Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Farelerde Multipl Skleroz EAE Modeli Optik Nörit ve Beyin Enflamasyon Biyoparlaklık ve Yakın-Kızılötesi Görüntüleme

9K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/55321

⸱

1 Mart 2017

 , 
1Institute of Clinical Pharmacology, University Hospital Frankfurt

Bu makalede

Özet

Biz, in vivo canlı biyolüminesans ve yakın kızılötesi SJL / J farelerinde multipl skleroz için deneysel otoimmün ensefalomyelit (EAE) modelinde optik nevrit ve ensefalit görüntüleme tekniğini göstermektedir.

Özet

SJL / J farelerde deneysel otoimmün ensefalomyelit (EAE) tekrarlayan-düzelen multipl skleroz (RRMS) için bir modeldir. fonksiyon kayıpları tarif Klinik EAE puanları omurilik bağışıklık aracılıklı iltihaplanma temel okumalar vardır. Ancak, puanları ve vücut ağırlığı, beyin iltihabı ve optik nörit in vivo değerlendirilmesi için izin vermez. İkincisi yaklaşık 2/3 MS hastalarının erken ve sık bulgusudur. Burada, bir in vivo görüntüleme sistemi kullanılarak canlı farelerde biyolüminesans ve EAE optik nörit uyarılmış değerlendirmek için yakın kızıl ötesi canlı görüntüleme, beyin iltihabı ve kan-beyin bariyeri (KBB) bozulması için yöntemler göstermektedir. oksidazlar ile aktive olan bir biyolüminesens alt tabaka öncelikle optik nörit gösterdi. Sinyal özgü ve klinik skorları paralel ilaç etkileri ve hastalık süresi derslerin görselleştirme, izin verdi. vasculatur içinde kalmıştır pegile floresan nanopartiküllerUzun bir süre için, e KBB devamlılığını değerlendirmek için kullanıldı. Yakın-kızılötesi görüntüleme hastalığının zirvesinde BBB sızıntısı tespit edildi. Sinyal göz çevresindeki en güçlü oldu. Matris metaloproteinazların için yakın kızılötesi alt-tabaka EAE uyarılmış iltihabı değerlendirmek için kullanıldı. Otomatik floresans ölçümü için spektral Karışmama gerektiren sinyaline müdahale. Genel olarak, biyoparlaklık görüntüleme EAE ilişkili optik nevrit ve ilaç etkilerini değerlendirmek için güvenilir bir yöntem olduğunu ve sinyal özgüllük, sağlamlık, ölçme kolaylığı ve maliyet açısından yakın kızılötesi tekniklerden üstündü.

Giriş

Multipl skleroz, beyin ve omurilikteki miyelin kılıfının otoimmün aracılı saldırısı ve yıkımı sonucu oluşur1. Kadınlarda yılda 100.000 kişi başına yaklaşık 3.6 vaka ve erkeklerde yaklaşık 2.0 vaka insidansı ile MS, travmatik yaralanmalardan sonra genç erişkinlerde nörolojik engelliliğin ikinci en yaygın nedenidir2,3. Hastalık patolojisine genetik ve çevresel faktörler katkıda bulunur4 ancak hala tam olarak anlaşılamamıştır. Otoreaktif T lenfositleri merkezi sinir sistemine girer ve beynin, omuriliğin ve optik sinirin beyaz cevherinde fokal infiltrasyonlara neden olan inflamatuar bir kaskadı tetikler. Çoğu durumda, bu sızıntılar başlangıçta geri dönüşümlüdür, ancak kalıcılık nüks sayısı ile artar. Hastalığın patolojisini incelemek için bir dizi kemirgen modeli geliştirilmiştir. SJL/J farelerinde nükseden-düzelen EAE ve C57BL6 farelerde birincil-progresif EAE en popüler modellerdir.

