Yöntem makalesi

Microinjections kemirgen beyin için kişiselleştirilmiş iğneler

DOI:

10.3791/55751

⸱

24 Ocak 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Medical Sciences, Section of Pharmacology, and National Institute of Neurosciences, University of Ferrara, 2Laboratory for the Technologies for Advanced Therapies (LTTA), University of Ferrara

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz burada mikroenjeksiyon kuvars iğneleri kullanan kemirgen beyin için bir iletişim kuralı tanımlamak. Bu iğneler değil algılanabilir doku hasarı üretmek ve derin bölgelerde bile güvenilir teslim edilmesini sağlamak. Ayrıca, araştırma ihtiyaçlarına tarafından kişiselleştirilmiş tasarımlar adapte edilebilir ve yeniden kullanılabilir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Microinjections uyuşturucu ya da toksinlerin belirli beyin bölgeleri içinde teslim etmek için uzun süre kullanılmıştır ve daha yakın zamanlarda, bunlar gen veya hücre terapi ürünleri teslim etmek için kullanılmıştır. Ne yazık ki, şu anki mikroenjeksiyon teknikleri için birden çok nedeni suboptimal çelik veya cam iğne kullanın: özellikle, çelik iğneler doku hasarına neden olabilir ve cam iğne eğmek derinden hedef bölge eksik beyin düşürdü. Bu makalede, biz hazırlamak ve yararlı özellikleri birleştirmek kuvars iğne kullanmak için bir iletişim kuralı tanımlamak. Bu iğneler tespit doku hasarı üretmek değildir ve çok sert olmak, güvenilir teslim istenen beyin bölgesinde derin koordinatları kullanırken bile olun. Ayrıca, birden fazla delik istenilen çap yaparak iğne tasarımını kişiselleştirmek mümkündür. Enjeksiyon hücrelerinin büyük delikler kolaylaştırmak, ancak birden fazla delik çözüm daha büyük bir alan içinde büyük miktarda enjeksiyon kolaylaştırmak. Buna ek olarak, bu kuvars iğneler temizlenmesi ve kullanılan, yeniden öyle ki yordamı maliyet-etkin hale gelir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Microinjections farmakolojik aktif bileşikler teslim etmek için uzun bir süre için belirli beyin alanlarda nöronal aktivite modüle için kullanılmıştır. Buna ek olarak, toksinler nörodejeneratif olaylar karakteristik bazı hastalıkların, örneğin 6-hidroksi-Parkinson hastalığı taklit etmek için nigrostriatal dopamin sisteminde dopamin taklit etmek için belirli nöron popülasyonları yakınındaki enjekte kullanılmıştır 1 , 2 veya anma 192 IgG saporin lezyon kolinerjik sistemi3için. Daha yakın zamanlarda, mikroenjeksiyon işlemleri viral vektörler veya hücreleri Greftler deneysel beyin bozuklukları4,5gen veya hücre tedavisi için teslim etmek için kullanılmaktadır.

Bu çalışmalarda kullanılan iğneler klasik tip paslanmaz çelikten imal edilmiştir. Ne kadar kolay ve pratik kullanmak, bir dizi sorunları6çelik iğneler var: onlar nispeten büyük ve doku hasarı, kan - beyin bariyerini kaçağı ve astrocytes; aktivasyonu ile neden Ayrıca, onlar bir engel oluşturmak veya hatta tamamen kaçınmak istediğiniz çözüm akışının iğne alır beyin dokusunun Asitleme üretebilir. Daha yakın zamanlarda, hazırlanan özel kılcal damarlar üzerinden tanıtıldı içinde cam iğne7,8kullanın. Bunlar önemli doku hasarı ne de astrocyte harekete geçirmek, neden olmaz ama nispeten esnek ve yerelleştirme (kişisel gözlemler) doğruluğunu azaltarak derin yapılarını tanıttığında viraj.

