Yöntem makalesi

İnsan Serumda kardiyak biyolojik ölçmek için olağanüstü optik iletim kullanma

DOI:

10.3791/55597

⸱

13 Aralık 2017

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1NUS Nanoscience and Nanotechnology Initiative, National University of Singapore, 2Cardiovascular Research Institute, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, 3Department of Electrical and Computer Engineering, National University of Singapore, 4Institute of Materials Research Engineering, A*STAR (Agency for Science, Technology and Research)

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu eser olağanüstü optik iletim prensibine göre çalışan yüksek kaliteli algılama diziler imal nanoimprinting litografi yöntemi açıklanır. Biyoalgılayıcı düşük maliyetli, güçlü, kullanımı kolay ve kardiyak troponin algılayabilir ben Serumda klinik konsantrasyonlarda (99inci yüzdelik kesme ∼10-400 pg/mL, tahlil bağlı olarak).

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Klinik önemi var bakım nokta (PT) ayarları biosensing için bir platform, tahlil duyarlılık, tekrarlanabilirlik ve güvenilir bir şekilde insan serumu çerçevede analitler izlemek için yeteneği açısından büyük önem taşıyor.

Nanoimprinting litografi (NIL) imal, düşük maliyetli olarak, alanları 1.5 x 1.5 mm büyüklüğünde algılama kullanılmıştır. Algılama yüzey nanoholes, her bir alana sahip yaklaşık 140 nm2yüksek sadakat dizileri yapılmıştır. NIL büyük tekrarlanabilirlik bir küçük parça, bir ölçüm strateji en az çip çip varyasyon ile 12 ayrı ayrı imal edilmiş yüzeylerde istihdam mümkün kıldı. Bu lokalize nanoimprinted yüzey plasmon rezonans (LSPR) fişleri kapsamlı yeteneklerini güvenilir bir bioanalyte 2,5 75 ng/ml biofluid-in karmaşık bir arka plan ortasında bu durumda, insan serum farklı konsantrasyonlarda ölçmek için test edildi. NIL sağlar bu Biyoalgılayıcı yaygın olarak bulunan laboratuvar ışık kaynağı ile kolayca senitehlikeye gibi hangi sırayla bir mikroskop ortadan kaldırır geniş algılama alanları, nesil yüksek sadakat. Bu biyosensörler kardiyak troponin serum içinde algılama (lod olarak) 0.55 ng/ml, bir limitte yüksek bir hassasiyetle klinik olduğu tespit edebilir. Onlar da düşük çip çip varyans (nedeniyle yüksek kaliteli imalat işleminin) göstermektedir. Sonuçlar çok kullanılan enzim bağlı immunosorbent assay (ELISA) ile commensurable-deneyleri temel, ancak teknik bir LSPR tabanlı algılama platformu (yapım oYani, amenability küçültme ve çoğullama, avantajları korur daha uygun POC uygulamalar için).

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Olağanüstü optik iletim (EOT) ilk raporda Ebbesen ve ark. 19981tarafından yayımlandıktan sonra kimyasal sensörler nanohole diziler üzerinde dayalı sayısız araştırmalar bir konu oldu. Işık alt dalga boyu boyutlarının nanohole yapıların periyodik dizilerle impinges, Gelişmiş iletim belirli dalga boylarında oluşur. Olay ışık Bloch-dalga yüzey polariton (BW-SPP) ve/veya yerelleştirilmiş yüzey plasmons (LSP)2çiftler oluşur.

Biosensing periyodik böyle dizileri ile basit olduğunda yararlanan temel fiziksel prensip. Adsorpsiyon molekülleri üzerine veya metal arabiriminin yakınındaki sırayla spektrum iletim bantlarında konumunu değişen metal ile temas halinde orta Dielektrik sabiti değişir. Spektrum kendisi-ebilmek var olmak ayarlamak nano-mühendislik şekli, boyutu ve renk ayrımı mesafe3,4,5. Tasarım gereği, sensörler üzerinde EOT dayalı moleküler bağlama olayları soruşturma sırasında belirli atamalarda6,7,8 kolaylaştırmak onların spectra karakteristik grup bulunur. Bu ticari olarak mevcut yüzey plasmon rezonans (SPR) platformlarına çok önemli bir avantajdır.

