Yöntem makalesi

Doku Mühendisliği vaskülarizasyon Birimleri olarak Kemirgen Yağ Dokusu kaynaklı Mikrovasküler Parçalarının İzolasyonu

DOI:

10.3791/55721

⸱

30 Nisan 2017

 ,  ,  ,  , 
1Institute for Clinical and Experimental Surgery, Saarland University, 2Division of Plastic Surgery and Hand Surgery, University Hospital Zurich, University of Zurich

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu umut verici vaskülarizasyon birimlerini temsil adipoz doku türevli mikrovasküler fragmanları izole etmek için bir protokol mevcut. Bunlar hızlı bir şekilde izole edilebilir, bu nedenle, doku mühendisliği farklı alanlarında tek aşamalı prevascularization için kullanılabilmektedir, nitro işleme gerektirmez ve yoktur.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fonksiyonel bir mikrovasküler ağ hayatta kalma ve mühendislik doku yapıları entegrasyonu için önemli bir önem taşımaktadır. Bu amaçla, çeşitli anjiyogenik ve prevascularization stratejileri kurulmuştur. Bununla birlikte, bir çok hücre-bazlı yaklaşımlar mikrovasküler ağı oluşumu için zaman alıcı, in vitro aşamaları içermektedir. Bu nedenle, bu operasyon sırasında tek aşamalı yöntemler için uygun değildir. Adipoz doku türevli mikrovasküler fragmanları (reklam MVF) umut vadeden vaskülarizasyon birimini temsil eder. Kolayca yağ dokusundan izole edilmiş ve bir işlevsel mikrodamar morfoloji sergiler edilebilir. Dahası, hızla in vivo implantasyonu sonrası yeni mikrovasküler ağlara yeniden birleştirmek. Ayrıca, reklam-MVF lemfanjiojenezi neden olduğu gösterilmiştir. Son olarak, daha da yüksek vaskülarizasyon etkisine de katkıda mezenkimal kök hücrelerin zengin bir kaynaktır. Daha önceki çalışmalarda biz olağanüstü vascularizati göstermiştirmühendislik kemik ve cilt ikame reklam-mvf kapasitesine. Bu çalışmada, biz fare yağ dokusundan reklam mvf enzimatik izolasyonu için standart bir protokol rapor.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Doku mühendisliği, in vivo meslektaşları 1, 2 çalışamaz işlevini geri ya da takviye iddia ettikleri doku ve organ ikamelerinin üretim odaklanmaktadır. Mühendislik doku yapıları kaderi önemlisi yeterli vaskülarizasyon 3 bağlıdır. Bu yapılara içinde Mikrovasküler ağlar hiyerarşik alıcının damarsal 4'e kaynaştırma sonra verimli kan perfüzyonunu sağlamak için Arterioller, kapiller ve venüllerden ile düzenlenmelidir. Bu tür ağların nesil doku mühendisliğinde temel zorluklardan biridir. Bu amaçla, deneysel vaskülarizasyon stratejileri geniş spektrumlu son yirmi yılda 5, 6 üzerinde tanıtıldı.

Anjiojenik yaklaşımlar mühendislik Tiss içine alıcı mikrodamarlar içeri büyümesini teşvikBu tür büyüme dahil 7 faktörleri olarak yapısal ya da fiziko-kimyasal iskele modifikasyonu vasıtasıyla evet. Bununla birlikte, büyük bir üç boyutlu yapıları vaskülarizasyonu için, anjiyogenez-bağımlı stratejiler belirgin mikrodamarlar gelişmekte olan 8 yavaş büyüme oranları ile sınırlıdır.

Doku yerlefltirilifl 9 öncesinde inşa dahilinde aksine, prevascularization kavramı fonksiyonel mikrovasküler ağların nesil için hedefliyor. Geleneksel prevascularization bu iskeleler olan endotel hücreleri, duvar hücreleri veya kök hücreler 10 gibi kap oluşturan hücre, ko-kültür içerir. mikrovasküler ağ oluşturulduktan sonra prevascularized yapıları daha sonra doku defektlerinin implante edilebilir. Karmaşık ve zaman alıcı in vitro temel aldığı için dikkate değer, bu prevascularization yaklaşım, klinik ortamda uygulamak zordur </ em> önemli düzenleyici engeller 9 kısıtlandığı prosedürleri,. Bu duruma göre, geniş bir klinik uygulama için daha müsait olan yeni prevascularization stratejilerinin geliştirilmesi için hala bir ihtiyaç vardır.