Bu nedenle olası hasar olduğu kadar hassasiyet ve tekrarlanabilirlik artırırken (özellikle hasar iyileşir deneyler yaparken) azaltmak için bir ihtiyaç olduğunu (Yani, tüm çözüm iletilmesini sağlamak ve doğru yerelleştirme emin olun). Ayrıca, en iyi beyin alanlarda değişen geometrileri ile enjekte çözüm dağıtımını sağlamak için farklı iğne tasarımları kullanmak arzu olacaktır. Bu makalede, biz hazırlamak ve kuvars iğneler microinjections kemirgen beyin için kullanmak için bir iletişim kuralı tanımlamak. Yüksek erime noktası nedeniyle kuvars kılcal bir geleneksel çektirmenin çekti ve bu nedenle, geçmişte iğneler oluşturmak için kullanılmamış. Kuvars, ancak, cam, özellikle yüksek sertlik ve ara direnç9bazı önemli avantaj sunar. Onların sertlik nedeniyle kuvars iğneler ideal enjeksiyonları ventral beyin bölgeleri için uygundur. Onların kırılma direnci nedeniyle onlar bile karmaşık geometriler10ile beyin bölgeleri hedefleme en etkili kanıtlayabilir tasarımlar elde birden fazla delik eklemek modellenebilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm deneysel protokoller Ferrara Üniversitesi etik kurul için hayvan deney ve İtalyanca Sağlık Bakanlığı tarafından kabul edildi. VARIŞ (hayvan araştırma: Raporlama In Vivo deneyler11) yönergeleri takip etti.

1. kuvars iğneler hazırlanması

  1. Temiz ve distile suda 5 dk, 5 dk etanol % 99 ve 5 dakika içinde Dietil eter yerleştirerek ( Tablo malzemelerigörmek) kuvars kılcal sterilize.
  2. Kılcal koyup tamamen kuruyuncaya kadar bırakın en az 1 h için başlık altında bırakın.
  3. Bir lazer çektirmenin bireysel ihtiyaçlarına bağlı olarak yeterince uzun, yeterince ince bir iğne imalatı izin parametrelere göre kullanarak iğneler hazır olun.
    Not: Biz bir lazer çektirmenin kullanın (bkz. Tablo malzeme). Bir iki satır program çekmek için kullanın. Yüksek güç, en büyük tarama uzunluğu (FİLAMENTLER DEĞERİNE karşılık gelen) ve çekerek güç kullanmaya ilk satırını kullanır. Bu parametreler birleşimi kılcal büyük iç/dış boyutu uzun bir iğneyle şekillendirme için izin en düşük uzantısı hızı ile en büyük bölümü erime yol açar ve şaft düşük. Bu şekilde, bir yüksek mekanik direnci ve tıkanma olmadan kök hücre veya viral parçacıkların geçişini sağlayan geni iç çapı iğne korur. Ucu çok küçük ve uzun, gerekli mekanik ve şekil özellikleri eksik olmadan önce hız ve gecikme bu program satırının kapiller uzantısı durdurmanız gerekir. Kuvars soğuduktan sonra çekerek programının ikinci satır otomatik olarak çalıştırılmasına (5 s). Güç, filaman ve kuvvet çekme bir ucu kısa olası ipucu uzunluğu ve bir ipucu kopma iki iğnelerle ayrılması kaçınarak dik shank ile kesmek için fonksiyonel parametreleridir. Düzenli olarak, bizim ekipman ile aşağıdakileri kullanın: (a) Line 1 = güç 990, filaman 5, hız 130, gecikme 110, çekme 0; (b) satır 2 = güç 970, gecikme 70, filament 3, hız 0 0 çekin.
  4. İğneler daha önce % 70 etanol ile temizlenmiş Petri kabına koyun.
    1. Bir plastik parafin film ile çanak kapağı.
  5. Kılcal mikro-tetkik kes.
    1. Başlangıç lazer güç doğrulamak için bir hazneler süreç çalıştırmak ve teslim enerji ver. Sonra kesme parametreleri ayarlayın.
      Not: Biz bir mikro-tetkik kullanın (bkz. Tablo reçetesi) ve aşağıdaki parametreleri: lazer güç darbe enerji (63 µJ), lazer ışın çapı maksimum diyafram % 20 (maksimum diyafram: 1.0 µm) ve kesme hızı maksimum hız (maksimum % 10 hız: 30 µm/s).
    2. Sıkıca iğne mikroskop tablosunu düzeltmek ve ucu bilgisayar ekranın ortasına konumlandırın.
    3. Menü çubuğunda kalem simgesine tıklayın ve bir işareti iğne lazer kesme için çizmek için kullanın.
      Not: Cut iğne yüzeyi ile ilgili yaklaşık 45 ° açılı olması gerekir.
    4. Yan çubuğu işlevi önceden işaretlenmiş nokta kesmek lazer izin vermek için "kesin Başlat" düğmesini içeren bayrağı seçin.
    5. Gerekirse, yan hole(s) 1.5.2-3 içinde açıklanan yordamları yineleyerek kesilmiş; iğne (şekil 1) yeniden konumlandırmak için gerek yoktur.
  6. Temizlik sonrası kesti.
    1. İğne geçersiz bir pompa ile bir plastik tüp takın.
    2. Pompa açmak ve el ile ılımlı bir hızda (3 µL/dak) ileriye doğru akış oranını ayarlamak.
    3. % 99 etanol Aspire kesme nedeniyle kirleri çıkarmak için ilk ve daha sonra distile su.
    4. Tekrar kurutma kolaylaştırmak için % 99 etanol Aspire edin.
      Not: Her adım en az 3 dakika sürmelidir.
  7. İğneler düzgün kapalı kabında cerrahi güne kadar saklayın.
  8. İğne yeniden kullanılabilir; deney sonunda, temiz çamaşır suyu ve etanol çözüm ve olası doku artıklarını çıkarın. Bir daha eksiksiz, iğne ucunu aşağı doğru işaret eden bir micropipette depolama kavanoza koyup temizlik için ipuçları kaplıdır kadar kavanoz distile su ile doldurun, kalan herhangi bir doku kaldırın, sonra etanol ile yıkamak için 1,5 dakika kaynatın.