Motor fonksiyon eksikliklerinin derecesini ve vücut ağırlığını tanımlayan klinik EAE skorları, EAE şiddetini değerlendirmek için altın standartlardır. Bu klinik belirtiler, omurilikteki immün hücre infiltrasyonu ve miyelin yıkımının derecesi ile uyumludur ve insanlarda ilaç tedavisi etkinliğini orta derecede tahmin eder5. Bununla birlikte, bu işaretler esas olarak omurilikteki ventral lif yollarının tahribatını yansıtır. Şu anda, canlı farelerde in vivo beyin infiltrasyonu ve optik nöriti değerlendirmek için kolay, invaziv olmayan, güvenilir ve tekrarlanabilir bir yöntem yoktur.

in vivo görüntüleme, Russel ve Burch'un (1959) hayvan deneylerinin Ryerleştirmesi, Rindüksiyonu ve Rarıtması olduğunu iddia eden 3 "R" ilkesiyle uyumludur6, çünkü görüntüleme bir hayvanın okumalarını birkaç zaman noktasında artırır ve toplam sayıların azaltılmasına izin verir. Şu anda, inflamasyon veya miyelin durumu esas olarak immünohistokimya, FACS analizi veya farklı moleküler biyolojik yöntemler yoluyla ex vivo olarak değerlendirilmektedir 7, tümü belirli zaman noktalarında ötenazi fareleri gerektirir.

Deri, eklemler ve vasküler sistemdeki iltihabı değerlendirmek için bir dizi in vivo görüntüleme sistemi probu geliştirilmiştir. Teknikler, miyeloperoksidaz (MPO), matris metaloproteinazlar (MMP'ler<), sup class='xref'>8 ve katepsins9 veya siklooksijenaz2 dahil olmak üzere doku peroksidazları tarafından biyolüminesan veya yakın kızılötesi floresan substratların aktivasyonuna dayanır. Bu problar esas olarak artrit veya ateroskleroz modellerinde doğrulanmıştır9,10. EAE11'in floresan moleküler tomografik görüntülemesi için katepsine duyarlı bir prob da kullanılmıştır. MMP'ler, özellikle MMP2 ve MMP9, EAE'de proteaz aracılı BBB bozulmasına katkıda bulunur ve bağışıklık hücresi infiltrasyonu bölgelerinde yukarı regüle edilir12, bu probların EAE görüntüleme için yararlı olabileceğini düşündürmektedir. Aynısı peroksidaz veya katepsin bazlı problar için de geçerlidir. Teknik olarak, beyin veya omurilikteki iltihabın görüntülenmesi önemli ölçüde daha zordur çünkü kafatası veya omurga biyolüminesan ve yakın kızılötesi sinyalleri emer.

Enflamasyon göstergelerine ek olarak, özellikle miyeline bağlanan ve miyelinasyon13'ün miktar tayinine izin verebilecek floresan kimyasallar tanımlanmıştır. Yakın kızılötesi bir floresan probu olan 3,3'-dietiltiyatrikarbosiyanin iyodürün (DBT), miyelinli liflere spesifik olarak bağlandığı bulundu ve primer miyelinasyon kusurlarının fare modellerinde ve cuprizone ile uyarılmış demiyelinizasyon14. EAE'de, miyelin liflerinin iltihaplanmasını yansıtan DBT sinyali oldukça artmıştır5.

EAE ve MS'nin ek bir ayırt edici özelliği, vasküler geçirgenliğin artmasına ve kan hücrelerinin, hücre dışı sıvının ve makromoleküllerin CNS parankimine ekstravazasyonuna neden olan BBB parçalanmasıdır. Bu, ödem, iltihaplanma, oligodendrosit hasarına ve sonunda demiyelinizasyon15,<sup class='xref'>16'ya yol açabilir. Bu nedenle, normalde kandan dokuya çok yavaş dağılan florokrom etiketli sığır serum albümini5 gibi floresan problar kullanılarak BBB sızıntısının görselleştirilmesi, EAE'yi değerlendirmek için yararlı olabilir.