Bu tür bir prevascularization stratejisi adipoz doku türevli mikrovasküler parçalarının (reklam MVF) uygulanması olabilir. Reklam-MVF sıçanlarda 11, 12 ve fareler 13 yağ dokusundan büyük miktarlarda hasat edilebilir kuvvetli vaskülarizasyon birimini temsil eder. Bunlar arteriyoler, kapiler ve bir lümen içeren bir fizyolojik mikrodamar morfolojisi sergileyen venüler damar bölümü ve stabilize edici perivasküler hücreleri 14, 15 oluşmaktadır. Bu benzersiz özellik Bakterinin yetişmesinden önceki süreye olmadan doku defektleri içine reklam MVF seribaşı iskelelerinin hemen implantasyonu verir. Orada, ad-MVF hızla içinde yeniden birleştirmekFonksiyonel mikrovasküler ağlara. Ayrıca, reklam MVF ilave olarak kendi çarpıcı rejeneratif kapasitesine katkıda mezenkimal kök hücrelerin 16, zengin bir kaynak oluşturmaktadır. Buna uygun olarak, reklam MVF artan doku mühendisliği 14, 15, 17, 18, 19, 20, 21 farklı alanlarında kullanılmaktadır.

Ad-mvf izolasyonu aslen 12 sıçanlarda 11 kurulmuştur. Bu yazıda, epididimal yağ pedleri gelen fare reklam mvf standardize izolasyonunu sağlayan bir protokol, açıklar. Bu transgenik fare modelleri kullanılarak reklam MVF fonksiyonu altında yatan moleküler mekanizmaların daha başka bilgi sağlayabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm prosedürler deney hayvanlarının kullanımı için Sağlık kılavuzların Ulusal Enstitüsü göre gerçekleştirilmiştir ve kurumsal yönergelere (Landesamt für Soziales, Gesundheit und Verbraucherschutz Abt. Lebensmittel- und Veterinär-, Zentralstelle, Saarbrücken, Almanya) izledi.

Cerrahi Araçların hazırlanması 1.

  1. % 10 fetal dana serumu (FCS), 100 U / mL penisilin, 0.1 mg / mL streptomisin, hazır diseksiyon makas, cerrahi forseps, küçük hazırlama makas, ince forseps ve 15 ml Dulbecco'nun modifiye edilmiş Eagle ortamında (DMEM ile steril bir Petri kabı tutmak ) epididimal yağ yastıkları hasat için.
  2. 5 dakika için dezenfekte edici bir çözeltisine cerrahi aletleri Açığa. Seçenek olarak ise, (buhar sterilizasyonu, 121 ° C, 20 dakika) sterilize.

2. Hayvanlar ve Anestezi

  1. çalışma ve için belirtildiği gibi dikkatle farelerin zorlanma seç soruşturma altında konu.
    NOT: Bu çalışmada epididimal yağ hasat için donör olarak erkek vahşi tip C57BL / 6 fareler kullanıldı. Ilgi konusu olan, reklam MVF aynı zamanda transjenik yeşil floresan protein (GFP) pozitif ve donor hayvandan (C57BL / 6-Tg (CAG EGFP) 1Osb / J) 22 izole edilebilir. Bu fragmanlar, GFP-negatif yabani tip farelere 14 implantasyon sonrası GFP immünohistokimyasal boyama ile kolayca tespit edilebilir olan büyük bir avantaj taşımaktadır.
  2. ksilazin (15 mg / kg) ve ketamin (75 mg / kg) intraperitonal enjeksiyonu ile hayvanlar anestezisi. hayvanlar derinden hiçbir yanıt ile bir ayak parmağı tutam yaparak anestezi emin olun. verici hayvanlar yağ hasattan sonra öldürülür olarak göz yağ belirtilmemektedir.
    NOT: analjezi ve cerrahi sterilite deneyleri planlanan ülke ve kurumun ilgili kurallarına uyum içindedir emin olun.
Epididimal Yağ Pads le "> 3. Hasat

