpler dikkatle boşaltmak ve tortu tüp tutun.
  4. Dış ambalaj kaldırarak bir çubukla unsheathe ve steril pamuk uç hava bulaşmasına neden. Pamuklu çubuk, Çapraz bulaşma denenmemiş yüzeylerin dokunmak bakım alarak kaçının.
    1. Tortu tüp 15 DNA örneği s.
    2. Pamuklu çubuk geri kılıf veya ucu steril santrifüj tüpüne bölünürler. Örnek etiket,-80 ° C'de dondurmak ve PCR test için gönderin.
      Not: 45 mL 60 mL tüp içinde kalır. Bu P. tomentosa yumurta tespiti için çamur analiz tarafından mikroskobu tarafından adım 3.1, örneğin, PCR sonuç onaylamak için açıklandığı gibi tutulabilir. PCR çamur içinde alınan hayvanlar adım 3.2 aşağıdaki eleme için denenebilir.

Sonuçlar

Balık örnekleri için karşılaştırıldığında yaygın Mycobacterium spp. tanımlamak için karter bezlerden faydaları şekil 4sonuçlarında destekler. Test 115 balık M. chelonae ve M. haemophilum ve örnekleri, %3 %5 sırasıyla tespit edildi. Hiçbir patojen diğer Mikobakteriyel tür tespit edilmiştir. Aynı sistemlerden 49 karter temizleme bezi 5 Mikobakteriyel türlerin varlığı saptandı. Oran oranı M. chelonae ve M. fortuitum daha sık PCR tarafından yüzey karter bezlerden balık örnek olarak algılanır hipotez ile hesaplanır. Bu 11 ilgili oran oranıyla istatistiksel olarak anlamlı (% 95 GA: 4-29; p < 0.0001) ve 306 (% 95 GA: 18-5208; p = 0.0001). Yüzey karter çubukla tekniği için Nöbetçi'yi ekrana Zebra balığı tesisi tek kullanım Mycobacterium spp. için değerli bir alternatiftir sonuçları göster Çevre örnekleri de kullanılmıştır için A. hydrophilaekran. Bu bakterilerin balık, çamur ve yüzey örnekleri (şekil 4) tespit edildi. Bu da önerilen teknikleri balık biyotop ekran yeteneğini destekler.

Yumurta aynı sistem üzerinden analiz çamur % 93 olarak tespit edildi, ancak P. tomentosa yumurta algılamak için çamur analizi ile ilgili Mocho9 parazit PCR ve histopatoloji balık örneklerin % 27 algılandı. Burada, teknik karantina tarama yeniden üretmek için meydan okuma geldi. Bu bağlamda, ithal hayvan örneklenmiş olamaz, ve onların sağlık zamanında değerlendirme Biyogüvenlik yönetimi ile yardımcı olur. Balık bir P. tomentosa olumlu tesisten bilinmeyen Sağlık durumunun aygıtları ıslahı ile 8 tankları ayarla: en fazla 16 balık/13 L tank, 7 transgenik ve cinsiyet, karışık 1 vahşi türü satır 4-24 ay yaşlı. Çamur cihazlardan bir hafta sonra hasat ve mikroskopi tarafından analiz. P. tomentosa yumurta 7 (%88) örneklerinde görüldü. Son olarak, parazit PCR tespiti karter temizleme bezi ve çamur çökeller yargılandın. 4 ve 6 çamur örnekleri PCR olumlu olduğunu ve tüm sonuçları yüzey temizleme bezi için negatif çıktı. Çamur tarama yeteneğine yumurta tankın altına düşmeye dayalı bu şaşırtıcı değil. Bu çamur analiz teknikleri D. rerio akvaryumlar için P. tomentosa istila ve yöntemleri alınan hayvanlar tarama için adapte edilebilir ekran için kullanılabileceğini gösterir.

