Yöntem makalesi

Peptid, bir monoklonal antikor tarafından tanınan lineer B-hücresi epitopunun belirlenmesi: Tarama destekli

9.1K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/55417

⸱

24 Mart 2017

 , 
1Institute of Cellular and Organismic Biology, Academia Sinica

Bu makalede

Özet

Burada yazarlar, saflaştırılmış bir monoklonal antikor ve nokta-leke hibridizasyonulama yoluyla peptit taraması kullanarak doğrusal bir antijenik epitop tanımlamak için basit ve verimli bir protokol sunmaktadır. Tanımlanan epitop daha sonra terapötik ve tanısal uygulamalarda kullanılabilir.

Özet

bağışıklık sisteminin bir antijenik epitopa tanımlanması aşılar ve peptid ilaçların geliştirilmesi kolaylaştırabilir nötralize edici antikorların bir koruyucu mekanizma anlaşılabilmiştir. Peptid tarama delikanlı monoklonal bir antikor (mAb) tarafından tanınan lineer epitop harita basit ve etkili bir yöntemdir. Burada, yazarlar nötrleştirici mAb kullanılarak sinir nekroz virüsü kaplama proteininin antigenik tanınması için seri kesik rekombinant proteinleri, sentetik peptid tasarımı ve nokta-benek hibridizasyonu ile ilgili bir epitop belirlenmesi yöntemi sunulmaktadır. Bu teknik, bir poliviniliden florür (PVDF) membran üzerinde sentetik peptidler ve mAb'lerin nokta benek hibridizasyonu dayanır. RG-M56 mAb tarafından tanınan bir viral kat proteininin en az antijenik bölge 6-mer peptit epitopu üzerine peptit haritalama kesilmiş adım adım daraltıldığı edilebilir. Buna ek olarak, alanin tarama mutajenezi ve tortu, altikamesi veya epitopu oluşturan her bir amino asit tortusu bağlanması önem karakterize etmek için gerçekleştirilebilir. epitop sitesini kuşatan kalıntıları peptid konformasyon düzenlenmesinde kritik roller oynamaya bulundu. tanımlanan epitop peptit bir X-ışını kırılım çalışmasının ve fonksiyonel rekabet veya tedavi için epitopunun peptid-antikor komplekslerinin kristalleri meydana getirmek üzere kullanılabilir.

Giriş

Bağışıklık sisteminde, V, D ve J segmentlerinin rekombinasyon antikorları patojenik enfeksiyon ana korumak için çeşitli antijenlere bağlanması için tamamlayıcılığı belirleyici bölgelerinde (CDR'ler) muazzam varyasyonlarını oluşturmak için sağlar. antijenlere karşı antikorların nötralize savunma antikorlarının CDR ve antijenlerin epitoplarına arasındaki mekansal tamamlayıcılık bağlıdır. Bu nedenle, bu moleküler etkileşim bir anlayış profilaktik aşı tasarımı ve terapötik peptid ilaç geliştirme yardımcı olacaktır. Bununla birlikte, bu nötrleştirme etkileşimi, tek bir antijen birden fazla antijenik alan ile ve dolayısıyla epitop belirleme süreci daha karmaşık hale antikor çoklu CDR'ler, hem de etkilenebilir. Neyse ki, miyelom hücreleri ile, bireysel antikor üreten hücrelerin sigortalar hibridom teknolojisinin gelişmesi, sn hücrelerin sürekli bölünmesi toplu sağlarBir monoklonal antikor (mAb) olarak bilinen retenin belirli bir antikor, 1. Hibridoma hücreleri, spesifik antijenin tek bir antijenik alana bağlanabilir, bu, saf, yüksek afiniteli mAbs üretir. Kurulan antijen-antikor, peptit taraması dahil olmak üzere çeşitli yaklaşımlar arasında bir ilişki ile, karşılık gelen mAb kullanan bir antijenin epitopunun belirlenmesi için kullanılabilir. sentetik peptid teknolojisindeki son gelişmeler peptid tarama tekniği daha erişilebilir ve gerçekleştirmek için daha uygun hale getirmiştir. Kısaca, üst üste binen sentetik peptidlere bir dizi, bir hedef bir antijen dizisine göre üretilir mAb hibridizasyona katı destekli zara ilişkilidir. Peptid tarama bölgesinin antikor bağlanmasını eşlemek için kolay bir yol sunar, ancak, aynı zamanda epitop peptit her AA tortu antikorun CDR arasındaki bağlanma etkileşimini değerlendirmek için tortu, tarama veya ikame arası amino asit (aa) mutagenez kolaylaştırmaktadır.