  1. Bir işlem tabloya hayvan aktarın. Cerrahi bir stereomikroskop altında yatar pozisyonda hayvan koyun ve ayak Tutam kullanarak derin anestezi onaylayın.
  2. Bir cerrahi kumaş bantla yapıştırılarak pençelerini hareketsizleştiriniz ve çözüm dezenfekte ile karın dezenfekte.
  3. diseksiyon makas ile altta yatan kas tabakasının serbest karın cildi ayırın.
  4. diseksiyon makas ile orta hat laparotomi ve yanal olarak karın duvarı kanatlarını açığa.
  5. Bilateral testis, epididimis ve ince forseps (Şekil 1) kullanılarak epididimal yağ pedi tanımlar. Yağ yastıklarının dışkı bulaşmasını önlemek için bağırsak yapıları zarar vermeyin.
  6. stereomikroskop altında küçük hazırlık makas ve ince forseps ile epididimal yağ yastıkları Hasat. Epididim ve yağ arasında birkaç mm'lik bir emniyet marjı tutunKazara epididimal hasat riskini azaltır.
    NOT: Bu prosedür ayrıca bir stereo olmadan gerçekleştirilebilir. Ancak, bu daha da epididim ve spermatik kord kazara yaralanma riskini artırabilir.
  7. DMEM 15 mL içeren bir Petri kutusu içine epididimal yağ pedleri transfer hücre laboratuara taşınması için 37 ° C sıcaklıkta önceden ısıtılır.
  8. abdominal aort ya da servikal bozma çizilmesi ile hayvan kurban.