Sensörleri EOT genellikle kullanan bir collimated ışın algılama yüzeyde olay öyle ki optik hizalanmış bir ışık kaynağı dahil. Zavallı tekrarlanabilirlik9kopolimer şablonları ve girişim ve nanosphere litografi, gibi büyük nanohole yüzeyler üretmek için teknikler vardır. Doğru bir şekilde gösterin EOT fenomen büyük yüzeyler imalatı, bu sınırlamaları nedeniyle bir optik mikroskobu doğru ışık kaynağı ve Dedektör konumlandırmak için gerekli oldu. Teknik, yüksek kaliteli nanoimprinting litografi basitleştirmek için (sıfır)10 istihdam edildi. Bu bir çip algılama yüzeyinde aramak mikroskop için ihtiyaç kaldırarak üretim büyük sensör yüzey alanlarını11 (mm-ölçek), etkin. Bunun yerine, bu sensör kolayca standart fiber optik kablo ile senitehlikeye.

Bu nanohole dizi için iletim doruklarına yakın kızılötesi bölgesi (Nur) için görünür içerdiği beri mükemmel bir sulu ortamda biomolecules için bağlama olayları algılama için uygundur. Nanohole dizi beklenen optik davranışını taklit. Sonuç sonra çalışmalar ile sıvı çift kırılma dizinleri (RI) aracılığıyla doğrulandı. Bu dizi sonra kardiyak troponin konsantrasyonunu ölçmek için kullanılan insan serumu karmaşık arka planda ben (cTnI). cTnI akut miyokard infarktüsü tanısı için klinik altın standarttır.

Bu sensör kullanarak, algılamak ve klinik olarak ilgili olan cTnI algılama (lod olarak) 0.55 ng/ml, bir limitte insan Serumda ölçmek mümkündür. Algılama en yaygın olarak bu etki alanında, enzim bağlı immunosorbent assay (ELISA) teknoloji eskisinden daha çabuk olur. Ayrıca, algılama yüzey-ebilmek kolayca yeniden ve bu nedenle yeniden kullanılabilir. Bu nedenle, bu eser karmaşık biofluids içinde biosensing için uygun bir bakım nokta (PT) teknoloji olarak Allah'ın nanohole dizileri gösterir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. sensör ve verileri edinimi imalatı