Bu çalışmada, EAE'deki farklı probların kullanışlılığını değerlendirdik ve en güvenilir ve sağlam biyolüminesan tekniğinin prosedürünü gösterdik. Ek olarak, MMP aktivitesi ve BBB bütünlüğü için yakın kızılötesi probların artılarını ve eksilerini tartışıyoruz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

SJL 1. EAE İndüksiyon / J Fareler

  1. fareler
    1. 11 haftalık dişi SJL / J fareler kullanın ve onları yaklaşık 7 gün boyunca deneysel odasına alıştırmak için izin verir. Grup başına n = 10 fare kullanın.
    2. ilaç etkilerinin değerlendirilmesi için, sürekli olarak içme suyu yoluyla ya da 3 ya da 5 gün Aşıdan sonra (n = 10 grup başına) başlangıç ​​gıda pelet yoluyla kontrol grubunda ilaç ve plasebo yönetmek. Hastalığın zirve sırasında, süt ya da% 3 şekerli su ile ıslatılmış mısır gevreği ile ilaç ya da plasebo yönetmek.
  2. Aşılama malzemesi
    1. Tam Freund katkı maddesi (CFA, ısı ile öldürülmüş Mycobacterium tuberculosis H37 Ra) ve 2 şişeler (5 ug her biri) ile bir emülsiyon içinde bir EAE indüksiyon kiti antijenini içeren (proteolipid protein peptidi, PLP139-151, 1 mg / ml emülsiyon) kullanarak liyofilize boğmaca toksin (PTX).
    2. 1x Fosfat tamponlu tuzlu su içinde PTX (2 ug / ml) (PBS içinde çözülür, yani, </ Em>), aynı bir pipet ucu ile kaldırma, iyice karıştırın ve 50 ml bir tüp içinde 1 mL PBS ile eklemek için, her PTX tüpüne PBS 1.5 mL eklemek; iyice karıştırın.
  3. aşılama
    1. kuyruk dibinde, 2 kısım halinde, her 100 uL, her iki PLP / CFA deri altına enjekte edilir. Üst sırt ya da boyun deride herhangi bir immün reaksiyonlar baş ve omurilik görüntüleme rahatsız olacaktır, çünkü boyun arkasına enjekte etmeyin.
    2. aşılamadan sonra 2 saat ve 24 saat sonra ikinci - iki kez, fare başına intraperitonal PTX (ip), 100 uL, önce, 1 enjekte edilir.
    3. kontrol fareleri için, PLP olmadan PLP olmadan CFA (100 uL 2 porsiyon) artı PTX enjekte edilir.
  4. Fare aşılama sonrası işleme
    1. farelere günde 7 her geçen gün yukarı tartılır ve daha sonra onları her gün tartın.
      NOT: Fareler yaklaşık 1 kaybetmek - EAE sırasında vücut ağırlığının 2 g. düşüş EAE başlangıcına işaret.
    2. gün 7 anlaşmanın günlük klinik semptomları değerlendirmekmotor fonksiyonlarda belirgin bir değişiklik; 0.5 puan: Standart skorlama sistemlerine ing (yani 0 Skor kuyruk distal felç; 1 puan: tam kuyruk paralizi; 1,5 puan: Bir veya her iki arka bacaklarda hafif parezi; 2 puan: arka ayakları şiddetli parezi; skoru 2.5: bir arka bacak tam paralizi; skoru 3: Her iki arka ayakları tam felç, 3.5 puan. arka ayakları ve bir ön bacak parezi tam felç 3.5 veya daha yüksek puanları ile fareler Euthanize > 12 saat.
  5. EAE ders ve görüntüleme zamanı
    1. aşılamadan sonra 12 - fareler günde 10 civarında oluşacak puanları> 1, ulaştığınızda, hastalığın başlangıcında ilk görüntüleme gerçekleştirmek.
    2. 3 gün - ilk belirtileri gelişebilir sonra 1 ya da 2 gün ulaşılacaktır ve 1 sürecek zirve, ikinci görüntüleme gerçekleştirmek.
      NOT: Daha sonra, fareler tamamen 7 ila 10 gün içinde iyileşir. aralarda görüntüleme hala vasküler sızıntıları gösterebilirancak inflamasyon göstergeleri negatif olmalıdır.

