Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Terapötik Antikorlar Arasındaki Hedef Bağlanma ve CDC İndüksiyonunu Karşılaştırmak İçin İn Vitro Yöntemler: Biyoeşdeğerlik Analizindeki Uygulamalar

17.2K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/55542

⸱

4 Mayıs 2017

 ,  ,  ,  , 
1Unit for Development and Research in Bioprocesses Unit (UDIBI), National School of Biological Sciences, National Polytechnic Institute (IPN), University of Mexico (UNAM), 2School of Chemistry, National Autonomous University of Mexico (UNAM), 3Graduate Program in Chemical Sciences, National Autonomous University of Mexico (UNAM), 4Unit for Development Research and Medical Innovation in Biotechnology (UDIMEB), National School of Biological Sciences, National Polytechnic Institute (IPN), 5Department of Immunology, National Scool of Biological Sciences, National Polytechnic Institute (IPN), 6Department of Pharmacology and Unit of Translational Biomedicine (CMN 20 de noviembre), School of Medicine, National Autonomous University of Mexico (UNAM)

Bu makalede

Özet

Bu protokol, rituksimab iki önemli fonksiyonel özellikleri in vitro karşılaştırmasını tarif: hedef bağlanma ve tamamlayıcıya bağlı sitotoksisite (CDC) indüksiyonu. yöntem, referans rituksimab ve rituksimab biyobenzerin arasında bir yan-yana karşılaştırma için kullanılmıştır. Bu tahliller, biyobenzer geliştirme sırasında veya üretimlerinde bir kalite kontrol olarak kullanılabilir.

Özet

Terapötik monoklonal antikorlar (mAb), kanserler de dahil olmak üzere farklı patolojilerin tedavisi için önemlidir. İlaç şirketleri tarafından biyobenzer mAb'lerin gelişimi bir pazar fırsatıdır, ancak aynı zamanda uyuşturucunun erişilebilirliğini artırmak ve terapi ile ilişkili maliyetleri azaltmak için bir stratejidir. Burada detaylandırılan protokoller, Daudi hücrelerinde rituksimab ile hedef bağlanma ve CDC indüksiyonunun değerlendirilmesini tanımlamaktadır. Bu iki işlev antikorun farklı yapısal bölgelerini gerektirir ve rituximab'ın indüklediği klinik etkiyle ilişkilidir. Protokoller, bir referans rituksimabın ve piyasaya sürülen rituksimab biyosimerlerinin yan yana karşılaştırılmasını sağlar. Değerlendirilen ürünler hem hedef bağlama hem de CDC indüksiyonunda farklılıklar gösterdi; bu, alttaki fizikokimyasal farklılıkların bulunduğunu ve klinik ortamdaki bu farklılıkların etkisini analiz etme ihtiyacının altını çizdi. Burada bildirilen yöntemler basit ve ucuz in vitro </ Em> rituximab biyosimilar aktivitesinin değerlendirilmesi için modeller. Bu nedenle, biyo-benzeri gelişim sırasında biyoeşdeğer üretimin kalite kontrolünde yararlı olabilirler. Dahası, sunulan yöntemler diğer terapötik mAb'lara ekstrapole edilebilir.

Giriş

Terapötik antikorlar kanser, oto bağışıklık ve kronik hastalıklar, nörolojik hastalıklar ve diğerleri 1 de dahil olmak üzere, farklı patolojilerin tedavisi için geliştirilmiş rekombinant monoklonal antikorlar (mAb'ler) bulunmaktadır. Şu anda FDA 40'dan fazla terapötik mAb'lere onayını veren ve daha sonraki yıllarda pazara ulaşması bekleniyor.

