Bu çalışma, Güney Çin'den allerjik rinit ve / veya astımlı bir hasta grubunda ot polen allerjenlerine duyarlılığı araştırmak için bileşen çözümü yaklaşımını kullanan bir protokolü açıklamaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
* These authors contributed equally
Bu çalışma, Güney Çin'den allerjik rinit ve / veya astımlı bir hasta grubunda ot polen allerjenlerine duyarlılığı araştırmak için bileşen çözümü yaklaşımını kullanan bir protokolü açıklamaktadır.
Ot polenine duyarlılık alerjik hava yolu hastalıkları için küresel bir risk oluşturmaktadır. Önleme, polen allerjenlerinin yerel incelemesine dayanmasına rağmen, bu konudaki veriler güney Çin'de sınırlıdır. Mevcut veriler, kendi kendine anket formları, cilt prick testleri ve ham ekstraktlar kullanılarak yapılan toplam veya spesifik IgE testleri ile elde edildi. Birçok nedenle bu yöntemler güvenilmez. Allerjik rinit ve / veya astımlı Greater Guangzhou (Güney Çin'in en büyük şehri ve eteklerinde) hastalardan oluşan bir gruptaki Bermuda ot, Timothy otu ve Humulus skandens allerjenlerine karşı Serum sIgE reaktivitesi, tam otomatik immünoassay analizör kullanılarak bir bileşen olarak incelendi -arlı teşhis (CRD) aracı.
İlk defa, alerjik rinit ve / veya astımı olan Çinli güney ülkelerde Bermuda çim SEg Pozitifliği yaygınlığı oldukça yüksek gösterildi. Bu hastalarda hassas bir prevalansİkincisi bölgede yaygın olmadığından, çapraz reaktiviteden kaynaklanabilecek Timothy grass and Humulus Scandens'e de dikkat çekildi. Bu aynı zamanda alerjen bileşenlerin tespiti ile de desteklendi.
Tam otomatik immüno-analizör, bölgeler, laboratuvarlar ve kurumlar arasında ve zamanla tatmin edici bir tutarlılık sağlayabilir. Cihazın otomatikliği, CRD'nin ortaya çıkmasından önce kolaylıkla ortaya çıkarılamayacak standart bir tespiti mümkün kılabilir.
Bu, Güney Çin'de çim polen allerjenlerine duyarlılığı araştırmak için CRD yaklaşımını kullanan bir çalışmadır. Literatürdeki mevcut kanıtlara ek olarak. Bu bulguları doğrulamak için gelecek çalışmalara ihtiyaç vardır. Bununla birlikte, CRD'nin yararlı bir araç olmasına rağmen, tam otomatik immüno-analiz analizörü ile yapılan bulgular, diğer laboratuvar araştırmaları, klinik değerlendirmeler ve doktor uzmanlığının yerini almamalıdır.
Çim poleni, immunglobulin E (IgE) ile ilişkili alerjilerin yaklaşık% 50'sini oluşturur ve havadaki yapısı nedeniyle, küresel bir alerjik hava yolu hastalıkları riski, özellikle astım ve alerjik rinit 1 , 2 , 3 , 4 etkiler. Bir bölgedeki ot polen alerjilerine karşı önleme, polen allerjenlerinin yerel dağılımı hakkında bilgilere dayanır. Ne yazık ki duyarlılaştırıcı allerjenlerin spektrumu yerden yere farklılık göstermektedir - genellikle bölgesel özgüllük olarak bilinen gözlem.
Geniş bir Doğu-Asya bölgesi olan Çin'de, otlak poleni hassasiyetinin bölgesel spesifikliği, günümüzde bu ülkenin güney kesiminde son on yıl boyunca mevcut olan sınırlı verilerle karmaşıktır5. Verilerdeki bu kadar azlık, çimen poleni sensinin genel olarak gösterilmesinde bir zorluğa neden olmuşturBu büyük ülkede tazeleme 6 . Ayrıca, Çinli güney kökenli insanlar hakkındaki çok sınırlı veriler büyük oranda kendi kendini raporlama anketlerinden, cilt prick testlerinden (laboratuvar serum testlerinden ziyade), toplam IgE ölçümlerinden (alerjen spesifik IgE'den (sIgE'den ziyade)) ve alerjenlere sIgE saptamadan ( Alerjen bileşen moleküllerinden ziyade).