2. Bioluminescent ve Optik Nörit ve Beyin Enflamasyon Yakın kızılötesi görüntüleme

  1. Görüntüleme sisteminin Kur
    1. Biyolüminesans ve yakın kızılötesi sinyallerin analizi için izin veren herhangi bir ekipman ile in vivo görüntüleme gerçekleştirin.
    2. Tüm görüntüleme işlemleri sırasında% 2.5 izofluran anestezisi - 2 altında fareler tutun.
    3. Pozisyon bir veya orta gaz tedarikini kullanarak aygıtında yanyana iki fare. merkezde üst omurga yerleştirin.
    4. ilaç etkilerinin değerlendirilmesi çiftleri karşılaştırmak için, aynı anda iki fare, grup başına birini kullanın. Bu bio-ışıldar görüntüleme için önemlidir.
    5. siyah bezle bağışıklama siteyi kalkan ve fare / farelerin doğru konumlandırma değerlendirmek için bir fotoğraf ve temel görüntü almak. Tüm görüntüler için kameraya 6.5 cm mesafe ile B-odak kullanın.
  2. Enjeksiyon ve biyolojik olarak ışık veren inflamasyon prob görüntüleme
    1. In vivo görüntüleme sistemi ayarları kullanın: 8 binning Epi-BLI, Em açık filtre, Ex filtre bloğu, fStop 1, B = 6.5 cm, reklam maruz kalma 120 s odak; temel bir görüntü çekmek.
    2. Hazır kullanımlı kemilüminesan bir reaktif (40 mg / ml), 100 uL ip enjekte edilir. şırınga doldurmadan önce iyice karıştırın.
    3. biyolüminesans görüntüleri 5, 10, ve enjeksiyon sonrası 15 dakika yakalayın. biyolüminesans zirve zaman ders hayvanlar arasında farklılık gösterir.
      NOT: pik 5 oluşacak - enjeksiyondan sonra 10 dakika; 15 dakika bir düşüş başka görüntüler gerekli olduğunu göstermektedir. nedeniyle farklı zaman kursları küçük önyargıları ortadan kaldırmak için kontrol ve tedavi grupları fare çiftleri kullanınız.
    4. deney ile ilgili açıklamalarda doldurun. otomatik olarak açılır bir iletişim kutusu gözlemlemek; Böyle fare suşu, cinsiyet, zaman noktasında, sonda enjeksiyon, grubun, vb gibi bilgileri içerir. Dosyaları tüm o kaydetne klasör; Onlar zaman etiketleri ve tüm açıklamaları olacaktır.
  3. BBB bütünlüğü için yakın kızılötesi floresan nanopartiküller Enjeksiyon ve görüntüleme
    1. B-odak (6.5 cm mesafe) yakın-kızılötesi Epifloresans görüntüleme kullanın. pegile floresan nanopartiküllerin uyarma / emisyon maxima 675/690 nm. Ex640 / Em700 ve Ex675 / Em720 farklı dalga boylarında, iki görüntü yakalamak; 8 binning 2 s pozlama, kullanabilir ve fStop 2. bir temel görüntü çekin.
    2. kuyruk damar yoluyla pegile floresan kızılötesi nanopartiküllerin 70 mcL iv enjekte edilir ve fareler 3 saat ve üzeri ayarları kullanarak enjeksiyondan sonra 24 saat düşünün. şırınga doldurmadan önce çözüm iyice karıştırın.
    3. sinyalin özelliğini değerlendirmek için gerekli olacak kontrol farelerinde,% 0.9 sodyum klorür enjekte edilir.
  4. Enjeksiyon ve MMP aktivitesi için yakın kızılötesi flüoresan probun görüntüleme
    1. Tıraş veya baş atmaktadır ve uBazal görüntüsünü almadan önce dikkatli bir gün pper omurga bölgesi. Cilt yaralı olmamalıdır.
    2. B-odak (6.5 cm mesafe) yakın-kızılötesi Epifloresans görüntüleme kullanın. MMP aktive edilebilir prob uyarım / emisyon maksimum 680/700 nm. Ex640 / Em700 ve Ex675 / Em720 farklı dalga boylarında, iki görüntü yakalamak; 8 kutulamanın 1-s maruz kullanımı ve fStop 2. Bir taban çizgisi görüntüsü al.
    3. 10 fareler için yeterli olacak şekilde hazır kullanım çözeltisi (1 x PBS içinde 20 nmol / 1.5 mL) içinde 1.5 mL bir tüpe 200 uL 1x PBS ilave et; şırınga doldurmadan önce iyice karıştırın.
      NOT: sağlanan hacim bazı ses şırınga doldurma ve enjeksiyon sırasında kaybolur dikkate almaz.
    4. görüntüleme önce kuyruk damar yoluyla 24 saat sonda iv 150 mcL enjekte edilir. sinyalin özelliğini değerlendirmek için tek kontrol hayvanlarında PBS enjekte edilir.
    5. enjeksiyondan 24 saat sonra, en az iki dalga boylarında, Ex640 / Em700 ve Ör 675 / E'de Epi-FL görüntüleri çekmekM720, ayarları (8 ve Fstop 2 binning 1-s pozlama odak B) Yukarıda açıklanan.
      NOT: İki dalga boyu kullanımı belirsiz sinyal çıkarılarak spektral unmixing sağlar.