2. yordam

  1. Pompa kullanım kılavuzu tarafından sağlanan yönergeleri izleyerek, pompa çapı/hacim mikroenjeksiyon şırınganın göre kalibre ve 0.3 µL/dak akış hızı ayarlamak için Ayarlar menüsünü seçin.
  2. ((Örneğin, Hamilton iğne, 30 G) künt bir iğne ve kısa politetrafloroetilen tüp ile donatılmış) bir 10 mL şırınga steril su ile doldurun ve mikroenjeksiyon şırınga (sonra çok dikkatli piston çıkarmak) ve enjeksiyon doldurmak için kullanın Montaj parçaları kiti için el ile mikroenjeksiyon pompa (MMP).
    Not: MMP kit stereotaksik çerçeve (Şekil 2) iğnede güvenli bir şekilde bağlamak için kullanılır. Kiti içerir: politetrafloroetilen boru, radarı boru coupler, pipet tutucu ve contalar Pipetler farklı dış çapı için.
  3. İğne MMP teçhizat-e doğru bağlamak.
    1. Daha fazla su sistemi genelinde 10 mL şırınga temizler ve su dışında iğne gelir olup olmadığını kontrol edin.
      Not: doldurma adımları tekrar uygulayarak sistem içinde herhangi bir hava kabarcığı kaldırdığınızdan emin olun.
  4. 10 mL şırınga yavaş yavaş piston bir damla su mikroenjeksiyon şırınga üstündeki bırakmak için bastırıyor ise mikroenjeksiyon şırıngadan çıkarın. Piston mikroenjeksiyon şırıngada yerleştirin.
  5. Mikroenjeksiyon şırınga pompa bağlanmak ve 0.3 µL/dak akış hızı ayarlayın.
    Not: bir damla iğneyi ucundan sızıntı tamamlanana kadar bekleyin ve sonra başka bir 3 dakikadır gidelim.
  6. Akış 0.1 µL/dk az ayarlayın ve cerrahisi prosedürü başlatın. Pompa ameliyat yaparken sürekli olması gerekir.
    Not: Bu makalesinde bildirilen deneyler için biz erkek Sprague Dawley Rat 300 g (3 ay-in yaş) kullanın. Ancak, yordamı özellikle fareler diğer türler için geçerlidir.
  7. Genel anestezi yerel düzenlemelere tarafından onaylanmış bir yöntemi kullanarak neden.
    Not: Anestezi için 20-50 dk 85 mg/kg ketamin ve 8 mg/kg xylazine mayi enjeksiyon (IP) bir karışımı kullanın. Kuyruk ve/veya ayak Pinch hayvan tamamen uyuşturulmuş emin olmak için kullanılır önemlidir. Anestezi ve temel hayati önce ameliyat başlar ve ameliyat yaparken her 10 min izlenen değerlendirildi. Hayvan vücut ısısı sırasında ve sonrasında cerrahi işlemler yeniden Isıtma yastığını dolaşan bir su kullanarak daha önce sabit tutulur. Hayvanlar kadar tamamen iyileşti izlenir (örneğin dik ve Ambulatuvar vardır). Ayrıca, hayvanlar üç gün boyunca post-operatively her 24 h analjezikler (tramadol, 5-7 mg/kg ı.p.) alırsınız.
    1. Hayvanın kafasını tıraş ve yeterince için aseptik cerrahi cerrahi site hazırlamak. Bir iki aşamalı bodur iyot tabanlı çözüm (betadin) % 70 etanol tarafından takip ile gerçekleştirin. Ayrıca, asepsis korumak için cerrahi sitesi cerrahi örtüsü ile sarın (video gösterim amacıyla çıkarılmıştır).