Burada, bu çalışmada, bir nötralize edici mAb 2, 3, 4 ile san bir orfoz sinir nekroz virüsü (YGNNV) kaplama proteininin lineer epitopa etkin tanımlanması için bir protokol açıklamaktadır. Protokol mAb, inşaat ve seri kesik rekombinant proteinlerin ekspresyonu sentetik üstüste binen peptit tasarım, nokta-benek hibridizasyonu, alanin tarama ve ikame mutagenezi bulunmaktadır. Peptit sentezi yüksek maliyeti göz önüne alındığında, seri arzu edilen bir hedef proteini rekombinant proteinleri kesilmesi aşamasının tadil edilmiş, ve sentetik peptid dizisi nokta-blot analizi gerçekleştirilmiştir önce antijenik bölge yaklaşık 100 ila 200 aa artıkları kadar daraltılmıştır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Monoklonal antikor hazırlanması 1.

  1. Kültür,% 5 CO2 ilave ile 37 ° C 'de 175T şişelerinde serum içermeyen ortam içinde RG-M56 tek klonlu fare hibridoma hücreleri, 2. orta renk inkübasyon beş gün sonra sarı döndüğünde süpernatant toplayın.
    Not: hibridoma hücreleri cenin sığır serumu antikor kirlenmesini önlemek için, serum barındırmayan ortam içinde kültürlenmiştir.
  2. 4 ° C'de 30 dakika boyunca 4500 x g'de santrifüj süpernatan ve hücre yıkıntıları pelet haline atın.
  3. 5 ml kolonuna (% 50 bulamaç olarak verilir), protein G agaroz 2 ml ilave edilir ve buz soğukluğunda PBS 10 reçine hacim (10 mL) ile dengeye getirin.
  4. Antikor süpernatant yükleyin 200 mL kolonuna (adım 1.2) ve geçişini atın.
  5. yıkamak için sütuna buz soğukluğunda 10 ml PBS ilave edin. İki kez tekrarlayın.
  6. protein G-bağlı antikor elüt edilmesi için sütun 50 mM glisin, pH 2.7, 10 ml ekleyin. ColCollect 10x nötralizasyon tampon 100 ul (1 M Tris, 1.5 M NaCl ve 1 mM EDTA, pH 8.0) ihtiva eden bir mikrosantrifüj tüpü içinde, 900 uL fraksiyonlar.
  7. -20 ° C'de% 0.03 NaN 3 ile% 50 gliserol saflaştırılmış antikor saklayın.