figure-results-1
Şekil 1: dolaşım sistemi ön filtrasyon sentinel havuzdan. Bir 8 L tankı su ve biyo-medya sistemleri karterleri ekrana ile doludur. İki beyaz seramik biyo-medya boncuk (ortasında resmi) tank dibinde oturmak. 12 balık kendi yaş, zorlanma ve cinsiyet göre seçilir ve sentinel deposuna eklenir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

figure-results-2
Şekil 2: P. tomentosa yumurta çamur Çözümleme sırasında mikroskobu tarafından algılandı. Büyütme kullanılan 400 X yapıldı. Oklar İki kutuplu fiş gösterir. Ölçek çubuğu 50 µm. = Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

figure-results-3
Şekil 3: aygıt ıslahı batık çamur analiz için toplamak için bir balık tankı içinde. Bu tank resmi amacıyla bir bankta ayarlanır; Aksi halde dolaşım sisteminde ayarlanır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

figure-results-4
Şekil 4: Balık, Mycobacterium spp., A. hydrophilave P. tomentosa PCR tarafından kimlik yüzdesi yüzey karter temizleme bezi ve karter çamur. Yüzde her patojen türün için olumlu sonuç sayısını test örnekleri sayısına bölünmesi ile elde edilir. Olumlu sonuçlar yüzdesini örnek türüne göre balık, yüzey veya çamur verilen ve bakteri adından sonra gösterilir. 115 balık ve 49 yüzey karter temizleme bezi tarafından PCR Mycobacterium spp. tanımlanması için test edildi Bu çalışmanın bir uzantısı olduğundan veri Mocho'nın9 sonuçları ile derlenir. Özellikle ön filtrasyon nöbetçiler Protokolü Bölüm 1 göre balıklar. Nadiren, nöbetçiler were değil elde edilebilir ne zaman balık kaçakların ve eski koloni (> 18 ay) örneklenmiş. Tüm test sistemleri Mycobacterium spp. için balık ve karter temizleme bezi üzerinde test edildi. Oran oranı M. chelonae ve M. fortuitum daha sık PCR tarafından yüzey karter bezlerden balık örnek olarak algılanır hipotez ile hesaplanır. Bu 11 ilgili oran oranıyla istatistiksel olarak anlamlı (% 95 GA: 4-29; p < 0.0001) ve 306 (% 95 GA: 18-5208; p = 0.0001). Mycobacterium marinum PCR tüm örnekleri için negatif ve bu nedenle bu tesislerinden yok sayılır ve analize dahil değil. 12 balık, 14 yüzey karter temizleme bezi ve 6 karter çamur PCR tarafından A. hydrophilavarlığı için test edildi. 6 karterleri yüzeyi ve çamur içinde P. tomentosa varlığı için test edildi. PCR Polimeraz zincir reaksiyonu =. CI güven aralığı =. * ve ** istatistiksel anlamlılık; belirtmek diğer karşılaştırmalar istatistiksel olarak anlamlı değildi. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

figure-results-5
Video 1: yumurta için tarama P. tomentosa mikroskop ile. 3.1. adımda açıklandığı gibi slayt çamur analizinden elde edilir. Alanı P. tomentosabir yumurta algılamak için taranır. Bir kez bir yapı kabul edilmektedir, bu daha yüksek çözünürlükte kimlik doğrulamak için Yakınlaştırılmış. Bu videoyu izlemek için lütfen buraya tıklayın. (İndirmek için sağ tıklatın.)

YazarlarPozlama başında yaşPozlama uzunluğuÖrnekleme yaşÖncesi veya sonrası
Filtrasyon		CinsiyetStrain(s)
Barton vd. 3 4 ay6 ay10 ayÖn filtrasyonN/AN/A
Borges vd. 4 6 ay6 ay12 ayÖn filtrasyonN/AAB vahşi türü
Collymore vd. 5 Mümkün olduğu kadar genç3 ay< 6 ayÖn filtrasyonN/AN/A
Geisler vd. 6 4 ay4 ay8 ayÖncesi ve sonrası
Filtrasyon		N/AAB vahşi türü
Liu vd. 7 3 ay1-6 ay4-9 ayÖncesi ve sonrası
Filtrasyon		N/AVahşi türü
Martins vd. 8 3 ay3 ay6 ayÖn filtrasyonN/AVahşi türü
Mocho9 < 6 ay,
6 - 12 ay
> 18 ay		4 ay7 - 24 ayÖn filtrasyon1 kadın ve
1 erkek
her yaş grubu		AB vahşi türü
Murray vd. 10 3-4 ay3 ay, 6 ay, 1 yıl7, 10 ve 16
ay		Öncesi ve sonrası
Filtrasyon		N/AAB vahşi türü