ad-mvf 4. İzolasyonu

  1. 15, fosfat tamponlu tuzlu su mL (PBS), steril bir 14-ml polipropilen (PP) tüpler, steril bir 50 ml Erlenmeyer şişesinde, steril 1.5 mL konik mikrosantrifüj tüpleri ve sterilize ince makas üç steril Petri kapları hazırlayın.
  2. bir laminar akış başlığı altında 15 ml PBS ile üç kere Petri tabaklarında yağ pedlerine yıkayın.
  3. 14 mL'lik bir PP tüpe yağ aktarın. t vasıtasıyla (mL) toplandı yağ dokusu hacminin belirlenmesio boru ölçeği. homojen bir doku süspansiyon elde edilene kadar ince makas mekanik yağ dokusunu inceltmek.
  4. pipet ölçüm 10 mL vasıtasıyla 50 mL'lik bir Erlenmeyer şişesi içine kollajenaz NB4G (0.5 U / ml PBS) iki hacim ile kıyılmış doku aktarın. Toplam hacim adım 4.3 'de ölçülen yağ dokusu hacim üç kez olur. 37 ° C'de ve% 5 CO2 ile nemlendirilmiş atmosfer koşullarına: Otomatik bir karıştırıcı (25 mm Manyetik bir karıştırma çubuğuna boyutu) ile kuvvetli karıştırma altında 10 dakika için bir kuluçka makinesi içinde doku sindirim gerçekleştirin.
  5. sindirim durdurulabilir olmadığını yargılama mikroskop altında sindirilmiş doku küçük bir bölümünü (10 uL) dikkate alınmalıdır. Enzimatik sindirim olan (Şekil 2) durdurmak için uygun noktayı gösteren Digestate esas olarak aşağıdaki tek hücre "serbest" ad-MVF içerdiğini teyit edin.
    NOT: Bu adım prosedürü ile tecrübe gerektirir ve kalite için kritiktirreklam-MVF izole edilmiştir. ad-mvf olmadan tek hücreli süspansiyon yağ sindirimi sonucu uzun süre.
  6. PBS /% 20 FCS iki hacim enzim nötralize. Toplam hacim aşama 4.4'te hücre-damar süspansiyonu hacmi üç kez olur. Yeni PP tüpler içine arka cep damar süspansiyon aktarın.
  7. yerçekimi ile yağ kalan reklam-MVF ayırmak için 37 ° C de 5 dakika süre ile süspansiyon inkübe edin. Daha sonra dikkatli bir şekilde 1 mL hassas pipet ile ana yağ süpernatant kaldırmak. Süspansiyon yağsız olması görünene kadar 100 mcL hassas pipet ile bu döngüyü birkaç kez tekrarlayın.
  8. 50 ml konik santrifüj tüpüne üstüne bir 500 um filtre koyun. yağ pıhtıları kalan çıkarmak için filtre zarı üzerine 14 ml PP tüpler 10 ml ölçüm pipet ile hücre-damar süspansiyon aktarın. tek reklam-MVF sayısına göre yeni bir 14-ml PP tüplere süzüldü süspansiyon aktarın planlanan deneyler için izole eder.
    NOT: İn vitrmikrovasküler ağı oluşumu odaklanan O deneyleri, ayrıca mikroskopik analiz sırasında görüntüleme kalitesini artırmak için, hücre-damar süspansiyonu saflaştırmak için yararlı olabilir. Bu amaç için, süspansiyon ek olarak, filtre üzerinde toplanan reklam MVF gelen tek hücreleri çıkarmak için, bir 20-mikron filtre ile bir kez filtrelenebilir.
  9. Reklam-MVF ihtiva eden bir pelet elde etmek için, hücre-damar süspansiyonu (600 x g, 5 dakika, oda sıcaklığı) santrifüjleyin.
  10. Santrifüj işleminden sonra, ml bırakılır 1 kadar supernatant çıkarın. Bu 1 mL reklam MVF ile pelet yeniden süspanse edin ve 1.5 ml konik bir mikrosantrifüj tüpü içine süspansiyon aktarın.
  11. bir pelet elde etmek için bir mikrosantrifüj tüpü içinde bir reklam-MVF süspansiyonu (600 x g, 5 dakika) santrifüj.
  12. PBS /% 20 FCS gereken son hacmine pelet yeniden askıya almak için süpernatantı.
    NOT: izolatı başına reklam mvf sayısının mikroskobik sayımı ile tespit edilebilir. Nihai hücre vesse bu amaçla, 1/10 İçinl süspansiyonu PBS içinde 1:10 seyreltilir ve bu seyreltme 100 uL, 96 oyuklu bir plaka iyi aktarılır. bir kap benzeri morfolojisi sergileyen reklam MVF tüm sayı daha sonra sayılmış ve bütün izolat için ekstrapole edilir. Gerekli reklam-MVF Konsantrasyon ve saflaştırma tek in vitro veya reklam MVF in vivo uygulamada ilgili uyarlanabilir. Bu mikrovasküler ağ oluşumunun in vitro analizi veya doku defektlerinin içine in vivo implantasyonu için iskeleler reklam-MVF tohumlanmasından kolojen jeller reklam-MVF gömülmesini içerebilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada, 12 aylık erkek, vahşi tip C57BL / 6 farelerinin (: 35 ± 1 g vücut ağırlığı ortalaması) 7- yağ dokusu ile altı reklam-MVF izolasyon prosedürleri gerçekleştirildi. Şekil 1, daha sonra, mekanik ve enzimatik reklam-MVF yalıtımlı murin epididimal yağ pedleri hasat göstermektedir. yağ toplama için gereken süre 30 dakika olmuştur ve reklam MVF izolasyonu için 120 dakika idi. Toplam olarak, prosedür, 150 dakika sürdü.