2. İnşaat ve seri olarak Kesik Rekombinant Proteinlerin İfadesi

  1. (10x Pfu tampon maddesi 5 uL, her dNTP 0.2 mM, 0.2 uM ileri primer 3, 0.2 uM ters primer 3, 2 mM MgSO 4, pET20b-1A59 3 plasmid DNA 1 ng ve 2.5 U: PCR reaksiyon karışımı hazırlandı ünite) Pfu DNA polimeraz, 50 ul'lik nihai bir hacme kadar O GKD 2 ekleyin.
    1. Otomatik termal döngü çalıştırmak örnekler aşağıdaki parametreler kullanılarak: Döngü 1 (5 dakika 94 ° C); döngüleri 2-36 (30 s için 94 ° C, 30 sn için 63 ° C ve 60 sn için 72 ° C); ve çevrim 37 (7 dakika süreyle 72 ºC).
  2. Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR), aşağıdaki kısıtlayıcı enzim sindirimi kolaylaştırmak için PCR saflaştırma kiti 5 kullanarak ürün ekstrakte edin.
  3. Nde I ve Xho I sınırlama enzimleri ile PCR amplifiye edilmiş DNA fragmanları sindirimi ve Nde I ve Xho I enzim ayrıldı pET-20b (+) vektörüne, bu DNA parçalarının her biri ligate. Escherichia coli DH-5α-kompetan hücreler 6 içine yapıları dönüştürmek.
    1. Sindirim tamponu sindirim karışım hazırlayın (20 mM Tris-asetat, 10 mM Mg (CH3COO) 2, 50 mM KCH 3 COO ve 1 mM DTT, pH 7.9) ile 1 PCR ile amplifiye DNA ya da PET-20b ug Nde I ve Xho I sınırlama (+) vektörü, DNA, ve 2 U 20 uL nihai hacim içinde enzim.
    2. yavaşça sindirim karışımı karıştırın ve hızlı bir şekilde aşağı doğru döndürün. sınırlama tam kesim oturup sağlamak için kuru bir banyo içinde, 2 saat boyunca 37 ° C de kuluçkaya bırakılıres.
    3. Aşağıdaki plazmid yapı kolaylaştırmak için PCR saflaştırma kiti 5 ile sınır enzimi ile sindirilmiş DNA fragmanları ekstrakte edin.
    4. Ligasyon tamponu bağlanma karışımının hazırlanması (66 mM Tris, 5 mM MgCl2, 1 mM ATP, ve 5 mM DTT, pH 7.5) önceden sindirilmiş, PCR ile amplifiye DNA 100 ng, predigested pET-20b, 10 ng (+) vektör DNA, 10 uL nihai hacim içinde, 5 U T4 DNA ligaz.
    5. yavaşça ligasyon karışımı karıştırın ve hızlı bir şekilde aşağı doğru döndürün. Bir su banyosu içinde 18 saat boyunca 16 ° C'de inkübe edin.
    6. DH-5α-kompetan hücreler 100 uL ligasyon numunelerinin 10 uL koyun ve 30 dakika boyunca buz üzerinde mikrosantrifüj tüpü yerleştirmeden önce yavaşça karıştırın. Isı şoku 7 ikna etmek 90 saniye süreyle 42 ºC kuru bir banyosunda ependorf tüp koyun. Hemen 2 dakika süreyle buz üzerine tüp aktarın.
    7. % 0.5 Bacto maya Extrac Luria-Bertani (LB) ortamı (% 1 Bacto tripton, 900 uL, eklemetüpe T ve% 0.5 NaCl, pH 7.0). 150 rpm'de 45 dakika boyunca çalkalama ile 37 ° C'de inkübe edin. 10 dakika süre ile 4,000 x g 'de santrifüj ile hücreler pelet ve süpernatant atılır.
    8. LB suyu 50 uL ile pelet yeniden süspanse edin ve 100 ug / ml ampisilin ihtiva eden, önceden-ısıtılmış LB plakaları üzerine her dönüşümü yayıldı. 16 saat boyunca 37 ° C'de inkübe edin.
    9. 200 uL ucunu kullanarak tek bir koloni Pick up ve gevşek kapatılmış 15 ml tüp içinde 100 ug / ml ampisilin içeren 3 ml LB suyu içine yerleştirin. 150 rpm'de 12 saat boyunca çalkalanarak 37 ° C'de inkübe edin.
    10. Her bir kültürden plazmid DNA 8 ekstrakte ve sırası 9 teyit etmek için T7 destekleyici ve T7 bitirme primerler kullanılarak, sekans.
  4. Sekans doğrulandıktan sonra, bu, pET-20b DNA, 10 ng (+) tarafımızdan, E. coli BL-21 (DE3) 'e suşa YGNNV kılıf proteini geni uzunlukları farklı olan plazmidler dönüşümüısı-şok yöntemi 7 ing. adımları izleyin 2.3.6-2.3.8 dönüşümü gerçekleştirmek için.
  5. Gevşek kapaklı 15 ml bir tüp içinde 100 ug / ml ampisilin ihtiva eden 3 ml LB suyu her bir transforme edilmiş E. coli BL-21, hücre tek bir koloni aktarın. 150 rpm çalkalanarak 37 ºC'de kültür inkübe edin.
  6. Kültür OD 600 yaklaşık 0.6 olduğu zaman 25 ° C, kültür soğutun ve yeniden birleştirici proteinin ifadesini uyarmak için 0.4 mM nihai bir konsantrasyona kadar IPTG ilave edin. 200 rpm çalkalanarak 25 ° C'de fazladan 4 saat süreyle kültür inkübe edin.
  7. mikrosantrifüj tüpü içine kültürün 1 ml'sinin aktarın. 1 dakika için 12,000 x g'de santrifüj ile hücreler pelet ve süpernatant atılır.
  8. Mikropipet ile pipetleme aşağı denatürasyon tampon maddesi 100 uL (8 M üre, 20 mM sodyum fosfat, 0.5 M NaCI, pH 7.4) içinde hücre pelletini. dinç vorteks ile karıştırın.
    NOT: Örnek solutions artık nokta blot hibridizasyon analizi için, yarı-saydam az yapışkan ve hazır olmalıdır.