3. Görüntü Analizi

  1. Biyoparlaklık analizi (BLI)
    1. açmak için yazılım çift tıklatın.
    2. Üst menü çubuğunda, deney klasörün dizine gidin ve onu seçin, dosya tarayıcı ikonuna tıklayın; Bu tablodaki klasördeki tüm dosyaları açacak.
    3. deney ile ilgili açıklamalar gösteren sütunları yapılandırın.
    4. kalite kontrolü için, EAE sinyallerinin özgüllüğünü kontrol etmek EAE ve / veya naif fare semptomu olmayan bir yanıtsızlık fare dosyasına çift tıklayın.
      NOT: naif farelerde ve non-cevap farelerde az sinyal sinyal olmalıdır.
      1. pro enjeksiyonundan önce bazal görüntüyü kontrolsinyalin özgüllük daha kontrol olarak her fare için olacak; negatif olmalıdır.
    5. Bir görüntüyü seçmek için, ilk EAE fare ilk dosyasına çift tıklayın ve biyolüminesens yoğunluğunu (LUT çubuğu aralık) ve yerelleştirme kontrol edin. Tüm görüntüleri teker teker kontrol edin. Her fare için en düşük yoğunlukla dosyayı kapatın (yani, her fare için 2 out of 3 görüntüleri tutmak).
    6. Görüntü ayarı ve ihracat
      1. sayısal olarak ilk dosyasını çift tıklatın. Yeni bir penceresi açılır gözlemleyin. "Seçenekleri" (üst menü) altında, her görüntüde görüntülemek için etiketleri özelleştirebilirsiniz.
      2. Doğru aracı paletinde, gidin "görüntü ayarı." Varsayılan olarak, minimum ve maksimum şiddetleri "auto" olarak ayarlanır ve gökkuşağı Pseudocolor görüntülenir. Gerekirse ayarları değiştirmek için "el" i seçin.
        NOT: Örneğin, tüm ihraç görüntüleri aynı LUT çubukları (aynı minima ve maxima) olabilir kolayca karşılaştırılabilir olması.asgari ve azami ayarlanması nicel sonuçlar üzerinde hiçbir etkisi yoktur.
      3. görüntü ihracat seçin png, dizin ve bir resim adını tıklayın
    7. İlgi Bölgeler miktarının belirlenmesi (YG)
      1. araç paletinde "ROI" aracı gidin. ROI yöntemi (daire, dikdörtgen, otomatik ya da serbest el) ve ROI sayısını seçin. ROI pencere görüntü penceresinde açılır gözlemleyin.
      2. Fareyi kullanarak, boyutunu ve konumunu ayarlamak. Otomatik ROI aracı kullanıldığı takdirde tüm görüntüler için aynı ROI eşikleri kullanın. YG boyutları ve konumları elle (örneğin, dairesel ROI) tanımlanmış olup olmadığını tüm görüntüler için aynı yerlerde kullanın.
      3. RO.I. yeni penceresi açılır gözlemleyin ölçmek "üzerine tıklayın. Sütunları özelleştir (örneğin, dosya adı, hayvan sayısı, grup, deney, alan, toplam sayım, ortalama sayısı, SD sayımı, min ve max sayar, alan, zaman nokta, sonda enjeksiyonu, vb) zamanı. özelleştirilmiş ayarları kaydedin. ne zaman yenidenady, bütün (Ctrl + A) seçin ve kopyalayıp bir elektronik tabloya tablo yapıştırın.