Rituksimab CD20 + B hücreli non-Hodgkin lenfoma (NHL), CD20 + foliküler NHL, kronik lenfositik lösemi, ve romatoid artrit, 2, 3 tedavisi için onaylanmıştır yüksek afiniteli bir kimerik monoklonal IgG1 antikoru. rituksimab tarafından B hücrelerinde aşırı eksprese olan CD20 tanınması, apoptozu indükler; kompleman aktivasyonu; ve antikora bağlı hücre aracılı sitotoksisite (ADCC) 3. Bu ilacın patent 2013 ve 2016 yılında ABD'de, Avrupa'da ve süresi dolmuş, sırasıyla. Böylece, dünya çapındaki ilaç firmaları rituximab biyosimilar geliştiriyor. İnsan tüketimi için diğer herhangi bir ilacın olduğu gibi, biyosimilarlar da düzenleyici kurumların onayını gerektirir. Uluslararası yönergeler, mAb'ler için yeni ve referans ürünlerin fiziko kimyasal özellikleri, farmakokinetiği, etkililiği ve emniyetini karşılaştırarak biyolojik benzerliğin gösterilmesi gerektiğini göstermektedir.

Buna göre, bu karşılaştırmalarda kullanılan metodolojiler mAb'lerin yapısal ve işlevsel özelliklerini, özellikle de klinik önemi olanları değerlendirmelidir. Bu amaçla, in vitro deneyler in vivo deneylere kıyasla birçok avantaj sağlar (Chapman ve ark. Gözden geçirilir) 5 : i) in vitro çalışmalar önerilen biyobenzer ile referans ürün arasındaki farklara daha duyarlıdır; Ii) in vivo çalışmalar ilgili türlerde yapılmalıdır, ki bu birçok mAb içininsan olmayan primatlar; ve iii) hareket mekanizması, klinik öncesi toksikoloji ve referans ürün ile ilgili klinik etkileri itibaren de ek yararlı bilgiler sağlamayabilir biyobenzerlerin ile in vivo çalışmalar, bilinmektedir. Buna göre, biyobenzerleri için Avrupa Birliği'nin Rehberlik adayları vitro verilere yalnız 6'da sağlam dayalı klinik deneylere girmek için izin verir.

Burada, CD20 + kültürlü hücreleri kullanılarak rituksimab biyolojik aktivitesini değerlendirmek iki hızlı, ekonomik ve basit deneyleri sunuyoruz. Bu tahliller, rituksimab Biyobenzer adaylar için karşılaştırılabilirlik çalışmasının bir parçası olarak dahil edilebilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. Hedef Bağlamanın Akış Sitometresi ile Değerlendirilmesi