Alerjik belirtilerin kendi kendine bildirilmesi, spesifik alerjenler söz konusu olduğunda güvenilmez olabilir. Deri prick testleri, yaygın olarak erişilebilir olmakla birlikte, sonuçta yorumlanmayı karıştıran diğer hassaslaştırıcı bileşenleri de içerebilen standartlaştırılmamış ham allerjen ekstraktlarının kullanılmasını içerir. Cilt prick testinin güvenilirliği, alerjik uzmanların veya uzman hemşirelerin becerikli manipülasyonuna, histamin kullanımına ve hasta uyumluluğuna (bazen küçük çocuklar için çok zor) bağlıdır. Total IgE, bir alerjinin taranması için yararlıdır ancakBir hastada alerjenleri rahatsız ediyorum. Dahası, hemen hemen tüm alerjenler bir dizi alerjen bileşeni molekülü içerir. Ana bileşenlere ( yani ev tozu akarlarından Der p 1 ve Der p 2'ye duyarlılaştırma), "gerçek" bir alerji (diğer allerjenlerle çapraz reaksiyonlardan ötürü yanlış pozitiflikten ziyade spesifik bir alerjene alerji) önerebilir, ancak duyarlılaşma Bazılarına ( örn. , Çapraz reaktif Der p 10, bir tropomiyozin) 7 olamaz.
Bileşen çözülmüş teşhis (CRD) kullanılmaya başlanmadan önce hayal kırıklığı yaratan bu gerileme, Çin'deki alerjen çalışmalarını engelledi. CRD, bir alerjenin bileşenlerini, rekombinant veya saflaştırılmış alerjen molekülleri kullanarak tam olarak algılar ve böylece ölçümü kolaylıkla nicelleştirilebilir ve karakterize edilebilir hale getirir 8 . Geçtiğimiz on yıllarda, alerji çalışmaları sıklıkla, birçok alâkasız bileşen içeren kaçınılmaz olarak allerjenlerden oluşan ham özleri kullandı. Bu ortakların birçoğuDönüşçüler etkisizdir, ancak zaman zaman, bazıları karıştırıcı olumlu reaksiyonlara neden olabilir. CRD'de rekombinant veya saflaştırılmış alerjen moleküllerinin kullanılması bunun önüne geçebilir ve bu nedenle daha iyi test doğruluğu sağlayabilir. Mikrodizilerde işlendiğinde, CRD yaklaşımı bireysel kişilerde yüzlerce allerjen molekülüne duyarlılığı hızla tarar veya tanımlar. Güney Çin'de çimlerin polen duyarlılığı üzerine iyi tasarlanmış bir CRD çalışması şimdilik eksiktir. İdeal olarak, böyle bir araştırma, Çin'de yaygın olarak bildirilen çimen polenlerini açıklayan önemli bir coğrafi kapsama alanındaki yerel bir nüfusu içermeli ve yukarıda belirtilen teknik hususlara dikkat etmelidir. Pratik düzeyde klinik önemi kazanmak ve serum örneklerinin alınmasını kolaylaştırmak için, çim polenlerine karşı inhalant allerjenlere karşı duyarlılığın erken araştırılması, genel popülasyondan ziyade allerjik solunum bozukluğu olan hastalar üzerinde yoğunlaşabilir.
Bu çalışma,CRD yaklaşımını kullanarak allerjik rinit ve / veya astımı olan Büyük Guangzhou'dan (güney Çin'in en büyük şehri ve eteklerinde) hastalardaki Bermuda çimenleri, Timothy çimi ve Humulus tarikatlarına karşı serum sIgE reaktivitesini test etmek için kullanıldı. Güney Çin'deki bu subtropikal ve ılıman çimen polenlerine duyarlılık üzerine yapılan bu bulgular şu anda literatürdeki bilgiler için önemli kanıtlar sağlamaktadır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
İnsan serum numunesi kullanımı da dahil çalışma protokolü Guangzhou Tıp Üniversitesi'nin İlk Bağlı Hastanesi Etik Komitesi tarafından onaylandı. Tüm katılımcılar ya bağımsız ya da ebeveynleri aracılığıyla (çocuklarda) yazılı bilgilendirilmiş onay almayı teklif ettiler. Protokol çevrimiçi kaydedildi (Çin Klinik Araştırması Kayıt Defteri, Kayıt No: ChiCTR-DCC-13004003, http://www.chictr.org/cn/ adresine bakın).
1. Araştırmanın Nüfusunun Belirlenmesi
NOT: AIR, güney Çin'de alerjen testleri için hastaların en iyi belgelenmiş büyük veri tabanı olduğundan, Solunum Hastalığının Devlet Anahtar Laboratuvarının (AIR-SKLRD) Alerji Bilgi Deposu hastanın işe alımının birincil kaynağıdır 9,10. AIR, yaklaşık on yıldır serum örneklerini saklıyor. Kısaca, bu muhafaza edilmiş numuneler daha önce 5 mL o santrifüj3.000 xg'de 10 dakika boyunca venöz kan alınmış ve süpernatanı geri kazanmıştır. Serum örnekleri, uzun süreli depolamada -80 ° C buzdolaplarına yerleştirildi. Hasta dahil etme kriterlerini karşılayan örnekler, bu çalışmada tüm testler için kullanılmaya hazırdı.