Tablo 1: sentinel ayarları Zebra balığı tesislerinde karşılaştırılması. Sentinel balık onların yaşı, cinsiyeti ya da zorlanma göre seçilebilir. Tanımlanan bir dönem için sunulur ve öncesi ya da sonrası filtrasyon sistemi su aldıkları. 2016 özel sayı sağlık Zebra balığı günlük3,4,5,6,7,8,9, gelen verileri derlenmiş 10.

Tartışma

Teknikleri, kritik adımlar, sınırlamaları ve sorun giderme:

Yaş, cinsiyet, zorlanma ve maruz kalma nöbetçiler uzunluğu standart değil. Bu Tablo 1' de gösterilmiştir. Aşağıda 6 ay yaş ve yaşlı balık Balık çok az tarama vardır. Genç balık büyük nüfus10,18,19,20dakikaya daha yaygın bazı patojen olarak etkileyen bazı patojen olabilir. Benzer şekilde, cinsiyet cinsiyet önyargı bazı patojenlerin21bazı rapor rağmen bazı sentinel gruplar seçimine kabul edilmez. Zorlanma seçimine göre belirli bir patojen izlemek için yapılmış olabilir, ancak bu sorunları çözmek önerilen tekniği çalışır. Örneğin, TU Mycobacterium spp.12,22algılama ile yardımcı olabilir ama nöbetçiler sonra göstermek veya rezervuar klinik belirtiler hareket edeceğini bir risk. Pozlama uzunluğu ile ilgili, Zebra balığı Uluslararası Kaynak Merkezi10 yaklaşım yetersiz kirlenme noktayla cevapsız patojenler algılamak için şansını artırır. Uzunsüre maruz kalanlar için ihtiyaç Nöbetçiler hazır değildir anlamına gelir. Çevre örnekleri ek esneklik ve tarama olayların çarpma sağlar. Örneğin, örnekleme iki ayda bir 4 ay aralığındaki her tarama yöntemi arasında yer alabilir. Bu yeni tanıtılan bir patojen algılanması zaman sukut azaltabilir.

Çevre tarama teknikleri çevre patojenler tespiti güveniyor. Patojenler tarafından Balık tutmak ve bu nedenle sistem suda seyreltilmiş. Patojenler su filtrasyon23 tarafından yakalama olasılığını araştırdı değil. Patojenler balık ve biyofilm algılama izin kirlenme bir eşik ulaşmak için çarpmak için yeterli zaman verilirse biz açıklamak için tek etkili yöntemlerdir. Bu sınırlama teknikleri örnekleme siteleri kritik bir seçime göre küçültülür: çamur içinde belgili tanımlık tank karter çamur yerine örneklenir ve karter bir tank veya yerine sonrası filtrasyon yüzeyde su ve biyofilm örnek. Yine de, aynı sistem üzerinden tüm örneklerini aynı sonuçlar vermek olası değildir. P. tomentosa için olumlu sonuçlar başka bir tahlil (histopatoloji, PCR veya çamur analiz) kullanarak onaylanabilir. Mikobakteriyel PCR olumlu sonuçlar kültür veya başka bir tanı Laboratuvarı tarafından onaylanabilir. Ancak, sağlık durumu kurarken daha fazla örnekleri herhangi bir çevre tarama tekniği olumsuz sonuçları onaylamak için tavsiye edilir.