      4. yerinde ROI ile png görüntü olarak dışa aktarın. Kaydet ve görüntü dosyasını kapatın.
    8. sayısal gereken tüm resim dosyaları için - prosedürü tekrarlayın (3.1.7 3.1.6 adımlar). elektronik tabloya tüm ROI quantifications kopyalayın.
      NOT: Burada, sonuçları vb grubunda, zaman noktasında, sıralanabilir ve istatistiksel analiz edildi. istatistiksel analizler için ROI biyolüminesens sinyallerinin toplam sayılarını kullanın.
  2. Floresan nanopartiküllerin Near-Infrared (NIR) analizi
    1. Yazılımda kontrolleri kullanarak, görüntünün eşiğini ayarlayın.
      NOT: Bu nicel sonuç üzerinde herhangi bir etkisi yoktur.
    2. Görme sinyalin özelliğini değerlendirmek için Ex / Em 675/720 ve Ex / Em 640/700 çekilen görüntüleri karşılaştırın.
    3. kantitatif analiz için Ex / Em 675/720 yakalanan görüntüleri kullanın (uyarma maksimum: 680 nm). Otomatik ROI aracı kullanılabileceği için İB'leri, tanımlayın. Otomatik ROI eşiğini ayarlamak ve tüm görüntüler için kullanabilirsiniz. ROI toplam radyant verimlilik ölçmek (adım 3.1).
  3. Proteaz duyarlı prob Near-Infrared (NIR) analizi
    1. Yazılım denetimlerini kullanma, görüntünün eşiğini ayarlayın.
      NOT: Bu nicel sonuç üzerinde herhangi bir etkisi yoktur. otomatik floresans spektral Karışmama gerçekleştirin. Karışmama aracı Image Yaşayan uygulanmaktadır. Otomatik Karışmama otomatik floresan görüntü olarak özel ve 675/720 Ex / Em 640/700 kullanır.
    2. karışmamış görüntü seçin ve yukarıda açıklandığı gibi, ROI tanımlar. Nicel ve istatistiksel analizler için ROI toplam radyant verimlilik kullanın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Optik nörit Bioluminescence Zaman Kursu

inflamasyon prob biyoparlaklık sinyal göz çevresindeki en güçlü ve optik nevrit EAE farelerde sadece oluştu. Bir sinyal olmayan EAE fareler ne de inflamasyon probu ile enjekte olmayan farelerde ne oluştu. fareler kurtarıldı zaman sinyal kayboldu. Bu nedenle, bir sinyal, optik nevrit özgüdür, ve sinyal tepe Klinik EAE puanları tepe paraleldir. Şekil 1 EAE...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Mevcut Video SJL / J farelerinde EAE in vivo görüntüleme biyolüminesans ve yakın kızılötesi floresan teknikleri göstermektedir. Biz bir enflamasyon duyarlı prob kullanılarak biyolüminesans görüntüleme esas optik nörit gösterir ve miktar EAE şiddetinin klinik değerlendirme ve ilaç etkileri ile uyumlu olduğunu göstermektedir. Sinyal omurga tarafından emilir Ancak, biyolüminesans görüntüleme yöntemi olasılıkla, EAE tezahürü 17 birincil site lomber spinal kord, iltihabı tespit etmek mümkün d...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.