  8. Fareyi stereotaksik çerçevede yeniden Isıtma battaniye dolaşan bir su üzerinde konumlandırın. Ek ağrı sağlamak için % 0.5 lidokain çözüm ameliyat yerinde geçerli (7 mg/kg fazla olamaz). Önceden tüm cerrahi aletler sterilize de %2 oxazolidin artı %7.05 fenol (Sporodicin veya Cidex) aletleri immerging tarafından bir boncuk Sterilizatör veya sıvı soğuk dezenfeksiyon kullanarak durulama steril su veya serum fizyolojik ile izledi. Dezenfeksiyon prosedürleri arasında bile gerçekleştirilmelidir. Bir boyuna kesim kafatası üzerinde steril neşter kullanarak yapmak. Aşırı kanama önlemek için nazik ol. Düz bir spatula kullanarak kafa derisi açın ve cerrahi klipleri onu açık tutmak için cilt kapakları üzerinde uygulayın. Çok yavaşça bregma ve hangi aracılığıyla iğne eklenir kafatası alan duyurmak kapaklarini bağlantısını kesin.
  9. (Akış devam eden ise) stereotaksik karede kol mount ve tam olarak bregma, ucu kırmamaya dikkat üzerine iğne ucu taşıyın. Bregma antero-posterior ve medio-lateral koordinatlarını açıklama ekleyin ve istediğiniz koordinatları tercüme. Bir stereomicroscope tarafından yönlendirilen, iğne ucu neredeyse kafatası dokunuyor kadar düşük, sondaj spot mark biraz stereotaksik kol yükseltme sonra.
  10. Matkap (matkap ucu Ø: 0.8 mm; matkap hızı: 1000 devir/dakika) işaretli nokta kafatasında. Beyin zarı Delme işlemler sırasında nüfuz değil bakım alınması gerekir. Delme sırasında kemik hasarı ve nekroz önlemek için steril serum fizyolojik damla.
  11. Plastik parafin film küçük bir parça keser ve kafatasında yerleştirir. 10 µL damlalıklı kullanarak, plastik parafin filmde enjekte için çözüm teslimatı yap. Pompa kes, biraz itici pompa almak ve mikroenjeksiyon şırınga piston hafifçe çekerek kılcal içinde küçük bir hava kabarcığı oluşturun.
  12. İğne ucu damla ulaşıncaya kadar stereotaksik kolu indir. Örnek (çok yavaş) herhangi bir kabarcık oluşumu kaçınarak mikroenjeksiyon şırınga piston çekerek çizin. Pompa itici piston ile temas halinde eski yerine koymak ve pompanın debisi 0,3 µL/dak bekle, bir sonraki adıma devam etmeden önce bir damla (bir kaç dk) oluşumu kadar açın.
    Not: mevcut örnek deneyde, yapay beyin omurilik sıvısı (aCSF) içinde striatum infüzyon (AP: +1.5, ML: ±2.7; DV:-5.0) ve dorsal hippocampus (AP:-3.5, ML: ±2.1; DV:-3.5; dura üzerinden mm), 2 µL/site. İki enjeksiyon yöntemleri arasında karşılaştırma kolaylaştırmak için her beyin alan bir Yarımküre ve 26 G künt bahşiş kuvars iğne veya diğer 30 G eğim-tip paslanmaz çelik iğne kullanarak infüzyon.
  13. Daha düşük akış 0.1 µL/dk, dura bir paslanmaz çelik eğim uçlu iğneyle nick ve beyin dokusu girerek dorso-ventral balta stereotaksik kolunda yavaşça indirin. İstediğiniz konuma geldiğinde, bir ek 0,1 mm pompa durdurmak, stereotaktik kol tarafından 0,1 mm yükseltmek ve 0.3 µL/dk akış istasyonlarında baştan gidin.
    Not: iğne düşürürken bir yavaş akış sağlamak için neden küçük parçaları iğne kendisi doku penetrasyonu önler bir pozitif basınç sağlamaktır. Böyle bir durumda çözüm teslimini bozulması uç, engel. İğne ve düşürücü hızını düşürerek yaklaşık 10 s/mm ise akış hızı çok yavaş olduğu için bu iğne parça kalır çözüm miktarda bu hedef sitede enjekte karşılaştırıldığında yok denecek kadar azdır anlamına gelir. Bu önlem iğneler ile yan delik kullanırken gerek kalmayabilir.