  1. Biyolojik materyal ve reaktiflerin hazırlanması
    1. % 10 ısı ile inaktive edilmiş fetal sığır serumu (H-IFBS) ile takviye edilmiş 500 mL RPMI kültür ortamı yapın.
    2. Kültür Daudi Burkitt'in Lenfoma (Daudi) hücreleri ve Daudi GFP + hücreleri RPMI ve 75 cm2 kültür şişeleri kullanıyor. Kültürleri 37 ° C'de% 5 CO 2 nemlendirilmiş atmosferde 6 - 9 x 10 5 hücre / mL'ye ulaşıncaya kadar muhafaza edin.
    3. PBS içinde 1/100 H-IFBS seyrelterek 50 mL boyama tamponu yapın; Bu tampon, 2-8 ° C'de en az bir ay boyunca kararlıdır.
    4. Referans ve biyoeşdeç mAb'ler için test çözümlerini hazırlayın. 5 μg / mL'den başlayarak, boyama tamponunda on 1: 2 seri dilüsyon (her biri 500 μL) yapın.
    5. Boyama tamponunu, insan IgG'sini (izotip kontrolü) 5 μg / mL'ye ve PE-Cy5 fare anti-insan IgG'sini (ikincil antikor) sulandırmak için kullanınÜreticinin önerdiği santrasyon.
    6. PBS (fiksasyon tamponu)% 4 paraformaldehid hazırlayın.
  2. Hedef ciltleme
    1. 75 cm2 kültür şişelerinden Daudi ve Daudi GFP + hücre süspansiyonlarını toplayın ve bunları 15 mL'lik bir santrifüj tüpüne aktarın. 5 dakika boyunca 400 xg'de santrifüjleyin.
    2. 5 mL PBS ekleyerek ve 400 xg'de hücre süspansiyonunu 5 dakika santrifüj ederek hücreleri yıkayın.
    3. PBS içinde hücreleri tekrar süspansiyon ve tripan mavi ile bir hücre sayısı ve canlılık analizi yapın. Analiz için hücre canlılığı seviyeleri ≥% 95 olan kültürleri kullanın.
    4. Hücre süspansiyonunu soğuk boyama tamponu ile 4 x 10 6 hücre / mL'ye seyreltin.
    5. 1.5 mL'lik mikrosantrifüj tüplerinde, referans veya biosimilar mAb'lerin farklı test konsantrasyonlarına 100 uL hücre süspansiyonu 50 μL ekleyin. Her deneysel durum için tekrarlar ekleyin.
    6. Ek tüpler hazırlayın.izotip kontrol (yerine rituksimab insan IgG1) ve negatif kontrol (birincil antikor olmayan ikincil antikor).
    7. 30 dakika - 20 boyunca 4 ° C'de inkübe edin.
    8. 1 ml PBS ilave edilerek ve 10 ° C'de 5 dakika boyunca 400 x g'de hücre süspansiyonu santrifüj hücreleri yıkanır. Süpernatant atılır.
    9. ikincil antikor, 100 uL hücreler süspansiyon halinde tutulur ve 20 için inkübe -, ışıktan korunarak, 4 ° C'de 30 dakika.
    10. PBS ile iki kez hücreleri yıkayın ve sabitleme tampon 200 uL onları askıya alın.
    11. bir akış sitometresinde hücreleri analiz edin.
      Not: örnekler 4 ° C sıcaklıkta saklanan ve ışıktan korunan eğer sinyal birkaç gün sabit kalır.
  3. Veri toplama
    1. işletim yazılımının akış sitometresinin bir çalışma sayfasında Açık iki nokta araziler. Birinci ve ikinci SSA-A karşı FSC A FSC H karşı FSC bir dizi. PE-Cy5 kanalı için bir histogram açın.
    2. FSC-A ve FSC-H arsalarında, singlet olaylarını seçerek bir geçit (R1) oluşturun ( Şekil 1A ).
    3. R1 popülasyonunu FSC-A'ya karşı SSA-A nokta-grafiğine ayarlayın ve sonra hedef hücreleri seçerek yeni bir kap (R2) yapın ( Şekil 1B ). Hücrelerin frekans dağılımını görmek için R2 popülasyonunu PE-Cy5 yoğunluk histogramında ayarlayın.
    4. Negatif ve izotip kontrolü ( Şekil 1C ) kullanarak PE-Cy5 kanalı için alt floresans yoğunluğu (FI) sınırını ayarlayın.
    5. Referans ürünün daha yüksek konsantrasyonda örneklemden R2 içerisinde 10.000 olay elde edin. Bu numunenin FI'sı beklenen en yüksek değer olmalıdır ( Şekil 1C ).
    6. Geri kalan örnekleri alın.
    7. Her örnek için, PE-Cy5 kanalında ortalama floresan yoğunluğunu (MFI) elde edin.
    8. Referans veya biosimilar mAb'si olan numuneler için, MFI ile izotip kontrolünün (ΔMFI) arasındaki farkı hesaplayın.