Teşekkürler

Bu araştırma, Deutsche Forschungsgemeinschaft (CRC1039 A3) ve araştırma fonu programı Hessen, Translasyonel Tıp ve Farmakoloji TMP Araştırma Merkezi Devlet "Landesoffensive zur Entwicklung Wissenschaftlich-ökonomischer Exzellenz" (LOEWE) ve Else Kröner-Fresenius Vakfı tarafından desteklenen (EKFS), Araştırma Eğitim Grubu Translational Araştırma Yenilik - Pharma (AÇMA).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
AngioSpark-680Perkin Elmer, Inc., Waltham, ABDNEV10149Görüntüleme probu, pegile nanopartiküller, kan beyin bariyeri bütünlüğünün görüntülenmesi için yararlıdır
MMP-sense 680Perkin Elmer, Inc., Waltham, ABDNEV10126Görüntüleme probu, matris metaloproteinazlar tarafından aktive edilebilir, iltihabın görüntülenmesi için yararlıdır
XenoLight RediJect İnflamasyon ProbuPerkin Elmer, Inc., Waltham, ABD760535Oksidazlar tarafından aktive edilebilen, inflamasyonun görüntülenmesi için yararlı
olan görüntüleme probu PLP139-151 / CFA emülsiyonu  Hooke Labs, St Lawrence, MAEK-0123EAE indüksiyon kiti
Boğmaca ToksiniHooke Labs, St Lawrence, MAEK-0123EAE indüksiyon kiti
IVIS Lumina SpectrumPerkin Elmer, Inc., Waltham, ABDBiyolüminesans ve Kızılötesi Görüntüleme Sistemi
LivingImage 4.5 yazılımı Perkin Elmer, Inc., Waltham, ABDCLS136334IVIS analiz yazılımı
IsofluraneAbbott Labs, Illinois, ABD26675-46-7Anestezi