2. Çalışma Akışı ve İlgi Alanlarının Ölçümü
3. İmmünoassay Analiz Sistemini kullanarak tam otomatik test prosedürü
NOT: Tamamen otomatik olan ve başka yerlerde 7 , 8 , 9 , 10'da tanımlanan allerjen testi prosedürünün tüm prosedürü üreticinin protokolünü izler.
4. sIgE Reaktivitesinin Tanımı
NOT: Seyreltilmemiş serum örneği için spesifik IgE ölçüm aralığı 0.35 ila 100 kU / L arasındadır.
5. İstatistiksel Analiz
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu çalışmada kullanılan tam otomatik immünoassay analiz cihazı, hastadan serum örneklerinde ilgi molekülleri (sIgE) ile reaksiyona giren kovalent bağlama alerjenleri veya alerjen bileşenleri ile kaplanmış bir katı faz yapısına sahiptir. Otomatik bir program ile, analizör, 150 uL durulama çözeltisi ile tüm spesifik olmayan IgE'leri yıkar ve bunu 5 kez tekrarlar. Ardından, bir kompleks oluşturmak için enzimle işaretlenmiş anti-IgE antikorları (50 uL) ekler. Enzim etiketli anti-IgE anti...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tam otomatik immüno-analizör, bölgeler, laboratuvarlar ve kurumlar arasında ve zamanla tatmin edici bir tutarlılık sağlayabilir. Böyle bir otomatik prosedürün büyük oranda tezgah araştırması ve klinik çalışmaları desteklediği, pek çok allerjen ve / veya alerjen bileşeninin standartlaştırılmış tespitini mümkün kıldığı ve muhtemel alerjen çapraz reaktivitesini, CRD'lerin gelmesinden önce kolaylıkla ortaya çıkmayacak şekilde tespit ettiği bulunmuştur. Ayrıca, tüm test prosedürü, geniş bir coğrafi bölgenin yüzey araştır...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Yueming Su'ya figürün hazırlanmasında yardımından dolayı teşekkür ediyoruz. Bu çalışma, Guangdong Bilim ve Teknoloji Vakfı (Proje No .: 2014A020212352), Guangzhou Eğitim Bürosu (1201630044; 1201630393) ve Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (NSFC 81572063; NSFC 81601394) tarafından finanse edildi.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| ImmunoCAP 1000 Enstrüman | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Uppsala İsveç) | 12-3800-01 | |
| Phadia Bilgi Veri Yöneticisi Yazılım Paketi | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Uppsala İsveç) | 12-3801-11 | |
| Yazılım Paketi, ImmunoCAP 1000 | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Uppsala İsveç) | 12-3801-12 | |
| g2 ( Bermuda otu) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala İsveç) | 14-4131-01 | |
| g6 (Timothy otu) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala İsveç) | 14-4100-01 | |
| w22 (Japon Hop) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala İsveç) | 14-4452-01 | |
| g216 (nCyn d 1) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala İsveç) | 14-4972-01 | |
| g205 (rPhl p 1) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala İsveç) | 14-5234-01 | |
| g208 (nPhl p 4) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala İsveç) | 14-5288-01 | |
| g215 (rPhl p 5b) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala İsveç) | 14-5338-01 | |
| g209 (rPhl p 6) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala İsveç) | 14-5289-01 | |
| g210 (rPhl p 7) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala, İsveç) | 14-5290-01 | |
| g211 (rPhl p 11) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala, İsveç) | 14-5291-01 | |
| g212 (rPhl p 12) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala İsveç) | 14-5292-01 | |
| o214 Çapraz reaksiyona giren karbonhidrat belirleyicileri (CCD'ler) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala İsveç) | 14-5339-01 | |
| Spesifik IgE Konjugatı 400 | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala İsveç) | 10-9310-08 | |
| Spesifik IgE Kalibratör Şeridi | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala İsveç) | 10-9459-08 | |
| Spesifik IgE Eğrisi Kontrol Şeridi | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Uppsala İsveç) | 10-9312-08 | |
| Spesifik IgE Anti-IgE ImmunoCAP Thermo | Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Uppsala İsveç) | 14-4417-01 | |
| ImmunoCAP Spesifik IgE Negatif Kontrol | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Uppsala İsveç) | 10-9445-01 | |
| ImmunoCAP Spesifik IgE Kontrolü L | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Uppsala İsveç) | 10-9528-01 | |
| ImmunoCAP Spesifik IgE Kontrolü M | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Uppsala İsveç) | 10-9529-01 | |
| ImmunoCAP Spesifik IgE Kontrolü H | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Uppsala İsveç) | 10-9530-01 | |
| Geliştirme Çözümü | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Uppsala İsveç) | 10-9439-08 | |
| Çözümü Durdur | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Uppsala İsveç) | 34-2271-58 | |
| Yıkama Çözeltisi | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Uppsala İsveç) | 10-9202-08 | |
| FluoroC | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Uppsala İsveç) | 10-9264-01 | |
| Bakım Çözüm Kiti | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala İsveç) | 10-9476-01 |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.