2. CDC'nin Değerlendirilmesi

  1. Biyolojik materyal ve reaktiflerin hazırlanması
    1. Yukarıda açıklandığı gibi hücre kültür ortamı ve kültür Daudi ve Daudi GFP + hücreleri hazırlayın (adım 1.1.1 - 1.1.2).
      NOT: Ek olarak, CDC tahlili serumsuz RPMI'yi gerektirir.
    2. Serumsuz RPMI ile normal insan serum tamamlayıcısı (NHSC) 1: 2 seyreltin. 2.5 mL hazırlayın.
    3. RPMI ile 1: 2 seyreltilmiş 1 mL ısı ile inaktive (30 dakika / 56 ° C) NHSC hazırlayın.
    4. Serumsuz RPMI'de referans ve biyolojik olarak benzer mAb'ler için test setleri hazırlayın. 1 ila 0.025 μg / mL arasında on seyreltme (her biri 200 mcL) yapın.
  2. CDC tahlili
    1. Kültürlerden Daudi ve Daudi GFP + hücrelerini toplayın ve hücre yaşayabilirliğini ölçün (adım 1.2.1 - 1.2.3'e bakın).
    2. Serumsuz RPMI'de 4 x 10 5 hücre / mL'lik bir hücre süspansiyonu hazırlayın.
    3. Eklemek96 pozitif konik (V) alt tabaka mikrofazarda her bir referansın 50 μL'sine 50 uL hücre süspansiyonu veya biosimilar mAb test konsantrasyonu. Her deneysel durum için tekrarlar ekleyin.
    4. Negatif kontrol ( yani mAb olmadan), bazal ölüm kontrolü ( örn., MAb varlığında ısı ile inaktive edilmiş NHSC) ve pozitif kontrol lekesi için ek kuyucuklar hazırlayın ( örn., 50 μL% 70 EtOH maruz bırakılan hücreler).
    5. Hücreleri,% 5 CO 2 nemlendirilmiş atmosferde 37 ° C'de 20-30 dakika inkübe edin.
    6. Her oyuğa 50 mcL NHSC (1: 2 oranında seyreltilmiş) ilave edin ve opsonize edilmiş hücreleri 37 ° C'de 2.5 saat süreyle% 5 CO 2 nemlendirilmiş atmosferde inkübe edin. Bazal ölüm kontrol kanallarında ısı ile inaktive NHSC'yi kullanın.
    7. 10 dakika boyunca 400 xg'de 5 dakika boyunca santrifüjleyin. Süpernatanı atın.
    8. 150 uL PBS ekleyerek ve 400 xg ve 10 ° C'de 5 dakika süreyle hücre süspansiyonunu santrifüj ederek hücreleri yıkayın. DiSüpernatant scard.
    9. Daha önce 7, 8 tarif edildiği gibi, 7-aminoactinomycin (7-AAD) ile örnekleri leke.
    10. Aynı gün bir akış sitometresinde hücreleri analiz edin.
  3. Veri toplama
    1. işletim yazılımının akış sitometresinin bir çalışma sayfasında Açık iki nokta araziler. 1.3.3 (Şekil 2A-B) - adımda 1.3.1 içinde olduğu gibi araziler ayarlayın. R2 nüfusa 7-AAD karşı GFP için bir nokta-komplodur üçüncü arsa oluşturun.
    2. Daudi hücreleri kullanılarak yeterli FI sınırlarını tanımlar, Daudi, GFP + hücreleri ve ölüm pozitif kontrol (Şekil 2C).
    3. Her bir örnek için, 7-AAD + hedef hücrelerin yüzdesini ölçer. R2, en az 5000 olayları elde edin.
    4. Farklı olan örneklerde bulunan yüzde bazal ölüm kontrol 7-AAD + 'nın yüzdesi çıkarılarak spesifik mAb kaynaklı sitotoksisiteyi hesaplamak( Şekil 2D ).