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada reklam mvf izolasyonu için köklü bir protokol mevcut. fare adipoz dokudan reklam MVF edinme birkaç kritik adımlarla basit bir işlemdir. Fareler farklı subkutanöz ve karın içi yağ birikintilerini sergiler. Daha önce fareler için tarif edildiği gibi, reklam MVF izolasyonu için en uygun yağ kaynağı, daha büyük kan damarlarının 11 ile boyut, homojen bir yapı ve en az kirlenme, 12 epididimal yağ pedleri. Bunun aksine, farelerde subkütan yağ tortularının ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz Janine Becker, Caroline Bickelmann ve Ruth Nickels mükemmel teknik yardım için teşekkür ederiz. (- Alman Araştırma Vakfı DFG) - LA 2682 / 7-1 Bu çalışma, Deutsche Forschungsgemeinschaft hibe ile finanse edildi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1.5 mL konik mikrosantrifüj tüpüVWR, Kelsterbach, Almanya700-5239
100-&mikro; L hassas pipetEppendorf, Hamburg, Almanya4920000059
10 mL ölçüm pipetiCostar, Corning Inc., New York, ABD4488
14 mL PP tüplerGreiner bio-one, Frickenhausen, Almanya187261
1 mL hassas pipetEppendorf, Hamburg, Almanya4920000083
500-&mikro; m filtre (pluriStrainer 500 & mikro; m)HISS Teşhis, Freiburg, Almanya43-50500-03
50 mL konik santrifüj tüpüGreiner bio-one, Frickenhausen, Almanya227261
50 mL Erlenmeyer şişesiVWR, Kelsterbach, Almanya214-0211
96 oyuklu plakaGreiner bio-one, Frickenhausen, Almanya65518
hücre ayırma çözeltisi (Accutase)eBioscience, San Diego, CA ABD00-4555-56
C57BL/6 farelerCharles River, Köln, Almanya027
C57BL/6-Tg(CAG-EGFP)1Osb/J farelerJackson Laboratuvarı, Bar Harbor, ABD003291
CD117-FITCBD Biosciences, Heidelberg, Almanya553373
CD31-PEBD Biosciences, Heidelberg, Almanya553354
Kollajenaz NB4G Serva Electrophoresis GmbH, Heidelberg, Almanya17465.02Lot enzimatik aktivite açısından üretici tarafından test edilmiştir
Diseksiyon makasıBraun Aesculap AG & CoKG, Melsungen, AlmanyaBC 601
DNA bağlayıcı boya (Bisbenzimide H33342)Sigma-Aldrich, Taufkirchen, AlmanyaB2261
Dulbecco'nun modifiye Eagle ortamı (DMEM) PAN Biotech, Rickenbach, AlmanyaP04-03600
Fetal buzağı serumu (FCS)Biochrom GmbH, Berlin, AlmanyaS0615
İnce forsepsS & T AG, Neuhausen, İsviçreFRS-15 RM-8
İnce makasWorld Precision Instrumets, Sarasota, FL, ABD503261
Dermal cilt ikamesi (Integra)Integra Life Sciences, Sain Priest, Fransa62021
Ketamin ve nbsp;Serumwerk Bernburg AG, Bernburg, Almanya7005294
M-IgG2akAL488   eBioscience, San Diego, CA USA53-4724-80
Octeniderm (dezenfeksiyon solüsyonu)Schü lke & Mayer, Norderstedt, Almanya118211
Penisilin / StreptomisinBiochrom, Berlin, AlmanyaA2213
Petri kabıGreiner bio-one, Frickenhausen, Almanya664160
Fosfat tamponlu salin (PBS)Lonza Group, Basel, İsviçre17-516F
pluriSüzgeç 20-&mikro; m (20 & mikro; m filtresi)HISS Diagnostics, Freiburg, Almanya43-50020-03
Rat-IgG2akFITCBD Biosciences, Heidelberg, Almanya553988
Rat-IgG2akPEBD Biosciences, Heidelberg, Almanya553930
Küçük hazırlama makasıS& T AG, Neuhausen, İsviçreSDC-15 R-8S
Cerrahi forsepsBraun Aesculap AG & CoKG, Melsungen, AlmanyaBD510R
Bant (Heftpflaster Seide) 1.25 cmFink & Walter GmbH, Mechweiler, Almanya1671801
Ksilazin Bayer Vital GmbH, Leverkusen, Almanya1320422
α-SMA-AL488eBioscience, San Diego, CA ABD53-9760-82Hücre içi etiketleme ayrıca Cytofix/Cytoperm gerektirir (BD Biosciences, Heidelberg, Almanya; #554722)