Mevcut/alternatif yöntemleri ile ilgili olarak teknik önemi:

Mycobacterium spp. ortamında ortak ve karter onların huzurunda onların patojenitesi12tahmin değil. Mocho9 mortalite oranları izleme sağlık sorunları gelişmeleri incelemek için anahtar olduğunu gösterdi. Hayvan örnekleri kullanımı hayvan hastalıklarıyla ilgili herhangi bir soruşturma için gerekli kalır. Sağlık izleme bir tesiste tüm yaygın patojenler tespiti anlamına gelir ve bu çevre tarama teknikleri tek kullanım ile elde edilemez. Yine de, tanı araçları hassasiyetinin eksikliği geciktirebilir veya sistem durumu doğru bir tanımını önlemek. Iken gözcü makine kullanımı yaygın bir mikrop kalabalıkta algılamak için gerekli balık sayısını azaltır, duyarlılık eksikliği çevre tarama5,23gibi yöntemleri kullanarak için ağırlık ekler. Gerçekten de öyle ki çevre ve hayvan örnekleri negatif24,25sınamalısınız belirli patojen ücretsiz durum genellikle tesis içinde bir tür yokluğu olarak tanımlanır.

Mycobacterium spp. tanımlamak için karter çubukla sonuçları örnekleri yanlış olumsuz sağlık durumuna neden olabilir balık güvenerek gösterin. 6 test Mikobakteriyel tür olarak patojenik açıklanan veya potansiyel Zebra balığı15 ve bazı patojen tarafından yumurta yüzey dezenfeksiyon gibi düzenli olarak yapılan karantinada klor26 ile ortadan değil. Bu nedenle, yanlış negatif bazı satırları ithal ortak çalışanlar için sonuçlara yol açabilir. Örneğin, M. fortuitum PCR balık örneği tarafından kaçırılan ancak karter çubukla PCR yarısından fazlası algılandı. Bu mikobakteriler daha klor için su sistemleri27' büyümeye yeteneklerini ve diğerleri daha dayanıklı olduğunu göz önünde bulundurursak, bu sigara-kirlenmiş alma tesisi için bir risk var. Satırlar alma izin vermek için güven ve onların ile ihracat tesisin sağlık raporları karşılaştırmak yöneticileri gerekir. ICLAS performans değerlendirme programı28 kemirgenler bu süreçte anahtarıdır. RESAMA ağ M. gordonae ve M. mucogenicum tespiti Fransız D. rerio11bildirir. Bu mikobakteriler kullandığımız ticari laboratuvarları panellerinde teklif değil. ICLAS program genişletmek için ve patojenik türler29listesinin yanı sıra tanı testleri uyum için yararlı olacaktır.

A. hydrophila klor30 onun duyarlılık onun eleme daha büyük olasılıkla rutin yumurta yüzey dezenfeksiyon sırasında geçici olsa da hayvanlar, içe aktarırken tanıttı olmak potansiyeline sahiptir hastalık da. Karter, pamuklu çubuk ve çamur sonuçları çevre tarama bu patojen tespit etmek için kullanılabileceğini göstermektedir. Diğer bakteriler Mycobacterium spp. gibi çamur içinde PCR23tarafından tespit edildi. Döken patojenler algılanmasını sağlayan bu yana bu tür örnek bir özellikle ilgili. Örneğin, başka bir yeni alınan balık karantinada P. tomentosaiçin ekran için çamur analizi uygulamasıdır. Parazit hayvanın sağlık13 ve neoplazi modelleri16için bir tehdit oluşturuyor. Ayrıca, rutin Zebra balığı yumurta yüzey dezenfeksiyon içinde kullanılan klor konsantrasyonu verimli31değildir. Bu nedenle, bir haftalık cirosu olan ve olmayan herhangi bir balık ötenazi alınan hayvanlar ekran yeteneği çok cazip görünüyor. Bu teknik bir önceliklendirme ithalatın izin vererek karantina ve Biyogüvenlik kuralları etkisi altına alabiliyor. Karar verme sürecinin ardından verilirken tesiste yaygın patojenler, içe aktarılan balık ve alma tesisi10sağlık durumunu ödün riski örnekleri algılanan patojenler göre tasarlanmıştır.