3. Biyoeşdeğerlik Analizi

  1. Konsantrasyon ve yanıt değerlerini bir grafik yazılımına girin.
  2. Grafikler üretin ve aşağıdaki hatalarla doğrusal olmayan regresyonları hesaplayın: i) mAb konsantrasyonunun log dönüşümünü "X" olarak kullanın; Ii) değişken eğim matematiksel modelini kullanın (Y = minimum tepki + (maksimum tepki - minimum tepki) / 1 + 10 ^ ((LogEC 50 -X) * tepe eğimi)); Ve iii) bazal tepki çıkarıldığından taban değerlerini sıfıra sınırlayın.
    NOT: Simetrik sigmoidal şekle sahip eğrilerin olması beklenir.
  3. Hem doğrusal olmayan uyumu F-testi (birçok grafik yazılım programı, bu özelliği içerir) kullanarak küresel uyumu ile karşılaştırın.
    NOT: Bu tür testler, maksimum yanıt, logEC 50 ve Hill eğiminin, iki veri kümesi için aynı olduğu ve bu kütle ile uyuşan boş hipotez oluşturmaktadır.Ele alınması amaçlanan biyolojik soru.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Yukarıda tarif edilen protokol kullanılarak, bağlanma hedef ve referans rituksimab CDC indüksiyon Asya'da üretilen biyobenzer rituksimab o ve ticari olarak temin edilebilen paralel olarak karşılaştırıldı.

Daudi hücreleri, her iki mAb de, konsantrasyona bağlı bir şekilde (Şekil 1D) CD20 bağlandı. Bağlanma verilerinin doğrusal olmayan regresyon referans ve biyobenzer rituksimab, sırasıyla (Şekil 1 E)...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Terapötik mAb'nin patent sona ermesi, biyosimilarların gelişimini desteklemektedir. Dolayısıyla, bu ürünlerin klinik olarak ilgili faaliyetlerindeki farklılıkları belirleyebilen basit yöntemlere ihtiyaç vardır. CD20 + kültürlü hücreler rituximabın iki önemli fonksiyonel özelliğinin değerlendirilmesi için kullanılmıştır: hedef bağlama ve CDC indüksiyonu. Önceki aktivite, CD20'nin mAb'nin Fab bölgesi tarafından tanınmasını gerektirirken, sonuncusu esasen Fc bölgesinin komplemanının etkileşimine bağl...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

N. Salinas-Jazmín, E. González-González ve SM Pérez-Tapia, çeşitli ilaç firmaları için biyolojik benzerlik çalışmaları yapan UDIBI çalışanlarıdır.

Teşekkürler

Yazarların onayları yok.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
RPMI-1640 ortaATCC30-2001Hücre hattına bağlı olarak kültürü değiştirin
Tripan Mavisi çözeltisiSigmaT8154%0.4, sıvı, steril filtreli, hücre kültürüne uygun
Daudi Burkitt'in Lenfoma HücreleriATCCCCL-213İlgilenilen antikora bağlı olarak hücre hattını değiştirebilirsiniz
Fetal sığır serumu (FBS)GIBCO16000-044Hücre hattının gereksinimlerine bağlı olarak serum kaynağını değiştirebilirsiniz
Normal İnsan Serumu KomplemanıQuidelA113Bu nedenle, ilaç geliştirme, biyomalzeme testi ve diğer uygulamalar dahil olmak üzere biyouyumluluk deneylerinde kullanım için uygundur
7AA-DBDPharmigen559925Canlılığı analiz etmek için çoğu cihaz konfigürasyonuyla uyumlu çok çeşitli renk seçeneklerini kullanabilirsiniz.
PECy5 Fare Anti-insan IgGBDPharmigen551497Akış sitometrenizin filtresine ve lazerine bağlı olarak florokromlu değiştirin
İnsan IgG İzotipKontrolü ThermoFisher Scientific07-7102mAb'ye bağlı olarak değiştirin
BDCytofixBDPharmigen554655Akış Sitometrisi Fiksasyon Tamponu (%1 - 4 formaldehit veya paraformaldehit)
PBS pH 7.4 10x (Fosfat tamponu tuzlu su)GIBCO70011-044Ca 2 + < / sup> / Mg2 + < / sup> [137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 8 mM Na2< / sub>HPO4< / sub>, 1.46 mM KH2< / sub>PO4< / sub>] ve endotoksin içermez.
Hücre kültürü plakaları 96 kuyulu, V-tabanlıCorning29442-06812 x 75 mm yuvarlak tabanlı test tüpleri veya 96 oyuklu V- veya U-tabanlı mikrotitre plakaları
MabThera (Rituximab)Roche—Referans ürün
RituximabHintli—Biyobenzer ürün
15 veya 50 mL konik santrifüj tüpleriCorning430290 veya 430052—
Pipet UçlarıEppendorf—Birden fazla hacim yapılandırması gereklidir
PipetlerEppendorf—Ayarlanabilir hacimli pipetler gereklidir
Santrifüj 5430/ 5430R modelEppendorf—Soğutmalı değişken hızlı santrifüj (4 ila 25 > C) 10 ila 30.130 & saat arasında değişen hızlarla; g
Akış sitometresiBD Dickinson—BD FACSAria III veya başka bir akış sitometresi
Olympus optik ve ışık mikroskobuOlympus—Hücre büyümesini ölçmek ve değerlendirmek için
Kuluçka makinesiSANYOve mdash;Kültür hücrelerine sıcaklık ve CO2 kontrolü için inkübatör
Biyolojik Güvenlik KabiniCHC BIOLUS—Araştırmacıyı, ürünü ve çevreyi korumak için kullanılan biyolojik güvenlik kabini.
.