  14. Sayacı başlatmak ve enjekte etmek için istenen birimde bağlı olarak ihtiyaç duyduğu zaman (2 µL enjekte Eğer örneğin, 6 dk 40 sn) bekleyin. Kabarcık hareketi enjekte ederken izlemek. Sonunda, pompa durdurun ve yavaş yavaş iğne almadan önce 5 dakika bekleyin. Kuvars iğne tamamen ayıklandığında, pompa yeniden başlatın ve iğne ucunda bir damla oluşumu için kontrol edin.
  15. Kafatası yüzey kemik balmumu ile açılış mühür, Kan durdurucu sargı küçük resimleri kaldırmak ve kafa derisi dikiş, yara bir antibiyotik krem (örneğin, neosporin) ile çevresini kat ve hayvan ev kafese döndürür.
    Not: Bu makalede açıklanan deneyler için kurumsal etik kurul tarafından onaylanmış ötenazi Protokolü hayvanlar derin 43 mg/kg ketamin ve 7 mg/kg xylazine bir ı.p. enjeksiyon ile anestezi ve kesti. 48 h ve parafin gömülü için formalin postfixed beyin çıkarıldı. Koronal bölümler (8 µm) beyin bir microtome kullanarak dilimlenmiş.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz fare dorsal Hipokampus ve striatum iki klasik, 26 G künt end ve 30 G eğimli kenar ile karşılaştırıldığında bir kuvars iğne (60 µM dış çapı uç; bir 20 µM çapı yan delik; tip C, şekil 1) kullanarak doğrudan mikroenjeksiyon tarafından indüklenen zarar göre Paslanmaz çelik iğneler. Bu amaç için aCSF sağ 2 µL enjekte ve dorsal Hipokampus ve sırasıyla kuvars ve çelik iğne ve, 48 saat sonra enjeksiyon kullanarak striatum yaptı, Hematoksilen-Eozin (HE) Boyama kul...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makalede açıklanan tekniği için çeşitli amaçlar12gerçekleştirilen microinjections optimize etmek için giriş bölümünde özetlenen ihtiyaçlarını yerine getirir. Burada açıklanan iğneler zarar en az, aslında algılanabilir seviyeye azaltmak; varyans (viraj eğilimli olduğunu) cam iğneler ile kuvars iğneler sert ve derin koordinatlarındaki bile istenen beyin bölgesi güvenilir bir doz emin olun. Ayrıca, ucu delik beyin dokusu içinde ekleme sırasında tıkandı bile yan delik çözüm olarak ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu eser Avrupa Topluluğu [FP7-insanlar-2011-IAPP proje 285827 (EPIXCHANGE)] bir hibe tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Kuvars kılcaldamarlar Sutter Instruments, Novato, CA ABDQ100-50-10Filamentsiz
ÇektirmeSutterP2000
Mikropipet saklama kavanozuWorld Precision Instruments (WPI), Sarasota, FL, ABDE210
Lazer mikrodissektörLeica Microsystems, Wetzlar, AlmanyaLMD6500
Hamilton şırıngaHamilton ILS Yenilikçi İşgücü Systeme GmbH, StŸ tzerbach, Almanya19138-U Mikroinfüzyon
pompasıUniventor, Zejtun, MaltaModel 864
Manuel mikroenjeksiyon pompa kitiWPIMikropipetlerin stereotaktik çerçeveye güvenli bir şekilde monte edilmesini sağlayanMMP-KIT
Hassas MatkapProxxon28510 MicroMot 50/EDeğişken hızlı Bilyalı rulmanlı tahrik mili
Yapay Serebral Omurilik SıvısıTocris3525
İğneler 26 g Künt ve 30 g KonikHamilton26 g Künt: 19138-U
30 g Eğim: 20757
MikrotomLeica, AlmanyaLEICA RM212RT
Öğe #: Kiti