Gelecekteki uygulamalar veya bu teknikleri Mastering sonra yön:

Rutin karantina tedavi seçilen seçeneği olsa bile, bu tür ilaç32,33,34,35,36 etkinliğini üreme aygıtı çamur analizi ile tespit edilebilir. Daha genel olarak, çevre tarama bileşikler bakteri ve parazit karşı test etmek için kullanılan ortadan kaldırılması, Balık biyotop dahil olmak üzere. Başka bir niş çevre tarama patojen nüfus canlı izlemek için37,38yem uygulamadır. Tanı toolbox Zebra balığı tesislerinde izleme sağlık için değerli bir ek olarak ana uygulama bu tekniklerin olmasına rağmen. Bir daha doğru maliyet ve zaman sayesinde sağlık durumu, karter temizleme bezi ve çamur analiz verimli tanımını sentinel gözetim ve rutin karantina uygulama için tamamlayıcı vardır. Gerçekten de, gelecekte bu tekniklerin herhangi bir su laboratuvar sağlık raporu rutin bir parçası olmaktır.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

Yazarlar BRF su sporları ekibi Francis Crick Enstitüsü onların kritik giriş ve teknik yardım için teşekkür etmek istiyorum. Bu eser onun çekirdek kanser araştırmaları İngiltere (FC001999), İngiltere'de tıbbi araştırma Konseyi (FC001999) ve Wellcome Trust (FC001999) fon alır Francis Crick Enstitüsü tarafından desteklenmiştir.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Aqua-Sed 250 mLVetark2-fenoksietanol
Tüplü Steril Dryswab UcumweMW100Karter yüzeyi
BD Plastipak Tek Kullanımlık Şırınga 50 mL EksantrikBecton
Dickinson		300866Aslında onlar
60 ml'ye derecelendirilmiştir
Santrifüj tüpü 15 mL CorningCorning430766
4 x 200 mL Salıncaklı Centaur 2 tezgah üstü santrifüj– Dış Rotor (Mühürsüz)SanyoMSB020. CX1.5
Kapak Camı 22 mm x22 mmMenzel-GlaserMNJ-350-020H
Düz Çubuk Steril Plastik Aplikatör Rayon Uçlu Beyaz KapakSterilin Ltd Thermo Fisher ScientificF155CAÇamurdan sürüntü tortusu
50 mL Bağımsız Santrifüj Tüpü CentriStar KapağıCorning430921
Tank İçi Yumurtlama Tepsisi SetiMBK Installations Ltd