Kaynaklar

  1. Schimizzi, G. F. Biosimilars from a practicing rheumatologist perspective: An overview. Autoimmun Rev. 15 (9), 911-916 (2016).
  2. Cuello, H. A., et al. Comparability of Antibody-Mediated Cell Killing Activity Between a Proposed Biosimilar RTXM83 and the Originator Rituximab. Bio Drugs. 30 (3), 225-231 (2016).
  3. Iwamoto, N., et al. Validated LC/MS Bioanalysis of Rituximab CDR Peptides Using Nano-surface and Molecular-Orientation Limited (nSMOL) Proteolysis. Biol Pharm Bull. 39 (7), 1187-1194 (2016).
  4. World Health Organization. Guidelines on evaluation of monoclonal antibodies as similar biotherapeutic products (SBPs). , Available from: http://www.who.int/biologicals/expert_committee/mAb_SBP_GL-ECBS_review_adoption-2016.10.26-11.7post_ECBS-Clean_Version.pdf (2016).
  5. Chapman, K., et al. Waiving in vivo studies for monoclonal antibody biosimilar development: National and global challenges. MAbs. 8 (3), 427-435 (2016).
  6. EMA, EMEA/CHMP/BMWP/42832/2005 Rev1. Guideline on similar biological medicinal products containing biotechnology-derived proteins as active substance: non-clinical and clinical issues. , Available from: http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2015/01/WC500180219.pdf (2014).
  7. Zembruski, N. C., et al. 7-Aminoactinomycin D for apoptosis staining in flow cytometry. Anal Biochem. 429 (1), 79-81 (2012).
  8. Salinas-Jazmin, N., Hisaki-Itaya, E., Velasco-Velazquez, M. A. A flow cytometry-based assay for the evaluation of antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) in cancer cells. Methods Mol Biol. 1165, 241-252 (2014).
  9. Teeling, J. L., et al. The Biological Activity of Human CD20 Monoclonal Antibodies Is Linked to Unique Epitopes on CD20. J Immunol. 177 (1), 362-371 (2006).
  10. Miranda-Hernandez, M. P., et al. Assessment of physicochemical properties of rituximab related to its immunomodulatory activity. J Immunol Res. 2015, 910763(2015).
  11. Visser, J., et al. Physicochemical and functional comparability between the proposed biosimilar rituximab GP2013 and originator rituximab. BioDrugs. 27 (5), 495-507 (2013).
  12. Ylera, F., et al. Off-rate screening for selection of high-affinity anti-drug antibodies. Anal Biochem. 441 (2), 208-213 (2013).
  13. Broyer, L., Goetsch, L., Broussas, M. Evaluation of complement-dependent cytotoxicity using ATP measurement and C1q/C4b binding. Methods Mol Biol. 988, 319-329 (2013).
  14. Herbst, R., et al. B-cell depletion in vitro and in vivo with an afucosylated anti-CD19 antibody. J Pharm Exp Ther. 335 (1), 213-222 (2010).
  15. Lazar, G. A., et al. Engineered antibody Fc variants with enhanced effector function. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (11), 4005-4010 (2006).
  16. Winiarska, M., et al. Statins impair antitumor effects of rituximab by inducing conformational changes of CD20. PLoS medicine. 5 (3), e64(2008).