  1. Nikel kalıp hazırlanması
    1. Kat negatif elektron ışını 220 nm-kalın tabakası 600 µm kalınlığında 4-in silikon gofret dayanacak. Tasarlanmış nanohole dizi bir elektron ışını litografi sistemini kullanarak bu gofret yazmak.
      1. E-beam yazma hızlandırmak için 20 k her 300 µm alan boyutu için düşük dotmap (N) ile desenler yazın (A) (Yani, orada her 300 µm2 bölgeyi haritalamıştır 0,4 milyar nokta vardır ve her nokta da e-beam tarafından ya da değil maruz kalacağı desen tasarımına bağlı olarak). E-beam resist maruz kalma doz için direnmek için 110 µC cm−2 ayarla ve mevcut 800 (I) yazmak baba.
        Not: e-beam yazılı olarak maruz kalma doz (D) tarafından hesaplanan her nokta (Tnokta), pozlama süresi tarafından denetlenir figure-protocol-1 . 110 µC cm−2, maruz kalma doz için 0,5 µs12maruz kalan her nokta e-kiriş konut zamanında geldi. Dizi 1.8 mm2yüzölçümü yakalar yana, 300-µm2 alan alanlarda birlikte dikişli formu bir büyük, altın nanohole dizisine 36 yamalari toplam vardır.
    2. Resist 10 için geliştirici çözüm 4 inç silikon gofret çeker tarafından geliştirmek s ve kuru havada gofret icar.
    3. Nikel, bakır veya alüminyum gibi bir metal tohum tabakası üzerinde silikon gofret Kasası.
    4. Bir nikel sulfamate banyoda bir kaplama sisteminde gofret electroplate. İki adımda galvanik dışarı taşımak. İlk adımda, kalıcı 95 dk, 0.7 A dm−2akım yoğunluğu kullanın; Bu tamamen nanopatterns nikel ile doldurur. İkinci adımda, 12 A dm−2 son nikel kalıp kalınlığı olarak 300 µm ulaşmak için kullanın 125 dk süren (20 mil). PH değeri 3.5-3,8 Bu ve sıcaklık 52-54 ° C'de olduğundan emin olun
    5. Nikel kalıp silikon substrat nazik mekanik kuvvet uygulayarak ayırın. Nikel kalıp 100 ml e-beam resist gelen kalıntı silsin için olumlu fotorezist kaldırma reaktif gecede emmek.
    6. Nikel kalıp fırın içine ve kuru yem bu 3 h. için 100 ° C'de temizlerim O2 gaz 10 sccm adlı ve 100 W 3 dk ile aşındırma bir plazma.
  2. Altın nanostructure imalatı
    1. Heptadecafluoro-1,1,2,2-tetrahydrodecyl trichlorosilane (FDTS) 150 µL nikel kalıp içinde kat bir kendinden montajlı monolayer (SAM) kaplama Makinası 80 ° C'de
      Not: Bu nanoimprinting adım tamamlanmasından sonra kalıp ayrılması ("demolding") fotorezist sağlayacak bir anti-yapışkan tabaka oluşturacak. Vaporizing zaman 180 olmalıdır s ve reaksiyon süresi-meli var olmak 900 s.
    2. Bir 4 - in fotoğraf tedavi edilebilir NIL bir 300 nm-kalın tabaka ile kaplanmış cam gofret karşı bir nano-imprinter bir basınç 10 Bar ve 40 ° C sıcaklık 10 dakikadır kullanma üstünde nanopatterns Künye.
    3. Kalıp, fotorezist ve cam gofret bir UV ışık sistemi ve photocure 30 için UV Işınlarına maruz kalma, 75 mW cm-2 ile kür transfer s.
      Not: tüm adımları doğru izlenmişse, nikel kalıp kolayca fotorezist demolded.
    4. Bir reaktif iyon fotorezist boş bir etch 50 W 2 için 10 sccm bir O2 gaz akışı ile cam alt katman üzerinde gerçekleştirmek (RIE) sistemi, aşındırma s cam girintili alanlarda ortaya çıkarmak için.
    5. Bir elektron ışını ifade makine cam gofret mevduat krom (Cr) metal yapışma için 5 nm-kalın tabakası ve altın (Au) Plazmonik sensör için 100-nm tabakası. 1 bir ifade hızını kullanın, Cr ve 2 için Å s– 1 Au için Å s– 1 .
    6. Fotorezist kalkış O2 plazma 3 dk aseton 15-s sonification algılama adımda takip için aşındırma yerine getirilir.
    7. Örnek 5 mm × 5 mm fiş içine zar. Nanohole dizi Merkezi 2 mm × 2 mm çipin yer alacak.
  3. Veri alma
    1. Cihazı kadar fiber optik verici sonuna doğru çıkarken beyaz ışık demeti collimated ve 90 ° (nanohole dizi) sensör yüzeyinde olay olacak optik ölçümler için ayarlayın.
      Not: Işık bütün nanohole dizi aracılığıyla iletilir.
    2. Fiber optik alıcı ile iletilen sinyal toplamak ve 300-1000 aralığında çalışma UV-görünür bir Spektrometre ile kayıt nm.
    3. Her çerçeve için satın alma zaman gürültü ölçümleri düşürmek için son spektrum elde etmek için 20 Bayan ortalama 100 kare için ayarlayın.
    4. Çizim yazılımı (Lorentz tabanlı yöntemi kullanma) önceden tanımlanan iletim tepeler üzerinde temel verileri çözümlemek için kullanın.