Kaynaklar

  1. Compston, A., Coles, A. Multiple sclerosis. Lancet. 372 (9648), 1502-1517 (2008).
  2. Dunn, J. Impact of mobility impairment on the burden of caregiving in individuals with multiple sclerosis. Expert Rev Pharmacoecon Outcomes Res. 10 (4), 433-440 (2010).
  3. Dutta, R., Trapp, B. D. Mechanisms of neuronal dysfunction and degeneration in multiple sclerosis. Prog Neurobiol. 93 (1), 1-12 (2011).
  4. Sawcer, S., et al. Genetic risk and a primary role for cell-mediated immune mechanisms in multiple sclerosis. Nature. 476 (7359), 214-219 (2011).
  5. Schmitz, K., et al. R-flurbiprofen attenuates experimental autoimmune encephalomyelitis in mice. EMBO Mol Med. 6 (11), 1398-1422 (2014).
  6. Balls, M. The origins and early days of the Three Rs concept. Altern Lab Anim. 37 (3), 255-265 (2009).
  7. Barthelmes, J., et al. Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues. J Vis Exp. (111), (2016).
  8. Leahy, A. A., et al. Analysis of the trajectory of osteoarthritis development in a mouse model by serial near-infrared fluorescence imaging of matrix metalloproteinase activities. Arthritis Rheumatol. 67 (2), 442-453 (2015).
  9. Scales, H. E., et al. Assessment of murine collagen-induced arthritis by longitudinal non-invasive duplexed molecular optical imaging. Rheumatology (Oxford). 55 (3), 564-572 (2016).
  10. Nahrendorf, M., et al. Dual channel optical tomographic imaging of leukocyte recruitment and protease activity in the healing myocardial infarct. Circ Res. 100 (8), 1218-1225 (2007).
  11. Eaton, V. L., et al. Optical tomographic imaging of near infrared imaging agents quantifies disease severity and immunomodulation of experimental autoimmune encephalomyelitis in vivo. J Neuroinflammation. 10, (2013).
  12. Kandagaddala, L. D., Kang, M. J., Chung, B. C., Patterson, T. A., Kwon, O. S. Expression and activation of matrix metalloproteinase-9 and NADPH oxidase in tissues and plasma of experimental autoimmune encephalomyelitis in mice. Exp Toxicol Pathol. 64 (1-2), 109-114 (2012).
  13. Wang, C., et al. In situ fluorescence imaging of myelination. J Histochem Cytochem. 58 (7), 611-621 (2010).
  14. Wang, C., et al. Longitudinal near-infrared imaging of myelination. J Neurosci. 31 (7), 2382-2390 (2011).
  15. Engelhardt, B. Molecular mechanisms involved in T cell migration across the blood-brain barrier. J Neural Transm. 113 (4), 477-485 (2006).
  16. Badawi, A. H., et al. Suppression of EAE and prevention of blood-brain barrier breakdown after vaccination with novel bifunctional peptide inhibitor. Neuropharmacology. 62 (4), 1874-1881 (2012).
  17. Simmons, S. B., Pierson, E. R., Lee, S. Y., Goverman, J. M. Modeling the heterogeneity of multiple sclerosis in animals. Trends in immunology. 34 (8), 410-422 (2013).
  18. Lin, T. H., et al. Diffusion fMRI detects white-matter dysfunction in mice with acute optic neuritis. Neurobiol Dis. 67, 1-8 (2014).
  19. Knier, B., et al. Neutralizing IL-17 protects the optic nerve from autoimmune pathology and prevents retinal nerve fiber layer atrophy during experimental autoimmune encephalomyelitis. J Autoimmun. 56, 34-44 (2015).
  20. Schellenberg, A. E., Buist, R., Yong, V. W., Del Bigio, M. R., Peeling, J. Magnetic resonance imaging of blood-spinal cord barrier disruption in mice with experimental autoimmune encephalomyelitis. Magn Reson Med. 58 (2), 298-305 (2007).
  21. Mori, Y., et al. Early pathological alterations of lower lumbar cords detected by ultrahigh-field MRI in a mouse multiple sclerosis model. Int Immunol. 26 (2), 93-101 (2014).
  22. Bittner, S., et al. Endothelial TWIK-related potassium channel-1 (TREK1) regulates immune-cell trafficking into the CNS. Nat Med. 19 (9), 1161-1165 (2013).
  23. Theien, B. E., et al. Differential effects of treatment with a small-molecule VLA-4 antagonist before and after onset of relapsing EAE. Blood. 102 (13), 4464-4471 (2003).
  24. Hawkins, B. T., Davis, T. P. The blood-brain barrier/neurovascular unit in health and disease. Pharmacol Rev. 57 (2), 173-185 (2005).
  25. Coisne, C., Mao, W., Engelhardt, B. Cutting edge: Natalizumab blocks adhesion but not initial contact of human T cells to the blood-brain barrier in vivo in an animal model of multiple sclerosis. J Immunol. 182 (10), 5909-5913 (2009).
  26. Andresen, V., et al. High-resolution intravital microscopy. PLoS One. 7 (12), e50915(2012).
  27. Bukilica, M., et al. Stress-induced suppression of experimental allergic encephalomyelitis in the rat. Int J Neurosci. 59 (1-3), 167-175 (1991).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Biyol minesans G r nt lemeMultipl Skleroz FareleriKan Beyin BariyeriIn Vivo G r nt lemeKlinik EAE Skorlarmm n H cre nfiltrasyonu
Farelerde Multipl Skleroz EAE Modeli Optik Nörit ve Beyin Enflamasyon Biyoparlaklık ve Yakın-Kızılötesi Görüntüleme
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.