  17. Zhou, X., Hu, W., Qin, X. The role of complement in the mechanism of action of rituximab for B-cell lymphoma: implications for therapy. Oncologist. 13 (9), 954-966 (2008).
  18. Hayashi, K., et al. Gemcitabine enhances rituximab-mediated complement-dependent cytotoxicity to B cell lymphoma by CD20 upregulation. Cancer Sci. 107 (5), 682-689 (2016).
  19. Mossner, E., et al. Increasing the efficacy of CD20 antibody therapy through the engineering of a new type II anti-CD20 antibody with enhanced direct and immune effector cell-mediated B-cell cytotoxicity. Blood. 115 (22), 4393-4402 (2010).
  20. Lapalombella, R., et al. A novel Raji-Burkitt's lymphoma model for preclinical and mechanistic evaluation of CD52-targeted immunotherapeutic agents. Clin Cancer Res. 14 (2), 569-578 (2008).
  21. Mitoma, H., et al. Mechanisms for cytotoxic effects of anti-tumor necrosis factor agents on transmembrane tumor necrosis factor alpha-expressing cells: comparison among infliximab, etanercept, and adalimumab. Arthritis Rheum. 58 (5), 1248-1257 (2008).
  22. Kaymakcalan, Z., et al. Comparisons of affinities, avidities, and complement activation of adalimumab, infliximab, and etanercept in binding to soluble and membrane tumor necrosis factor. Clin Immunol. 131 (2), 308-316 (2009).
  23. Zent, C. S., et al. Direct and complement dependent cytotoxicity in CLL cells from patients with high-risk early-intermediate stage chronic lymphocytic leukemia (CLL) treated with alemtuzumab and rituximab. Leuk Res. 32 (12), 1849-1856 (2008).
  24. Goswami, M. T., et al. Regulation of complement-dependent cytotoxicity by TGF-beta-induced epithelial-mesenchymal transition. Oncogene. 35 (15), 1888-1898 (2016).
  25. Wang, A., et al. Induction of anti-EGFR immune response with mimotopes identified from a phage display peptide library by panitumumab. Oncotarget. , (2016).
  26. Ueda, N., et al. The cytotoxic effects of certolizumab pegol and golimumab mediated by transmembrane tumor necrosis factor alpha. Inflamm Bowel Dis. 19 (6), 1224-1231 (2013).
  27. Nesbitt, A., et al. Mechanism of action of certolizumab pegol (CDP870): in vitro comparison with other anti-tumor necrosis factor alpha agents. Inflamm Bowel Dis. 13 (11), 1323-1332 (2007).
  28. Teeling, J. L., et al. Characterization of new human CD20 monoclonal antibodies with potent cytolytic activity against non-Hodgkin lymphomas. Blood. 104 (6), 1793-1800 (2004).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Rituksimab BiyobenzeriDaudi H creleriFonksiyonel Kar la t rmaAntikor De erlendirmesiKalite Kontrol
Terapötik Antikorlar Arasındaki Hedef Bağlanma ve CDC İndüksiyonunu Karşılaştırmak İçin İn Vitro Yöntemler: Biyoeşdeğerlik Analizindeki Uygulamalar
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.