2. sensör toplu duyarlılık testi

  1. RI 1,31 1,39 için değişen sıvı hücre içine standart RI sıvı Kasası.
  2. Standart RI sıvı sensör yongasında bırakın ve beyaz ışık demeti ile hizalayın. İletim spektrum elde edilir.
  3. Sonra bir yüzey-aktif maddeler temizlik reaktif her ölçüm sensörü çip temiz ve azot gazı ile kuru.

3. sensör yüzey modifikasyonu

  1. Herhangi bir kimyasal değişiklik öncesinde, sensör cips sıralı daldırma isopropanol, aseton ve deiyonize suyla temizleyin. Kuru Kuru azot gazı akışı içinde oda sıcaklığında.
  2. Sensör cips 0.4 mM 10-carboxy-1-decanethiol ve 1,6 mM 1-octanethiol oda sıcaklığında 12 h için ethanolic bir çözüm kuluçkaya.
    Not: Bu bir amin-reaktif kendinden montajlı oluşturacak monolayer (SAM).
  3. Iyice durulayınız ve oda sıcaklığında kuru için etanol kullanın.
  4. 75 mM sulfo-N-hydroxysuccinimide (sulfo-NHS) ve 15 mM 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (EDC) karışımı olun. Bu karışımı 15 dakika cips bırakın.
    Not: Bu SAM karboksilik grubu devreye giriyor.
  5. 50 µL sensör yüzeyinde bir pH 4.5 asetat arabelleğinde yapılan 200 µg/mL Anti-troponin antikor çözüm spot ve 30 dk için kuluçkaya.
  6. Unreacted esterleri 1 M etanolamin-HCl çözüm 15dk için sensör yongasında çeker tarafından devre dışı bırakın.
  7. Çip deiyonize suyla durulayın ve kuru azot gazı oda sıcaklığında bir akıştaki kuru.

4. cTnI tahlil

  1. Herhangi bir non-spesifik bağlama tarafından tespit 100 µL % 1 sığır serum albumin (BSA) çözüm yüzeyine engelleyin.
15 dakikadır kuluçkaya.
  • Sensör cips fosfat tamponlu tuz (PBS) çözüm içinde üç kez yıkayın. Çip iletim spektrum kaydetmek için ölçüm hücresine yerleştirin.
    Not: Bu başvuru spektrum olduğunu.
  • CTnI çip yüzeye standart 50 µL spot ve 30 dk için nemli bir ortamda kuluçkaya.
  • Sensör cips üç kez PBS çözümde durulayın ve iletim spektrum kaydetmek için ölçüm hücresine ekleyin.
    Not: Bu sonrası bağlama spektrum olduğunu.
  • 50 mM glisin-HCl (pH 2) 1 dk. için fiş daldırın ve PBS çözümde çip yüzey yeniden oluşturmak için üç kez yıkayın. Yeniden oluşturma işlemi adım başarısını doğrulamak için PBS iletim spektrumunda ölçmek.

    • 5. yüzey Plasmon rezonans (SPR) ölçüm

    1. Çoğaltılmış SPR sensör çip PBS-T arabellek SPR sistemiyle çalıştırın.
      Not: PBS-T arabellek bileşimi 20 mM Na-fosfat, 150 mM NaCl ve % 0.05 değil ara 20. PH 7,4 arasındadır.
    2. CTnI standart ve antikor, adım 4'te açıklandığı gibi kullanın.
    3. 3 EDC (0.2 M) ve sulfo-NHS (0,05 M) 5 dk. gerçekleştir 50 µg/mL antikor 560 bir 5 dk enjeksiyon karışımı ve 5-dak enjeksiyon 1 M etanolamin-HCl bir çözüm ile 6 kullanılabilir kanal dışarı etkinleştirin.
    4. Sensör çip 90 ° Döndür ve cTnI standartları farklı konsantrasyonlarda enjekte (75, 30, 7.5 ve 2.5 ng/mL).
    5. Çip SPR okuma ile gerçek zamanlı etkileşim antikor noktalar için konjugasyon gözlemlemek.
    6. Çip 50 mM glisin-HCl (pH 2) 1 dk. için enjekte edilerek yeniden.

    Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

    Sonuçlar

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    Çekici ölçüm için optik kurulum şekil 1Aile gösterilir. Gerçek nanohole dizi görüntüsünü şekil 1Badımında verilir. Algılama işlemi sürüş fiziği anlamak için COMSOL simülasyon yazılımı Plazmonik alan bir sulu ortamda dağıtımını benzetimini yapmak için kullanıldı. Simülasyon sonuçlarından sonra gerçek ölçümle ilgili. Daha önce yayımlanmış bir çalışma yapılmış varsayımlar ve simülasyon11,

    Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

    Tartışma

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    Olay ışık ve taşınımı arasındaki etkileşimi simüle olan shift analit konsantrasyonu bir fonksiyonu olarak kaydedilebilir uygun tepe (iletim spektrum) içinde tanımlamak olanaklı kılan. Yerelleştirme ile ilgili sensör yapısını gruplarından olan üst karakter-ebilmek var olmak izci analit anlamaya doğru grup seçimi için çok önemli olduğunu unutmamak gerekir. Görselleştirme simülasyonlar elde edilebilir. Bu da analitler biosensing sağlar optimum bir yapı tasarımı için önemlidir. Burada, ben ve III cam-altın arabirim üzerinde ...

    Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

    Açıklamalar

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    Yazarlar hiçbir rakip mali ilgi alanlarına sahip.

    Teşekkürler

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    AP Prof T Venkatesan, yönetmen, NUS Nanobilim ve nanoteknoloji girişimi ve Office Yardımcısı Başkan (Singapur Ulusal Üniversitesi) (R-398-000-084-646) desteğiyle kabul eder. Suç araştırma departmanı Singapur Bakanlığı, sağlık Milli Tıbbi Araştırma Konseyi onun klinisyen bilim adamı finansman programı kapsamında, NMRC/CSA/035/2012 ve Singapur Ulusal Üniversitesi destek kabul eder. Fon çalışma tasarım, veri toplama ve analizi, yayımlamaya karar veya el yazması hazırlanması herhangi bir rolü yoktu.

    Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

    Malzemeler

    Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
    AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
    Elektron Işını Litografi kurulumuElionix ELS 700
    o-KsilenSigma Aldrich95662
    EB direnciSumitomoNEB-22A2
    Geliştirici reaktifiShipley CompanyMicroposit MF 321
    Galvanik makinesiTechnotrans AG RD 50
    Fotorezist sıyırıcı Rohm ve Haas Elektronik Malzemeler  LLCMikropozit Sökücü 1165
    Aşındırma SistemiTrion Fantom
    Heptadekafloro-1,1,2,2-tetrahidrodesil) triklorosilan ve nbsp;Gelest (PA, ABD)78560-44-8
    SAM kaplayıcı Sorona A.Ş.AVC 150M
    Fotoğrafla sertleştirilebilir NIL resistmicro resist technology GmbHmr-UVCur21-300nm
    Işıkla Kürleme SistemiDymax Model 2000 Flood
    E-beam biriktirme makinesiDenton Explorer
    UV-görünür spektrometre Ocean optic HR2000+ (Dunedin, FL, ABD)
    Standart kırılma indisi sıvıları Cargill Inc (Cedar Grove, ABD)18032
    Çizim yazılımıOriginOrigin Pro 9
    10-karboksi-1-dekanatiol Dojindo Laboratuvarları (Japonya)C385-10
    1-oktanetiyol Sigma-Aldrich, MO, ABD471386
    Sülfo-N-hidroksisüksinimid ve 1-etil-3- (3-dimetilaminopropil) karbodiimid &BioRad (CA, ABD)1762410
    Anti-troponin antikoru 560Hytest (Finlandiya)4T21
    Etanolamin-HCl çözeltisiBioRad (CA, ABD)1762450
    Yüzey Plazmon Rezonans kurulumuBioRad XPR36 (Hayfa, İsrail)
    Çoğullanmış SPR çipiBioRadGLC
    İnsan cTnI standardıPhoenix FarmasötiklerEK -311-05
    Glisin-HClBioRad (CA, ABD)1762221