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Langer, R., Vacanti, J. P. Tissue engineering. Science. 260 (5110), 920-926 (1993).
  2. Khademhosseini, A., Langer, R. A decade of progress in tissue engineering. Nat Protoc. 11 (10), 1775-1781 (2016).
  3. Novosel, E. C., Kleinhans, C., Kluger, P. J. Vascularization is the key challenge in tissue engineering. Adv Drug Deliv Rev. 63 (4-5), 300-311 (2011).
  4. Rouwkema, J., Khademhosseini, A. Vascularization and Angiogenesis in Tissue Engineering: Beyond Creating Static Networks. Trends Biotechnol. 34 (9), 733-745 (2016).
  5. Laschke, M. W., Menger, M. D. Vascularization in tissue engineering: angiogenesis versus inosculation. Eur Surg Res. 48 (2), 85-92 (2012).
  6. Sarker, M., Chen, X. B., Schreyer, D. J. Experimental approaches to vascularisation within tissue engineering constructs. J Biomater Sci Polym Ed. 26 (12), 683-734 (2015).
  7. Frueh, F. S., Menger, M. D., Lindenblatt, N., Giovanoli, P., Laschke, M. W. Current and emerging vascularization strategies in skin tissue engineering. Crit Rev Biotechnol. 20, 1-13 (2016).
  8. Utzinger, U., Baggett, B., Weiss, J. A., Hoying, J. B., Edgar, L. T. Large-scale time series microscopy of neovessel growth during angiogenesis. Angiogenesis. 18 (3), 219-232 (2015).
  9. Laschke, M. W., Menger, M. D. Prevascularization in tissue engineering: Current concepts and future directions. Biotechnol Adv. 34 (2), 112-121 (2016).
  10. Baiguera, S., Ribatti, D. Endothelialization approaches for viable engineered tissues. Angiogenesis. 16 (1), 1-14 (2013).
  11. Wagner, R. C., Kreiner, P., Barrnett, R. J., Bitensky, M. W. Biochemical characterization and cytochemical localization of a catecholamine-sensitive adenylate cyclase in isolated capillary endothelium. Proc Natl Acad Sci U S A. 69 (11), 3175-3179 (1972).
  12. Wagner, R. C., Matthews, M. A. The isolation and culture of capillary endothelium from epididymal fat. Microvasc Res. 10 (3), 286-297 (1975).
  13. Laschke, M. W., Menger, M. D. Adipose tissue-derived microvascular fragments: natural vascularization units for regenerative medicine. Trends Biotechnol. 33 (8), 442-448 (2015).
  14. Laschke, M. W., et al. Vascularisation of porous scaffolds is improved by incorporation of adipose tissue-derived microvascular fragments. Eur Cell Mater. 24, 266-277 (2012).
  15. Frueh, F. S., et al. Adipose tissue-derived microvascular fragments improve vascularization, lymphangiogenesis and integration of dermal skin substitutes. J Invest Dermatol. 137 (1), 217-227 (2017).
  16. McDaniel, J. S., Pilia, M., Ward, C. L., Pollot, B. E., Rathbone, C. R. Characterization and multilineage potential of cells derived from isolated microvascular fragments. J Surg Res. 192 (1), 214-222 (2014).
  17. Nakano, M., et al. Effect of autotransplantation of microvessel fragments on experimental random-pattern flaps in the rat. Eur Surg Res. 30 (3), 149-160 (1998).
  18. Nakano, M., et al. Successful autotransplantation of microvessel fragments into the rat heart. Eur Surg Res. 31 (3), 240-248 (1999).
  19. Shepherd, B. R., Hoying, J. B., Williams, S. K. Microvascular transplantation after acute myocardial infarction. Tissue Eng. 13 (12), 2871-2879 (2007).
  20. Pilia, M., et al. Transplantation and perfusion of microvascular fragments in a rodent model of volumetric muscle loss injury. Eur Cell Mater. 28, 11-23 (2014).
  21. Laschke, M. W., et al. Adipose tissue-derived microvascular fragments from aged donors exhibit an impaired vascularisation capacity. Eur Cell Mater. 28, 287-298 (2015).
  22. Okabe, M., Ikawa, M., Kominami, K., Nakanishi, T., Nishimune, Y. 'Green mice' as a source of ubiquitous green cells. FEBS Lett. 407 (3), 313-319 (1997).
  23. Honek, J., et al. Modulation of age-related insulin sensitivity by VEGF-dependent vascular plasticity in adipose tissues. Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (41), 14906-14911 (2014).
  24. Cho, C. H., et al. Angiogenic role of LYVE-1-positive macrophages in adipose tissue. Circ Res. 100 (4), e47-e57 (2007).
  25. Han, S., Sun, H. M., Hwang, K. C., Kim, S. W. Adipose-Derived Stromal Vascular Fraction Cells: Update on Clinical Utility and Efficacy. Crit Rev Eukaryot Gene Expr. 25 (2), 145-152 (2015).
  26. Chen, Y. J., et al. Isolation and Differentiation of Adipose-Derived Stem Cells from Porcine Subcutaneous Adipose Tissues. J Vis Exp. (109), e53886(2016).
  27. Guillaume-Jugnot, P., et al. Autologous adipose-derived stromal vascular fraction in patients with systemic sclerosis: 12-month follow-up. Rheumatology (Oxford). 55 (2), 301-306 (2016).
  28. Tissiani, L. A., Alonso, N. A Prospective and Controlled Clinical Trial on Stromal Vascular Fraction Enriched Fat Grafts in Secondary Breast Reconstruction. Stem Cells Int. , 2636454(2016).
  29. Calcagni, M., et al. The novel treatment of SVF-enriched fat grafting for painful end-neuromas of superficial radial nerve. Microsurgery. , (2016).
  30. Hoying, J. B., Boswell, C. A., Williams, S. K. Angiogenic potential of microvessel fragments established in three-dimensional collagen gels. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 32 (7), 409-419 (1996).
  31. Kirkpatrick, N. D., Andreou, S., Hoying, J. B., Utzinger, U. Live imaging of collagen remodeling during angiogenesis. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 292 (6), H3198-H3206 (2007).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Adipoz Doku zolasyonuEnzimatik zolasyonAk SitometrisiCD31 Pozitif H crelerMezenkimal K k H crelerMurin Ya DokusuKollajenaz Sindirimi

İlgili makaleler