Çakışan Peptitler 3. Tasarım ve Sentezi

  1. Tasarım ve her nokta lekeleme tarafından RG-M56 mAb epitop bölgesini daraltmak için YGNNV kat proteininin 195-338 aa bölgesinden 10 aa artıkları ile halefi ile örtüşen 3 seri 20-mer peptidler sentez.
  2. Tasarım ve sentez 3 üç 8-mer peptitler (202 195 VNVSVLCR, 197 VSVLCRWS 204 ve 199 VLCRWSVR 206) aşağıdaki sentetik peptid üzerine 6 aa artıkları bir örtüşme ile noktalama yöntemiyle 195-206 aa epitop bölgesini daraltmak için.
  3. Tasarım ve 3 7-mer sentez (196 NVSVLCR 202 ve 195 VNVSVLC 201), 6-mer (195 VNVSVL 200, 196 NVSVLC 201 ve 1En aza indirmek için komşu peptit üzerinde sırasıyla, 6, 5 üst üste binmekte ve 4 aa artıkları, 97 VSVLCR 202) ve 5-mer peptidleri (202 195 VNVSV 199, 196 NVSVL 200, 197 VSVLC 201 ve 198 SVLCR) noktalama yöntemiyle epitop bölgesi.

4. Nokta benek hibridizasyonu

  1. 10 mg / mL'lik nihai bir konsantrasyona kadar, dimetil sülfoksit (DMSO) içinde, her sentez peptidi çözülür.
    Not: sentetik peptidler değişik çözünürlüğe üstesinden gelmek için, tüm sentetik peptidler DMSO içinde çözündürülmelidir. DMSO tamamen hidrofobik ya da hidrofilik peptitleri çözündürmek için iyi bir çözücüdür.
  2. 2 dakika boyunca metanol ile poliviniliden florit (PVDF) membran bekletin.
    NOT: PVDF membran DMSO dayanıklı% 100 kadardır; diğerleri kadar olmayabilir.
  3. modifiye Towbin tamponu (25 mM Tris, 192 mM glisin ve% 0.1 SDS, pH 8.3) için, PVDF membranı ile dengeye2 dakika.
    Not:% 10-20 (h / h) metanol transfer sonuçlarını geliştirmek için modifiye Towbin tamponu ilave edilebilir.
  4. modifiye Towbin tamponu ile kromatografi bir parça kağıt durulayın. kromatografi kağıdı üzerine PVDF membran yerleştirin. modifiye Towbin tampon sonraki adıma geçmeden önce PVDF membran yüzeyinden kaybolana kadar bekleyin.
  5. 10 uL ucu ile membrana her peptid numunesi 2 ul ekle. 10 dakika süre ile kromatografi kağıdı üzerinde PVDF membran hava-kurutun. Çok fazla difüzyon önlemek için zar üzerine yavaş ve aşamalı olarak, her peptit örnek ekleyin.
  6. hafifçe çalkalanarak oda sıcaklığında 30 dakika boyunca% 5 yağsız süt ile TBST tamponu içinde membran (% 0.05 (h / h) Tween-20, 20 mM Tris, 150 mM NaCI, pH 7.4) ile bloke edin.
  7. zara% 5 yağsız süt ile TBST tamponu içinde 1.000: 1 oranında bir nihai seyreltme ile RG-M56 mAb ekleyin. hafifçe çalkalanarak 1 saat boyunca 37 ° C'de membran inkübe edin.
  8. bu nedenle antikorunu çıkarındökülmesinden. hafifçe çalkalanarak 5 dakika süreyle TBST tamponu içinde membran yıkayın. İki kez tekrarlayın.
  9. zara% 5 yağsız süt ile TBST tamponu içinde 5.000: 1 bir son seyreltide ikincil antikor (keçi anti-fare IgG, Fc, konjuge alkalin fosfataz) ekleyin. hafifçe çalkalanarak 1 saat boyunca 37 ° C'de membran inkübe edin.
  10. antikor çözüm atın. hafifçe çalkalanarak 5 dakika süreyle TBST tamponu içinde membran yıkayın. iki kez yıkama adımı yineleyin.
  11. karanlıkta 15 dakika için oda sıcaklığında BCIP / NBT substrat çözeltisi ile membran geliştirir. Sinyal göründüğünde GKD 2 O ile membran yıkayarak gelişmekte durdurun.
  12. membran Hava kurutun ve bir görüntü sistemi kullanılarak dot-blot görüntü yakalamak.
  13. Görüntü analiz yazılımı 3 kullanarak her nokta leke yoğunluğunu ölçmek.