Kaynaklar

  1. Schroeder, P., Mocho, J. P. A veterinary perspective on laboratory zebrafish welfare. Fish Veterinary Journal. 14, 37-46 (2014).
  2. Mason, T., et al. Strategies to Mitigate a Mycobacterium marinum Outbreak in a Zebrafish Research Facility. Zebrafish. 13, Suppl 1. 77-87 (2016).
  3. Barton, C. L., Johnson, E. W., Tanguay, R. L. Facility Design and Health Management Program at the Sinnhuber Aquatic Research Laboratory. Zebrafish. 13, Suppl 1. 39-43 (2016).
  4. Borges, A. C., et al. Implementation of a Zebrafish Health Program in a Research Facility: A 4-Year Retrospective Study. Zebrafish. 13, Suppl 1. 115-126 (2016).
  5. Collymore, C., Crim, M. J., Lieggi, C. Recommendations for Health Monitoring and Reporting for Zebrafish Research Facilities. Zebrafish. 13, Suppl 1. 138-148 (2016).
  6. Geisler, R., Borel, N., Ferg, M., Maier, J. V., Strähle, U. Maintenance of Zebrafish Lines at the European Zebrafish Resource Center. Zebrafish. 13, Suppl 1. 19-23 (2016).
  7. Liu, L., Pan, L., Li, K., Zhang, Y., Zhu, Z., Sun, Y. Zebrafish Health Conditions in the China Zebrafish Resource Center and 20 Major Chinese Zebrafish Laboratories. Zebrafish. 13, Suppl 1. 8-18 (2016).
  8. Martins, S., Monteiro, J. F., Vito, M., Weintraub, D., Almeida, J., Certal, A. C. Toward an Integrated Zebrafish Health Management Program Supporting Cancer and Neuroscience Research. Zebrafish. 13, Suppl 1. 47-55 (2016).
  9. Mocho, J. -P. Three-Dimensional Screen: A Comprehensive Approach to the Health Monitoring of Zebrafish. Zebrafish. 13, Suppl 1. 132-137 (2016).
  10. Murray, K. N., Varga, Z. M., Kent, M. L. Biosecurity and Health Monitoring at the Zebrafish International Resource Center. Zebrafish. 13, Suppl 1. 30-38 (2016).
  11. Legendre, L., et al. RESAMA: A Network for Monitoring Health and Husbandry Practices in Aquatic Research Facilities. Zebrafish. 13, Suppl 1. 56-65 (2016).
  12. Whipps, C. M., Matthews, J. L., Kent, M. L. Distribution and genetic characterization of Mycobacterium chelonae in laboratory zebrafish Danio rerio. Dis Aquat Organ. 82 (1), 45-54 (2008).
  13. Murray, K. N., Peterson, T. S. Pathology in practice. P. tomentosa infection in zebrafish. J Am Vet Med Assoc. 246 (2), 201-203 (2015).
  14. Foreyt, W. J. Veterinary Parasitology Reference Manual. , 5th Edition, Wiley-Blackwell. Ames, IA. (2001).
  15. Whipps, C. M., Lieggi, C., Wagner, R. Mycobacteriosis in zebrafish colonies. ILAR J. 53 (2), 95-105 (2012).
  16. Kent, M. L., Bishop-Stewart, J. K., Matthews, J. L., Spitsbergen, J. M. Pseudocapillaria tomentosa, a nematode pathogen, and associated neoplasms of zebrafish (Danio rerio) kept in research colonies. Comp Med. 52 (4), 354-358 (2002).
  17. Moravec, F. Observations on the bionomy of the nematode Pseudocapillaria brevispicula (Linstow, 1873). Folia Parasitol. 30, 229-241 (1983).
  18. Ramsay, J. M., Watral, V., Schreck, C. B., Kent, M. L. Pseudoloma neurophilia infections in zebrafish Danio rerio: effects of stress on survival, growth, and reproduction. Dis Aquat Organ. 88 (1), 69-84 (2009).
  19. Watral, V., Kent, M. L. Pathogenesis of Mycobacterium spp. in zebrafish (Danio rerio) from research facilities. Comp Biochem Physiol C Toxicol Pharmacol. 145, 55-60 (2007).
  20. Whipps, C. M., Dougan, S. T., Kent, M. L. Mycobacterium haemophilum infections of zebrafish (Danio rerio) in research facilities. FEMS Microbiol Lett. 270, 21-26 (2007).
  21. Chow, F. W., Xue, L., Kent, M. L. Retrospective study of the prevalence of Pseudoloma neurophilia shows male sex bias in zebrafish Danio rerio (Hamilton-Buchanan). J Fish Dis. 39 (3), 367-370 (2016).
  22. Murray, K. N., Bauer, J., Tallen, A., Matthews, J. L., Westerfield, M., Varga, Z. M. Characterization and management of asymptomatic Mycobacterium infections at the Zebrafish International Resource Center. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (5), 675-679 (2011).