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kirik, D., Rosenblad, C., Björklund, A. Characterization of behavioral and neurodegenerative changes following partial lesions of the nigrostriatal dopamine system induced by intrastriatal 6-hydroxydopamine in the rat. Exp Neurol. 152 (2), 259-277 (1998).
  2. Paolone, G., Brugnoli, A., Arcuri, A., Mercatelli, D., Morari, M. Eltoprazine prevents levodopa-induced dyskinesias by reducing striatal glutamate and direct pathway activity. Mov Disord. 30 (13), 1728-1738 (2015).
  3. Paolone, G., Lee, T. M., Sarter, M. Time to pay attention: attentional performance time-stamped prefrontal cholinergic activation, diurnality, and performance. J Neurosci. 32 (35), 12115-12128 (2012).
  4. Shoichet, M. S., Winn, S. R. Cell delivery to the central nervous system. Adv Drug Deliv Rev. 42, 81-102 (2000).
  5. Simonato, M., et al. Progress in gene therapy for neurological disorders. Nature RevNeurol. 9, 277-291 (2013).
  6. Björklund, H., Olson, L., Hahl, D., Schwarcz, R. Short-and Long-Term Consequences of Intracranial Injections of the Excitotoxin, Quinolinic Acid, as Evidenced by GFA Immunohistochemistry of Astrocytes. Brain Res. 317, 267-277 (1986).
  7. Paradiso, B., et al. Localized delivery of fibroblast growth factor-2 and brain-derived neurotrophic factor reduces spontaneous seizures in an epilepsy model. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (17), 7191-7196 (2009).
  8. Falcicchia, C., et al. Silencing Status Epilepticus-Induced BDNF Expression with Herpes Simplex Virus Type-1 Based Amplicon Vectors. PLoS One. 11 (3), 1-17 (2016).
  9. Munoz, J. L., Coles, J. A. Quartz micropipettes for intracellular voltage microelectrodes and ion-selective microelectrodes. J Neurosci Meth. 22 (1), 57-64 (1987).
  10. Sutter Instruments. P-2000: Laser-Based Micropipette Puller. , Available from: http://www.sutter.com/MICROPIPETTE/p-2000.html (2017).
  11. Kilkenny, C., Browne, W., Cuthill, I. C., Emerson, M., Altman, D. G. Animal research: reporting in vivo experiments: the ARRIVE guidelines. J Cereb Blood Flow Metab. 31, 991-993 (2011).
  12. Torres, E. M., Trigano, M., Dunnett, S. B. Translation of cell therapies to the clinic: characteristics of cell suspensions in large-diameter injection cannulae. Cell Transplant. 24, 737-749 (2015).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Kuvars nelerBeyin MikroenjeksiyonuLazer ekiciStereotaksik FrameMikroenjeksiyon PompasDoku Hasar n n nlenmesiYeniden Kullan labilir nelerDerin Beyin B lgelerine zelle tirme

İlgili makaleler