5. Alanin Tarama ve Değişiklik

  1. Tasarım ve 3 alanin ve Methi sentezonine, ikame peptidler. VAVSVLCR 202, 195 VNASVLCR 202, 195 VNVAVLCR 202, 195 VNVSALCR 202, 195 VNVSVACR 202, 195 VNVSVLAR 202 8-mer peptidi 195 VNVSVLCR 202 alanine her AA artığı yerine sentez peptidleri 195 ANVSVLCR 202, 195, ve 195 VNVSVLCA 202 . SJNNV genotip epitop peptit 195 VNVSVMCR 202 oluşturmak için metionin aa kalıntısı lösin 200 değiştirin.
  2. alanin tarama ve ikame mutagenez nokta blotlama gerçekleştirmek için Bölüm 4 izleyin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bu deneyin amacı, mAb kullanılarak nokta blotlama yoluyla bir epitopu belirlemek için yapıldı. Hızlı ve verimli bir şekilde mAb tarafından algılanan antijenik bölge daraltmak için, C-terminali bir 6xHis füzyon etiketidir tam boyunda ve seri olarak kesildi YGNNV rekombinant kaplama proteinleri bir E. coli pET ifade sistemi 10 (Şekil 1 A) ile ilgili olarak ifade edildi. Elde edilen rekombinant proteinleri nokta benek hibridizasyonu için RG-...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu protokol, mAb tanınan lineer epitopunu belirlemek için hızlı ve basit bir teknik sunmaktadır. dikkate peptit sentezi ve sentez peptidlerin üretim verimliliği maliyeti alarak, virüs kaplama proteininin antijenik bölgenin peptit tarama analizinden önce seri kesik rekombinant proteinleri ifade azaltılmıştır. 10 ila 50 arasındaki moleküler ağırlıklara sahip bir araya getiren proteinler kDa kolaylıkla bu sistem ile ifade edilebilir Bu nedenle, güvenli ve etkili bir E.coli pET ifade sistemi, bu seri olarak kısaltı...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların bu raporla ilgili herhangi bir çıkar çatışması bulunmamaktadır.

Teşekkürler

Yazarlar, Academia Sinica Hücresel ve Organizma Biyolojisi Enstitüsü (ICOB) Çekirdek Tesisi'nden Bayan Ching-Chun Lin ve Bayan Diana Lin'e sırasıyla peptit sentezi ve DNA dizilimi konusundaki uzmanlıklarını sundukları için teşekkür eder. Bu çalışma Academia Sinica tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Hibrit-SFM ortamıGibco12045-076
Dulbeccos'un Fosfat Tamponlu Salin (PBS)Gibco21600-069
Pfu DNA Polimeraz Termo Bilimsel EP0502 Tamponlar dahil
T4 DNA LigazRoche10799009001Tamponlar dahil
NdeI New England BiolabsR0111STamponlar dahil
XhoI New England BiolabsR0146STamponlar
dahil pET-20b (+) vektörNovagen, Merck Millipore69739
E. coli< / em> DH-5 ve alfa; yetkili hücreRBC BioscienceRH617
E. coli< / em> BL-21 (DE3) yetkili hücreRBC BioscienceRH217
AmpisilinAmresco0339-25G
LB et suyu Invitrongen12780-052
İzopropiltio-β-D-tiyogalaktozit (IPTG)MDBio, Inc.101-367-93-1
MetanolMerck Milipore106009
Polioksietilen 20 Sorbitan Monolaurat (Tween-20)JTBakerX251-07
Dimetil sülfoksit (DMSO)SigmaD2650
GlisinAmresco0167-5KG
TrisAffymetrix, USB75825
NaClAmresco0241-1KG
EDTAAmresco0105-1KG
GliserolAmresco0854-1L
NaN < sub > 3 < / sub>SigmaS2002-500G
BCIP / NBTPerkinElmerNEL937001PK
Keçi Anti-Fare IgG, Fc fragman antikoruJackson ImmunoResearch115-055-008
Immobilon-P (Poliviniliden florür, PVDF)Merck MilliporeIPVH00010
Protein G Agaroz HızlıAkış Merck Millipore16-266
QIAquick PCR Saflaştırma kitiQiagen28106
UVP BioSpectrum 600 Görüntü SistemiUVPyok
VisionWorks LS Analiz Yazılımı Sürüm 6.8UVPyok
MyCycler termal döngüleyiciBioRad1709713