  23. Crim, M. J., Lawrence, C., Livingston, R. S., Rakitin, A., Hurley, S. J., Riley, L. K. Comparison of Antemortem and Environmental Samples for Zebrafish Health Monitoring and Quarantine. J Am Assoc Lab Anim Sci. , (2017).
  24. Jensen, E. S., Allen, K. P., Henderson, K. S., Szabo, A., Thulin, J. D. PCR testing of a ventilated caging system to detect murine fur mites. J Am Assoc Lab Anim Sci. 52 (1), 28-33 (2013).
  25. Commission Regulation (EC) No 1168/2006 of 31 July 2006 implementing Regulation (EC) No 2160/2003 as regards a Community target for the reduction of the prevalence of certain salmonella serotypes in laying hens of Gallus gallus and amending Regulation (EC) No 1003/2005 (Text with EEA relevance). OJ. L. 211, 4-8 (2006).
  26. Chang, C. T., Colicino, E. G., DiPaola, E. J., Al-Hasnawi, H. J., Whipps, C. M. Evaluating the effectiveness of common disinfectants at preventing the propagation of Mycobacterium spp. isolated from zebrafish. Comp Biochem Physiol C Toxicol Pharmacol. 178, 45-50 (2015).
  27. Le Dantec, C., Duguet, J. P., Montiel, A., Dumoutier, N., Dubrou, S., Vincent, V. Chlorine disinfection of atypical mycobacteria isolated from a water distribution system. Appl Environ Microbiol. 68 (3), 1025-1032 (2002).
  28. Goto, K., Hayashimoto, N., Ishida, T., Takakura, A., Kagiyama, N. First trial in the developmental phase of the "performance evaluation program" based on the ICLAS animal quality network program: self-assessment of microbiological monitoring methods using test samples supplied by ICLAS. Exp Anim. 58 (1), 47-52 (2009).
  29. Nogueira, C. L., et al. Mycobacterium saopaulense sp. nov., a rapidly growing mycobacterium closely related to members of the Mycobacterium chelonae--Mycobacterium abscessus group. Int J Syst Evol Microbiol. 65 (12), 4403-4409 (2015).
  30. Massa, S., Armuzzi, R., Tosques, M., Canganella, F., Trovatelli, L. D. Note: susceptibility to chlorine of Aeromonas hydrophila strains. J Appl Microbiol. 86 (1), 168-173 (1999).
  31. Martins, M. L., Watral, V., Rodrigues-Soares, J. P., Kent, M. L. A method for collecting eggs of Pseudocapillaria tomentosa (Nematoda: Capillariidae) from zebrafish Danio rerio and efficacy of heat and chlorine for killing the nematode's eggs. J Fish Dis. 40 (2), 169-182 (2017).
  32. Maley, D., Laird, A. S., Rinkwitz, S., Becker, T. S. A simple and efficient protocol for the treatment of zebrafish colonies infected with parasitic nematodes. Zebrafish. 10 (3), 447-450 (2013).
  33. Samaee, S. M. Experimental Assessment of the Efficacy of Five Veterinary Broad-Spectrum Anthelmintics to Control the Intestinal Capillariasis in Zebrafish (Danio rerio). Zebrafish. 12 (3), 255-267 (2015).
  34. Collymore, C., et al. Tolerance and Efficacy of Emamectin Benzoate and Ivermectin for the Treatment of Pseudocapillaria tomentosa in Laboratory Zebrafish (Danio rerio). Zebrafish. 11 (5), 490-497 (2014).
  35. Chang, C. T., Whipps, C. M. Activity of Antibiotics against Mycobacterium Species Commonly Found in Laboratory Zebrafish. Journal of Aquatic Animal Health. 27 (2), 88-95 (2015).
  36. Chang, C. T., Doerr, K. M., Whipps, C. M. Antibiotic treatment of zebrafish mycobacteriosis: tolerance and efficacy of treatments with tigecycline and clarithromycin. J Fish Dis. , (2017).
  37. Peterson, T. S., Ferguson, J. A., Watral, V. G., Mutoji, K. N., Ennis, D. G., Kent, M. L. Paramecium caudatum enhances transmission and infectivity of Mycobacterium marinum and M. chelonae in zebrafish Danio rerio. Dis Aquat Organ. 106 (3), 229-239 (2013).
  38. Watts, S. A., Lawrence, C., Powell, M., D'Abramo, L. R. The Vital Relationship Between Nutrition and Health in Zebrafish. Zebrafish. 13, Suppl 1. 72-76 (2016).

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Zebra Bal Sa l k zlemeSentinel Tank KurulumuPCR Tespitiamur AnaliziMycobacterium TespitiKarantina Biyog venli iBal k Patojen S rveyans
Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp. ve Pseudocapillaria tomentosa Zebra balığı sistemlerinde çevre tarama
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.