    Kaynaklar

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
    1. Ebbesen, T. W., Lezec, H. J., Ghaemi, H., Thio, T., Wolff, P. Extraordinary optical transmission through sub-wavelength hole arrays. Nature. 391 (6668), 667-669 (1998).
    2. Krishnan, A., et al. Evanescently coupled resonance in surface plasmon enhanced transmission. Optics Comm. 200 (1), 1-7 (2001).
    3. Yang, J. -C., et al. Enhanced optical transmission mediated by localized plasmons in anisotropic, three-dimensional nanohole arrays. Nano letters. 10 (8), 3173-3178 (2010).
    4. Kim, J. H., Moyer, P. J. Transmission characteristics of metallic equilateral triangular nanohole arrays. Appl Phys Lett. 89 (12), 121106(2006).
    5. Liu, H., Lalanne, P. Microscopic theory of the extraordinary optical transmission. Nature. 452 (7188), 728-731 (2008).
    6. Shon, Y. -S., Choi, H. Y., Guerrero, M. S., Kwon, C. Preparation of nanostructured film arrays for transmission localized surface plasmon sensing. Plasmonics. 4 (2), 95-105 (2009).
    7. Xiang, G., Zhang, N., Zhou, X. Localized surface plasmon resonance biosensing with large area of gold nanoholes fabricated by nanosphere lithography. Nanoscale Res Lett. 5 (5), 818(2010).
    8. Valsecchi, C., Brolo, A. G. Periodic metallic nanostructures as plasmonic chemical sensors. Langmuir. 29 (19), 5638-5649 (2013).
    9. Gates, B. D., et al. New approaches to nanofabrication: molding, printing, and other techniques. Chem Rev. 105 (4), 1171-1196 (2005).
    10. Guo, L. J. Nanoimprint lithography: methods and material requirements. Adv Mater. 19 (4), 495-513 (2007).
    11. Wong, T. I., et al. High throughput and high yield nanofabrication of precisely designed gold nanohole arrays for fluorescence enhanced detection of biomarkers. Lab on a Chip. 13 (12), 2405-2413 (2013).
    12. Deng, J., Wong, T. I., Sun, L. L., Quan, C., Zhou, X. Acceleration of e-beam lithography by minimized resist exposure for large scale nanofabrication. Microelect Eng. 166, 31-38 (2016).
    13. Wu, L., Bai, P., Li, E. P. Designing surface plasmon resonance of subwavelength hole arrays by studying absorption. JOSA B. 29 (4), 521-528 (2012).
    14. Ding, T., et al. Quantification of a cardiac biomarker in human serum using extraordinary optical transmission (EOT). PloS one. 10 (3), 0120974(2015).
    15. Im, H., Sutherland, J. N., Maynard, J. A., Oh, S. -H. Nanohole-based surface plasmon resonance instruments with improved spectral resolution quantify a broad range of antibody-ligand binding kinetics. Anal Chem. 84 (4), 1941-1947 (2012).
    16. Bhagawati, M., You, C., Piehler, J. Quantitative real-time imaging of protein-protein interactions by LSPR detection with micropatterned gold nanoparticles. Anal Chem. 85 (20), 9564-9571 (2013).

    Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

    Yeniden basım ve izinler

    Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

    İzin iste

    Etiketler

    Nano bask litografisilokalize y zey plazmon rezonansinsan serumu tespitibiyosens r retimitroponin tespitihasta ba alg lamaoptik iletim l my zey plazmon rezonans

    İlgili makaleler