Kaynaklar

  1. Milstein, C., Kohler, G. Clonal variations of myelomatous cells (proceedings). Minerva Med. 68 (50), 3453(1977).
  2. Lai, Y. S., et al. In vitro neutralization by monoclonal antibodies against yellow grouper nervous necrosis virus (YGNNV) and immunolocalization of virus infection in yellow grouper Epinephelus awoara (Temminck & Schlegel). J Fish Dis. 24 (4), 237-244 (2001).
  3. Chen, C. W., Wu, M. S., Huang, Y. J., Cheng, C. A., Chang, C. Y. Recognition of Linear B-Cell Epitope of Betanodavirus Coat Protein by RG-M18 Neutralizing mAB Inhibits Giant Grouper Nervous Necrosis Virus (GGNNV) Infection. PLoS One. 10 (5), 0126121(2015).
  4. Lai, Y. -S., et al. Propagation of yellow grouper nervous necrosis virus (YGNNV) in a new nodavirus-susceptible cell line from yellow grouper, Epinephelus awoara (Temminck & Schlegel), brain tissue. J Fish Dis. 24 (5), 299-309 (2001).
  5. Lougee, E., Morjaria, S., Shaw, O., Collins, R., Vaughan, R. A new approach to HLA typing designed for solid organ transplantation: epityping and its application to the HLA-A locus. Int J Immunogenet. 40 (6), 445-452 (2013).
  6. Radulovich, N., Leung, L., Tsao, M. S. Modified gateway system for double shRNA expression and Cre/lox based gene expression. BMC Biotechnol. 11, 24(2011).
  7. Froger, A., Hall, J. E. Transformation of plasmid DNA into E. coli using the heat shock method. J Vis Exp. (6), e253(2007).
  8. Pronobis, M. I., Deuitch, N., Peifer, M. The Miraprep: A Protocol that Uses a Miniprep Kit and Provides Maxiprep Yields. PLoS One. 11 (8), e0160509(2016).
  9. Metzker, M. L. Emerging technologies in DNA sequencing. Genome Res. 15 (12), 1767-1776 (2005).
  10. Chiu, C. C., John, J. A., Hseu, T. H., Chang, C. Y. Expression of ayu (Plecoglossus altivelis) Pit-1 in Escherichia coli: its purification and immunohistochemical detection using monoclonal antibody. Protein Expr Purif. 24 (2), 292-301 (2002).
  11. Atassi, M. Z. Antigenic structures of proteins. Their determination has revealed important aspects of immune recognition and generated strategies for synthetic mimicking of protein binding sites. Eur J Biochem. 145 (1), 1-20 (1984).
  12. Opuni, K. F., et al. Mass spectrometric epitope mapping. Mass Spectrom Rev. , (2016).
  13. Chang, C. Y., Chiu, C. C., Christopher John, J. A. The Aquaculture of Groupers. Liao, I. C., Leaño, E. M. , Taiwan Asian Fisheries Society, World Aquaculture Society, The Fisheries Society of Taiwan, National Taiwan Ocean University, Taiwan Press. 207-224 (2008).
  14. Conti-Tronconi, B. M., et al. Alpha-bungarotoxin and the competing antibody WF6 interact with different amino acids within the same cholinergic subsite. Biochemistry. 30 (10), 2575-2584 (1991).
  15. Briggs, S., Price, M. R., Tendler, S. J. Fine specificity of antibody recognition of carcinoma-associated epithelial mucins: antibody binding to synthetic peptide epitopes. Eur J Cancer. 29 (2), 230-237 (1993).
  16. Chen, N. C., et al. Crystal Structures of a Piscine Betanodavirus: Mechanisms of Capsid Assembly and Viral Infection. PLoS Pathog. 11 (10), e1005203(2015).
  17. Badani, H., Garry, R. F., Wimley, W. C. Peptide entry inhibitors of enveloped viruses: The importance of interfacial hydrophobicity. Biochim Biophys Acta. , (2014).
  18. Qureshi, N. M., Coy, D. H., Garry, R. F., Henderson, L. A. Characterization of a putative cellular receptor for HIV-1 transmembrane glycoprotein using synthetic peptides. AIDS. 4 (6), 553-558 (1990).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Dot blot HibritlemeSeri Olarak K salt lm ProteinlerAlanin TaramaSinir Nekrozu Vir sRekombinant Protein EkspresyonuPVDF MembranEpitop Haritalama

İlgili makaleler